3 ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ THE INFLUENCE OF THERAPY WITH METHOTREXATE ON PHENOTYPE OF PERIPHERAL BLOOD LEUKOCYTES IN RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS I.R. Kolosova1, E.R. Polosukhina2, A.Yu. Baryshnikov2, G.V. Loukina1, Ya.A. Sigidin1 1 Institute of Rheumatology RAMS 2 N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS* ABSTRACT Objective. To examine the influence of therapy with methotrexate on phenotype of peripheral blood leukocytes in rheumatoid arthritis (RA) patients. Methods. Peripheral blood samples were obtained from 20 patients with active RA. All patients were treated with methotrexate in dosage of 7,5-15 mg/week. Fluorescent flow cytometry on FACScan (Becton Dickinson) was used to assess the expression of antigens CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD11b, CD16, CD18, CD20, CD25, CD26, CD50, CD54, CD56, CD71, CD95, HLA-DR, Pgp-170 on peripheral blood leukocytes before and after therapy. Results. The therapy with methotrexate led to the decrease of expression of the antigens CD50 (from 75,2±15,0% to 58,7±24,5%, P<0,05), CD26 (from 24,3±14,6% to 15,7±12,2%, P<0,05) in lymphocytes and CD50 (from 71,7±(24,6% to 56,2±24,3%, P<0,05) in granular leukocytes. The expression of other antigens remained unchanged. Conclusion. The therapy with methotrexate led to the decrease of percentage of activated leukocytes. ÄÈÍÀÌÈÊÀ ÈÌÌÓÍÎËÎÃÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÔÅÍÎÒÈÏÀ ËÅÉÊÎÖÈÒΠÏÎÄ ÂËÈßÍÈÅÌ ÒÅÐÀÏÈÈ ÌÅÒÎÒÐÅÊÑÀÒÎÌ ÏÐÈ ÐÅÂÌÀÒÎÈÄÍÎÌ ÀÐÒÐÈÒÅ È.Ð. Êîëîñîâà1, Å.Ð. Ïîëîñóõèíà2, À.Þ. Áàðûøíèêîâ2, Ã.Â. Ëóêèíà1, ß.À. Ñèãèäèí1 1 Èíñòèòóò ðåâìàòîëîãèè ÐÀÌÍ, 2 Ðîññèéñêèé îíêîëîãè÷åñêèé íàó÷íûé öåíòð èì. Í.Í. Áëîõèíà ÐÀÌÍ ÐÅÇÞÌÅ Öåëüþ äàííîãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëàñü îöåíêà äèíàìèêè ìåìáðàííîãî ôåíîòèïà ëåéêîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (ÏÊ) ó áîëüíûõ ðåâìàòîèäíûì àðòðèòîì (ÐÀ) ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì (ÌÒ).  èññëåäîâàíèå áûëè âêëþ÷åíû 20 áîëüíûõ ÐÀ ñ âûñîêîé è óìåðåííîé êëèíèêî-ëàáîðàòîðíîé àêòèâíîñòüþ çàáîëåâàíèÿ.  êà÷åñòâå áàçèñíîé òåðàïèè âñåì áîëüíûì áûë íàçíà÷åí ÌÒ â äîçå 7,5-15ìã â íåäåëþ. Íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè äèôôåðåíöèðîâî÷íûõ àíòèãåíîâ ÑD3, ÑD4, ÑD5, ÑD7, CD8, CD16, CD20; àêòèâàöèîííûõ àíòèãåíîâ CD25, CD26, CD71, HLA-DR, CD95; ìîëåêóë àäãåçèè CD11b, CD18, CD50, CD54, CD56; ôàêòîðà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé óñòîé÷èâîñòè Pgp-170. Íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè àíòèãåíîâ CD11b, CD18, CD50, CD54, ÑD95, Pgp-170. Îïðåäåëåíèå ýêñïðåññèè èññëåäóåìûõ àíòèãåíîâ íà ëåéêîöèòàõ ÏÊ ïðîâîäèëîñü èììóíîôëþîðåñöåíòíûì ìåòîäîì äî ëå÷åíèÿ è ÷åðåç 6 ìåñÿöåâ òåðàïèè. Ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ îòìå÷àëîñü ñíèæåíèå ïðîöåíòà ëèìôîöèòîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ àíòèãåíû CD50 (ñ 75,2±15,0% äî 58,7±24,5%, P<0,05) è CD26 (24,3±14,6% äî 15,7±12,2, P<0,05) è ãðàíóëîöèòîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ àíòèãåí CD50 (ñ 71,7±24,6% äî 56,2±24,3%, P<0,05). Íå áûëî âûÿâëåíî ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîé äèíàìèêè ýêñïðåññèè îñòàëüíûõ èññëåäóåìûõ àíòèãåíîâ. Òàêèì îáðàçîì, òåðàïèÿ ÌÒ óìåíüøàåò ïðèòîê àêòèâèðîâàííûõ ëåéêîöèòîâ ÏÊ â ñèíîâèþ, áëàãîäàðÿ èçìåíåíèþ èììóíîëîãè÷åñêîãî ôåíîòèïà ýòèõ êëåòîê. ¹4/ ÒÎÌ 1/2002 ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË 4 ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ Ââåäåíèå. Ðåâìàòîèäíûé àðòðèò (ÐÀ) - õðîíè÷åñêîå ñèñòåìíîå âîñïàëèòåëüíîå çàáîëåâàíèå, õàðàêòåðèçóþùååñÿ ðàçâèòèåì ñèììåòðè÷íîãî äåñòðóêòèâíîãî ïîëèñèíîâèòà.  