ЭКО СЕРВИС КлиниТест-АЛТ ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ (КАТ.№№ B-10371, B-10372, В-10373, В-10374, В-10377) Утверждена приказом Росздравнадзора от 19.01.2009 г. № 226-Пр/09 РУ № ФСР 2009/04022 от 19.01.2009 г. НАЗНАЧЕНИЕ Íàáîðû ïðåäíàçíà÷åíû äëÿ ôîòîìåòðè÷åñêîãî îïðåäåëåíèÿ àêòèâíîñòè àëàíèíàìèíîòðàíñôåðàçû (ÀËÒ) â ñûâîðîòêå è ïëàçìå êðîâè ôåðìåíòàòèâíûì êèíåòè÷åñêèì IFCC-ìåòîäîì áåç ïèðèäîêñàëü-5-ôîñôàòà â êëèíèêî-äèàãíîñòè÷åñêèõ ëàáîðàòîðèÿõ è â íàó÷íî-èññëåäîâàòåëüñêîé ïðàêòèêå. Íàáîðû ðàññ÷èòàíû íà 100 è 500 îïðåäåëåíèé ïðè êîíå÷íîì îáú¸ìå ðåàêöèîííîé ñìåñè 1 ìë. ПРИНЦИП МЕТОДА ÀËÒ êàòàëèçèðóåò ðåàêöèþ ïåðåàìèíèðîâàíèÿ ìåæäó L-àëàíèíîì è 2-îêñîãëóòàðàòîì ñ îáðàçîâàíèåì L-ãëóòàìàòà è ïèðóâàòà.  õîäå ïîñëåäóþùåé îêèñëèòåëüíîâîññòàíîâèòåëüíîé ðåàêöèè ìåæäó ïèðóâàòîì è ÍÀÄÍ, êàòàëèçèðóåìîé ëàêòàòäåãèäðîãåíàçîé, â ýêâèìîëÿðíûõ êîëè÷åñòâàõ ïîëó÷àþòñÿ ëàêòàò è ÍÀÄ+. Ñêîðîñòü óìåíüøåíèÿ êîíöåíòðàöèè ÍÀÄÍ ïðÿìî ïðîïîðöèîíàëüíà àêòèâíîñòè ÀËÒ. СОСТАВ НАБОРОВ Ðåàãåíò 1 (Р1). ÒÐÈÑ-HCl – 0,1 моль/л, ËÄà – 1200 Å/ë, L-àëàíèí – 0,5 ìîëü/ë, азид натрия Ðåàãåíò 2 (Р2). ÒÐÈÑ-HCl – 0,1 моль/л, 2-îêñîãëóòàðàò–15 ììîëü/ë, ÍÀÄÍ –0,18 ììîëü/ë, азид натрия Êàò.¹ Êîìïëåêòàöèÿ Â-10371 Ð1 1õ80 ìë + Ð2 1õ20 ìë Â-10372 Ð1 5õ80 ìë + Ð2 1õ100 ìë Â-10373 Ð1 1õ40 ìë + Ð2 1õ10 ìë Â-10374 Ð1 5õ20 ìë + Ð2 1õ25 ìë Â-10377 Ð1 4õ100 ìë + Ð2 1õ100 ìë АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ×óâñòâèòåëüíîñòü – íå áîëåå 15 Åä/ë. Ëèíåéíîñòü. Îò 20 äî 240 Åä/ë. Îòêëîíåíèå îò ëèíåéíîñòè íå áîëåå 5%. Êîýôôèöèåíò âàðèàöèè – íå áîëåå 5%. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Âî èçáåæàíèå âîçìîæíîãî èíôèöèðîâàíèÿ ïðè ðàáîòå ñ îáðàçöàìè êðîâè íåîáõîäèìî íàäåâàòü îäíîðàçîâûå ðåçèíîâûå ïåð÷àòêè. Ïðè èñïîëüçîâàíèè íàáîðîâ ñëåäóåò ñîáëþäàòü ïðàâèëà òåõíèêè áåçîïàñíîñòè ïðè ðàáîòå ñ õèìè÷åñêèìè âåùåñòâàìè. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Ñâåæàÿ íåãåìîëèçèðîâàííàÿ ñûâîðîòêà èëè ãåïàðèíèçèðîâàííàÿ ïëàçìà. Îïðåäåëåíèå àêòèâíîñòè ÀËÒ äîëæíî áûòü ïðîâåäåíî â äåíü âçÿòèÿ îáðàçöà, ïîñêîëüêó ôåðìåíò òåðÿåò àêòèâíîñòü êàê ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå (18-25îÑ), òàê è ïðè çàìîðàæèâàíèè [1,2]. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА Приготовление монореагента для схемы 1 Ñìåøàòü íåîáõîäèìûå êîëè÷åñòâà ðåàãåíòîâ 1 è 2 â ñîîòíîøåíèè 4:1. Ïîëó÷åííûé ìîíîðåàãåíò ñòàáèëåí â òå÷åíèå 14 суток ïðè òåìïåðàòóðå 2-8°Ñ. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Äëèíà âîëíû 340 íì. Êþâåòà ñ äëèíîé îïòè÷åñêîãî ïóòè 10 ìì. Òåìïåðàòóðà ïðîâåäåíèÿ ðåàêöèè 37°C. Схема 1. Запуск реакции образцом  êþâåòó âíåñòè 1 ìë ìîíîðåàãåíòà, èíêóáèðîâàòü â òå÷åíèå 5 ìèí. ïðè 37°Ñ, çàòåì äîáàâèòü 0,1 ìë àíàëèçèðóåìîãî îáðàçöà è ïåðåìåøàòü. ×åðåç 60 ñ èçìåðèòü îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü (Å1). ×åðåç 60 ñ ïîâòîðèòü èçìåðåíèå (Å2). Ðàññ÷èòàòü èçìåíåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè çà ìèíóòó (Å1- Å2). Схема 2. Запуск реакции реагентом 2  êþâåòó âíåñòè 0,8 ìë ðåàãåíòà 1 è 0,1 ìë îáðàçöà, ïåðåìåøàòü è èíêóáèðîâàòü 5 ìèí. ïðè 37°Ñ, çàòåì äîáàâèòü 0,2 ìë ðåàãåíòà 2 è ïåðåìåøàòü. ×åðåç 60 ñ èçìåðèòü îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü (Å1). ×åðåç 60 ñ ïîâòîðèòü èçìåðåíèå (Å2). Ïðèìå÷àíèå. Åñëè âíîñèòñÿ 1 ìë ðåàãåíòà 1, òî îáú¸ì îáðàçöà ñëåäóåò óâåëè÷èòü äî 0,125 ìë , à îáú¸ì ðåàãåíòà 2 äî 0,25 ìë. Ðàññ÷èòàòü èçìåíåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè çà ìèíóòó (Å1 - Å2). РАСЧЁТ Àêòèâíîñòü À àëàíèíàìèíîòðàíñôåðàçû â åäèíèöàõ Åä/ë ðàññ÷èòàòü ïî ôîðìóëå: À = 1746 • (Å1-Å2) ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ Àíàëèçàòîðû îòêðûòîãî òèïà ðàçëè÷íûõ èçãîòîâèòåëåé, íàáîð ïèïåòîê, ïîçâîëÿþùèõ îòáèðàòü îáú¸ìû 0,1–1,0 ìë, òåðìîñòàò, ñåêóíäîìåð. 1 НПЦ «ЭКО-СЕРВИС» Тел. (812)70-210-44, 450-67-79, (921)77-525-88 www.ecoservice-spb.ru КлиниТест-АЛТ ПАРАМЕТРЫ ДЛЯ БИОХИМИЧЕСКИХ АНАЛИЗАТОРОВ Òèï àíàëèçàòîðà Ëþáîé Ìåòîä èçìåðåíèÿ Êèíåòèêà Äëèíà âîëíû, íì 340 Èçìåðåíèå ïðîòèâ Âîçäóõà èëè äèñòèëë.