Иммунобиологические свойства аттенуированного штамма фк

ÑÅËÜÑÊÎÕÎÇßÉÑÒÂÅÍÍÀß ÁÈÎËÎÃÈß, 2014, ¹ 4, ñ. 70-74
ÓÄÊ 636.4:619:578.835.2:615.371
doi: 10.15389/agrobiology.2014.4.70rus
ÈÌÌÓÍÎÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÅ ÑÂÎÉÑÒÂÀ
ÀÒÒÅÍÓÈÐÎÂÀÍÍÎÃÎ ØÒÀÌÌÀ ÔÊ-135 ÂÈÐÓÑÀ
ÀÔÐÈÊÀÍÑÊÎÉ ×ÓÌÛ ÑÂÈÍÅÉ, ÂÛÐÀÙÅÍÍÎÃÎ
 ÑÓÑÏÅÍÇÈÈ ÊËÅÒÎÊ ÊÎÑÒÍÎÃÎ ÌÎÇÃÀ ÑÂÈÍÅÉ
Í.È. ÇÀÊÓÒÑÊÈÉ, Ò.Ã. ØÈÐÎÊÎÂÀ, Ñ.Ã. ÞÐÊÎÂ, Â.Ì. ÁÀËÛØÅÂ
Ìíîãèå ãîäû óñèëèÿ èññëåäîâàòåëåé áûëè íàïðàâëåíû íà ïîëó÷åíèå è èñïûòàíèå ðàçëè÷íûõ àòòåíóèðîâàííûõ âàðèàíòîâ âèðóñà àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé (À×Ñ) ñ öåëüþ ðàçðàáîòêè
ñïåöèôè÷åñêèõ ñðåäñòâ ïðîôèëàêòèêè. Àíàëîãè÷íûå èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäèëèñü è âî Âñåðîññèéñêîì ÍÈÈ âåòåðèíàðíîé âèðóñîëîãèè è ìèêðîáèîëîãèè, â ðåçóëüòàòå ÷åãî Â.À. Áóðëàêîâûì è
äð. (1979) ïàññèðîâàíèåì â êóëüòóðå êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà ñâèíåé (ÊÌÑ) âèðóëåíòíîãî øòàììà
Ôðàíöèÿ-32, îòíîñÿùåãîñÿ ê 4-ìó ñåðîòèïó, áûë ïîëó÷åí àòòåíóèðîâàííûé âàðèàíò âèðóñà À×Ñ —
ÔÊ-135. Óñòàíîâëåíî, ÷òî 25-êðàòíûé êîíöåíòðàò ýòîãî øòàììà, âûðàùåííîãî â ìîíîñëîéíîé
êóëüòóðå êëåòîê ÊÌÑ, âûçûâàë çàùèòó 85-100 % ïîäñâèíêîâ îò çàðàæåíèÿ ãîìîëîãè÷íûì âèðóëåíòíûì âèðóñîì À×Ñ. Ó÷èòûâàÿ, ÷òî ìåòîä ãëóáèííîãî (ñóñïåíçèîííîãî) êóëüòèâèðîâàíèÿ òåõíîëîãè÷íåå, ïðîèçâîäèòåëüíåå è ýêîíîìè÷íåå ìîíîñëîéíîãî, ïðåäñòàâëÿëî èíòåðåñ èçó÷èòü àíòèãåííóþ è èììóíîãåííóþ àêòèâíîñòü êîíöåíòðèðîâàííîãî ýìóëüãèðîâàííîãî âèðóññîäåðæàùåãî
ïðåïàðàòà, êîòîðûé áûë ïîëó÷åí íà îñíîâå àòòåíóèðîâàííîãî øòàììà ÔÊ-135 âèðóñà À×Ñ, íàêîïëåííîãî â ñóñïåíçèè êëåòîê ÊÌÑ â áèîðåàêòîðàõ. Âûïîëíåííûå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî
ïðè òàêîì êóëüòèâèðîâàíèè ìàêñèìàëüíîå íàêîïëåíèå âèðóñà (7,50-8,00 lg ÃÀÅ50/ñì3) íàáëþäàëè íà 4-å ñóò, à ÊÑ-àíòèòåëà (1:16-1:32) — íà 5-6-å ñóò. Òèòð âèðóñà, âûðàùåííîãî â ìîíîñëîå
