Ассистент кафедры микробиологии ЧГМА, КМН Дутова А.А

Молекулярные методы в
диагностике TORCHинфекций беременных и
новорожденных
Лаборатория молекулярной генетики НИИ Молекулярной медицины ГБОУ
ВПО Читинская государственная медицинская академия
TORCH ИНФЕКЦИИ группа инфекционных заболеваний, для
которых характерно передача
возбудителя от матери плоду,
приводящее к возникновению различных
эмбриопатий и врожденных патологий,
выявляемых пренатально или после
рождения.
TORCH-инфекции и «TORCH-синдром»
 Toxoplasma gondii
 Other:
 Парвовирус B19
 Энтеровирусы
 Вирус кори
 VZV
 HHV6
 Вирусы гепатитов А,В,С
 ВИЧ
 Treponema pallidum
 Стрептококки гр.В
 Chlamydia trachomatis
 Neisseria gonorrhoeae
 Listeria monocytogenes
 Rubella virus (вирус краснухи)
 Cytomegalovirus (CMV)
 Herpes Simplex Virus (HSV 1,2)
Общее представление о TORCHинфекциях
Тератогенное действие
возбудителей
Передача от матери плоду
Вероятность передачи инфекции и
тяжесть поражения плода зависит
от срока гестации
Клинические проявления внутриутробных
инфекций неспецифичны:
-Мертворождение
-Раннее прерывание беременности
-Задержка внутриутробного развития
плода
-Гепатоспленомегалия
-Желтуха
-Сыпь
-Синдром дыхательных расстройств
-Сердечно-сосудистая недостаточность
-Неврологические нарушения
Трансплацентарная передача и тяжесть поражения
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
пе рвый
триме стр
второй триме стр
Вероятность передачи
тре тий триме стр
Степень тяжести
•Вероятность передачи наивысшая при инфицировании матери на поздних
сроках беременности.
•Тяжесть поражения наивысшая при инфицировании на ранних сроках
Пути проникновения инфекции
• Трансплацентарный (через
плаценту)
•
•
•
•
•
•
•
•
Вирус краснухи
Токсоплазма
Герпесы: CMV, VZV, HHV6
Парвовирус B19
Энтеровирус
Treponema pallidum
Листерии
HAV, HBV, HCV, HIV…
•
•
•
•
•
•
•
HSV 1, HSV 2, (CMV)
Стрептококки гр. В
Хламидии
Трихомонады
Гонококк
Генитальные микоплазмы
Кандиды, флора БВ
• Восходящий (через
плодные оболочки)
• Перинатальный (в процессе
родов)
Учет пути проникновения возбудителя в организм плода
играет существенную роль в выборе правильной
диагностической тактики
Методы лабораторной диагностики TORCH-инфекций
Косвенные – серологические (ИФА)
 Используются для скрининговой диагностики у матери
инфекций с трансплацентарной передачей
 Позволяют установить первичную инфекцию у матери, с
которой связан наибольший риск передачи инфекции
плоду
Прямые – молекулярные, культуральные и др.
• У матери:
подтверждающие для инфекций с
трансплацентарной передачей
оценка степени активности инфекции (наличие и
концентрация)
скрининговые для восходящих инфекций
• У плода: наличие и степень активности инфекции
(пуповинная кровь, АЖ)
Обобщенный алгоритм обследования
матери и плода
Обследование
матери
Обследование
плода
Скрининг инфекций – определение IgG, IgM,
индекса авидности)
Подтверждение факта первичной или реактивированной
инфекции (CMV), оценка риска передачи инфекции плоду
– определение ДНК/РНК микроорганизма в крови матери
-Прямое выявление инфекционного агента
(исследование ворсин хориона,
амниотической жидкости, пуповинной крови)
-Выявление признаков
нарушения развития у плода
Назначение профилактической терапии (CMV, Toxoplasma),
принятие решения о сохранении или прерывании беременности (Rubella),
тактике ведения беременности.
