Ãðóïïà Í19 Ì Å Æ Ã Î Ñ Ó Ä À Ð Ñ Ò Â Å Í Í Û É ÌßÑÎ Ìåòîäû áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî àíàëèçà Ñ Ò À Í Ä À Ð Ò ÃÎÑÒ 2123775 Meat. Methods of bacteriological analysis ÎÊCÒÓ 9209 Äàòà ââåäåíèÿ 01.01.77 Íàñòîÿùèé ñòàíäàðò ðàñïðîñòðàíÿåòñÿ íà ìÿñî è ñóáïðîäóêòû îò âñåõ âèäîâ óáîéíîãî ñêîòà è óñòàíàâëèâàåò ìåòîäû áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ äëÿ âûÿâëåíèÿ â íèõ àýðîáíûõ áàêòåðèé (áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû, áàêòåðèé èç ðîäà ñàëüìîíåëë, áàêòåðèé èç ðîäà êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèé, áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ, áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, áàêòåðèé ëèñòåðèîçà, áàêòåðèé ïàñòåðåëëåçà, áàêòåðèé èç ãðóïïû êîêêîâ) è àíàýðîáíûõ áàêòåðèé (ïàòîãåííûõ è òîêñèãåííûõ êëîñòðèäèé). Áàêòåðèîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ìÿñà è ñóáïðîäóêòîâ ïðîèçâîäÿò âî âñåõ ñëó÷àÿõ, ïðåäóñìîòðåííûõ äåéñòâóþùåé íîðìàòèâíî-òåõíè÷åñêîé äîêóìåíòàöèåé, ïðàâèëàìè âåòåðèíàðíî-ñàíèòàðíîé ýêñïåðòèçû ìÿñà è ìÿñîïðîäóêòîâ è äðóãèìè íîðìàòèâíûìè àêòàìè, à òàêæå ïî òðåáîâàíèþ îðãàíîâ, îñóùåñòâëÿþùèõ âåòåðèíàðíûé èëè ñàíèòàðíûé íàäçîð. (Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2). 1. ÌÅÒÎÄÛ ÎÒÁÎÐÀ ÎÁÐÀÇÖΠ1.1.  çàâèñèìîñòè îò õàðàêòåðà çàáîëåâàíèÿ íà áàêòåðèîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå íàïðàâëÿþò îò òóøè: - ÷àñòü ìûøöû ñãèáàòåëÿ èëè ðàçãèáàòåëÿ ïåðåäíåé è çàäíåé êîíå÷íîñòåé òóøè äëèíîé íå ìåíåå 8 ñì èëè êóñîê äðóãîé ìûøöû ðàçìåðîì íå ìåíåå 8×6×6 ñì; - ëèìôàòè÷åñêèå óçëû ïîâåðõíîñòíûé øåéíûé èëè ñîáñòâåííî ïîäêðûëüöîâûé è íàðóæíûé ïîäâçäîøíûé âìåñòå ñ îêðóæàþùåé èõ ñîåäèíèòåëüíîé è æèðîâîé òêàíüþ, à îò ñâèíåé ïîâåðõíîñòíûé øåéíûé äîðçàëüíûé (ïðè îòñóòñòâèè ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé â îáëàñòè ãîëîâû è øåè) èëè ïîäêðûëüöîâûé ïåðâîãî ðåáðà è íàäêîëåííûé; - äîëþ ïå÷åíè ñ ïå÷åíî÷íûì ëèìôàòè÷åñêèì óçëîì èëè æåë÷íûì ïóçûðåì, îñâîáîæäåííûì îò æåë÷è, ïî÷êó è ñåëåçåíêó. Äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ íà ëèñòåðèîç íàïðàâëÿþò: ãîëîâíîé ìîçã, äîëþ ïå÷åíè è ïî÷êó. Äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ íà âîçáóäèòåëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû íàïðàâëÿþò ëèìôàòè÷åñêèé óçåë ïîðàæåííîãî îðãàíà èëè ëèìôàòè÷åñêèé óçåë, ñîáèðàþùèé ëèìôó ñ ìåñòà ëîêàëèçàöèè ïîäîçðèòåëüíîãî ôîêóñà, îòå÷íóþ òêàíü, óõî, à ó ñâèíåé, êðîìå òîãî, ïîä÷åëþñòíîé ëèìôàòè÷åñêèé óçåë. Ïðè èññëåäîâàíèè ïîëóòóø èëè ÷åòâåðòèí òóø áåðóò êóñîê ìûøöû, ëèìôàòè÷åñêèå óçëû è òðóá÷àòóþ êîñòü. Ïðè èññëåäîâàíèè ñîëåíîãî ìÿñà, íàõîäÿùåãîñÿ â áî÷å÷íîé òàðå, áåðóò îáðàçöû ìÿñà è èìåþùèåñÿ ëèìôàòè÷åñêèå óçëû ñâåðõó, èç ñåðåäèíû è ñî äíà áî÷êè, à òàêæå, ïðè íàëè÷èè, òðóá÷àòóþ êîñòü è ðàññîë. Ï ð è ì å ÷ à í è å. Åñëè áåðóò ÷àñòü ïå÷åíè, ïî÷êè, ñåëåçåíêè, òî ïîâåðõíîñòü ðàçðåçà ïðèæèãàþò. 1.2. Îáðàçöû çàâåðòûâàþò êàæäûé â îòäåëüíîñòè â ïîëèýòèëåíîâóþ ïëåíêó ïî ÃÎÑÒ 10354 èëè ïåðãàìåíò ïî ÃÎÑÒ 1341, ïîìåùàþò â áóìàæíûé ïàêåò, íà êîòîðîì ñòàâÿò äàòó îòáîðà îáðàçöà, íîìåð òóøè è íàïðàâëÿþò â ëàáîðàòîðèþ â îáùåé òàðå (ÿùèêå). « 69 Ñ. 2 ÃÎÑÒ 2123775 1.3. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïåðåñûëêè îáðàçöîâ â ëàáîðàòîðèþ, ðàñïîëîæåííóþ çà ïðåäåëàìè ïðåäïðèÿòèÿ èëè õîçÿéñòâà, ãäå îòáèðàþò îáðàçöû, òàðó ñ îáðàçöàìè îïå÷àòûâàþò èëè ïëîìáèðóþò.  ñîïðîâîäèòåëüíîì äîêóìåíòå óêàçûâàþò: - íàèìåíîâàíèå ïðîäóêòà ñ óêàçàíèåì âèäà ìÿñà, îò êîòîðîãî âçÿò îáðàçåö, è åãî êîëè÷åñòâî; - íàèìåíîâàíèå ïðåäïðèÿòèÿ èëè õîçÿéñòâà, ãäå îòîáðàí îáðàçåö, è åãî àäðåñ; - íîìåðà îáðàçöîâ; - ïðè÷èíó íàïðàâëåíèÿ îáðàçöîâ íà èññëåäîâàíèå; - êðàòêèå ïàòîëîãîàíàòîìè÷åñêèå äàííûå è ïðåäïîëàãàåìûé äèàãíîç; - äàòó âçÿòèÿ îáðàçöîâ è ïîäïèñü ëèöà, íàïðàâèâøåãî èõ íà èññëåäîâàíèå. 2. ÀÏÏÀÐÀÒÓÐÀ, ÌÀÒÅÐÈÀËÛ, ÐÅÀÊÒÈÂÛ È ÏÈÒÀÒÅËÜÍÛÅ ÑÐÅÄÛ 2.1. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ïðèìåíÿþò: àâòîêëàâ; àïïàðàò Êîõà; áàíþ âîäÿíóþ ñ òåðìîðåãóëÿòîðîì; âåñû ëàáîðàòîðíûå îáùåãî íàçíà÷åíèÿ ïî ÃÎÑÒ 24104; âåñû òîðçèîííûå; ãîìîãåíèçàòîð áàêòåðèîëîãè÷åñêèé èëè àïïàðàò äëÿ èçìåëü÷åíèÿ òêàíåé ñ ÷èñëîì îáîðîòîâ íå ìåíåå 8000 îá/ìèí è íå áîëåå 45000 îá/ìèí; ãîðåëêè ãàçîâûå; äèñòèëëÿòîð; êîòëû ñ ïàðîâîé ðóáàøêîé; êîìïàðàòîð; ëóïó ñ óâåëè÷åíèåì 35× ïî ÃÎÑÒ 25706; ìèêðîñêîï òèïà ÌÁÈ èëè ÌÁÐ èëè äðóãèõ àíàëîãè÷íûõ ìàðîê; ìÿñîðóáêó áûòîâóþ ïî ÃÎÑÒ 4025; íîæè; íîæíèöû ìåäèöèíñêèå ïî ÃÎÑÒ 21239; îñâåòèòåëü ÎÈ-19; ïèíöåòû ìåäèöèíñêèå ïî ÃÎÑÒ 21241; ïîòåíöèîìåòð èëè ðÍ-ìåòð; ñïèðòîâêè ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 25336; òåðìîñòàò ýëåêòðè÷åñêèé ñ àâòîìàòè÷åñêèì ðåãóëÿòîðîì; óëüòðàòåðìîñòàò; ôëàêîíû Ñîêñëåòà (áóòûëêè äëÿ äåòñêîãî ïèòàíèÿ); õîëîäèëüíèê ýëåêòðè÷åñêèé áûòîâîé ïî ÃÎÑÒ 16317; ÷àñû ïåñî÷íûå ïî ÎÑÒ 251138 íà 1, 2, 5 è 15 ìèí; øêàô ñóøèëüíûé ýëåêòðè÷åñêèé ëàáîðàòîðíûé; áóìàãó ôèëüòðîâàëüíóþ ïî ÃÎÑÒ 12026; áóòûëêè ñòåêëÿííûå; âàòó ìåäèöèíñêóþ ãèãðîñêîïè÷åñêóþ ïî ÃÎÑÒ 5556; âîäó áðîìíóþ; âîäó äèñòèëëèðîâàííóþ ïî ÃÎÑÒ 6709; âîäó ïèòüåâóþ ïî ÃÎÑÒ 2874*; âîðîíêè ñòåêëÿííûå ïî ÃÎÑÒ 25336, êîíóñîîáðàçíûå, âìåñòèìîñòüþ 250, 500 ñì3; äðîææè ïðåññîâàííûå ïî ÃÎÑÒ 171; æåë÷ü êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ñâåæóþ èëè ñóõóþ îáåçâîæåííóþ; êàñòðþëè; êîëáû ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 25336; êðîâü êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, îâåö, ëîøàäåé; ìàðëþ ìåäèöèíñêóþ ïî ÃÎÑÒ 9412; ìàñëî âàçåëèíîâîå ìåäèöèíñêîå ïî ÃÎÑÒ 3164; ìàñëî èììåðñèîííîå äëÿ ìèêðîñêîïèè ïî ÃÎÑÒ 13739; * Íà òåððèòîðèè Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äåéñòâóåò ÃÎÑÒ Ð 5123298. 