êëåòîê ÊÌÑ â ìàòðàñàõ, îêàçàëñÿ íà 0,25-0,50 lg ÃÀÅ50/ñì3 íèæå, ÷åì â ïåðâîì âàðèàíòå, ïðè
ñëàáîì îòëè÷èè ïî óðîâíþ ÊÑ-àíòèòåë â ýòè æå ñðîêè (1:16). Êîíöåíòðèðîâàííûé ýìóëüãèðîâàííûé ïðåïàðàò íà îñíîâå øòàììà ÔÊ-135, âûðàùåííîãî â ñóñïåíçèè êëåòîê ÊÌÑ â áèîðåàêòîðàõ, ÷åðåç 7 ñóò ïîñëå ââåäåíèÿ îáåñïå÷èâàë çàùèòó ïîäñâèíêîâ ïðîòèâ çàðàæåíèÿ ãîìîëîãè÷íûì âèðóëåíòíûì âèðóñîì â òå÷åíèå 4 ìåñ (ñðîê íàáëþäåíèÿ). Ïðè ýòîì ó ïðèâèòûõ æèâîòíûõ
àòòåíóèðîâàííûé âèðóñ âûäåëÿëè èç ïðîá êðîâè äî 10-14-õ ñóò. Îòìå÷àåòñÿ, ÷òî ñóñïåíçèîííûé
ìåòîä âûðàùèâàíèÿ àòòåíóèðîâàííîãî øòàììà ÔÊ-135 â êóëüòóðå êëåòîê ÊÌÑ â àâòîìàòèçèðîâàííûõ áèîðåàêòîðàõ ïîçâîëÿåò â êîíòðîëèðóåìûõ óñëîâèÿõ ïîëó÷àòü îäíîðîäíûé âèðóñíûé ìàòåðèàë ñ âûñîêîé áèîëîãè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ.
Êëþ÷åâûå ñëîâà: àôðèêàíñêàÿ ÷óìà ñâèíåé, À×Ñ, âèðóñ À×Ñ, êóëüòóðà êëåòîê êîñòíîãî
ìîçãà ñâèíåé, êëåòêè ÊÌÑ, èíôåêöèîííîñòü, ãåìàäñîðáèðóþùàÿ è êîìïëåìåíòñâÿçûâàþùàÿ
(ÊÑ) àêòèâíîñòü, èììóíîãåííîñòü.
Ïîñëå çàíîñà àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé (À×Ñ) íà Åâðîïåéñêèé
êîíòèíåíò (1957 ãîä) óñèëèÿ ìíîãèõ èññëåäîâàòåëåé áûëè íàïðàâëåíû íà
ïîëó÷åíèå è èñïûòàíèå ðàçëè÷íûõ àòòåíóèðîâàííûõ âàðèàíòîâ âèðóñà À×Ñ
ñ öåëüþ ðàçðàáîòêè ñïåöèôè÷åñêèõ ñðåäñòâ ïðîôèëàêòèêè, òàê êàê èíàêòèâèðîâàííûå âàêöèíû ïðè ýòîé áîëåçíè îêàçàëèñü íåýôôåêòèâíûìè (1).
Àíàëîãè÷íûå èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäèëèñü è âî Âñåðîññèéñêîì ÍÈÈ
âåòåðèíàðíîé âèðóñîëîãèè è ìèêðîáèîëîãèè (ÂÍÈÈÂÂèÌ) (2-6).  ðÿäå
ýêñïåðèìåíòîâ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî óñòîé÷èâîñòü ñâèíåé ê çàðàæåíèþ ãîìîëîãè÷íûì âèðóëåíòíûì âèðóñîì À×Ñ çàâèñèò îò èíòåíñèâíîñòè ïðîÿâëåíèÿ êëèíè÷åñêîé ðåàêöèè æèâîòíûõ íà èììóíèçàöèþ àòòåíóèðîâàííûìè
øòàììàìè. Øòàììû âèðóñà À×Ñ, âûçûâàâøèå óìåðåííóþ êëèíè÷åñêóþ ðåàêöèþ ó ïðèâèòûõ îñîáåé, îáåñïå÷èâàëè ôîðìèðîâàíèå óñòîé÷èâîñòè ê çàðàæåíèþ âèðóëåíòíûìè øòàììàìè ãîìîëîãè÷íûõ ñåðîòèïîâ (3, 7, 8).
