СВЕРХМАЛЫЕ ДОЗЫ АНТИТЕЛ К ГИСТАМИНУ: ВЛИЯНИЕ НА
реклама
Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2003, приложение № 1 58 ÑÂÅÐÕÌÀËÛÅ ÄÎÇÛ ÀÍÒÈÒÅË Ê ÃÈÑÒÀÌÈÍÓ: ÂËÈßÍÈÅ ÍÀ ÏÐÎÄÓÊÖÈÞ ÀËËÅÐÃÅÍÑÏÅÖÈÔÈ×ÅÑÊÈÕ ÀÍÒÈÒÅË Â.È.Àãàôîíîâ, Í.Â.Áåëüñêàÿ, Ì.Ã.Äàíèëåö, Þ.Ï.Áåëüñêèé, Å.Ñ.Òðîôèìîâà, Þ.Ë.Äóãèíà*, Î.È.Ýïøòåéí* ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ; *Íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííàÿ ôèðìà “Ìàòåðèà Ìåäèêà Õîëäèíã”, Ìîñêâà Èññëåäîâàëè âëèÿíèå àíòèòåë ê ãèñòàìèíó â ñâåðõìàëûõ äîçàõ, ïîëó÷åííûõ ïî òåõíîëîãèè ïîòåíöèðîâàíèÿ, íà ïðîäóêöèþ IgE- è IgG1-àíòèòåë â îòâåò íà 1-, 2- è 3-êðàòíóþ èììóíèçàöèþ îâàëüáóìèíîì â äîçàõ 0.5, 10 è 100 ìêã/ìûøü. Êóðñîâîå ââåäåíèå àíòèòåë ê ãèñòàìèíó äâóêðàòíî èììóíèçèðîâàííûì ìûøàì ïðèâåëî ê ñíèæåíèþ ïðîäóêöèè àëëåðãåíñïåöèôè÷åñêèõ IgE è IgG1 ïðè èñïîëüçîâàíèè äîç îâàëüáóìèíà 100 è 0.5 ìêã/ìûøü ñîîòâåòñòâåííî. Ó 3-êðàòíî èììóíèçèðîâàííûõ æèâîòíûõ ïîä äåéñòâèåì ïðåïàðàòà ïðîäóêöèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ îáîèõ êëàññîâ ñíèæàëàñü ïðè èñïîëüçîâàíèè âñåõ äîç îâàëüáóìèíà. Êëþ÷åâûå ñëîâà ñëîâà: èììóíîãëîáóëèíû, àíòèòåëà ê ãèñòàìèíó, ñâåðõìàëûå äîçû Ðàíåå íàìè ïîêàçàíî, ÷òî ââåäåíèå ñâåðõìàëûõ äîç àôôèííî î÷èùåííûõ (ïîòåíöèðîâàííûõ) àíòèòåë ê ãèñòàìèíó (ÏÀÒ-Ã) îñëàáëÿåò ðàçâèòèå àíàôèëàêòè÷åñêîãî øîêà [1]. Èçâåñòíî, ÷òî ãèñòàìèí ÿâëÿåòñÿ íå òîëüêî ìåäèàòîðîì âîñïàëåíèÿ, íî è èììóíîìîäóëÿòîðîì [2-4]. Òàê, ïîêàçàíî, ÷òî íà ýòàïå èíèöèàöèè èììóííîãî îòâåòà ãèñòàìèí ñïîñîáñòâóåò ðàçâèòèþ àëëåðãè÷åñêîãî òèïà îòâåòà íà àíòèãåí [5-8].  ÷àñòíîñòè, ñòèìóëèðóÿ ñèíòåç èíòåðëåéêèíà-4 [7], ãèñòàìèí ìîæåò óâåëè÷èâàòü ñåêðåöèþ IgE è IgG1.  ñâÿçè ñ ýòèì ìû èññëåäîâàëè âëèÿíèå ÏÀÒ-à íà ïðîäóêöèþ àëëåðãåíñïåöèôè÷åñêèõ IgE è IgG1-àíòèòåë ïðè ðàçëè÷íûõ ðåæèìàõ èììóíèçàöèè. ÌÅÒÎÄÈÊÀ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Èñïîëüçîâàëè ïîòåíöèðîâàííûé ïðåïàðàò, ñîäåðæàùèé ñìåñü ãîìåîïàòè÷åñêèõ ðàçâåäåíèé (ýêâèâàëåíòíàÿ êîíöåíòðàöèÿ 10—24 ìàññîâûõ äîëåé) ÏÀÒ-à è äèñòèëëèðîâàííóþ âîäó (ÄÂ). Ýêñïåðèìåíòû ïðîâåäåíû