îñíîâå ïàòîãåíåçà ëåæèò ïðîèñõîäÿùàÿ â ñèíîâèàëüíîé ìåìáðàíå ñóñòàâà èììóííàÿ ðåàêöèÿ ëèìôîèäíûõ êëåòîê íà àóòîàíòèãåíû ñóñòàâíûõ òêàíåé [3]. Íà íà÷àëüíûõ ýòàïàõ èììóííîé ðåàêöèè ïðè ÐÀ îòìå÷àåòñÿ ïðåîáëàäàíèå CD4+-êëåòîê è ïîâûøåíèå èíäåêñà CD4+/CD8+ â ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè è ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (ÏÊ). Êîìïëåêñ àêòèâíûõ àíòèãåííûõ ïåïòèäîâ è ìîëåêóë HLA 2 êëàññà ñ ðåöåïòîðîì CD4+- Ò - ëèìôîöèòà ÿâëÿåòñÿ ñèãíàëîì, «çàïóñêàþùèì» âñþ ïîñëåäóþùóþ èììóííóþ ðåàêöèþ ñ âûðàáîòêîé öèòîêèíîâ, àêòèâèðîâàíèåì íîâûõ êîëè÷åñòâ ìàêðîôàãîâ è ëèìôîöèòîâ, ìîáèëèçàöèåé íåéòðîôèëîâ, ïðîäóêöèåé ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë. Ôîðìèðîâàíèå êîìïëåêñà ðåöåïòîðà ëèìôîöèòà (TCRCD3) ñ àíòèãåííûìè ïåïòèäàìè è ìîëåêóëîé ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè ñëóæèò îäíèì èç îñíîâíûõ ñòèìóëîâ äëÿ äàëüíåéøèõ àêòèâàöèîííûõ ïðîöåññîâ â èììóíîêîìïåòåíòíûõ êëåòêàõ. ×àñòü èç àêòèâàöèîííûõ ìîëåêóë èñõîäíî îòñóòñòâóåò íà ïîâåðõíîñòè ëèìôîöèòîâ, è èõ ýêñïðåññèÿ èíäóöèðóåòñÿ â ïðîöåññå îáìåíà ñèãíàëàìè. Âàæíûìè ìàðêåðàìè àêòèâàöèè ëèìôîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ ýêñïðåññèÿ ðåöåïòîðîâ èíòåðëåéêèíà-2 (CD25), òðàíñôåððèíà (CD71), àíòèãåíà CD95, îïîñðåäóþùåãî àïîïòîç. Ïîñëåäíèé ïîÿâëÿåòñÿ íà ïîâåðõíîñòè êëåòîê, ñâèäåòåëüñòâóÿ î ïðåäñòîÿùåì óäàëåíèè ëèìôîöèòîâ, âûïîëíèâøèõ ñâîþ ôóíêöèþ. Íåäîñòàòî÷íî èçó÷åíà ðîëü ôåðìåíòà äèïåïòèäèëïåïòèäàçû-4 (CD26), îòíîñÿùåãîñÿ ê ñåðèíîâûì ýêçîïðîòåàçàì. Èçâåñòíî, ÷òî ïðè ÐÀ âûÿâëÿåòñÿ çíà÷èòåëüíîå ïîâûøåíèå ýêñïðåññèè CD26 [13], êîððåëèðóþùåå ñ êîëè÷åñòâîì ñûâîðîòî÷íîãî èíòåðôåðîíà-ãàììà (IFN-γ), êîòîðûé ñïîñîáåí çíà÷èòåëüíî óñèëèâàòü àóòîèììóííûå ïðîöåññû. Âàæíàÿ ðîëü â ôîðìèðîâàíèè èììóííî-âîñïàëèòåëüíîãî îòâåòà ïðè ÐÀ ïðèíàäëåæèò ìåæêëåòî÷íûì âçàèìîäåéñòâèÿì, êîòîðûå îñóùåñòâëÿþòñÿ ïðè ó÷àñòèè ìîëåêóë àäãåçèè (ñåëåêòèíîâ, èíòåãðèíîâ, èõ ðåöåïòîðîâ). Áëàãîäàðÿ óñòàíîâëåíèþ ñëàáûõ è îáðàòèìûõ ñâÿçåé ñ ñåëåêòèíàìè, îñóùåñòâëÿåòñÿ ïåðâûé ýòàï ïåðåÒàáëèöà 1 Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà áîëüíûõ ×èñëî áîëüíûõ Ïîë Ñðåäíèé âîçðàñò áîëüíûõ (ãîäû) Ñðåäíÿÿ äëèòåëüíîñòü çàáîëåâàíèÿ (ãîäû) Àêòèâíîñòü ÐÀ, ñòåïåíü (n) Ðåíòãåíîëîãè÷åñêàÿ ñòàäèÿ (n) Ôóíêöèîíàëüíàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü (n) Íàëè÷èå ÐÔ (n) Ñèñòåìíûå ïðîÿâëåíèÿ ÐÀ (n) Ì Æ 2 3 2 3 4 1 2 20 3 17 51±12 9,9±8,6 16 4 12 5 3 8 12 13 9 ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË ìåùåíèÿ ëåéêîöèòîâ â î÷àã âîñïàëåíèÿ èç êðîâîòîêà. Ìîëåêóëû β1-β2-èíòåãðèíîâ (â íàøåì èññëåäîâàíèè CD18, êîòîðàÿ ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé β2 èíòåãðèíîâ è CD11b - α-ñóáúåäèíèöà β2 èíòåãðèíîâ), âçàèìîäåéñòâóÿ ñ ðåöåïòîðàìè èíòåãðèíîâ CD54 (ICAM-1), CD50 (ICAM-3) è äð., îáåñïå÷èâàþò ïðî÷íóþ àäãåçèþ ëåéêîöèòîâ ñ äðóãèìè êëåòêàìè [4]. Ïðè èñïîëüçîâàíèè èììóíîôåðìåíòíîãî ìåòîäà èññëåäîâàíèÿ, â ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè ïðè ÐÀ îáíàðóæèâàþòñÿ ïîâûøåííûå óðîâíè ðàñòâîðèìûõ ôîðì ìîëåêóë ICAM-1, ÷òî, âåðîÿòíî, îáóñëàâëèâàåò àêòèâíîñòü ëèìôîöèòîâ ñèíîâèè è âûñîêèé óðîâåíü êîíòàêòíûõ âçàèìîäåéñòâèé êëåòîê, ïðèâîäÿùèõ, â êîíå÷íîì èòîãå, ê ðàçâèòèþ äåñòðóêòèâíûõ ïðîöåññîâ. Èììóíîôëþîðåñöåíòíûì ìåòîäîì, â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè âûÿâëÿåòñÿ êàê ïîâûøåííàÿ [8, 20], òàê è ïîíèæåííàÿ ýêñïðåññèÿ ICAM1 ëèìôîöèòàìè [19, 28]. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ðàçëè÷èÿ â ðåçóëüòàòàõ, ñ îäíîé ñòîðîíû, ÿâëÿþòñÿ ñëåäñòâèåì ðàçíîðîäíîñòè èññëåäóåìûõ ãðóïï áîëüíûõ ÐÀ. Ñ äðóãîé ñòîðîíû, âåðîÿòíî, ïîâûøåííûé óðîâåíü ýêñïðåññèè ICAM-1 ëèìôîöèòàìè ÏÊ îòðàæàåò íàëè÷èå ñèñòåìíîñòè ðåâìàòîèäíîãî ïðîöåññà âñëåäñòâèå ìèãðàöèè àêòèâèðîâàííûõ ëèìôîöèòîâ èç ñóñòàâíîé ïîëîñòè â êðîâÿíîå ðóñëî ïðè âûñîêîé àêòèâíîñòè çàáîëåâàíèÿ.  ïîëüçó ýòîãî çàêëþ÷åíèÿ ñâèäåòåëüñòâóåò çíà÷èòåëüíîå ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè öèðêóëèðóþùèõ ìîëåêóë ICAM-1 è ICAM-3 â ÏÊ ïðè ðåâìàòîèäíîì âàñêóëèòå [30]. Àíòèðåâìàòè÷åñêàÿ òåðàïèÿ îêàçûâàåò ìîäóëèðóþùåå âëèÿíèå íà ìåìáðàííûé ôåíîòèï ëèìôîöèòîâ.  êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå èç áàçèñíûõ ïðåïàðàòîâ ïðåäïî÷òåíèå îòäàåòñÿ ìåòîòðåêñàòó (ÌÒ). Ýòî îáóñëîâëåíî êàê óäîáñòâîì ïðèìåíåíèÿ, òàê è â áîëüøåé ñòåïåíè åãî âûñîêîé êëèíè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòüþ [3]. Îí ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé àíàëîã ôîëèåâîé êèñëîòû è îòíîñèòñÿ ê ãðóïïå àíòèìåòàáîëèòîâ, òî åñòü âåùåñòâ, áëèçêèõ ïî õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðå ê åñòåñòâåííûì ìåòàáîëèòàì îðãàíèçìà è êîíêóðèðóþùèõ c íèìè çà ó÷àñòèå â áèîõèìè÷åñêèõ ïðîöåññàõ [3].  