È.Ô. Âèøíÿêîâûì ñ ñîàâò. (4) ïðè ïàññèðîâàíèè âèðóëåíòíîãî
øòàììà Ôðàíöèÿ-32, îòíîñÿùåãîñÿ ê 4-ìó ñåðîòèïó, â êóëüòóðå êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà ñâèíåé (ÊÌÑ) áûë âûäåëåí àòòåíóèðîâàííûé âàðèàíò âèðóñà
À×Ñ — ÔÊ-135. Âèðóñíûé ìàòåðèàë, êîòîðûé ïîëó÷èëè íà îñíîâå ýòîãî
øòàììà, âûðàùåííîãî â ìîíîñëîéíîé êóëüòóðå êëåòîê ÊÌÑ, ïîñëå êîíöåíòðèðîâàíèÿ â 25 ðàç ïî îáúåìó âûçûâàë çàùèòó 85-100 % ïîäñâèíêîâ
îò çàðàæåíèÿ ãîìîëîãè÷íûì âèðóëåíòíûì âèðóñîì À×Ñ. Çàùèòà íàñòóïà70
ëà óæå ÷åðåç 7 ñóò ïîñëå ïðèâèâêè (3).
 ïîñëåäíåå âðåìÿ äëÿ ïîëó÷åíèÿ âèðóñíîãî ñûðüÿ ñ öåëüþ èçãîòîâëåíèÿ âàêöèííûõ ïðåïàðàòîâ øèðîêîå ðàñïðîñòðàíåíèå ïîëó÷èëè ìåòîäû êóëüòèâèðîâàíèÿ ñ èñïîëüçîâàíèåì ðîëëåðíûõ óñòàíîâîê è àâòîìàòèçèðîâàííûõ áèîðåàêòîðîâ (9, 10).
 íàñòîÿùåé ðàáîòå ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èçó÷åíèÿ àíòèãåííîé
è èììóíîãåííîé àêòèâíîñòè êîíöåíòðèðîâàííîãî ýìóëüãèðîâàííîãî âèðóññîäåðæàùåãî ïðåïàðàòà âèðóñà àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé, âûðàùåííîãî â ñóñïåíçèè êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà ñâèíåé.
Ìåòîäèêà.  îïûòàõ èñïîëüçîâàëè àòòåíóèðîâàííûé øòàìì ÔÊ135 âèðóñà À×Ñ ïîñëå 9-ãî ïàññàæà â êóëüòóðå êëåòîê ÊÌÑ è ýïèçîîòè÷åñêèé øòàìì Ô-32, ïðîøåäøèé 3 ïàññàæà íà ñâèíüÿõ, ñ èíôåêöèîííîé àêòèâíîñòüþ ñîîòâåòñòâåííî 7,50 è 7,33 lg ÃÀÅ50/ñì3.
Êóëüòóðó êëåòîê ÊÌÑ âûðàùèâàëè íà ñòàíäàðòíîé ñðåäå Èãëà
ÌÅÌ («Sigma», ÑØÀ) ñ äâîéíîé êîíöåíòðàöèåé àìèíîêèñëîò è âèòàìèíîâ, à òàêæå â ñðåäå íà îñíîâå ðàñòâîðå Ýðëà, ñîäåðæàùåé ôåðìåíòàòèâíûé ãèäðîëèçàò ìûøå÷íûõ áåëêîâ (0,25 % ÔÃÌ-Ñ, ðàçðàáîòêà ÂÍÈÈÂÂèÌ) ñ 10 % ñûâîðîòêè êðîâè ñâèíåé («ÁèîëîÒ», ã. Ñàíêò-Ïåòåðáóðã). Âûðàùèâàíèå âèðóñà îñóùåñòâëÿëè â òå÷åíèå 4-6 ñóò â ñóñïåíçèè êëåòîê ÊÌÑ
â àâòîìàòèçèðîâàííûõ áèîðåàêòîðàõ âìåñòèìîñòüþ 5 ë («NBS», ÑØÀ) è
20 ë («Chemap», Øâåéöàðèÿ) ïðè îïòèìàëüíûõ óñëîâèÿõ: ïëîòíîñòü ñóñïåíçèè êëåòîê ÊÌÑ — 3,0½106 êë/ñì3, ìíîæåñòâåííîñòü çàðàæåíèÿ —
0,1 ÃÀÅ50/êë., ñêîðîñòü âðàùåíèÿ òóðáèííîé ìåøàëêè — 100-120 îá/ìèí,
ðÍ 7,2-7,4, ñêîðîñòü ïîäà÷è ãàçîâîé ñìåñè (âîçäóõ + ÑÎ2) — 2 ë/÷ â ðàñ÷åòå íà 1 ë ñóñïåíçèè. ×åðåç êàæäûå 24 ÷ èç ðåàêòîðîâ îòáèðàëè ïðîáû
äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñòåðèëüíîñòè êóëüòóðû, âåëè÷èíû ðÍ, îáùåãî ÷èñëà è
æèçíåñïîñîáíîñòè êëåòîê, èíôåêöèîííîé è àíòèãåííîé àêòèâíîñòè âèðóñà (10). Äëÿ êîíòðîëÿ âèðóñ âûðàùèâàëè â ìîíîñëîå êëåòîê ÊÌÑ â ìàòðàñàõ ñ ïðèìåíåíèåì òåõ æå ñðåä è óñëîâèé.