íà 135 ìûøàõ CBF1 I êàòåãîðèè â âîçðàñòå 2-4 ìåñ (ìàññîé 18-20 ã). Ñîäåðæàíèå IgG1 è IgE îïðåäåëÿëè ìåòîäîì ïàññèâíîé êîæíîé àíàôèëàêñèè, äëÿ ÷åãî èñïîëüçîâàëè 10 íåëèíåéíûõ áåëûõ ìûøåé ìàññîé 1820 ã è 10 íåëèíåéíûõ êðûñ ìàññîé 180-250 ã. Âñå æèâîòíûå ïîëó÷åíû èç ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè ÒÍÖ ÑÎ ÐÀÌÍ. Ïðîäóêöèþ IgE è IgG1 âûçûâàëè âíóòðèáðþøèííûì ââåäåíèåì îâàëüáóìèíà (OVA) ñ àäúþâàíòîì — Al(OH)3 (îáà — “ICN”). Äëÿ èììóíèçàöèè èñïîëüçîâàëè 3 äîçèðîâêè àíòèãåíà è àäúþâàíòà: 0.5 ìêã+0.5 ìã, 10 ìêã+5 ìã, 100 ìêã+5 ìã íà 1 ìûøü ñîîòâåòñòâåííî. Èììóíèçàöèþ ïðîâîäèëè 1-, 2- è 3-êðàòíûìè èíúåêöèÿìè ñîîòâåòñòâóþùèõ äîç àíòèãåíà è àäúþâàíòà ñ èíòåðâàëîì 3 íåä. ÏÀÒ-à è Ä ââîäèëè per os 1 ðàç â ñóòêè ïî 0.2 ìë â òå÷åíèå 10 äíåé. Ïðè ýòîì â ñëó÷àå îäíîêðàòíîé èììóíèçàöèè ÏÀÒ-à è Ä íà÷èíàëè ââîäèòü çà 5 äíåé äî ñàìîé èììóíèçàöèè è ïðîäîëæàëè åùå 5 äíåé ïîñëå íåå. Ïðè 2- è 3-êðàòíîé èììóíèçàöèÿõ ââåäåíèå ÏÀÒ-à è Ä íà÷èíàëè îäíîâðåìåííî ñ èììóíèçàöèåé è ïðîäîëæàëè â òå÷åíèå 10 äíåé. Ñûâîðîòêó êðîâè äëÿ îïðåäåëåíèÿ èììóíîãëîáóëèíîâ áðàëè íà 5-å ñóòêè ïîñëå 1-îé èììóíèçàöèè è íà 3-è ñóòêè ïîñëå 2 è 3-é èììóíèçàöèè. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñîäåðæàíèÿ IgG1 ñûâîðîòêó êðîâè èììóíèçèðîâàííûõ ìûøåé â ðàçâåäåíèÿõ 1:4, 1:8 è 1:16 ââîäèëè ìûøàì â îáëàñòü ñïèíû ïî 30 ìêë âíóòðèêîæíî, ðàçðåøàþùóþ äîçó OVA (0.5 ìã â 0.2 ìë 0.5% ñèíåãî Ýâàíñà) — â ðåòðîîðáèòàëüíûé ñèíóñ ÷åðåç 2 ÷ ïîñëå ââåäåíèÿ ñûâîðîòêè. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ IgE ñûâîðîòêó êðîâè èììóíèçèðîâàííûõ ìûøåé â ðàçâåäå- 59 Ðèñ. 1. Âëèÿíèå ïîòåíöèðîâàííûõ àíòèòåë ê ãèñòàìèíó (ÏÀÒÃ) íà ïðîäóêöèþ IgE, âûçâàííóþ èììóíèçàöèåé îâàëüáóìèíîì â äîçå 0.5 (à), 10 (á) è 100 (â) ìêã/ìûøü. Çäåñü è íà ðèñ. 2: 1 — äèñòèëèðîâàííàÿ âîäà (êîíòðîëü), 2 — ÏÀÒ-Ã. Ðèñ. 2. Âëèÿíèå ÏÀÒ-à íà ïðîäóêöèþ IgG1, âûçâàííóþ èììóíèçàöèåé îâàëüáóìèíîì â äîçå 0.5 (à), 10 (á) è 100 (â) ìêã/ìûøü. 60 Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2003, приложение № 1 íèÿõ 1:4, 1:8 è 1:16 ââîäèëè êðûñàì