âîäû Òåìïåðàòóðà ðåàêöèè 37îÑ Åäèíèöà èçìåðåíèÿ Å/ë ×èñëî çíàêîâ ïîñëå çàïÿòîé 0 Èçìåíåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè Óìåíüøàåòñÿ Ôàêòîð 1746 Ñîîòíîøåíèå ðåàãåíò/ïðîáà 10:1 Êîëè÷åñòâî èçìåðåíèé, íå ìåíåå 3 Âðåìÿ ïðåèíêóáàöèè, ñåê. 60 Âðåìÿ ðåàêöèè, ñåê. 60 Âåðõíèé ïðåäåë àáñîðáöèè ðåàãåíòà ïðîòèâ âîäû, Å 2 Íèæíèé ïðåäåë àáñîðáöèè ðåàãåíòà ïðîòèâ âîäû, Å 0,8 Ïðåäåë ìàêñèìàëüíîé àáñîðáöèè ∆Å/ìèí. 0,14 Ãðàíèöû ëèíåéíîñòè 20-240 Ìàêñèìóì íîðìû 40* Ìèíèìóì íîðìû 6* * Ïðèâåäåíû íîðìàëüíûå âåëè÷èíû äëÿ ìóæ÷èí. 2 ПРИМЕЧАНИЯ 1. Äëÿ êàæäîãî àíàëèçàòîðà ñëåäóåò óòî÷íèòü ôàêòîð ïåðåñ÷¸òà ïî êîíòðîëüíûì ñûâîðîòî÷íûì êàëèáðàòîðàì, àòòåñòîâàííûì äàííûì ìåòîäîì. 2.  ñëó÷àå âîçíèêíîâåíèÿ êàêèõ-ëèáî òðóäíîñòåé ìîæíî çàïðîñèòü àäàïòèðîâàííóþ èíñòðóêöèþ ïî ðàáîòå ñ íàáîðàìè «ÊëèíèÒåñò-ÀËÒ» íà âàøåì àíàëèçàòîðå. 3. Åñëè àêòèâíîñòü ÀËÒ âûøå 240 Åä/ë, îáðàçåö ðàçâåñòè ôèçðàñòâîðîì â 10 ðàç, àíàëèç ïîâòîðèòü, âåëè÷èíó ðàññ÷èòàííîé àêòèâíîñòè óìíîæèòü íà 10. НОРМАЛЬНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ Ìóæ÷èíû îò 6 äî 40 Åä/ë Æåíùèíû îò 6 äî 32 Åä/ë Ðåêîìåíäóåòñÿ â êàæäîé ëàáîðàòîðèè óòî÷íÿòü äèàïàçîí íîðìàëüíûõ âåëè÷èí. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРОВ Íàáîðû íåîáõîäèìî õðàíèòü ïðè òåìïåðàòóðå 2-8°Ñ â óïàêîâêå ïðåäïðèÿòèÿ-èçãîòîâèòåëÿ â òå÷åíèå âñåãî ñðîêà ãîäíîñòè (12 ìåñÿöåâ). Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре 2-8оС и при условии достаточной герметичности флаконов в течение всего срока годности набора. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Êîíòðîëü êà÷åñòâà ìîæåò áûòü ïðîâåä¸í ïî îòå÷åñòâåííûì èëè çàðóáåæíûì êîíòðîëüíûì ñûâîðîòêàì, àòòåñòîâàííûì äàííûì ìåòîäîì. ЛИТЕРАТУРА 1. Îáåñïå÷åíèå êà÷åñòâà ëàáîðàòîðíûõ èññëåäîâàíèé. Ïðåàíàëèòè÷åñêèé ýòàï. Ïîä ðåä. Â.Â. Ìåíüøèêîâà, Ì., 1999, «Ëàáèíôîðì». 2. Ýíöèêëîïåäèÿ êëèíè÷åñêèõ ëàáîðàòîðíûõ òåñòîâ. Ïîä ðåä. ïðîô.Í.Ó.Òèöà, Ì., 1997, “Ëàáèíôîðì”. НПЦ «ЭКО-СЕРВИС» Тел. (812)70-210-44, 450-67-79, (921)77-525-88 www.ecoservice-spb.ru