Ïîëó÷åííóþ âèðóññîäåðæàùóþ ñóñïåíçèþ êîíöåíòðèðîâàëè â 25 ðàç
(ïî îáúåìó) ïîëèýòèëåíãëèêîëåì (ÏÝÃ, ì.ì. 6000), à çàòåì ýìóëüãèðîâàëè,
èñïîëüçóÿ ñ ýòîé öåëüþ àäúþâàíò (1:1), ñîäåðæàùèé ïîäîáðàííûå ìèíåðàëüíîå ìàñëî è ýìóëüãàòîð. Èç ïîëó÷åííîãî â òðåõ öèêëàõ âûðàùèâàíèÿ
âèðóñíîãî ìàòåðèàëà ïðèãîòîâèëè òðè ñåðèè ýìóëüãèðîâàííîãî ïðåïàðàòà.
Îïðåäåëåíèå èíôåêöèîííîé è àíòèãåííîé àêòèâíîñòè âèðóñà À×Ñ, à òàêæå ñåðîëîãè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ êîíöåíòðèðîâàííîãî âèðóññîäåðæàùåãî
ìàòåðèàëà ïðîâîäèëè ïî ìåòîäèêàì, ðàçðàáîòàííûì âî ÂÍÈÈÂÂèÌ (4).
Èììóíîãåííîñòü òðåõ ñåðèé ïðåïàðàòà èçó÷àëè íà âíóòðèìûøå÷íî ïðèâèòûõ ïîäñâèíêàõ ìàññîé 25-35 êã. Æèâîòíûõ (ïî 4 ãîë. íà ïðåïàðàò) èììóíèçèðîâàëè îäíîêðàòíî ïî 1 ñì3 è ÷åðåç 7 ñóò ïîñëå ïðèâèâêè çàðàæàëè
âíóòðèìûøå÷íî âèðóëåíòíûì âèðóñîì øòàììà Ô-32 â äîçå 105 ÃÀÅ50.
Ðåçóëüòàòû. Âèðóñ À×Ñ (øòàìì ÔÊ-135) â ñóñïåíçèè êëåòîê
ÊÌÑ íà 4-å ñóò êóëüòèâèðîâàíèÿ â áèîðåàêòîðàõ íàêàïëèâàëñÿ â ìàêñèìàëüíûõ òèòðàõ (7,50-7,75 lg ÃÀÅ 50/ñì3), òîãäà êàê â ìîíîñëîå â ìàòðàñàõ
(êîíòðîëü) åãî èíôåêöèîííàÿ àêòèâíîñòü íå ïðåâûøàëà 7,00-7,25 lg
ÃÀÅ50/ñì3. Óñòàíîâëåíî, ÷òî êîìïëåìåíòñâÿçûâàþùàÿ àêòèâíîñòü àíòèãåíà âèðóñà, âûðàùåííîãî ñóñïåíçèîííûì ìåòîäîì è â ñòàöèîíàðíîì
ìîíîñëîå êëåòîê ÊÌÑ, â ýòè æå ñðîêè êóëüòèâèðîâàíèÿ õàðàêòåðèçîâàëàñü ïîêàçàòåëÿìè òèòðîâ 1:8-1:16. Áîëüøåå íàêîïëåíèå êîìïëåìåíòñâÿçûâàþùåãî àíòèãåíà (ÊÑ-àíòèãåíà) âèðóñà â ñóñïåíçèè êëåòîê ÊÌÑ
íàáëþäàëè íà 5-6-å ñóò (1:16-1:32), õîòÿ åãî èíôåêöèîííàÿ àêòèâíîñòü
ïðè ýòîì íå ïîâûøàëàñü. Ïðåäñòàâëåííûå äàííûå óêàçûâàþò íà òî, ÷òî
71
ìàêñèìàëüíîå íàêîïëåíèå ÊÑ-àíòèãåíà âèðóñà À×Ñ, âûðàùåííîãî â ñóñïåíçèè êëåòîê ÊÌÑ, ïðîèñõîäèëî ÷åðåç 1-2 ñóò ïîñëå òîãî, êàê ðåãèñòðèðîâàëè íàèáîëüøóþ èíôåêöèîííóþ àêòèâíîñòü. Ïðåïàðàò, ïîëó÷åííûé íà îñíîâå àòòåíóèðîâàííîãî øòàììà ÔÊ-135 âèðóñà À×Ñ (òðè íåçàâèñèìûå ñåðèè) äëÿ ïîñëåäóþùåãî òåñòèðîâàíèÿ íà æèâîòíûõ, áûë ñòåðèëüíûì, à èíôåêöèîííàÿ è ÊÑ-àêòèâíîñòü â ñåðèÿõ õàðàêòåðèçîâàëàñü çíà÷åíèÿìè ñîîòâåòñòâåííî 7,50-7,75 lg ÒÖÄ50/ñì3 è 1:16-1:32.