Недостатки методов
серологической диагностики
 Наличие «серологического окна»
 IgM могут циркулировать в периферической крови
до 2 лет
 наличие перекрестных реакций при выявлении IgM
 Достоверный диагноз можно поставить только при
анализе результатов тестирования парных
сывороток или определения авидности IgG
 При реактивации серологические маркеры могут
не изменятся или изменяться незначительно
 Малоинформативны в диагностике TORCH у плода
(низкая выработка антител, наличие материнских
антител)
«Подводные камни» прямого выявления
возбудителя (ПЦР)
 Выделение возбудителя может быть ограничено во
времени (краснуха, корь) или происходить в
недетектируемых количествах (токсоплазма)
 Возбудитель может длительно существовать (и
определяться) в организме матери что не позволяет
отличить персистирующую инфекцию от вновь
приобретенного инфицирования (CMV, VZV,
парвовирус B19)
 В ряде случаев для чувствительного и специфичного
анализа необходимо правильно выбирать
клинический материал для исследования (CMV – в
крови, вирус краснухи – в мазках)
 У плода исследование биологического материала
ограничено возможными сроками проведения
инвазивной пренатальной диагностики
Биопсия хориона 10-12 нед.
Амниоцентез 16-23 нед.
Плацентоцентез 13-18 нед.
Кордоцентез 20-24 нед.
 Прямое обнаружение возбудителя заболевания в
амниотической жидкости или образцах плаценты –
не является 100% доказательством инфицирования
плода
Превентивные меры различаются
в зависимости от инфекции
-Прерывание
беременности по
показаниям (Краснуха)
-Лечение
(Токсоплазмоз, сифилис)
-Профилактические мероприятия
(CMV, HHV6)
Необходимы точные лабораторные методы
Сравнение методов выявления
возбудителей
Метод
Чувствительность
Специфичность
Время
выполнения
Микроскопия
10-80%
Выявление АГ
(РИФ,ИФА)
70-75%
90%
Культуральный
80-100%
100%
5-7 дней
ПЦР
95-100%
90-100%
1 день
низкая (?) 1-2 часа
Российская ассоциация
специалистов
перинатальной медицины
Материал для исследования
 Кровь, ликвор (токсоплазма,краснуха,герпесы,
энтеровирус, микоплазмы, парвовирус B19)
 Моча (ЦМВ, микоплазмы, хламидии, трихомонады,
гонококки )
 Смывы носоглотки (краснуха, герпес,
энтеровирус)
 Содержимое везикул (ВПГ)
 Мазки отделяемого из глаза – хламидии
• Урогенитальные соскобы – ( ВПГ, генитальные
микоплазмы, стрептококки гр. В, хламидии,
трихомонады, гонококки)
Перечень тест-систем марки АмплиСенс® для
прямого выявления TORCH-инфекций методом ПЦР
 Вирус краснухи
 Toxoplasma gondii
Многообразие
технологий
 CMV (в т.ч. количественно)
 ВПГ1,2 типов, типирование ВПГ
 Парвовирус В19
 VZV
 Энтеровирусы
 Chlamydia trachomatis
 Neisseria gonorrhoeae
 Treponema pallidum
 Ureaplasma spp., M.hominis M.genitalium
 C.albicans/C.glabrata/C.crusei
 Gardenerella vaginalis/Lactobacillus spp.
 Listeria monocytogenes
 HIV, HAV, HBV, HCV…
Флуоресцентная
детекция (FEP, FRT)
Заключение
 Метод ПЦР диагностики имеет высокую
чувствительность, специфичность и скорость
 Метод ПЦР эффективен при правильном выборе
материала, а для подтверждения некоторых
инфекций и периода заболевания (краснуха –
только период сыпи)
 При подтверждении факта первичной или
реактивированной TORCH-инфекции
серологические и молекулярные методы (ПЦР)
дополняют друг друга
 ПЦР имеет решающее значение для этиологической
верификации диагноза у плода и новорождённого
Благодарю за внимание