âíóòðèêîæíî â îáëàñòü æèâîòà ïî 30 ìêë, ðàçðåøàþùóþ äîçó OVA (100 ìêã/100 ã â 1 ìë 0.5% ñèíåãî Ýâàíñà) — â õâîñòîâóþ âåíó ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå ïàññèâíîé èììóíèçàöèè. Èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè îöåíèâàëè ÷åðåç 30 ìèí ïî ïðîêðàøèâàíèþ ó÷àñòêîâ êîæè, äëÿ ÷åãî æèâîòíûõ çàáèâàëè, êîæó îòñåïàðîâûâàëè è îïðåäåëÿëè íàèáîëüøåå ðàçâåäåíèå ñûâîðîòêè, âûçâàâøåå ïðîêðàøèâàíèå íà âíóòðåííåé ïîâåðõíîñòè êîæè. ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß ÏÀÒ-à ñíèæàëè ïðîäóêöèþ IgE ïîñëå 3 èììóíèçàöèé ïðè âñåõ èñïîëüçóåìûõ äîçàõ àíòèãåíà (ðèñ. 1). Ïðè èììóíèçàöèè ñàìîé âûñîêîé äîçîé (100 ìêã/ìûøü) äåéñòâèå ÏÀÒ-à âûÿâëÿëîñü óæå ïîñëå 2 èììóíèçàöèé (ðèñ. 1, â). Ïðîäóêöèÿ OVA-ñïåöèôè÷åñêèõ IgG1 ïðè êóðñîâîì ââåäåíèè ÏÀÒ-à òàêæå ñíèæàëàñü ïîñëå 3 èììóíèçàöèé ïðè âñåõ èñïîëüçóåìûõ äîçàõ àíòèãåíà (ðèñ. 2). Ïðè èñïîëüçîâàíèè íàèìåíüøåé äîçû àíòèãåíà ÏÀÒ-à ñíèæàëè ïðîäóêöèþ IgG1 óæå ïîñëå 2 èììóíèçàöèé (ðèñ. 2, à). Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ââåäåíèå ÏÀÒ-à ýêñïåðèìåíòàëüíûì æèâîòíûì ïðèâîäèò ê óìåíüøåíèþ ïðîäóêöèè OVA-ñïåöèôè÷åñêèõ IgG1 è IgE. Ìîæíî çàêëþ÷èòü, ÷òî â îñíîâå àíòèàíàôèëàêòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ÏÀÒ-à ëåæèò èõ ñïîñîáíîñòü ñíèæàòü âûðàáîòêó àëëåðãåíñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ 1. Àãàôîíîâ Â.È., Áåëüñêàÿ Í.Â., Äàíèëåö Ì.Ã. è äð. // Áþë. ýêñïåð. áèîë. 2001. Ïðèë. 3. C. 46-48. 2. Burastero S.E., Crimi E., Balbo A. et al. // J. Immunol. 1995. Vol. 155, N 12. P. 5836-5846. 3. Garovoy M.R., Reddish M.A., Rocklin R.E. // Ibid. 1983. Vol. 130, N 1. P. 357-361. 4. Leiva L.E., Lammie P.J. // Ibid. 1989. Vol. 142, N 4. P. 1304-1309. 5. Osna N., Elliott K., Khan M.M. // Int. Immunopharmacol. 2001. Vol. 1, N 1. P. 85-96. 6. Osna N., Elliott K., Khan M.M. // Ibid. P. 135-145. 7. Redrup A.C., Howard B.P., MacGlashan D.W. et al. // J. Immunol. 1998. Vol. 160, N 4. P. 1957-1964. 8. Sirois J., Menard G., Moses A.S., Bissonnette E.Y. // Ibid. 2000. Vol. 164. P. 2964-2970.