Ïîñëå êîíöåíòðèðîâàíèÿ â 25 ðàç ïî îáúåìó è ýìóëüãèðîâàíèÿ
òèòð âèðóñà â îáðàçöàõ óâåëè÷èëñÿ äî 8,00-8,25 lg ÒÖÄ50/ñì3.
Ó äâóõ èç 12 ïðèâèòûõ ïîäñâèíêîâ íà 3-è è 7-å ñóò ïîñëå èììóíèçàöèè ðåãèñòðèðîâàëè ïîâûøåííóþ òåìïåðàòóðó (äî 40,5 °Ñ â òå÷åíèå
1-3 ñóò) áåç ïðîÿâëåíèÿ äðóãèõ êëèíè÷åñêèõ ïðèçíàêîâ. Ïîñëå êîíòðîëüíîãî çàðàæåíèÿ ó ÷åòûðåõ ïîäñâèíêîâ íà 4-7-å ñóò îòìå÷àëè ïîäúåì òåìïåðàòóðû òåëà äî 41,2 °Ñ â òå÷åíèå 1-3 ñóò áåç äðóãèõ ïðèçíàêîâ áîëåçíè.
Íåïðèâèòûå (êîíòðîëüíûå) æèâîòíûå (4 ïîäñâèíêà) ïàëè íà 8-11-å ñóò
ïîñëå çàðàæåíèÿ ñ ïðèçíàêàìè è ïàòîàíàòîìè÷åñêèìè èçìåíåíèÿìè, õàðàêòåðíûìè äëÿ À×Ñ.
Ó æèâîòíûõ, ïðèâèòûõ óêàçàííûì ïðåïàðàòîì, àòòåíóèðîâàííûé
âèðóñ À×Ñ âûäåëÿëè èç êðîâè äî 10-14-õ ñóò â íèçêèõ òèòðàõ (äî 1,52,5 lg ÃÀÅ50/ñì3).  ìî÷å è ôåêàëèÿõ â ýòè è áîëåå ïîçäíèå ñðîêè âèðóñ
À×Ñ íå îáíàðóæèëè. Êðîìå òîãî, íå íàáëþäàëè ïåðåäà÷è âèðóñà îò ïðèâèòûõ ïîäñâèíêîâ èíòàêòíûì ïóòåì ïðè èõ ñîâìåñòíîì ñîäåðæàíèè â òå÷åíèå 30 ñóò (ñðîê íàáëþäåíèÿ).  ñûâîðîòêàõ êðîâè ïðèâèòûõ ïîäñâèíêîâ ÷åðåç 14 ñóò âûÿâëÿëè êîìïëåìåíòñâÿçûâàþùèå è ïðåöèïèòèðóþùèå
àíòèòåëà â òèòðàõ 1:4-1:8, à àíòèòåë, çàäåðæèâàþùèõ ãåìàäñîðáöèþ âèðóñà, íå îáíàðóæèâàëè (ñðîê íàáëþäåíèÿ 30 ñóò).