ðåàëèçàöèè ôàðìàêîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòè ÌÒ è åãî ìåòàáîëèòîâ âàæíîå ìåñòî çàíèìàåò èíãèáèðóþùåå âëèÿíèå íà äèãèäðîôîëàòðåäóêòàçó (ÄÃÔ). Îäíàêî â äàëüíåéøèõ èññëåäîâàíèÿõ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ìåõàíèçì äåéñòâèÿ ìàëûõ äîç ÌÒ â áîëüøåé ñòåïåíè îñóùåñòâëÿåòñÿ çà ñ÷åò ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíîãî äåéñòâèÿ, êîòîðîå ðåàëèçóåòñÿ ïîñðåäñòâîì ñâÿçûâàíèÿ àäåíîçèíîâûõ (ÀÇ) ðåöåïòîðîâ. Ñâÿçûâàíèå ñ À3 ðåöåïòîðîì ïðèâîäèò ê èíãèáèðîâàíèþ ñèíòåçà îñíîâíûõ ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ IFN-γ è ÔÍÎ-α [10], ñìåùåíèþ ñîîòíîøåíèÿ Th1/ Th-2 â ïðîâîñïàëèòåëüíóþ ñòîðîíó [14].  ðàíåå ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ íå îòìå÷àåòñÿ èçìåíåíèÿ êîëè÷åñòâà îñíîâíûõ ïîïóëÿöèé ëèìôîöèòîâ â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè [1], à â ñèíîâèè ïîêàçàíî ñíèæåíèå êîëè÷åñòâà CD3+, ÑD4+, CD8+, CD38+, CD68+-êëåòîê [27]. Êðîìå òîãî, íàáëþäàåòñÿ óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè îòäåëüíûõ ìîëåêóë àäãåçèè (E-ñåëåêòèí è VCAM-1) [11] è àêòèâàöèè (HLA-DR) [7]. Îòäåëüíîé ïðîáëåìîé ëå÷åíèÿ ÐÀ ÿâëÿåòñÿ âòîðè÷íàÿ íåýôôåêòèâíîñòü òåðàïèè, êîòîðàÿ ðàçâèâàåòñÿ ïîñëå ëå÷åíèÿ íåñêîëüêèìè áàçèñíûìè ïðåïàðàòàìè [3]. ¹4/ ÒÎÌ1/2002 5 ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ Â 1995ã. Jorgensen et al. [16] ïðåäëîæèë ãèïîòåçó ó÷àñòèÿ ãëèêîïðîòåèíà-Ð (Pgp-170), ïðîäóêòà ãåíà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé ðåçèñòåíòíîñòè, â ðàçâèòèè ëåêàðñòâåííîé íåýôôåêòèâíîñòè ïðè ÐÀ ïóòåì àêòèâèðîâàíèÿ ïîâûøåííîãî âûáðîñà õèìè÷åñêèõ âåùåñòâ èç êëåòîê.  ñâÿçè ñ ýòèì ìû ðåøèëè èññëåäîâàòü ýêñïðåññèþ Pgp-170 íà ëåéêîöèòàõ ÏÊ, à òàêæå ïðîàíàëèçèðîâàòü âîçìîæíîå âëèÿíèå ÌÒ íà ýêñïðåññèþ ýòîãî ãëèêîïðîòåèíà. Òàêèì îáðàçîì, èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ÌÒ íà ôóíêöèîíàëüíî ñóùåñòâåííûå ïîâåðõíîñòíûå ìîëåêóëû ëåéêîöèòîâ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ ïðåäñòàâëÿåò îïðåäåëåííûé èíòåðåñ. Îíî ïîçâîëèò ðàñøèðèòü ïðåäñòàâëåíèÿ î ìåõàíèçìàõ äåéñòâèÿ ÌÒ è ïîëó÷èòü äîïîëíèòåëüíûå äàííûå î ïàòîãåíåçå ÐÀ. Ìàòåðèàëû è ìåòîäû.  îòêðûòîå êîíòðîëèðóåìîå èññëåäîâàíèå ýêñïðåññèè àêòèâàöèîííûõ àíòèãåíîâ ïðè ÐÀ áûëè âêëþ÷åíû 20 áîëüíûõ ñ äîñòîâåðíûì ÐÀ, ñîãëàñíî êðèòåðèÿì Àìåðèêàíñêîé êîëëåãèè ðåâìàòîëîãîâ, ñ âûñîêîé è óìåðåííîé êëèíèêîëàáîðàòîðíîé àêòèâíîñòüþ çàáîëåâàíèÿ. Êëèíè÷åñêàÿ õàðàêòåðèñòèêà áîëüíûõ, âêëþ÷åííûõ â èññëåäîâàíèå, ïðåäñòàâëåíà â òàáëèöå 1. Âñå áîëüíûå íå ìåíåå 3 ìåñÿöåâ äî íà÷àëà è â ïåðèîä íàáëþäåíèÿ ïðîäîëæàëè ïîëó÷àòü ôîíîâóþ íåñòåðîèäíóþ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíóþ òåðàïèþ, ïðåèìóùåñòâåííî äèêëîôåíàê â ñðåäíèõ òåðàïåâòè÷åñêèõ äîçàõ. Ïðåäøåñòâóþùàÿ áàçèñíàÿ òåðàïèÿ îòìåíÿëàñü íå ïîçæå ÷åì çà 1 ìåñÿö äî íà÷àëà èññëåäîâàíèÿ âñëåäñòâèå íåýôôåêòèâíîñòè èëè íåïåðåíîñèìîñòè. Âñåì áîëüíûì â êà÷åñòâå áàçèñíîé òåðàïèè áûë íàçíà÷åí ìåòîòðåêñàò â äîçå 7,5-15ìã â íåäåëþ. Êîíòðîëüíóþ ãðóïïó ñîñòàâèëè 18 çäîðîâûõ äîíîðîâ (ñðåäíèé âîçðàñò 53±16 ëåò). Äëÿ îöåíêè ýôôåêòèâíîñòè ïðîâîäèìîé òåðàïèè èñïîëüçîâàëè ñëåäóþùèå êðèòåðèè: âûðàæåííîñòü áîëè â ñóñòàâàõ ïî 10-ñàíòèìåòðîâîé âèçóàëüíîé àíàëîãîâîé øêàëå (ÂÀØ), âûðàæåííîñòü óòîìëÿåìîñòè ïî ÂÀØ, äëèòåëüíîñòü óòðåííåé ñêîâàííîñòè (â ìèí.), ÷èñëî ïðèïóõøèõ ñóñòàâîâ, ÷èñëî áîëåçíåííûõ ñóñòàâîâ, èíäåêñ ïðèïóõëîñòè, ñèëà ñæàòèÿ êèñòè (â êÏà), ðàçäåëüíàÿ îöåíêà òÿæåñòè ñîñòîÿíèÿ âðà÷îì è ïàöèåíòîì ïî ãðàäàöèÿì 1 - ïðàêòè÷åñêè çäîðîâ, 2- ìèíèìàëüíûå èçìåíåíèÿ, 3 - óìåðåííûå, 4- ñðåäíåé òÿæåñòè, 5 - òÿæåëîå ñîñòîÿíèå, ÑÎÝ, óðîâíè ôèáðèíîãåíà, ñåðîìóêîèäà è Ñ-ðåàêòèâíîãî áåëêà, ðåâìàòîèäíûé ôàêòîð ïî äàííûì ëàòåêñ-òåñòà, ðàçäåëüíàÿ îöåíêà ëå÷åáíîãî ýôôåêòà âðà÷îì è ïàöèåíòîì ïî ñëåäóþùèì ãðàäàöèÿì: çíà÷èòåëüíîå óëó÷øåíèå, óëó÷øåíèå, íåçíà÷èòåëüíîå óëó÷øåíèå, áåç ïåðåìåí, óõóäøåíèå. Äëÿ îöåíêè ïåðåíîñèìîñòè èñïîëüçóåìûõ ïðåïàðàòîâ îïðåäåëÿëè óðîâåíü ãåìîãëîáèíà, êîëè÷åñòâî ëåéêîöèòîâ è òðîìáîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè, ëåéêîöèòàðíóþ ôîðìóëó, ñîäåðæàíèå â ñûâîðîòêå êðîâè áèëèðóáèíà, àñïàðàãèíîâîé è àëàíèíîâîé òðàíñàìèíàç, êðåàòèíèíà; ïðîâîäèëè òàêæå îáùèå àíàëèçû ìî÷è. Îïðåäåëåíèå ýêñïðåññèè ïîâåðõíîñòíûõ àíòèãåíîâ ëåéêîöèòîâ íà ïîâåðõíîñòè ëåéêîöèòîâ îñóùåñòâëÿëîñü ñ èñïîëüçîâàíèåì ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë ñåðèè ICO (ÍÏÖ «ÌåäáèîÑïåêòð») ïðè ïîìîùè ïðÿìîé è ¹4/ ÒÎÌ 1/2002 íåïðÿìîé ðåàêöèé èììóíîôëþîðåñöåíöèè. Îïðåäåëåíèå ýêñïðåññèè àíòèãåíà Pgp-170 ïðîâîäèëîñü ñ èñïîëüçîâàíèåì ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë UIC2 («Immunotech»). Íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè äèôôåðåíöèðîâî÷íûõ àíòèãåíîâ ÑD3, ÑD4, ÑD5, ÑD7, CD8, CD16, CD20; àêòèâàöèîííûõ àíòèãåíîâ CD25, CD26, CD71, HLA-DR, CD95; ìîëåêóë àäãåçèè CD11b, CD18, CD50, CD54, CD56; ôàêòîðà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé óñòîé÷èâîñòè Pgp-170. Íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ èññëåäîâàëèñü óðîâíè ýêñïðåññèè: àíòèãåíîâ CD11b, CD18, CD50, CD54, ÑD95, Pgp-170. Ðåãèñòðàöèÿ êëèíè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé è çàáîð êðîâè ïðîâîäèëèñü äî íà÷àëà ëå÷åíèÿ è ïîñëå ïðåäïîëàãàåìîé ïîëíîé ðåàëèçàöèè êëèíè÷åñêîãî ýôôåêòà ìåòîòðåêñàòà - ÷åðåç 6 ìåñÿöåâ òåðàïèè. Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ ïðîâîäèëàñü íà ïåðñîíàëüíîì êîìïüþòåðå ñ èñïîëüçîâàíèåì ïðîãðàììíîãî ïàêåòà Statisica 5.1. Ïðèìåíÿëèñü íåïàðàìåòðè÷åñêèå ìåòîäû (ðàíãîâàÿ êîððåëÿöèÿ ïî Ñïèðìåíó, òåñò Ìàííà-Óèòíè, Óèëêîêñîíà, òî÷íûé êðèòåðèé Ôèøåðà), äëÿ îïèñàíèÿ ðàñïðåäåëåíèÿ äàííûõ áûëè èñïîëüçîâàíû ñðåäíÿÿ âåëè÷èíà (Ì) è ñòàíäàðòíîå îòêëîíåíèå (SD). Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå. Íà ïåðâîì ýòàïå ìû èññëåäîâàëè îñîáåííîñòè ôåíîòèïà ëåéêîöèòîâ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé çäîðîâûõ äîíîðîâ. Ïðè îöåíêå èììóíîëîãè÷åñêîãî ôåíîòèïà ëèìôîöèòîâ ìû îáíàðóæèëè çíà÷èìîå óìåíüøåíèå êîëè÷åñòâà ÑD8+ëèìôîöèòîâ (áîëüíûå - 22,4±6,5% è çäîðîâûå 29,0±9,0%, Ð<0,05) (òàáëèöà 3) è òåíäåíöèþ ê óâåëè÷åíèþ èììóíîðåãóëÿòîðíîãî èíäåêñà (CD4/CD8) ó áîëüíûõ ÐÀ. Êðîìå òîãî, íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ âûÿâëåíî óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè β2-èíòåãðèíîâ, àíòèãåíà CD18 (áîëüíûå -71,0±19,0%, çäîðîâûå 81,0±13,0%, Ð<0,05). Êîëè÷åñòâî CD11b+-ëèìôîöèòîâ îñòàâàëîñü â ïðåäåëàõ íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé, îäíàêî íàáëþäàëîñü óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè àíòèãåíà Òàáëèöà 2 Äèíàìèêà êëèíè÷åñêèõ è ëàáîðàòîðíûõ ïîêàçàòåëåé àêòèâíîñòè ÐÀ ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì Êëèíè÷åñêèå è ëàáîðàòîðíûå ïîêàçàòåëè Áîëü, ïî ÂÀØ (0-10 ñì). Óòðåííÿÿ ñêîâàííîñòü (ìèí.) ×èñëî ïðèïóõøèõ ñóñòàâîâ ×èñëî áîëåçíåííûõ ñóñòàâîâ Èíäåêñ ïðèïóõëîñòè Ñèëà ñæàòèÿ ïðàâîé êèñòè (êÏà) Ñèëà ñæàòèÿ ëåâîé êèñòè (êÏà) Óòîìëÿåìîñòü, ïî ÂÀØ (0-10 ñì). Òÿæåñòü ñîñòîÿíèÿ (îöåíêà áîëüíîãî) Òÿæåñòü ñîñòîÿíèÿ (îöåíêà âðà÷à) Ôèáðèíîãåí (ììîëü/ë) Ñåðîìóêîèä (Åä) ÑÎÝ (ìì/÷) Ñ- ðåàêòèâíûé áåëîê (ìã%) Ðåâìàòîèäíûé ôàêòîð (lîg òèòðà) 6,5±1,3 117,0±160,9 7,4±4,1 15,8±7,8 9,0±4,1 64,7±37,7 70,6±50,2 6,7±2,0 Ïîñëå ëå÷åíèÿ 4,3±2,8** 86,9±118,8 2,7±2,8*** 7,1±7,2*** 2,7±2,8*** 96,0±47,5** 92,0±50,5 5,6±2,2 3,5±0,6 2,4±1,0** 3,5±0,6 4,1±1,3 0,46±0,2 34,8±12,4 1,7±1,6 2,0±0,5 2,4±1,0*** 4,0±0,8 0,35±0,1* 25,0±13,5 1,0±1,0* 1,7±0,9 Äî ëå÷åíèÿ *Ð < 0,05, **Ð < 0,01 , ***Ð< 0,001. ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË 6 ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ CD50 (áîëüíûå - 75,2±15,0% , çäîðîâûå - 83,5±11,3% Ð<0,05) è òåíäåíöèÿ ê ñíèæåíèþ ýêñïðåññèè àíòèãåíà ÑD54 (òàáëèöà 3). Íàøè ðåçóëüòàòû ñîâïàäàþò ñ äàííûìè áîëüøèíñòâà èññëåäîâàòåëåé [5, 19, 28], êîòîðûå îáíàðóæèëè óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè ýòèõ àäãåçèâíûõ ìîëåêóë ëèìôîöèòàìè ÏÊ ó áîëüíûõ ÐÀ [5, 19] èëè íå âûÿâèëè çíà÷èìûõ îòëè÷èé ïî ñðàâíåíèþ ñ äîíîðàìè [28]. Îäíàêî, â ðàíåå ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèÿõ ñ èñïîëüçîâàíèåì èììóíîôåðìåíòíîãî ìåòîäà, áûëà îáíàðóæåíà ïîâûøåííàÿ êîíöåíòðàöèÿ öèðêóëèðóþùèõ ìîëåêóë àäãåçèè ICAM-1 â ÏÊ. Ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî ÷àñòü ðàñòâîðåííûõ ôîðì ìîëåêóë àäãåçèè èìååò ýíäîòåëèàëüíîå ïðîèñõîæäåíèå. Ïðè èññëåäîâàíèè ôåíîòèïà ãðàíóëîöèòîâ â ãðóïïàõ áîëüíûõ ÐÀ è çäîðîâûõ äîíîðîâ çíà÷èìûõ ðàçëè÷èé íå áûëî âûÿâëåíî. Ïî äàííûì ëèòåðàòóðû, ýêñïðåññèÿ àíòèãåíîâ CD11b, CD18 íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ ïðè ÐÀ íå èçìåíåíà. Êðîìå òîãî, îáíàðóæèâàåòñÿ ïîâûøåíèå óðîâíåé ýêñïðåññèè ýòèõ àíòèãåíîâ íà ãðàíóëîöèòàõ, âûäåëåííûõ èç ñèíîâèàëüíîé æèäêîñòè [12]. Ïðè ñðàâíåíèè óðîâíåé ýêñïðåññèè ôàêòîðà ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé óñòîé÷èâîñòè íà ëåéêîöèòàõ ÏÊ áîëüíûõ ÐÀ è çäîðîâûõ äîíîðîâ áûëè ïîëó÷åíû ñëåäóþùèå ðåçóëüòàòû. Ìû îáíàðóæèëè òåíäåíöèþ ê ïðåîáëàäàíèþ ëèìôîöèòîâ è ãðàíóëîöèòîâ, ýêñïðåññèðóþùèõ ìîëåêóëó Pgp-170, ó áîëüíûõ ÐÀ. Êîððåëÿöèîííûé àíàëèç íå âûÿâèë ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìûõ ñâÿçåé ýêñïðåññèè Pgp-170 ñ äðóãèìè ëåéêîöèòàðíûìè àíòèãåíàìè. Íå áûëî îáíàðóæåíî ñâÿçåé óðîâíÿ ýêñïðåññèè Pgp-170 ñ êëèíèêî-ëàáîðàòîðíûìè îñîáåííîñòÿìè ÐÀ, ïðåäøåñòâóþùåé òåðàïèåé, äåìîãðàôè÷åñêèìè îñîáåííîñòÿìè áîëüíûõ. Î âîçìîæíîì ó÷àñòèè Òàáëèöà 3 Õàðàêòåðèñòèêà èììóíîëîãè÷åñêîãî ôåíîòèïà ëèìôîöèòîâ çäîðîâûõ ëèö è áîëüíûõ ÐÀ (äî è ïîñëå ëå÷åíèÿ ÌÒ) ÑDìàðêåð ÑD3 ÑD4 CD5 CD7 ÑD8 CD4/8 ÑD11b ÑD16 ÑD18 ÑD20 ÑD25 CD26 ÑD50 ÑD54 ÑD56 ÑD71 ÑD95 HLA-DR Pgp170 Çäîðîâûå N=18 65,6±11,4 35,2±10,2 61,3±10,8 58,6±14,1 29,0±9,0 1,3±0,6 20,2±9,9 11,1±6,2 81,0±13,0 8,1±3,2 4,9±5,1 25,2±12,2 83,5±11,3 9,3±6,6 5,8±3,5 3,7±3,4 25,6±12,3 9,1±2,9 2,5±1,9 Áîëüíûå ÐÀ äî ëå÷åíèÿ 61,8±11,7 36,0±10,7 55,5±14,1 51,7±14,8 22,4±6,5 1,6±1,0 22,2±11,2 13,0±1,9 71,0±19,0 7,1±5,7 4,9±4,6 24,3±14,6 75,2±15,0 8,2±8,0 5,1±4,7 4,6±4,7 27,2±17,4 9,1±4,2 17,1±24,8 Áîëüíûå ÐÀ ïîñëå ëå÷åíèÿ 58,7±15,6 31,9±11,3 46,1±18,4 48,3±13,4 20,3±8,6 2,1±1,0 22,3±18,9 12,0±9,4 55,9±25,1 6,6±3,2 3,4±3,7 15,7±12,2* 58,7±24,5* 6,5±4,6 5,3±5,0 3,8±4,3 15,0±15,7 8,2±4,7 23,3±27,3 *Ð < 0,05 ïðè ñðàâíåíèè ðåçóëüòàòîâ äî è ïîñëå òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì. ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË Pgp-170 â ïàòîëîãè÷åñêîì ïðîöåññå ïðè ÐÀ ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü îáíàðóæåíèå ïðÿìîé ñâÿçè ìåæäó óðîâíåì ýêñïðåññèè Pgp-170 ëèìôîöèòàìè ÏÊ è óðîâíåì ôèáðèíîãåíà (R=0,54). Íàøè ðåçóëüòàòû ñîâïàäàþò ñ äàííûìè äðóãèõ ó÷åíûõ [16, 18], êîòîðûå ïîëó÷èëè ïîäîáíûå ðåçóëüòàòû. Íå áûëî íàéäåíî ëèòåðàòóðíûõ äàííûõ îá ýêñïðåññèè Pgp-170 ãðàíóëîöèòàìè ÏÊ. Èçâåñòíî, ÷òî áàçèñíûå ïðåïàðàòû, îäíèì èç êîòîðûõ ÿâëÿåòñÿ ìåòîòðåêñàò, èíäóöèðóþò êëèíè÷åñêóþ ðåìèññèþ è ïðåäóïðåæäàþò ïîâðåæäåíèå ñóñòàâîâ è òêàíåé ïðè ÐÀ. Íàðÿäó ñ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûìè, ÌÒ îáëàäàåò èììóíîñóïðåññèâíûìè ñâîéñòâàìè, îäíàêî òîíêèå ìåõàíèçìû åãî äåéñòâèÿ îñòàþòñÿ íåÿñíûìè.  ñâÿçè ñ ýòèì, íà ñëåäóþùåì ýòàïå íàøåé ðàáîòû, ìû èññëåäîâàëè äèíàìèêó ëåéêîöèòàðíîãî ôåíîòèïà ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ. Ìû íàáëþäàëè ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìóþ ïîëîæèòåëüíóþ äèíàìèêó áîëüøèíñòâà îñíîâíûõ êëèíè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé (áîëü â ñóñòàâàõ, ÷èñëî ïðèïóõøèõ, ÷èñëî áîëåçíåííûõ ñóñòàâîâ, èíäåêñ ïðèïóõëîñòè, ñèëà ñæàòèÿ ïðàâîé êèñòè, òÿæåñòü ñîñòîÿíèÿ ïî îöåíêå âðà÷à è áîëüíîãî) è ëàáîðàòîðíûõ (ñåðîìóêîèä, Ñ-ðåàêòèâíûé áåëîê) ïîêàçàòåëåé àêòèâíîñòè ÐÀ (òàáëèöà 2). Òåðàïèÿ îêàçàëàñü ýôôåêòèâíîé ó 60% ïàöèåíòîâ: çíà÷èòåëüíîå óëó÷øåíèå íàáëþäàëîñü ó 40%, óëó÷øåíèå - ó 10%, íåçíà÷èòåëüíîå - ó 10%. Ýôôåêò îò ëå÷åíèÿ îòñóòñòâîâàë ó 25% áîëüíûõ, óõóäøåíèå çàôèêñèðîâàíî ó 15% áîëüíûõ. Ïåðåíîñèìîñòü ìåòîòðåêñàòà áûëà óäîâëåòâîðèòåëüíîé. Ñïåêòð è ÷àñòîòà ïîáî÷íûõ ðåàêöèé â íàøåì èññëåäîâàíèè íå îòëè÷àëèñü îò òàêîâûõ â äðóãèõ èññëåäîâàíèÿõ [1]. Ìû ïîêàçàëè, ÷òî òåðàïèÿ ÌÒ íå îêàçûâàåò âëèÿíèÿ íà ýêñïðåññèþ äèôôåðåíöèðîâî÷íûõ àíòèãåíîâ, òàêèõ êàê ÑD3+, ÑD4+, CD8+, ÑD16+, CD20+, ÷òî êîððåëèðóåò ñ äàííûìè ëèòåðàòóðû [17]. À ïðè èññëåäîâàíèè áèîïòàòîâ ñèíîâèè Balsa A. et al. [7] è Dolhain R.et al. [11] âûÿâèëè óìåíüøåíèå èíôèëüòðàöèè ñèíîâèàëüíîé òêàíè ÑD4+- CD8+- ëèìôîöèòàìè íà ôîíå òåðàïèè ÌÒ. Òàêæå ìû îáíàðóæèëè, ÷òî ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ îòìå÷àåòñÿ çíà÷èìîå ñíèæåíèå ïðîöåíòà ëèìôîöèòîâ ÏÊ, ýêñïðåññèðóþùèõ ìîëåêóëó àäãåçèè ICAM3 (CD50) ñ 75,2±15,0% äî 58,7±24,5%, Ð<0,05. Ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÌÒ ïîäàâëÿåò ýêñïðåññèþ Å-ñåëåêòèíà è VCAM-1 [10]. Òàêèì îáðàçîì, íà ôîíå ëå÷åíèÿ ÌÒ óìåíüøàåòñÿ ïðèòîê íîâûõ ïîðöèé ëèìôîöèòîâ â âîñïàëåííóþ ñèíîâèþ, çà ñ÷åò åãî âëèÿíèÿ íà ýêñïðåññèþ îòäåëüíûõ àäãåçèâíûõ ìîëåêóë. Êðîìå òîãî, ìû îáíàðóæèëè, ÷òî ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì óìåíüøàåòñÿ ýêñïðåññèÿ àêòèâàöèîííîãî àíòèãåíà CD26 ñ 24,3±14,6% äî 15,7±12,2%, Ð<0,05 (òàáëèöà 3). Ìû ïðåäïîëàãàåì, ÷òî ñïîñîáíîñòü ÌÒ ìîäóëèðîâàòü öèòîêèíîâûé ïðîôèëü îñóùåñòâëÿåòñÿ îò÷àñòè ïîñðåäñòâîì âëèÿíèÿ íà ýêñïðåññèþ ôåðìåíòà äèïåïòèäèëïåïòèäàçû 4 (ÑD26). Ïðè èçó÷åíèè âëèÿíèÿ òåðàïèè ÌÒ íà ýêñïðåññèþ îòäåëüíûõ àíòèãåíîâ íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ ó èññëåäóåìîé ãðóïïû áîëüíûõ ÐÀ ìû âûÿâèëè çíà÷èòåëüíîå óìåíüøåíèå ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà äëÿ èíòåãðèíîâ, àíòèãåíà CD50 (ICAM-3) c 71,7±24,6% äî 56,2±24,3%, Ð<0,05. Ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíîé äèíàìèêè ýêñïðåñ¹4/ ÒÎÌ1/2002 ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ Òàáëèöà 4 Õàðàêòåðèñòèêà ôåíîòèïà ãðàíóëîöèòîâ çäîðîâûõ ëèö è áîëüíûõ ÐÀ (äî è ïîñëå ëå÷åíèÿ ÌÒ) ÑDìàðêåð Çäîðîâûå N=18 Áîëüíûå ÐÀ äî ëå÷åíèÿ Áîëüíûå ÐÀ ïîñëå ëå÷åíèÿ ÑD11b 65,2±20,1 62,3±25,2 57,7±25,1 ÑD16 ÑD18 ÑD50 ÑD54 ÑD95 Pgp170 77,6±16,7 78,9±17,3 83,3±10,9 1,7±1,2 4,6±5,9 2,2±1,8 70,5±20,7 74,9±19,7 71,7±24,6 4,3±8,8 8,4±10,6 6,8±7,2 68,6±21,1 59,0±21,7 56,2±24,3* 3,8±4,5 3,3±3,8 16,1±22,7 *- P<0,05 â ãðóïïå áîëüíûõ ÐÀ ïðè ñðàâíåíèè ïîêàçàòåëåé äî è ïîñëå òåðàïèè ÌÒ. ñèè äðóãèõ èññëåäóåìûõ ìîëåêóë àäãåçèè âûÿâëåíî íå áûëî (Òàáëèöà4). Íàøè ðåçóëüòàòû äîïîëíÿþò äàííûå Storgaard M è ñîàâò. [27], êîòîðûå ïîêàçàëè, ÷òî òåðàïèÿ ÌÒ íå âëèÿåò íà ýêñïðåññèþ àíòèãåíîâ CD18, CD11b íà íåéòðîôèëàõ ÏÊ ïðè ÐÀ. Òàêèì îáðàçîì, ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî â ðåçóëüòàòå òåðàïèè ÌÒ óìåíüøàåòñÿ èíòåíñèâíîñòü ìåæêëåòî÷íûõ âçàèìîäåéñòâèé ëåéêîöèòîâ è èõ ïðèòîê â ñèíîâèþ. Âîçìîæíî, ýòîò ïðîöåññ îñóùåñòâëÿåòñÿ îïîñðåäîâàííî, ïóòåì èçìåíåíèÿ öèòîêèíîâîãî áàëàíñà, òàê êàê èçâåñòíî, ÷òî ÌÒ îêàçûâàåò èíãèáèðóþùåå âëèÿíèå íà ñèíòåç òàêèõ öèòîêèíîâ, êàê èíòåðëåéêèí-1, ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëè àëüôà, IFN-γ è äð. Äàëåå ðåçóëüòàòû òåðàïèè ÌÒ áûëè ïðîàíàëèçèðîâàíû â çàâèñèìîñòè îò ïîêàçàòåëÿ ñèñòåìû ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé ðåçèñòåíòíîñòè Pgp-170.  ãðóïïå áîëüíûõ ÐÀ íàáëþäàëàñü òåíäåíöèÿ ê óâåëè÷åíèþ ýêñïðåññèè Pgp-170 íà ëèìôîöèòàõ ÏÊ è â áîëüøåé ñòåïåíè íà ãðàíóëîöèòàõ ÏÊ, îäíàêî, ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîé äèíàìèêè ýòîãî àíòèãåíà ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ íå áûëî âûÿâëåíî. Áûëà îáíàðóæåíà îòðèöàòåëüíàÿ êîððåëÿöèîííàÿ ñâÿçü ìåæäó ýêñïðåññèåé Pgp-170 ãðàíóëîöèòàìè ÏÊ ïîñëå ëå÷åíèÿ è ýôôåêòîì òåðàïèè ÌÒ(R=-0,50, P<0,05). Ðàíåå ïðîâîäèâøèåñÿ èññëåäîâàíèÿ âëèÿíèÿ ÌÒ íà ýêñïðåññèþ Pgp170 âûäåëåííûìè ëèìôîöèòàìè in vitro [33] òàêæå íå îáíàðóæèëè çíà÷èìîé äèíàìèêè óðîâíÿ ýêñïðåññèè ýòîãî àíòèãåíà. Ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî ÌÒ íå ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì äëÿ Ðgp - òðàíñïîðòíîãî êàíàëà, à ðåçèñòåíòíîñòü ê ëå÷åíèþ ýòèì ïðåïàðàòîì ïðè ÐÀ îáóñëîâëåíà äðóãèìè ôàêòîðàìè. Ìû ïîïûòàëèñü âûÿâèòü ïðè÷èíû îòñóòñòâèÿ òåðàïåâòè÷åñêîãî ýôôåêòà ó ÷àñòè áîëüíûõ ÐÀ. Ïðîâåäåííûé êîîðåëÿöèîííûé àíàëèç ïîçâîëèë âûÿâèòü îáðàòíóþ êîððåëÿöèþ ìåæäó óðîâíåì ýêñïðåññèè ìîëåêóëû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè HLADR íà ëèìôîöèòàõ äî ëå÷åíèÿ è ýôôåêòîì òåðàïèè ÌÒ (R=-0,47, P<0,05). Òàêèì îáðàçîì, ìîæíî ïîëàãàòü, ÷òî ïîâûøåííûå óðîâíè ýêñïðåññèè HLA-DR ÿâëÿþòñÿ ïðîãíîñòè÷åñêè íåáëàãîïðèÿòíûì ôàêòîðîì ïðè íàçíà÷åíèè òåðàïèè ÌÒ. ¹4/ ÒÎÌ 1/2002 7 Âûâîäû. Îñîáåííîñòüþ ôåíîòèïà ëåéêîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè áîëüíûõ ÐÀ ÿâëÿåòñÿ áîëåå íèçêîå ïî ñðàâíåíèþ ñî çäîðîâûìè êîëè÷åñòâî CD8+ ïîçèòèâíûõ ëèìôîöèòîâ è îòíîñèòåëüíîå ïðåîáëàäàíèå ÑD4+ êëåòîê. Áûëî âûÿâëåíî óìåíüøåíèå ïðîöåíòà ÑD18+ è CD50+ -ïîçèòèâíûõ ëèìôîöèòîâ. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñîîòâåòñòâóþò èìåþùèìñÿ ïðåäñòàâëåíèÿìè î ïàòîãåíåçå çàáîëåâàíèÿ è ìîãóò áûòü îáúÿñíåíû òåì, ÷òî ëèìôîöèòû, ýêñïðåññèðóþùèå ìîëåêóëû àäãåçèè, àêòèâíî ìèãðèðóþò â çîíû ðåâìàòîèäíîãî âîñïàëåíèÿ, â ðåçóëüòàòå ÷åãî îáíàðóæèâàåòñÿ îòíîñèòåëüíîå óìåíüøåíèå ïðîöåíòà ýòèõ êëåòîê â ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè. Íàøå èññëåäîâàíèå ïîçâîëèëî äîïîëíèòü çíàíèÿ î ìåõàíèçìàõ äåéñòâèÿ ìåòîòðåêñàòà. Ìû îáíàðóæèëè, ÷òî òåðàïèÿ ýòèì ïðåïàðàòîì îêàçûâàåò âëèÿíèå íà ìåæêëåòî÷íûå âçàèìîäåéñòâèÿ ïîñðåäñòâîì óìåíüøåíèÿ ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà äëÿ èíòåãðèíà ICAM-3, óìåíüøàÿ òåì ñàìûì ó÷àñòèå ëåéêîöèòîâ â èììóíîâîñïàëèòåëüíûõ ðåàêöèÿõ. Âàæíîé íàõîäêîé ÿâèëîñü ñíèæåíèå óðîâíÿ ýêñïðåññèè äèïåïòèäèëïåïòèäàçû-4 (ÑD26) íà ëèìôîöèòàõ ïîä âëèÿíèåì òåðàïèè ÌÒ. Êðîìå òîãî, áûëî âûÿâëåíî, ÷òî èñõîäíûé óðîâåíü ýêñïðåññèè ìîëåêóëû HLA-DR íà ëèìôîöèòàõ ìîæåò îêàçûâàòü âëèÿíèå íà ðåçóëüòàòû òåðàïèè ìåòîòðåêñàòîì ïðè ÐÀ. Ïðè íàèáîëåå âûñîêîé ýêñïðåññèè ýòèõ ìîëåêóë, ñâèäåòåëüñòâóþùåé îá àêòèâíîì ïðåäñòàâëåíèè àíòèãåíîâ (è àóòîàíòèãåíîâ) èììóíîêîìïåòåíòíûì êëåòêàì, êëèíè÷åñêèé ýôôåêò áûë íàèìåíüøèì. Íå áûëî îïðåäåëåíî ÷åòêîé çàâèñèìîñòè ðåçóëüòàòîâ òåðàïèè ÌÒ îò ïîêàçàòåëÿ ñèñòåìû ìíîæåñòâåííîé ëåêàðñòâåííîé ðåçèñòåíòíîñòè - Pgp-170. Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî, ëèáî ÌÒ íå ÿâëÿåòñÿ ñóáñòðàòîì äëÿ ýòîãî òðàíñïîðòíîãî êàíàëà, ëèáî åãî ôóíêöèÿ ïðîÿâëÿåòñÿ ïðè íàëè÷èè äåôåêòîâ äðóãèõ òðàíñïîðòåðîâ, ó÷àñòâóþùèõ â âûáðîñå ðàçëè÷íûõ âåùåñòâ. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Íàñîíîâ Å.Ë. 50 ëåò ïðèìåíåíèÿ ìåòîòðåêñàòà â ðåâìàòîëîãèè. // Ðóññêèé Ìåäèöèíñêèé æóðíàë, 2000, ¹ 8-9, C. 372-376. 2. Íàñîíîâ Å.Ë., Ñàìñîíîâ Ì.Þ. è ñîàâò. Ðàñòâîðèìûå ìîëåêóëû àäãåçèè (Ð-ñåëåêòèí, ICAM-1 è ICAM-3) ïðè ðåâìàòîèäíîì àðòðèòå. // Òåð. àðõèâ, 1999, ¹ 5, C. 17-20. 3. Ñèãèäèí ß.À., Ëóêèíà Ã.Â. Áàçèñíàÿ (ïàòîãåíåòè÷åñêàÿ) òåðàïèÿ ðåâìàòîèäíîãî àðòðèòà. Novartis pharma services Inc., Ìîñêâà, 2000 - 100 ñ. 4. ßðèëèí À.À. Îñíîâû èììóíîëîãèè: Ó÷åáíèê. - «Ìåäèöèíà», Ìîñêâà,1999 - 608 ñ. 5. ßðèëèíà À.À. Ðîëü ìîëåêóë àäãåçèè â ïàòîãåíåçå ðåâìàòîèäíîãî àðòðèòà. // Íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêàÿ ðåâìàòîëîãèÿ, 2000, ¹ 1, Ñ. 61-69. 6. Afeltra A., Galeazzi M., Sebastiani G. et al. Coexpression of CD69 and HLA-DR activation markers on synovial fluid T lymphocytes of patients affected by rheumatoid arthritis: a three-color cytometric analysis. // Int. J.Exp.Pathol. 1997, 78, ¹ 5, P. 331-336. 7. Balsa A., Gamallo C., Martin-Mola E. et al. Histologic changes in rheumatoid synovitis induced by naproxen and methotrexate. // J. Rheumatol., 1993, 20, ¹ 9, P. 1472-1477. 8. Carthy D., Taylor M.J., Bernhagen J. et al. Leucocytes integrin and CR1 expression on peripheral blood leucocytes of patients with rheumatoid arthritis. // Ann. Rheum. Dis., 1992, 51, ¹ 3, P. 307-312. ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË 8 ÁÈÎÌÀÐÊÅÐÛ 9. Cogalgil S, Taysi S. Sialic acid, intercellular adhesion molecule-1 and rheumatoid arthritis: a study on the erythrocyte membrane. // Clin. Chem. Lab. Med., 2002, 40, ¹ 4, P. 356-360. 10. Cutolo Ì., Sulli A., Pizzorni C. et al. Anti-inflammatory meñhanisms of methotrexate in rheumatoid arthritis. // Ann. Rheum.Dis., 2001, 60, P. 729-735. 11. Dolhain R., Tak P., Dijkmans B. et al. Methotrexate reduces inflammatory cell numbers, expression of monokines and of adhesion molecules in synovial tissue of patients with rheumatoid arthritis. // Br. J. Rheumatol., 1998, 37, ¹ 5, P. 502-508. 12. Gendt C., Clerck L., Bridts C. et al. Relationship between interleukin-8 and neutrophil adhesion molekyles in rheumatoid arthritis. // Rheumatol. Int., 1996, ¹ 16, P. 169173. 