70 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 3 ìåë õèìè÷åñêè îñàæäåííûé ïî ÃÎÑÒ 6253; ìÿñî-ãîâÿäèíó ïî ÃÎÑÒ 779; ïàíêðåàòèí ïèùåâîé ñóõîé; ïåíèöèëëèí; ïåïòîí âåíãåðñêîé ôèðìû «Ðèõòåð»; ïåïòîí ñóõîé ôåðìåíòàòèâíûé äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ öåëåé ïî ÃÎÑÒ 13805; ïåïòîí ÷åøñêîé ôèðìû «Ñïîôà»; ïåòëåäåðæàòåëè; ïå÷åíü ãîâÿæüþ; ïèïåòêè âìåñòèìîñòüþ 1, 2 ñì3 ñ öåíîé äåëåíèÿ 0,05 è 0,1 ñì3 è âìåñòèìîñòüþ 10 ñì3; ïëàçìó öèòðàòíóþ êðîëè÷üþ ñóõóþ; æåëåçó ïîäæåëóäî÷íóþ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà; ïîïëàâêè äëÿ ïðîáèðîê è êîëá äëèíîé 20, 45 è 75 ìì, äèàìåòðîì ñîîòâåòñòâåííî 2, 5 è 10 ìì; ïîñóäó ìåðíóþ ñòåêëÿííóþ ïî ÃÎÑÒ 1770; íàáîð àããëþòèíèðóþùèõ àäñîðáèðîâàííûõ ñàëüìîíåëëåçíûõ ñûâîðîòîê: ïîëèâàëåíòíîé Î-ñûâîðîòêè ãðóïï À, Â, Ñ, D è Å è ìîíîâàëåíòíûõ Î- è Í-ñûâîðîòîê; ïðîáèðêè ñòåêëÿííûå áàêòåðèîëîãè÷åñêèå ïî ÃÎÑÒ 25336; ïðîáêè êîðêîâûå ïî ÃÎÑÒ 5541; ïðîáêè ðåçèíîâûå; ïðîâîëîêó èç íèêåëåâûõ ñïëàâîâ äèàìåòðîì 0,30,5 ìì ïî ÃÎÑÒ 1791; ñïèðò ýòèëîâûé ðåêòèôèêîâàííûé ïî ÃÎÑÒ 5962* èëè ñïèðò ýòèëîâûé ðåêòèôèêîâàííûé òåõíè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 18300. ñïèðò äåíàòóðèðîâàííûé; ñòåêëà ïîêðîâíûå ïî ÃÎÑÒ 6672; ñòåêëà ïðåäìåòíûå ïî ÃÎÑÒ 9284; ñòóïêè ôàðôîðîâûå ñ ïåñòèêàìè ïî ÃÎÑÒ 9147; õëîðîôîðì òåõíè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 20015; öèëèíäðû âìåñòèìîñòüþ 100, 250, 500 ñì3 ïî ÃÎÑÒ 1770; ÷àøêè ñ êðûøêàìè ñòåêëÿííûå ëàáîðàòîðíûå ïî ÃÎÑÒ 25336 (÷àøêè Ïåòðè); øòàòèâû äëÿ ïðîáèðîê; øóìîâêó; ýîçèí áàêòåðèîëîãè÷åñêèé; ÿéöà êóðèíûå; áðèëëèàíòîâûé çåëåíûé; áðîìòèìîëîâûé ñèíèé; ãåíöèàí ôèîëåòîâûé (ãåíöèàíâèîëåò); ãëèöåðèí ïî ÃÎÑÒ 6259, õ.÷.; Ä-ãëþêîçó ïî ÃÎÑÒ 6038, Ä (+), õ.÷.; æåëàòèí ïî ÃÎÑÒ 11293; éîä ìåòàëëè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 4159, õ.÷.; êàëèé éîäèñòûé ïî ÃÎÑÒ 4232, õ.÷.; êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåùåííûé ïî ÃÎÑÒ 2493, õ.÷.; êàëèé ôîñôîðíîêèñëûé îäíîçàìåùåííûé ïî ÃÎÑÒ 4198, õ.÷.; êèñëîòó êàðáîëîâóþ êðèñòàëëè÷åñêóþ; êèñëîòó ôîñôîðíóþ ïî ÃÎÑÒ 6552; êðèñòàëëè÷åñêèé ôèîëåòîâûé (êðèñòàëëâèîëåò); ëàêòîçó, õ.÷.; ìàãíèé ñåðíîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 4523, õ.÷.; ìàãíèé õëîðèñòûé ïî ÃÎÑÒ 4209, õ.÷.; ìàííèò (ìàííèòîë) ïî ÃÎÑÒ 8321, õ.÷., Ä (); ñèíü ìåòèëåíîâóþ; ìåòèëîâûé êðàñíûé ïî ÒÓ 6095169; ìåòèëîâûé ôèîëåòîâûé ìåäèöèíñêèé (ìåòèëâèîëåò); ìî÷åâèíó ïî ÃÎÑÒ 6691, õ.÷.; * Íà òåððèòîðèè Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè äåéñòâóåò ÃÎÑÒ Ð 516522000. 71 Ñ. 4 ÃÎÑÒ 2123775 íàáîð óãëåâîäîâ äëÿ èññëåäîâàíèÿ ôåðìåíòàöèè ìèêðîáîâ êèøå÷íîé ãðóïïû (áîëüøîé); íàòðèé-àììîíèé ôîñôîðíîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 4170; íàòðèÿ ãèäðîîêèñü ïî ÃÎÑÒ 4328; íàòðèé äâóóãëåêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 4201, õ.÷.; íàòðèé êèñëûé ñåëåíèñòîêèñëûé (áåç òåëëóðà); íàòðèé ëèìîííîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 22280; íàòðèé ñåðíèñòîêèñëûé (ñóëüôèò íàòðèÿ) áåçâîäíûé ïî ÃÎÑÒ 195, õ.÷.; òèîñóëüôàò íàòðèÿ ïî ÃÎÑÒ 27068, õ.÷.; íàòðèé ôîñôîðíîêèñëûé äâóçàìåùåííûé áåçâîäíûé ïî ÃÎÑÒ 11773, õ.÷.; íàòðèé ôîñôîðíîêèñëûé îäíîçàìåùåííûé ïî ÃÎÑÒ 245, õ.÷.; íàòðèé õëîðèñòûé ïî ÃÎÑÒ 4233, õ.÷.; ïàðàäèìåòèëàìèäîáåíçàëüäåãèä; ñàôðàíèí; ñàõàðîçó ïî ÃÎÑÒ 5833, õ.÷.; ñâèíåö óêñóñíîêèñëûé ïî ÃÎÑÒ 1027; ñîëü çàêèñè æåëåçà è àììîíèÿ äâîéíóþ ñåðíîêèñëóþ (ñîëü Ìîðà) ïî ÃÎÑÒ 4208; ôåíîë; ôåíîëîâûé êðàñíûé ïî ÒÓ 6095170, õ.÷.; ôóêñèí êèñëûé äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ öåëåé; ôóêñèí îñíîâíîé äëÿ ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ öåëåé; àãàð ìèêðîáèîëîãè÷åñêèé ïî ÃÎÑÒ 17206; àãàð ñóõîé ïèòàòåëüíûé; àãàð Ïëîñêèðåâà ñóõîé áàêòåðèîëîãè÷åñêèé; àãàð ñóõîé âèñìóò-ñóëüôèò; àãàð ñóõîé ñ ýîçèí-ìåòèëåíîâûì ñèíèì (ñðåäà Ëåâèíà); âîäó ìÿñíóþ ïî ÃÎÑÒ 20729; áóëüîí ìÿñî-ïåïòîííûé ïî ÃÎÑÒ 20730; äèàëèçàò èëè ýêñòðàêò äðîææåâîé; ðàñòâîð Õåíêñà; ñàëüìîíåëëåçíûé Î-áàêòåðèîôàã; ñèáèðåÿçâåííûé ôàã «ãàììà ÌÂÀ». (Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 1, 2). 3. ÏÎÄÃÎÒÎÂÊÀ Ê ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÞ 3.1. Ïðèãîòîâëåíèå ïèòàòåëüíûõ ñðåä, ðåàêòèâîâ, êðàñîê 3.1.1. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ì ÿ ñ î-ï å ï ò î í í î ã î à ã à ð à Ê 1000 ñì3 ìÿñî-ïåïòîííîãî áóëüîíà ïåðåä ñòåðèëèçàöèåé äîáàâëÿþò 20 ã àãàðà è êèïÿòÿò íà ñëàáîì îãíå ïðè ïîñòîÿííîì ïîìåøèâàíèè äî ïîëíîãî ðàñòâîðåíèÿ. Ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð, îõëàæäåííûé äî òåìïåðàòóðû 5055 °Ñ, îñâåòëÿþò ÿè÷íûì áåëêîì (èç ðàñ÷åòà îäèí áåëîê íà 1000 ñì3 ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà), ïîìåùàþò â àâòîêëàâ, íå çàâèí÷èâàÿ êðûøêó àâòîêëàâà, èëè â àïïàðàò Êîõà íà 1 ÷, ÷òîáû áåëîê ñâåðíóëñÿ è, îñåäàÿ, óâëåê çà ñîáîé âçâåøåííûå ÷àñòèöû. Ãîðÿ÷èé ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð ôèëüòðóþò ÷åðåç âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð, óñòàíàâëèâàþò â íåì ðÍ 7,07,4, ðàçëèâàþò âî ôëàêîíû èëè ïðîáèðêè è 20 ìèí ñòåðèëèçóþò â àâòîêëàâå ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. 3.1.2. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å î ñ í î â í î ã î ð à ñ ò â î ð à Õ î ò ò è í ã å ð à 1000 ã ìÿñà, îñâîáîæäåííîãî îò æèðà è ñóõîæèëèé, íàðåçàþò êóñêàìè ðàçìåðîì 12 ñì è îïóñêàþò íåáîëüøèìè ïîðöèÿìè â êàñòðþëþ ñ äâîéíûì êîëè÷åñòâîì êèïÿùåé âîäîïðîâîäíîé âîäû. Êèïÿòÿò â òå÷åíèå 1520 ìèí, ïîêà öâåò ìÿñà íå ñòàíåò ñåðûì; ýòî óêàçûâàåò íà òî, ÷òî áåëêè ñâåðíóëèñü. Ìÿñî âûíèìàþò øóìîâêîé è èçìåëü÷àþò íà ìÿñîðóáêå. Îñòàâøóþñÿ æèäêîñòü ôèëüòðóþò è â íåé óñòàíàâëèâàþò ðÍ 8,0. Ôàðø îïóñêàþò â îòôèëüòðîâàííóþ æèäêîñòü è îõëàæäàþò äî òåìïåðàòóðû 40 °Ñ â îòêðûòîé êàñòðþëå, çàòåì äîáàâëÿþò î÷èùåííóþ îò æèðà, ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè è äâàæäû èçìåëü÷åííóþ ïîäæåëóäî÷íóþ æåëåçó â êîëè÷åñòâå 10 % ê ïîëó÷åííîé âçâåñè (íà 1000 ñì3 æèäêîñòè 100 ã æåëåçû) èëè ñóõîé ïàíêðåàòèí â êîëè÷åñòâå 0,51,0 % (â çàâèñèìîñòè îò åãî àêòèâíîñòè). Ïîëó÷åííóþ ñìåñü õîðîøî ðàçìåøèâàþò, ïîñëå ÷åãî ñíîâà ïîäùåëà÷èâàþò 10 %-íûì ðàñòâîðîì ãèäðîîêèñè íàòðèÿ äî ðÍ 7,88,0 è ïîâòîðÿþò òàêîå æå ïîäùåëà÷èâàíèå ÷åðåç 30 ìèí. Îòñóòñòâèå ñäâèãà ðåàêöèè ñìåñè óêàçûâàþò íà åãî äîáðîêà÷åñòâåííîñòü. 72 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 5 Ïîñëå óñòàíîâëåíèÿ ðÍ ñìåñü ïåðåëèâàþò â áóòûëü ñ õîðîøî ïîäîáðàííîé ðåçèíîâîé ïðîáêîé ñ òàêèì ðàñ÷åòîì, ÷òîáû 1/3 ÷àñòü áóòûëêè îñòàâàëàñü ñâîáîäíîé. Çàòåì äîáàâëÿþò â êîëè÷åñòâå 13 % îò îáúåìà õëîðîôîðìà (â õîëîäíîå âðåìÿ ãîäà ìåíüøå, ÷åì â òåïëîå), çàêðûâàþò áóòûëü ïðîáêîé è íåñêîëüêî ðàç âñòðÿõèâàþò, ïîñëå ÷åãî âûíèìàþò ïðîáêó äëÿ óäàëåíèÿ èçáûòêà õëîðîôîðìà è òóò æå ñíîâà çàêðûâàþò. ×åðåç 12 ÷ ïîñëå äîáàâëåíèÿ ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû èëè ïàíêðåàòèíà ïðîâåðÿþò ðåàêöèþ, óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,47,6 è îñòàâëÿþò ñìåñü äëÿ ïåðåâàðèâàíèÿ íà 716 ñóòîê ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå äî îáðàçîâàíèÿ àìîðôíîãî îñàäêà. Ïåðâûå 34 ñóòîê ïåðåâàðèâàíèÿ åæåäíåâíî ïðîâåðÿþò ðåàêöèþ ñðåäû è ïîääåðæèâàþò ðÍ íà óðîâíå 7,47,6.  òå÷åíèå ýòîãî âðåìåíè âñòðÿõèâàþò æèäêîñòü íå ìåíåå òðåõ ðàç â ñóòêè òàê æå, êàê óêàçàíî âûøå.  äàëüíåéøåì âñòðÿõèâàòü ìîæíî ðåæå. Çà 12 ñóòîê äî îêîí÷àíèÿ ïåðåâàðèâàíèÿ âñòðÿõèâàíèå ïðåêðàùàþò, ÷òîáû ãèäðîëèçàò îòñòîÿëñÿ. Êîíåö ïåðåâàðèâàíèÿ õàðàêòåðèçóåòñÿ ñëåäóþùèìè ïðèçíàêàìè: íà äíå áóòûëêè ñîáèðàåòñÿ àìîðôíûé îñàäîê; æèäêîñòü íàä îñàäêîì ïðîñâåòëÿåòñÿ è ïðèíèìàåò ñîëîìåííî-æåëòûé öâåò; ãèäðîëèçàò ëåãêî ôèëüòðóåòñÿ; ðåàêöèÿ íà òðèïòîôàí ñ áðîìíîé âîäîé äîëæíà áûòü ïîëîæèòåëüíîé (â ïðîáèðêó íàëèâàþò 34 ñì3 ôèëüòðîâàííîãî ãèäðîëèçàòà, äîáàâëÿþò òðè-÷åòûðå êàïëè áðîìíîé âîäû); ïðè íàëè÷èè òðèïòîôàíà æèäêîñòü ïðèíèìàåò ðîçîâî-ôèîëåòîâûé öâåò, â òî âðåìÿ êàê êîíòðîëüíàÿ ïðîáèðêà ñ ãèäðîëèçàòîì áåç áðîìíîé âîäû èìååò æåëòîå îêðàøèâàíèå. 5 %-íûé ãèäðîëèçàò äîëæåí ñîäåðæàòü 1,11,2 % îáùåãî àçîòà. Ïîñëå ãèäðîëèçà æèäêîñòü ôèëüòðóþò ÷åðåç ïîëîòíÿíûé èëè áóìàæíûé ôèëüòð, ñëèâàþò â áóòûëü è ñòåðèëèçóþò â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. Ïðèãîòîâëåííóþ ñðåäó ìîæíî õðàíèòü ïÿòü ìåñÿöåâ. Ïåðåä óïîòðåáëåíèåì æèäêîñòü ôèëüòðóþò. (Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2). 3.1.3. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å á ó ë ü î í à Õ î ò ò è í ã å ð à Ê 100 ñì3 îñíîâíîãî ðàñòâîðà äîáàâëÿþò 500 ñì3 âîäîïðîâîäíîé âîäû, 3 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ è 0,12 ã äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ. Ïîëó÷åííûé ðàñòâîð êèïÿòÿò â òå÷åíèå 10 ìèí, ôèëüòðóþò, óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,27,4 è ñòåðèëèçóþò â òå÷åíèå 20 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. 3.1.4. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ô è ç è î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î ð à ñ ò â î ð à  1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 8,5 ã õèìè÷åñêè ÷èñòîãî õëîðèñòîãî íàòðèÿ. Ðàñòâîð äîâîäÿò äî êèïåíèÿ, îõëàæäàþò, ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð, ðàçëèâàþò â êîëáû èëè ïðîáèðêè è ñòåðèëèçóþò 20 ìèí â àâòîêëàâå ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. 3.1.5. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ë å â è í à Ê 100 ñì3 ðàñïëàâëåííîãî ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà ñ ðÍ 7,07,4, ïðèãîòîâëåííîãî ïî ï. 3.1.1, äîáàâëÿþò 2 ñì3 0,5 %-íîãî âîäíîãî ðàñòâîðà ïðåäâàðèòåëüíî ïîäîãðåòîé íà âîäÿíîé áàíå ìåòèëåíîâîé ñèíè, 1,5 ñì3 2 %-íîãî ðàñòâîðà ýîçèíà (áàêòåðèîëîãè÷åñêîãî), 2 ã ëàêòîçû è 0,2 ã äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ. Ðàñòâîðû êðàñîê ãîòîâÿò íà äèñòèëëèðîâàííîé âîäå è ñòåðèëèçóþò 1 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 100 °Ñ. Ïîñëå äîáàâëåíèÿ âñåõ êîìïîíåíòîâ â óêàçàííîì ïîðÿäêå ñðåäó òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, ðàçëèâàþò â ÷àøêè è ïîäñóøèâàþò. Ñðåäà äîëæíà èìåòü êðàñíî-ôèîëåòîâûé öâåò. Ñðåäà Ëåâèíà ìîæåò áûòü ïðèãîòîâëåíà èç ñóõîé ñòàíäàðòíîé ñðåäû ïî ïðîïèñè, óêàçàííîé íà ýòèêåòêå. 3.1.6. Ñðåäû ôóêñèí-ñóëüôèòíûé àãàð (ñðåäà Ýíäî), áàêòîàãàð Ïëîñêèðåâà, âèñìóò-ñóëüôèò àãàð (ñðåäà Âèëüñîí-Áëåðà) ìîãóò áûòü ïðèãîòîâëåíû èç ñóõèõ ñòàíäàðòíûõ ñðåä ïî ïðîïèñè, óêàçàííîé íà ýòèêåòêå. 3.1.7. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ì þ ë ë å ð à Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ñðåäû Ìþëëåðà âíà÷àëå ãîòîâÿò ðàñòâîðû ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ è Ëþãîëÿ.  ìåðíûé öèëèíäð ñ 50 ã ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ äîáàâëÿþò äî 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ðàñòâîð ïåðåëèâàþò â áóòûëü è ñòåðèëèçóþò òåêó÷èì ïàðîì â òå÷åíèå 30 ìèí. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðà Ëþãîëÿ â 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 25 ã ìåòàëëè÷åñêîãî éîäà, 20 ã éîäèñòîãî êàëèÿ. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ñðåäû Ìþëëåðà â ñòåðèëüíûå ôëàêîíû ïîìåùàþò ïî 4,5 ã ìåëà è ñòåðèëèçóþò èõ ñóõèì ïàðîì â òå÷åíèå 1 ÷. Çàòåì íàëèâàþò â êàæäûé ôëàêîí ïî 90 ñì3 áóëüîíà èç ïåðåâàðà Õîòòèíãåðà, ñîäåðæàùåãî 0,130,15 % àìèííîãî àçîòà, óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,27,4 è ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. Ïîñëå ñòåðèëèçàöèè âíîâü óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,27,4, äëÿ ÷åãî ïðîâåðÿþò â îäíîì èç ôëàêîíîâ è îïðåäåëÿþò íåîáõîäèìûé äëÿ ïîäòèòðîâêè äàííîãî êîëè÷åñòâà ñðåäû îáúåì ñîëÿíîé êèñëîòû èëè ãèäðîîêèñè íàòðèÿ. Çàòåì â àñåïòè÷åñêèõ óñëîâèÿõ ïåðåä óïîòðåáëåíèåì äîáàâëÿþò ïî 2 ñì3 ðàñòâîðà Ëþãîëÿ è ïî 10 ñì3 ðàñòâîðà ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ. (Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2). 4-11106 73 Ñ. 6 ÃÎÑÒ 2123775 3.1.8. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ê à ó ô ì à í à Ê 500 ñì3 ñòåðèëüíîé ñðåäû Ìþëëåðà, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.7, äîáàâëÿþò 25 ñì3 ñòåðèëüíîé æåë÷è êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà è 5 ñì3 0,1 %-íîãî âîäíîãî ðàñòâîðà áðèëëèàíòîâîé çåëåíè. Ñìåñü õîðîøî âçáàëòûâàþò, ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ôëàêîíû, íî íå ñòåðèëèçóþò. 3.1.9. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ å ë å í è ò î â î ã î Ô-á ó ë ü î í à Ñðåäó ãîòîâÿò èç äâóõ îñíîâíûõ ðàñòâîðîâ À è Á. Ðàñòâîð À ñîñòîèò èç 5 ã ïåïòîíà ÷åøñêîé ôèðìû «Ñïîôà» èëè âåíãåðñêîé ôèðìû «Ðèõòåð», 7 ã áåçâîäíîãî äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðèÿ, 3 ã îäíîçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðèÿ, 4 ã õ.÷. ëàêòîçû, 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû, ðÍ ðàñòâîðà 6,97,1. Ðàñòâîð ñòåðèëèçóþò 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 112 °Ñ. Ðàñòâîð Á ñîñòîèò èç 10 %-íîãî ðàñòâîðà êèñëîãî ñåëåíèñòîêèñëîãî íàòðèÿ, ïðèãîòîâëåííîãî íà ñòåðèëüíîé âîäå. Ðàñòâîð ãîòîâÿò íåïîñðåäñòâåííî ïåðåä óïîòðåáëåíèåì. Ïðè èçìåíåíèè ñåðèè ëþáîãî èç âõîäÿùèõ â ñðåäó êîìïîíåíòîâ (ïåïòîíà, êèñëîãî ñåëåíèñòîêèñëîãî íàòðèÿ, ôîñôàòîâ) ïðîâîäÿò ïðåäâàðèòåëüíî ïîäòèòðîâêó, äëÿ ÷åãî ýêñïåðèìåíòàëüíî îïðåäåëÿþò òî÷íóþ ïðîïîðöèþ ôîñôîðíîêèñëîãî äâóçàìåùåííîãî áåçâîäíîãî íàòðèÿ è ôîñôîðíîêèñëîãî îäíîçàìåùåííîãî íàòðèÿ, êîòîðàÿ ñ èñïîëüçóåìûìè îáðàçöàìè ïåïòîíà è ñåëåíèñòîêèñëîãî íàòðèÿ äàåò ðÍ íå âûøå 6,97,1, ÷òî ðåãóëèðóåòñÿ èçìåíåíèåì ñîîòíîøåíèÿ ôîñôàòîâ. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ñåëåíèòîâîé ñðåäû ê 50 ñì3 ðàñòâîðà À ñòåðèëüíî äîáàâëÿþò 2 ñì3 ðàñòâîðà Á. Ñðåäó ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ôëàêîíû èëè êîëáû, íî íå ñòåðèëèçóþò. 3.1.10. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å õ ë î ð è ñ ò î ì à ã í è å â î é ñ ð å ä û «Ì» (ì î ä è ô èö è ð î â à í í î é) Ñðåäó ãîòîâÿò èç òðåõ îñíîâíûõ ðàñòâîðîâ À, Á è Â. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðà À â 90 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 0,42 ã ñóõîãî ôåðìåíòàòèâíîãî ïåïòîíà, 0,7 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ, 0,15 ã îäíîçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ, 4 ñì3 äðîææåâîãî äèàëèçàòà. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàñòâîðà Á â 9 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 3,6 ã êðèñòàëëè÷åñêîãî õëîðèñòîãî ìàãíèÿ. Ðàñòâîð  ñîñòîèò èç 0,09 ñì3 5 %-íîãî âîäíîãî ðàñòâîðà áðèëëèàíòîâîé çåëåíè. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ õëîðèñòîìàãíèåâîé ñðåäû «Ì» (ìîäèôèöèðîâàííîé) ðàñòâîðû À, Á è  ñìåøèâàþò è ñòåðèëèçóþò 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 112,5 °Ñ. Êîíöåíòðèðîâàííóþ ñðåäó ãîòîâÿò, óäâàèâàÿ ñîäåðæàíèå âñåõ êîìïîíåíòîâ, êðîìå äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ïðè îòñóòñòâèè äðîææåâîãî äèàëèçàòà äîïóñêàåòñÿ ïðèìåíÿòü äðîææåâîé ýêñòðàêò. 3.1.11. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ä ð î æ æ å â î ã î ý ê ñ ò ð à ê ò à  2000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 1000 ã ïðåññîâàííûõ õëåáîïåêàðíûõ äðîææåé. Ïîëó÷åííóþ ñóñïåíçèþ ñòåðèëèçóþò 30 ìèí òåêó÷èì ïàðîì, çàòåì îòñòàèâàþò â õîëîäèëüíèêå ïðè òåìïåðàòóðå 4 °Ñ â òå÷åíèå 56 ñóòîê. Æèäêîñòü íàä îñàäêîì äåêàíòèðóþò, ïðèëèâàþò 2,5 ñì3 0,01 %-íîãî ðàñòâîðà êðèñòàëëè÷åñêîãî ôèîëåòîâîãî, ðàçëèâàþò âî ôëàêîíû èëè ïðîáèðêè è âíîâü ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå 100 °Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí. Ýêñòðàêò õðàíÿò â õîëîäèëüíèêå ïðè òåìïåðàòóðå 46 °Ñ äî äâóõ íåäåëü. 3.1.12. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ê è ë ë è à í à Ê 100 ñì3 ñòåðèëüíîãî ïèòàòåëüíîãî áóëüîíà (ðÍ 6,86,9) ñòåðèëüíî äîáàâëÿþò 1 ñì3 0,1 %-íîãî ðàñòâîðà áðèëëèàíòîâîé çåëåíè. Ðàñòâîð áðèëëèàíòîâîé çåëåíè ãîòîâÿò ñëåäóþùèì îáðàçîì: 0,1 ã áðèëëèàíòîâîé çåëåíè çàëèâàþò 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû, ïîìåùàþò âî ôëàêîíû ñ ðåçèíîâîé èëè êîðêîâîé ïðîáêîé è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà ñóòêè. 3.1.13. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å òðåõñàõàðíîãî àãàðà ñ ìî÷åâèíîé (Ê ð ó ì â è ä å-Î ë ü ê å í è ö ê î ã î â ì î ä è ô è ê à ö è è Ê î â à ë ü ÷ ó ê à)  1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 2 ã ãëþêîçû, 3,5 ã ñàõàðîçû, 15 ã ëàêòîçû, 0,6 ã ñîëè Ìîðà, 1 ã ñåðíîâàòèñòîêèñëîãî íàòðèÿ è 10 ã ìî÷åâèíû. Ñîëü Ìîðà è ñåðíîâàòèñòîêèñëûé íàòðèé ïðåäâàðèòåëüíî ðàñòâîðÿþò â 57 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû â ïðîáèðêàõ. Óãëåâîäû è ìî÷åâèíó òàêæå ðàñòâîðÿþò â 10 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû â êîëáå íà âîäÿíîé áàíå. Äî ñòåðèëèçàöèè óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,47,6 è äîáàâëÿþò 46 ã ñóõîé ñðåäû ñ ñàõàðîçîé è èíäèêàòîðîì «Âл. Ðàñòâîð ðàçìåøèâàþò è êèïÿòÿò äî ðàñïëàâëåíèÿ àãàðà, ðàçëèâàþò â ïðîáèðêè ïî 56 ñì3 â êàæäóþ. Ñðåäó, ðàçëèòóþ â ïðîáèðêè, ñòåðèëèçóþò òåêó÷èì ïàðîì 2 äíÿ ïî 30 ìèí èëè ïðè òåìïåðàòóðå 112 °Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí. Ïîñëå ñòåðèëèçàöèè ñðåäó ñêàøèâàþò òàê, ÷òîáû îñòàëñÿ íåáîëüøîé ñòîëáèê (íå ìåíåå 3 ñì). 74 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 7 3.1.14. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ï å ï ò î í í î-ó ã ë å â î ä í û õ ñ ð å ä (ñ ð å ä û à è ñ ñ à) Ê 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ïðèáàâëÿþò 1 ã ñóõîãî ôåðìåíòàòèâíîãî ïåïòîíà, 0,5 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ è íàãðåâàþò äî ðàñòâîðåíèÿ, çàòåì ôèëüòðóþò äî òåõ ïîð, ïîêà ðàñòâîð íå ñòàíåò ñîâåðøåííî ïðîçðà÷íûì. Óñòàíàâëèâàþò ðÍ 0,7, ïðèáàâëÿþò 0,5 ã óãëåâîäà è 1 ñì3 èíäèêàòîðà Àíäðåäå. Ñðåäó ðàçëèâàþò ïî 5 ñì3 â ïðîáèðêè ñ ïîïëàâêàìè è ñòåðèëèçóþò 20 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 110 °Ñ. Ñðåäà äîëæíà áûòü áåñöâåòíîé èëè ñîëîìåííî-æåëòîãî öâåòà, áåç ðîçîâîãî îòòåíêà. Ìîæíî èñïîëüçîâàòü ãîòîâûå ñðåäû Ãèññà. Äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ èíäèêàòîðà Àíäðåäå ê 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 16,4 ñì3 1 ìîëü/äì3 ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè íàòðèÿ è 0,5 ã êèñëîãî ôóêñèíà. Ðàñòâîð ñòåðèëèçóþò 5 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 110112 °Ñ. Èíäèêàòîð õðàíÿò â ñêëÿíêå èç òåìíîãî ñòåêëà. (Èçìåíåííàÿ ðåäàêöèÿ, Èçì. ¹ 2). 3.1.15. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ï å ï ò î í í î é â î ä û Ê 1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 10 ã ïåïòîíà è 5 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ, êèïÿòÿò äî ðàñòâîðåíèÿ ïåïòîíà, ôèëüòðóþò è óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,27,4, ïîñëå ÷åãî ñòåðèëèçóþò 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. 3.1.16. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ï ë à ç ì û ê ð î â è  ïðîáèðêó âíîñÿò 2 ñì3 5 %-íîãî ðàñòâîðà ëèìîííîêèñëîãî íàòðèÿ è 8 ñì3 òîëüêî ÷òî ïîëó÷åííîé êðîâè êðîëèêà. Öèòðàòíóþ êðîâü ñòàâÿò íà 1820 ÷ â õîëîäèëüíèê ïðè òåìïåðàòóðå 46 °Ñ èëè ïîäâåðãàþò öåíòðèôóãèðîâàíèþ ïðè 3000 îá/ìèí â òå÷åíèå 15 ìèí.  ðåçóëüòàòå ÷åãî íàä îñàäêîì ýðèòðîöèòîâ îáðàçóåòñÿ ïðîçðà÷íûé ñëîé æèäêîñòè æåëòîâàòîãî öâåòà ïëàçìû, êîòîðóþ ðàçâîäÿò ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì 1:4. 3.1.17. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ä å ô è á ð è í è ð î â à í í î é ê ð î â è  êîëáó ñî ñòåêëÿííûìè áóñàìè ñëèâàþò 8 ñì3 òîëüêî ÷òî âçÿòîé êðîâè êðîëèêà, áàðàíà, ëîøàäè è íåïðåðûâíî âñòðÿõèâàþò â òå÷åíèå 1015 ìèí, â ðåçóëüòàòå ÷åãî íàõîäÿùèéñÿ â êðîâè ôèáðèí âûïàäàåò â îñàäîê, îáâîëàêèâàåò áóñû. Äåôèáðèíèðîâàííóþ êðîâü ñëèâàþò â äðóãóþ êîëáó èëè ïðîáèðêó. Ñëèòàÿ äåôèáðèíèðîâàííàÿ êðîâü óòðà÷èâàåò ñïîñîáíîñòü ñâåðòûâàòüñÿ. 3.1.18. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê ð î â ÿ í î ã î à ã à ð à Ê 100 ñì3 ðàñïëàâëåííîãî ñòåðèëüíîãî ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà, ïðèãîòîâëåííîãî ïî ï. 3.1.1 è îõëàæäåííîãî äî òåìïåðàòóðû 45 °Ñ, ñòåðèëüíî ïðèáàâëÿþò 510 ñì3 ñòåðèëüíî âçÿòîé äåôèáðèíèðîâàííîé êðîâè. Ãîòîâóþ ñðåäó ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ÷àøêè Ïåòðè, äàþò åé çàñòûòü è ïîäñóøèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Ñëîé àãàðà äîëæåí áûòü ðàâíîìåðíî îêðàøåí â êðàñíûé öâåò. 3.1.19. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å à ã à ð à Ñ è ì ì î í ñ à  1000 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 5 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ, 0,2 ã ñåðíîêèñëîãî ìàãíèÿ, 1,5 ã ôîñôîðíîêèñëîãî íàòðèÿ-àììîíèÿ, 2 ã äâóçàìåùåííîãî ôîñôîðíîêèñëîãî êàëèÿ, 5 ã íåéòðàëüíîãî ëèìîííîêèñëîãî íàòðèÿ, 20 ã àãàðà. Ðàñòâîð ôèëüòðóþò, äîáàâëÿþò 40 ñì3 ðàñòâîðà áðîìòèìîëîâîãî ñèíåãî (1:500). Ñðåäó ðàçëèâàþò â ïðîáèðêè ïî 56 ñì3 â êàæäóþ, ñòåðèëèçóþò ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí, ïîñëå ÷åãî ñêàøèâàþò. Ãîòîâàÿ ñðåäà äîëæíà áûòü îëèâêîâîãî öâåòà. 3.1.20. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û à î ñ ó ä à ð ñ ò â å í í î ã î ê î í ò ð î ë ü í î ã î è í ñ ò è ò ó ò à (ÃÊÈ)  ñòåðèëüíóþ êîëáó íàëèâàþò 60 ñì3 ðàñòâîðà Õåíêñà è äîáàâëÿþò ñòåðèëüíî 40 ñì3 ñûâîðîòêè êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, ïðîãðåòîé ïðè òåìïåðàòóðå 56 °Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí. Ïîñëå òùàòåëüíîãî ïåðåìåøèâàíèÿ óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,2 ðàñòâîðîì äâóóãëåêèñëîãî íàòðèÿ è ðàçëèâàþò ñðåäó ïî 2 ñì3 â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè, êîòîðûå çàêðûâàþò ñòåðèëüíûìè ðåçèíîâûìè ïðîáêàìè. Ñðåäó ìîæíî õðàíèòü ïðè òåìïåðàòóðå 4 °Ñ äî ÷åòûðåõ ìåñÿöåâ. 3.1.21. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ä ð î æ æ å â ê è í î é Ê 10 ñì3 ñòåðèëüíîãî æåëòêà êóðèíîãî ÿéöà äîáàâëÿþò 90 ñì3 ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà, òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò. Ñìåñü ðàçëèâàþò ïî 8 ñì3 â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè. Ïåðåä óïîòðåáëåíèåì ïðîâåðÿþò ñòåðèëüíîñòü ñðåäû, ïîìåñòèâ åå â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà 48 ÷. 3.1.22. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ñ ð å ä û Ê è ò ò-Ò à ð î ö ö è Ñâåæóþ ïå÷åíü êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ðàçðåçàþò íà êóñêè ìàññîé ïî 5060 ã, çàëèâàþò ðàâíûì êîëè÷åñòâîì âîäû è êèïÿòÿò â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè ïîñòîÿííîì ïîìåøèâàíèè. Ïå÷åíî÷íûé ýêñòðàêò ôèëüòðóþò ÷åðåç âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð è ñìåøèâàþò ñ ìÿñî-ïåïòîííûì áóëüîíîì èç ðàñ÷åòà îäíà ÷àñòü ïå÷åíî÷íîãî ýêñòðàêòà íà òðè ÷àñòè áóëüîíà. Ñìåñü íàãðåâàþò äî êèïåíèÿ, äîáàâëÿþò õëîðèñòûé íàòðèé èç ðàñ÷åòà 1,25 ã íà 1000 ñì3 ñðåäû è óñòàíàâëèâàþò ðÍ 7,67,8, ïîñëå ÷åãî êèïÿòÿò â òå÷åíèå 15 ìèí è ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð. 4-1* 75 Ñ. 8 ÃÎÑÒ 2123775  ïðîáèðêè êëàäóò ìåëêî íàðåçàííûå êóñî÷êè ïå÷åíè ïî 1,52 ã è çàëèâàþò ñìåñüþ ïå÷åíî÷íîãî ýêñòðàêòà ñ ìÿñî-ïåïòîííûì áóëüîíîì. Íà ïîâåðõíîñòü ñðåäû íàñëàèâàþò 0,51 ñì3 âàçåëèíîâîãî ìàñëà. Ñðåäó ñòåðèëèçóþò â òå÷åíèå 30 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 120 °Ñ. 3.1.23. Ð à ç â å ä å í è å ï å í è ö è ë ë è í à Íà êàæäûå 100 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà äîáàâëÿþò 1 ñì3 ñòåðèëüíîé äèñòèëëèðîâàííîé âîäû è ïîëó÷àþò îñíîâíîå ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 100 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3. Íàïðèìåð, âî ôëàêîí, ñîäåðæàùèé 500 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà, íóæíî âíåñòè 5 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.  ïÿòü ïðîáèðîê íàëèâàþò ïî 4,5 ñì3 â êàæäóþ ñòåðèëüíîé äèñòèëëèðîâàííîé âîäû.  ïåðâóþ ïðîáèðêó ñòåðèëüíîé ïèïåòêîé âíîñÿò 0,5 ñì3 ïåíèöèëëèíà îñíîâíîãî ðàçâåäåíèÿ è ïîëó÷àþò â ïåðâîé ïðîáèðêå ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 10 òûñ. åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà. Íîâîé ïèïåòêîé èç ïåðâîé ïðîáèðêè, òùàòåëüíî ïåðåìåøàâ ñîäåðæèìîå, ïåðåíîñÿò 0,5 ñì3 ðàñòâîðà âî âòîðóþ ïðîáèðêó è ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 1000 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà. Òàêèì æå îáðàçîì èç âòîðîé ïðîáèðêè ïåðåíîñÿò â òðåòüþ 0,5 ñì3 è ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 100 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà. Èç òðåòüåé ïðîáèðêè ïåðåíîñÿò 0,5 ñì3 â ÷åòâåðòóþ è ïîëó÷àþò ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 10 åä. â 1 ñì3 ðàñòâîðà. Èç ÷åòâåðòîé ïðîáèðêè ïåðåíîñÿò 0,5 ñì3 â ïÿòóþ è ïîëó÷àþò â ïÿòîé ïðîáèðêå ðàçâåäåíèå, ñîäåðæàùåå 1 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà. 3.1.24. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ì ÿ ñ î-ï å ï ò î í í î ã î à ã à ð à ñ ï å í è ö è ë ë è í î ì  òðè êîëáî÷êè èëè áîëüøèå ïðîáèðêè, ñîäåðæàùèå ïî 20 ñì3 ñòåðèëüíîãî ðàñïëàâëåííîãî è îõëàæäåííîãî äî òåìïåðàòóðû 4550 °Ñ ìÿñî-ïåïòîííîãî àãàðà (ðÍ 7,2), äîáàâëÿþò â ïåðâóþ êîëáó 1 ñì3 ïåíèöèëëèíà èç ÷åòâåðòîé ïðîáèðêè (ñì. ï. 3.1.23), ñîäåðæàùåé â 1 ñì3 10 åä. ïåíèöèëëèíà, òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, ïîëó÷àþò àãàð, ñîäåðæàùèé 0,5 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3, âî âòîðóþ êîëáó âíîñÿò 1 ñì3 èç ïÿòîé ïðîáèðêè (ñì. ï. 3.1.23), ñîäåðæàùåé â 1 ñì3 1 åä. ïåíèöèëëèíà, ïîëó÷àþò àãàð, êîòîðûé ñîäåðæèò â 1 ñì3 0,05 åä. ïåíèöèëëèíà; òðåòüþ êîëáî÷êó îñòàâëÿþò áåç ïåíèöèëëèíà äëÿ êîíòðîëÿ. Ñîäåðæèìîå âñåõ òðåõ êîëáî÷åê ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè ïî 5 ñì3 â êàæäóþ è ñêàøèâàþò. 3.1.25. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å è í ä è ê à ò î ð í î é á ó ì à ã è ä ë ÿ î ï ð å ä å ë å í è ÿ èíäîëà 5 ã ïàðàäèìåòèëàìèäîáåíçàëüäåãèäà, 10 ñì3 î÷èùåííîé êîíöåíòðèðîâàííîé ôîñôîðíîé êèñëîòû ðàñòâîðÿþò â 50 ñì3 96 ° ñïèðòà.  òåïëîâàòîì ðàñòâîðå ñìà÷èâàþò ôèëüòðîâàëüíóþ áóìàãó, âûñóøèâàþò, íàðåçàþò óçêèìè ïîëîñêàìè. Öâåò áóìàãè æåëòûé. Ïðè íàëè÷èè èíäîëà öâåò áóìàãè ìåíÿåòñÿ îò ñèðåíåâàòî-ðîçîâîãî äî èíòåíñèâíî ìàëèíîâîãî. Ïîÿâëåíèå äðóãèõ öâåòîâ íà èíäèêàòîðíîé áóìàãå íå ó÷èòûâàþò. 3.1.26. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å è í ä è ê à ò î ð í î é á ó ì à ã è ä ë ÿ î ï ð å ä å ë å í è ÿ ñåðîâîäîðîäà  100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 20 ã óêñóñíîêèñëîãî ñâèíöà è 1 ã äâóóãëåêèñëîãî íàòðèÿ. Ýòèì ðàñòâîðîì ïðîïèòûâàþò ïîëîñêè ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè, âûñóøèâàþò èõ ïðè òåìïåðàòóðå 1823 °Ñ è íàðåçàþò íà óçêèå ïîëîñêè. Ïîñëå ïðèãîòîâëåíèÿ áóìàãà îñòàåòñÿ áåëîé: ïðè íàëè÷èè ñåðîâîäîðîäà ÷åðíååò. 3.1.27. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å í à ñ û ù å í í î ã î ñ ï è ð ò î â î ã î ð à ñ ò â î ð à ì åòèëåíîâîé ñèíè  100 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà ðàñòâîðÿþò 89 ã ìåòèëåíîâîé ñèíè. Ðàñòâîð ôèëüòðóþò. 3.1.28. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å â î ä í î-ñ ï è ð ò î â î ã î ð à ñ ò â î ð à ì å ò è ë å í îâîé ñèíè Ê 30 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 1 ñì3 íàñûùåííîãî ñïèðòîâîãî ðàñòâîðà ìåòèëåíîâîé ñèíè, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.27. 3.1.29. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ì å ò è ë å í î â î é ñ è í è Ë å ô ô ë å ð à Ê 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû äîáàâëÿþò 30 ñì3 íàñûùåííîãî ñïèðòîâîãî ðàñòâîðà ìåòèëåíîâîé ñèíè è 1 ñì3 1 %-íîãî ðàñòâîðà ãèäðîîêèñè êàëèÿ. 3.1.30. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å í à ñ û ù å í í î ã î ñ ï è ð ò î â î ã î ð à ñ ò â î ð à ô ó êñèíà 89 ã îñíîâíîãî êðèñòàëëè÷åñêîãî ôóêñèíà âûñûïàþò âî ôëàêîí, çàëèâàþò 100 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà è ñòàâÿò íà 1824 ÷ â òåðìîñòàò ñ òåìïåðàòóðîé 37 °Ñ. Ôëàêîí ïåðèîäè÷åñêè âçáàëòûâàþò.  òå÷åíèå óêàçàííîãî âðåìåíè çíà÷èòåëüíàÿ ÷àñòü êðàñêè ðàñòâîðÿåòñÿ, è íà äíå ôëàêîíà îñòàåòñÿ îñàäîê, ñâèäåòåëüñòâóþùèé î íàñûùåíèè ðàñòâîðà. Íàñûùåííûé ðàñòâîð õðàíÿò âî ôëàêîíàõ èç òåìíîãî ñòåêëà. Èç íàñûùåííîãî ñïèðòîâîãî ðàñòâîðà ãîòîâÿò âîäíî-ñïèðòîâîé ðàñòâîð ôóêñèíà. Äëÿ ýòîãî ê 1 ñì3 íàñûùåííîãî ðàñòâîðà äîáàâëÿþò 9 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. 76 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 9 3.1.31. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê à ð á î ë î â î ã î ô ó ê ñ è í à Ö è ë ÿ 1 ã îñíîâíîãî êðèñòàëëè÷åñêîãî ôóêñèíà ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñ 5 ã êðèñòàëëè÷åñêîé êàðáîëîâîé êèñëîòû (ôåíîëà) è 0,5 ñì3 ãëèöåðèíà. Âî âðåìÿ ðàñòèðàíèÿ íåáîëüøèìè ïîðöèÿìè ïðèáàâëÿþò 10 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà. Ïîñëå òîãî, êàê êðàñêà ïîëíîñòüþ ðàçîòðåòñÿ, ïðèáàâëÿþò ïðè ïîñòîÿííîì ïîìåøèâàíèè 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ðàñòâîð êðàñêè ôèëüòðóþò. Ôóêñèí Öèëÿ ñòîéêèé è åãî õðàíÿò âî ôëàêîíàõ èç òåìíîãî ñòåêëà ñ ïðèòåðòîé ïðîáêîé. 3.1.32. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê à ð á î ë î â î ã î ê ð è ñ ò à ë ë è ÷ å ñ ê î ã î ô è î ë åòîâîãî, ã å í ö è à í-ô è î ë å ò î â î ã î è ë è ì å ò è ë î â î ã î ô è î ë å ò î â î ã î äëÿ îêðàñêè ïî Ãðàìó 1 ã êðèñòàëë-, ãåíöèàí- èëè ìåòèëâèîëåòà ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñ 2 ã êðèñòàëëè÷åñêîé êàðáîëîâîé êèñëîòû (ôåíîëà). Âî âðåìÿ ðàñòèðàíèÿ íåáîëüøèìè ïîðöèÿìè ïðèáàâëÿþò 10 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà. Ïîñëå òîãî, êàê êðàñêà ïîëíîñòüþ ðàñòâîðèòñÿ, ïðèáàâëÿþò ïðè ïîñòîÿííîì ïîìåøèâàíèè 100 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Ðàñòâîð êðàñêè ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð. Ðàñòâîðû íåñòîéêèå. 