Ó ïðèâèòûõ òàêèì ïðåïàðàòîì ïîäñâèíêîâ, êîòîðûõ çàðàæàëè ÷åðåç 4 ìåñ âèðóëåíòíûì âèðóñîì, ñïåöèôè÷åñêàÿ çàùèòà ñîõðàíÿëàñü â òå÷åíèå âñåãî ñðîêà íàáëþäåíèÿ. Ïîñëå çàðàæåíèÿ âèðóëåíòíûì âèðóñîì ó
7 èç 12 æèâîòíûõ â ïåðèîä ñ 3-õ ïî 4-å ñóò îòìå÷àëè 1-2-ñóòî÷íîå ïîâûøåíèå òåìïåðàòóðû òåëà äî 40,5-41,3 °Ñ. Îñòàëüíûå ïîäñâèíêè îñòàâàëèñü êëèíè÷åñêè çäîðîâûìè.  êîíòðîëüíîé ãðóïïå æèâîòíûå ïàëè íà 7-å
è 9-å ñóò, è ó íèõ çàðåãèñòðèðîâàëè êëèíè÷åñêèå ïðîÿâëåíèÿ è ïàòîàíàòîìè÷åñêèå èçìåíåíèÿ, õàðàêòåðíûå äëÿ À×Ñ.
Òàêèì îáðàçîì, ïðè êóëüòèâèðîâàíèè àòòåíóèðîâàííîãî øòàììà
ÔÊ-135 âèðóñà àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé (À×Ñ) â ñóñïåíçèè êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà ñâèíåé â áèîðåàêòîðàõ ìàêñèìàëüíîå íàêîïëåíèå âèðóñà
(7,50-7,75 lg ÃÀÅ50/ñì3) ïðîèñõîäèëî íà 4-å ñóò, êîìïëåìåíòñâÿçûâàþùåãî àíòèãåíà (1:16-1:32) — íà 5-6-å ñóò. Êîíöåíòðèðîâàííûé ýìóëüãèðîâàííûé ïðåïàðàò, èçãîòîâëåííûé íà îñíîâå ýòîãî ìàòåðèàëà, ÷åðåç 7 ñóò
ïîñëå âíóòðèìûøå÷íîãî ââåäåíèÿ îáåñïå÷èâàë çàùèòó ïîäñâèíêîâ ïðîòèâ çàðàæåíèÿ ãîìîëîãè÷íûì âèðóëåíòíûì âèðóñîì â òå÷åíèå 4 ìåñ
(ñðîê íàáëþäåíèÿ). Ïðè ýòîì ó ïðèâèòûõ æèâîòíûõ àòòåíóèðîâàííûé
âèðóñ âûäåëÿëè èç ïðîá êðîâè äî 10-14-õ ñóò. Ñëåäîâàòåëüíî, âèðóññîäåðæàùåå ñûðüå, ïîëó÷åííîå ñóñïåíçèîííûì ìåòîäîì â áèîðåàêòîðàõ
íà îñíîâå øòàììà ÔÊ-135, ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíî ïðè èçó÷åíèè èììóííîãî îòâåòà æèâîòíûõ è ìîëåêóëÿðíî-ãåíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ âèðóñà
À×Ñ, à òàêæå äëÿ ñðàâíåíèÿ ñ åãî èçîëÿòàìè, öèðêóëèðóþùèìè â íàñòîÿùåå âðåìÿ â Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè, â òîì ÷èñëå ñ öåëüþ ðàçðàáîòêè ïðèåìîâ èììóíîïðîôèëàêòèêè.
Àâòîðû áëàãîäàðÿò çàâåäóþùóþ áèáëèîòåêîé ÂÍÈÈÂÂèÌ À.Í. Íåâîëèíó çà
ïîìîùü â ïîäáîðå è îôîðìëåíèè öèòèðóåìûõ ññûëîê ëèòåðàòóðû.
72
ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ
1.
Ê î â à ë å í ê î ß.Ð., Ñ è ä î ð î â Ì.À., Á ó ð á à Ë.Ã. Àôðèêàíñêàÿ ÷óìà ñâèíåé.
Ì., 1972.
2. H e s s W., C o x B., H e u s h e l e W., S t o n e S. Propagation and modification of African
swine fever virus in cell cultures. Am. J. Vet. Res., 1965, 110: 141-146.
3. Á ó ð ë à ê î â Â.À. Èììóíîáèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà âèðóñà è ïðîáëåìà ðàçðàáîòêè
ñðåäñòâ ñïåöèôè÷åñêîé ïðîôèëàêòèêè àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé. Äîêò. äèñ. Ïîêðîâ, 1979.
