ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса на 2014-2020 годы» Соглашение о предоставлении субсидии от «27» июня 2014 г. № 14.604.21.0061 по теме «РАЗРАБОТКА АДРЕСНОГО ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОСТНЫХ МЕТАСТАЗОВ НА ОСНОВЕ БИФОСФОНАТОВ И БЕЛКОВ-ЦИТОКИНОВ» Руководитель проекта- директор Института медицинской биотехнологии ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Елена Дмитриевна Даниленко Организация-получатель субсидии – ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора Индустриальный партнер - ООО «Вектор Фортис» Объем финансирования: Средства субсидии: 19,5 млн.руб. 2014 г.-6,0 млн.руб. 2015 г.-7,5 млн. руб. 2016 г.-6,0 млн.руб. Внебюджетные средства: 6,5 млн.руб. 2014 г- 2,0 млн.руб. 2015 г.-2,5 млн.руб. 2016 г.-2,0 млн.руб. Актуальность проекта Неуклонный рост числа онкологических заболеваний в мире и в стране Выявление онкологических заболеваний преимущественно на поздних стадиях заболевания, стадиях метастазирования Скелет- третья по частоте локализация метастатического поражения после легких и печени Наличие костных метастазов как фактор ухудшения качества жизни онкологических больных Более длительный период выживаемости по сравнению с метастазами в висцеральные органы Невысокая эффективность лечения костных метастазов в силу их труднодоступности Следовательно, создание эффективных средств лечения костных метастазов актуально, социально значимо и экономически целесообразно. Научно-техническая проблема Активные компоненты Ключевые характеристики препарата для лечения метастазов: • противоопухолевая активность и селективность действия; • наличие антирезорбтивной активности; • эффективное средство адресной доставки ФНО-альфа ИФН-гамма Векторная молекула Алендроновая кислота Средства доставки ALN-TNF-α ALN-IFN-γ 1 2 3 Цель проекта Цель проекта - разработка методов получения противоопухолевого препарата направленного действия на основе фактора некроза опухоли альфа, интерферона гамма и алендроновой кислоты– прототипа принципиально нового лекарственного средства для лечения костных метастазов Технические требования Препарат должен обеспечивать: -накопление противоопухолевых цитокинов ФНО-альфа, ИФН-гамма в области экспериментальной опухоли в кости до уровня, не менее чем в 2 раза превышающего концентрацию препаратов в крови; -снижение содержания ФНО-альфа и ИФН-гамма в сыворотке крови в течение часа после внутривенного введения не менее чем на 90%; -торможение роста экспериментальных метастазов опухоли не менее чем на 30%; -статистически значимое ингибирование уменьшения объема костной ткани не менее, чем на 25%. Результаты В рамках работ по этапу № 1 «Выбор направления исследований. Подготовка исходных данных и образцов» • Оформлен аналитический обзор «Разработка лекарственных препаратов на основе бифосфонатов и биологически активных веществ пептидной природы для лечения костных патологий, в том числе, костных метастазов опухолей» (на 45 стр., 91 источник, из них – 71 источник за 2008-2014 гг.) • Выполнены патентные исследования в соответствии с ГОСТ 15.011-96 • Обоснован выбор направления исследований, включая обоснование выбора методов получения конъюгатов и конструкций, содержащих алендроновую кислоту, ФНО-альфа и ИФН-гамма • Выбрана и обоснована экспериментальная модель костных метастазов • Разработана Программа экспериментальных исследований • Наработана биомасса штаммов-продуцентов рекомбинантных ФНОальфа и ИФН-гамма человека • Получены образцы рекомбинантных аналогов ФНО-альфа человека и ИФН-гамма человека, по показателям качества соответствующие проектам НД. Метастазирование лейкоза L1210/1 в теменные кости мышей линии DBA/2 (внутривенное введение опухоли, 500 тыс.клеток) Метастазы развиваются в области швов между костями, нарушается структура костей. Макропрепараты. Теменные кости здоровых мышей Инвазия опухолевых клеток лейкоза L1210/1 в теменные кости мышей Опухолевые клетки в метастазе Опухолевые клетки (окрашены в красный цвет) прорастают в костную ткань (окрашена в синий цвет), ровная граница кости становится изрезанной. Окраска по методу пикро-Маллори. Получение биомассы штамма-продуцента и образцов рчФНО-альфа Электрофореграмма биомассы E. сoli SG 20050/pTNF311Δ, штамма-продуцента рчФНОальфа, в 12% ПААГ (А) и денситограмма образца 1 с.010814 (Б) А к 1 14,4 кДа рчФНОальфа Дорожки: К – лизоцим, 14,4 kDa 1,2- образцы биомассы E.Сol iSG20050/pTNF311 Δ 1 2 3 4 Дорожки: 1 – лизоцим (14,4 кДа); 2 –рчФНО-альфа,10 мкг/лунку; 3 - рчФНО-альфа, 40 мкг/лунку; 4 – белковый маркер М31 (10 – 250 кДа) + лизоцим (14,4 кДа). Б 2 Электрофореграмма рчФНОальфа с. 010814 в 12% ПААГ, окрашивание Кумасси R-250 Пик, соответствующий белку рчФНОальфа Молекулярная масса 16,9 кДа Неспецифические примеси: -ДНК- < 0,1 пкг/мкг -белки штамма-продуцента-0,093 нг/мкг белка -ЛПС - < 25 ЕЭ/106МЕ -Специфическая активность0,8*108Ед/мг Выводы В ходе работ на первом этапе проекта завершены: -работы по выбору направления исследований и подготовке исходных данных для получения образцов активных компонентов нового лекарственного средства; - работы по получению экспериментальных образцов белковцитокинов– компонентов нового препарата. На следующем этапе планируется: - разработать методы конъюгирования алендроновой кислоты с белками-цитокинами (ФНО-альфа, ИФН-гамма); -получить экспериментальные образцы конъюгатов; -провести исследования физико-химических и биологических свойств; -исследовать накопление конъюгатов в костной и опухолевой ткани. Достижение показателей результативности Индикаторы -Объем привлеченных внебюджетных средств -2,0 млн руб., из них 300 тыс.руб.-средства Индустриального партнера (план-2,0 млн.руб./300 тыс.руб.) -Число публикаций - 1 (1) -Доля исследователей в возрасте до 39 лет – 53,6% (40%) Показатели -Средний возраст исследователей – участников проекта -40 лет (41 год) -Количество мероприятий по демонстрации и популяризации результатов и достижений науки -2 (1) -Число организаций, использовавших научное оборудование сети центров коллективного пользования научным оборудованием -1 (1) Благодарю за внимание!