13. Gerli R., Muscat C., Bertotto A. et al. CD26 surface molecule involvement in T cell activation and lymphokine synthesis in rheumatoid and other inflammatory synovitis. // Clin. Immunol. Immunopathol., 1996, 80, ¹ 1, P. 31-37. 14. Hildner K., Finotto S, Becker C. et al. Tumor necrosis factor (TNF) production by Tcell receptor-primed T lymphocytes is a target for low dose methotrexate in rheumatoid arthritis. // Clin. Exp. Immunol., 1999, 118, ¹ 1, P. 137-146. 15. Isomaki Ð., Aversa G., Cocks B. et al. Increased expression of signaling lymphocytic activation molecule in patients with rheumatoid arthritis and its role in the regulation of cytokine production in rheumatoid synovium. // J. Immunol., 1997, 159, ¹ 6, P. 2986-2993. 16. Jorgensen C., Sun. R., Rossi J.F. et al. Expression of multidrug resistance gene in human rheumatoid synovium. // Rheumatol. Int., 1995, 15, ¹ 2, P. 83-86. 17. Lacki J., Mackiewicz S., Wiktorowicz U. et al. Lymphocyte phenotype studies of rheumatoid arthritis patients treated with methotrexate. // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz), 1994, 42, ¹ 4, P. 287-290. 18. Llorente L., Richaud-Patin Y., Diaz-Borjon A., et al. Increased P-glycoprotein activity in lymphocytes from rheumatoid arthritis patients might influence disease outcome. // Joint Bone Spine, 2000, 67, P. 30-39. 19. Macey M., Wilton J., Carbon R. et al. Leucocyte activation and function-associated in inflammatory disease. // Agent Action, 1993, 38, P.39-40. 20. Mason J.C. Karahi P., Hascard D.O. Detection of increased levels of circulating intercellular adhesion molecule 1 in some patients with rheumatoid arthritis but not in patients with ÐÎÑÑÈÉÑÊÈÉ ÁÈÎÒÅÐÀÏÅÂÒÈ×ÅÑÊÈÉ ÆÓÐÍÀË systemic lupus erythematosus. // Arthritis Rheum., 1993, 36, P. 519-527. 21. Masuco-Hongo K., Sekine T., Ueda S. et al. Long-term persistent accumulation of CD8+ T cells in synovial fluid of rheumatoid arthritis. // Ann. Rheum. Dis., 1997, 56, ¹ 10, P. 613-621. 22. Mizokami A., Eguchi K., Kawakami A. et al. Increased population of high fluorescence 1F7 (CD26) antigen on T cells in synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis. // J. Rheumatol., 1996, 23, ¹ 12, P. 2022-2026. 23. Muscat C., Bertotto A., Agea E. et al. Expression and functional role of 1F7 (CD26) antigen on peripheral blood and synovial fluid T cells in rheumatoid arthritis patients. / / Clin. Exp. Immunol., 1994, 98, ¹ 2, P. 252-256. 24. Panayi G.S. T-cell-dependent pathways in rheumatoid arthritis. // Current opinion in Rheumatology., 1997, ¹ 9, P. 236-240. 25. Paulus H., Egger M., Ward J. et al. Analisis of improvment in individal rheumatoid arthritis patients treated with diseasemodifyng antirheumatic drugs, based on the findings in patients treated with placebo. // Arthritis Rheum., 1990, 33, P. 477- 484. 26. Sfikakis P., Charalambopoulos D., Vaiopoulos G. et al. Circulating P- and L-Selectin and T-Lymphocyte Activation in Patients with Autoimmune Rheumatic Diseases. // Clin. Rheumatol.,1999, 18, P. 28-32. 27. Storgaard M., Jensen M., Stengaard-Pedersen K. et al.Effects of methotrexate, sulphasalazine and aurothiomalate on polymorphonuclear leucocytes in rheumatoid arthritis. // Scand. J. Rheum., 1996, 25, P. 168-173. 28. Takahashi H., Soderstrom K., Nilsson E. et al. Integrins and other adhesion molecules on lymphocytes from synovial fluid and peripheral blood of rheumatoid arthritis patients. // Eur.J.Immunol., 1992, 22, ¹ 11, P. 2879-2885. 29. Tanaka S., Murakami T., Horikawa H. et al. Suppression of arthritis by inhibitors of dipeptidylpeptidase 4. // Int. J. Immunopharmacol., 1997, 19, P. 15-24. 30. Voskuyl A., Martin S., Melchers I. et al. Levels of circulating intercellular adhesion molecule-1 and -3 but not circulating endothelial leucocytes adhesion molecule are increased in patients with rheumatoid vasculitis. // Br. J. of Rheumatol., 1995, 34, P. 311-315. 31. Yudoh K., Matsuno H., Nakazawa F. et al. Increased expression of multidrug resistance of P-glycoprotein on Th1 cells correlates with drug resistance in rheumatoid arthritis. // Arthritis Rheum., 1999, 42, ¹ 9, P. 2014-2018. ¹4/ ÒÎÌ1/2002