4.  è ø í ÿ ê î â È.Ô., Ì è ò è í Í.È., Ï å ò ð î â Þ.È., × å ð ÿ ò í è ê î â Ë.Ë., Ê è ñ å ë å â À.Â., Á ó ð ë à ê î â Â.À., Á à ë û ø å â Â.Ì., Ô å ä î ð è ù å â È.Â., Ì î ð ã ó í î â Þ.Ï. Ñåðîèììóíîëîãè÷åñêàÿ êëàññèôèêàöèÿ ïðèðîäíûõ èçîëÿòîâ âèðóñà àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé. Ìàò. íàó÷.-ïðàêò. êîíô. «Àêòóàëüíûå âîïðîñû âåòåðèíàðíîé âèðóñîëîãèè». Ïîêðîâ, 1995: 141-143.
5. Ê è ñ å ë å â À.Â., Ð ó ä î á å ë ü ñ ê è é À.Â., Ç ó å â Â.Â. è äð. Êóëüòóðàëüíûå è èììóíîáèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà àòòåíóèðîâàííûõ âàðèàíòîâ âèðóñà À×Ñ, âûäåëåííûõ èç ïðèðîäíûõ èçîëÿòîâ âîçáóäèòåëÿ â ÍÐÊ. Ìàò. íàó÷. êîíô. ÂÍÈÈÂÂèÌ «Âîïðîñû âåòåðèíàðíîé âèðóñîëîãèè, ìèêðîáèîëîãèè è ýïèçîîòîëîãèè». Ïîêðîâ, 1992: 44-45.
6. Ï ð ó ä í è ê î â à Å.È., Á à ë û ø å â Â.Ì., Á å ë ÿ í è í Ñ.À., Á à ë û ø å â à Â.È. Ïàòîãåííûå è èììóíîãåííûå ñâîéñòâà êóëüòóðàëüíîãî âèðóñà àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé.
Ìàò. Ìåæä. íàó÷.-ïðàêò. êîíô., ïîñâÿùåííîé 55-ëåòèþ ÂÍÈÈÂÂèÌ. Ïîêðîâ, 2013:
54-57.
7. Ê à ë à í ò à å í ê î Þ.Ô., Æ å ñ ò å ð å â Â.È., Ì è ù à í è í Â.À., Á à ë û ø å â Â.Ì. Àòòåíóèðîâàííûé øòàìì âèðóñà àôðèêàíñêîé ÷óìû ñâèíåé 2-ãî ñåðîòèïà äëÿ ðàçðàáîòêè äèàãíîñòè÷åñêèõ è âàêöèííûõ ïðåïàðàòîâ. Ïàòåíò ÐÔ ¹ 2452511. À61Ê39/187
Ñ12N7/00. Çàÿâë. 16.11.2010. Îïóáë. 10.06.2012. Áþë. ¹ 16.
8. Ð å ï è í Â.È., × å ð ÿ ò í è ê î â Ë.Ë., Ï å ò ð î â Þ.È., Ê è ñ å ë å â À.Â. Ðåàêòîãåííûå
è èììóíîãåííûå ñâîéñòâà àòòåíóèðîâàííîãî øòàììà Êàòàíãà-350 âèðóñà À×Ñ. Ìàò.
íàó÷.-ïðàêò. êîíô. «Àêòóàëüíûå âîïðîñû âåòåðèíàðíîé âèðóñîëîãèè». Ïîêðîâ, 1995:
140-141.
9. Ð ó á à í Å.À., Ñ î ë î â ü å â Á.Â., à ó í è í Ì.À. Íåêîòîðûå ïðîáëåìû ãëóáèííîãî êóëüòèâèðîâàíèÿ æèâîòíûõ êëåòîê â áèîðåàêòîðàõ. Ìàò. Âñåðîñ. íàó÷.-ïðàêò. êîíô. «Íàó÷íûå
îñíîâû ïðîèçâîäñòâà âåòåðèíàðíûõ áèîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ». Ùåëêîâî, 2000: 290-293.
10. Ñ ë è â ê î È.À. Èììóíîáèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà âàêöèííûõ øòàììîâ ÒÑ-80 è 7/1 ÁåëÍÈÝÂ-ÂÃÍÊÈ âèðóñà áåøåíñòâà. Àâòîðåô. êàíä. äèñ. Ïîêðîâ, 2003.
ÃÍÓ Âñåðîññèéñêèé ÍÈÈ âåòåðèíàðíîé
âèðóñîëîãèè è ìèêðîáèîëîãèè Ðîññåëüõîçàêàäåìèè,
Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ
24 àïðåëÿ 2014 ãîäà
601120 Ðîññèÿ, Âëàäèìèðñêàÿ îáë., Ïåòóøèíñêèé ð-í, ã. Ïîêðîâ,
e-mail: vniivvim@niiv.petush.elcom.ru, patronn13@rambler.ru
IMMUNOBIOLOGICAL FEATURES OF AN ATTENUATED AFRICAN
SWINE FEVER VIRUS STRAIN FC-135 GROWN IN A PORCINE BONE
MARROW CELL SUSPENSION
N.I. Zakutskii, T.G. Shirokova, S.G. Yurkov, V.M. Balyshev
All-Russian Institute of Veterinary Virology and Microbiology, Russian Academy of Agricultural Sciences, Pokrov, Petushinskii Region, Vladimir Province, 601120 Russia, e-mail vniivvim@niiv.petush.elcom.ru
Received April 24, 2014
doi: 10.15389/agrobiology.2014.4.70eng
Abstract
For many years, efforts of research scientists have been directed towards obtaining and
testing of various attenuated variants of African swine fever (ASF) virus to develop specific methods
for ASF prevention. Similar investigations were also carried out in the All-Russian Institute of Veterinary Virology and Microbiology which resulted in obtaining an attenuated ASF virus variant
FC-135 through passaging a virulent strain France-32 of serotype 4 (V.A. Burlackov et al., 1979).
The above strain grown in a porcine bone marrow (PBM) monolayer cell culture and taken at a 25fold concentration provided 85 to 100 % protection from infection with a homologous virulent ASF
virus. Because of higher manufacturability, performance and cost effectiveness of a suspension
culture method as compared to those for a monolayer one, the investigation of antigenic and
immunogenic activity of a virus-containing emulsified preparation produced in bioreactors from an
ASF virus strain FC-135 grown in a PBM cell suspension was of some interest. The results of the reported research showed that when culturing the attenuated ASF virus strain FC-135 in PBM cell
suspension in bioreactors, the highest virus accumulation levels of 7.50 to 8.00 lg HAU50/cm3
were observed after 4 day cultivation, and CF-antibody levels of 1:16 to 1:32 were indicated after
73
5 to 6 day cultivation. The titers of the virus grown in a PBM cell monolayer in mattresses were 0.25
to 0.50 lg HAU50/cm3 lower than those as seen in the previous case, although CF-antibody levels as
observed within the same period were of 1:16. A concentrated emulsified preparation designed from
the strain FC-135 grown in a PBM cell suspension using bioreactors provided protection of gilts
against infection with a homologous virulent virus for 4 months (observation period). Also, we
showed that the suspension method of the attenuated strain FC-135 culture in PBM cells using
automated bioreactors, being more manufacturable, productive and cost-efficient as compared to the
monolayer growth in mattresses, when applied under controlled conditions, provided production of
homologous virus materials exhibiting high biological activity.
Keywords: African swine fever, ASF, ASF virus, porcine bone marrow cell culture, PBM
cells, infectivity, haemadsorbing activity, complement-fixing (CF) activity, immunogenicity.
Àäðåñ ñàéòà æóðíàëà â Èíòåðíåòå — www.agrobiology.ru
Ñòàòüè, ñîáûòèÿ, èíôîðìàöèÿ — 7500 ïðîñìîòðîâ çà ìåñÿö
73 % — ïîñåòèòåëè èç Ðîññèè, îêîëî 7 % — èç ÑØÀ è Êàíàäû, 20 % — èç äðóãèõ ñòðàí
Íàó÷íûå ñîáðàíèÿ
VI ÑÚÅÇÄ ÂÀÂÈËÎÂÑÊÎÃÎ ÎÁÙÅÑÒÂÀ ÃÅÍÅÒÈÊÎÂ È ÑÅËÅÊÖÈÎÍÅÐÎÂ È
ÀÑÑÎÖÈÈÐÎÂÀÍÍÛÅ ÃÅÍÅÒÈ×ÅÑÊÈÅ ÑÈÌÏÎÇÈÓÌÛ
(15-20 èþíÿ 2014 ãîäà, ã. Ðîñòîâ-íà-Äîíó)
Êîíòàêòû è èíôîðìàöèÿ: info-vogis@bionet.nsc.ru
74