3.1.33. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ê ð à ñ ÿ ù å é á ó ì à ã è ï î Ñ è í å â ó  100 ñì3 96 ° ýòèëîâîãî ñïèðòà ðàñòâîðÿþò 1 ã êðèñòàëëâèîëåòà è 1 ñì3 ãëèöåðèíà. Êðàñêó íàëèâàþò â ëîòîê. Áóìàãó íàðåçàþò ïîëîñêàìè øèðèíîé 2,02,5 ñì è äëèíîé 3050 ñì. Ïîëîñêó ïîãðóæàþò íà íåñêîëüêî ñåêóíä â êðàñêó òàê, ÷òîáû îíà îêðàñèëàñü ñ îáåèõ ñòîðîí. Îêðàøåííûå ïîëîñêè âûíèìàþò ïèíöåòîì, äàþò êðàñêå ñòå÷ü è ïîäâåøèâàþò íà øïàãàòå äëÿ âûñóøèâàíèÿ. Áóìàãó ñóøàò íà âîçäóõå ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå 1823 °Ñ. Âûñóøåííûå ïîëîñêè áóìàãè ðàçðåçàþò íà êóñî÷êè ðàçìåðîì 2×2 ñì è õðàíÿò â áàíêå èç òåìíîãî ñòåêëà. 3.1.34. Ï ð è ã î ò î â ë å í è å ð à ñ ò â î ð à Ë þ ã î ë ÿ  10 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû ðàñòâîðÿþò 2 ã éîäèñòîãî êàëèÿ. Çàòåì ïðèáàâëÿþò 1 ã êðèñòàëëè÷åñêîãî éîäà. Ðàñòâîð âûäåðæèâàþò 56 ÷ äî ïîëíîãî ðàñòâîðåíèÿ éîäà, ïîñëå ÷åãî ïðèáàâëÿþò 290 ñì3 äèñòèëëèðîâàííîé âîäû. Õðàíÿò ðàñòâîð â ñêëÿíêå èç òåìíîãî ñòåêëà. 3.2. Îêðàñêà ïðåïàðàòîâ 3.2.1. Î ê ð à ñ ê à ì à ç ê î â ï î à ð à ì ó (î á ù å ï ð è í ÿ ò à ÿ ì î ä è ô è ê à ö è ÿ) Íà ôèêñèðîâàííûé ìàçîê ïîìåùàþò ïîëîñêó ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè è íàëèâàþò êàðáîëîâûé ãåíöèàíâèîëåò. Âûäåðæèâàþò 12 ìèí, ïîñëå ÷åãî ñíèìàþò áóìàæêó, ñëèâàþò êðàñêó, ìàçîê ïðîìûâàþò âîäîé è íàëèâàþò íà íåãî ðàñòâîð Ëþãîëÿ (ìàçîê ÷åðíååò). ×åðåç 12 ìèí ðàñòâîð ñëèâàþò è íàëèâàþò ýòèëîâûé ñïèðò íà 0,51 ìèí. Çàòåì ìàçîê ïðîìûâàþò âîäîé è äîïîëíèòåëüíî îêðàøèâàþò âîäíûì ôóêñèíîì èëè âîäíûì ðàñòâîðîì ñàôðàíèíà â òå÷åíèå 12 ìèí. Çàòåì ïðîìûâàþò âîäîé è ïðîñóøèâàþò ìàçîê ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé. Îêðàñêó ïî Ãðàìó ìîæíî ïðèìåíÿòü â âîäîèçìåíåíèè Ñèíåâà, ñîãëàñíî êîòîðîìó âìåñòî êàðáîëîâîãî ãåíöèàíâèîëåòà ïðèìåíÿþò îêðàøåííûå ïîëîñêè ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.33. Äëÿ îêðàøèâàíèÿ ìàçêîâ íà ôèêñèðîâàííûé ìàçîê íàêëàäûâàþò ïîëîñêó ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãè, ïðîïèòàííîé ñïèðòîâûì ðàñòâîðîì êðèñòàëëâèîëåòà, è íàíîñÿò äâå-òðè êàïëè âîäû, êîòîðûå ïîëíîñòüþ âïèòûâàþòñÿ áóìàãîé, ïîñëåäíÿÿ ïëîòíî ïðèëåãàåò ê ñòåêëó. Âûäåðæèâàþò 2 ìèí, çàòåì áóìàãó óäàëÿþò ïèíöåòîì è äàëüíåéøóþ îêðàñêó ïðîèçâîäÿò ïî Ãðàìó. 3.2.2. Î ê ð à ñ ê à ê à ï ñ ó ë ì å ò î ä î ì Î ë ü ò à Ìàçêè îêðàøèâàþò 2 %-íûì âîäíûì ðàñòâîðîì ñàôðàíèíà â òå÷åíèå 13 ìèí (ëó÷øå ïðè ïîäîãðåâàíèè) è áûñòðî ñìûâàþò âîäîé. Ðàñòâîð ñàôðàíèíà ãîòîâÿò ïåðåä óïîòðåáëåíèåì: ñàôðàíèí ðàñòâîðÿþò â âîäå, äîâåäåííîé äî êèïåíèÿ è ôèëüòðóþò ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð. 3.2.3. Î ê ð à ñ ê à ê à ï ñ ó ë ì å ò î ä î ì Ð å á è ã å ð à Ìàçêè îêðàøèâàþò è ôèêñèðóþò îäíîâðåìåííî. Ãîòîâÿò ðàñòâîð: 1520 ã ãåíöèàíâèîëåòà ðàñòâîðÿþò â 100 ñì3 40 %-íîãî ôîðìàëèíà. Ðàñòâîð îñòàâëÿþò íà 810 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 20 °Ñ, ôèëüòðóþò, ïîñëå ÷åãî îí ãîòîâ ê óïîòðåáëåíèþ. Îêðàøèâàþò íåôèêñèðîâàííûå ìàçêè â òå÷åíèå 1520 ñ, áûñòðî ïðîìûâàþò âîäîé è âûñóøèâàþò ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé. 3.3. Ïîäãîòîâêà îáðàçöîâ ê èññëåäîâàíèþ è ïðîâåäåíèþ ïîñåâà 3.3.1. Êàæäûé ïðåäñòàâëåííûé ê èññëåäîâàíèþ îáðàçåö (ìûøöû, ëèìôàòè÷åñêèå óçëû, ïàðåíõèìàòîçíûå îðãàíû) ïåðåä ïîñåâîì îñâîáîæäàþò îò âèäèìîé æèðîâîé è ñîåäèíèòåëüíîé òêàíè, ïîãðóæàþò íà 23 ìèí â ñïèðò è äâà ðàçà îáæèãàþò ñ ïîâåðõíîñòè. Çàòåì ñòåðèëüíûìè íîæíèöàìè èç ãëóáèíû ðàçëè÷íûõ ìåñò êàæäîãî îáðàçöà âûðåçàþò êóñî÷êè ðàçìåðîì íå ìåíåå 2,0×1,5×2,5 ñì; ëèìôàòè÷åñêèå óçëû ðàçðåçàþò ïîïîëàì. Çàòåì âñå âûðåçàííûå êóñî÷êè èçìåëü÷àþò ñòåðèëüíûìè íîæíèöàìè. 3.3.2. Äëÿ ïîñåâà ñîñòàâëÿþò äâå ïðîáû ïî 15 ã êàæäàÿ. Îäíà ïðîáà ñîñòîèò èç êóñî÷êîâ ìûøö è ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ, à âòîðàÿ èç êóñî÷êîâ ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ (ïå÷åíè, ïî÷êè è ñåëåçåíêè). 4-21106 77 Ñ. 10 ÃÎÑÒ 2123775 3.3.3. Êàæäóþ ïðîáó â îòäåëüíîñòè ïîìåùàþò â ñòåðèëüíûé ñòàêàí (êîëáó) ãîìîãåíèçàòîðà äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ âçâåñè. Äëÿ ýòîãî â ñòàêàí (êîëáó) äîáàâëÿþò ïî 15 ñì3 ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà, êîëè÷åñòâî êîòîðîãî ðàâíî ìàññå êàæäîé ïðîáû, è ãîìîãåíèçèðóþò ïðîáû â ýëåêòðè÷åñêîì ãîìîãåíèçàòîðå. Âíà÷àëå èçìåëü÷àþò ìàòåðèàë çàìåäëåííîé ÷àñòîòîé îáîðîòîâ, çàòåì ñ áîëüøåé ÷àñòîòîé îáîðîòîâ íå áîëåå 2,5 ìèí (â çàâèñèìîñòè îò ÷èñëà îáîðîòîâ). 1 ñì3 ïðèãîòîâëåííîé âçâåñè ñîäåðæèò 0,5 ã ïðîäóêòà. 3.3.4. Ïîëó÷åííûå âçâåñè îòñòàèâàþò 10 ìèí. Èç âåðõíåé ÷àñòè íàäîñàäî÷íîé æèäêîñòè ïèïåòêîé Ïàñòåðà èëè ïåòëåé âíîñÿò íà ÷àøêó ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì è ýëåêòèâíîé ñðåäîé (Ýíäî, Ëåâèíà) îäíó-äâå êàïëè èëè îäíó ïåòëþ è òùàòåëüíî âòèðàþò ìàòåðèàë â ïîâåðõíîñòü ïðåäâàðèòåëüíî ïîäñóøåííûõ ñðåä. 3.3.5. Îäíîâðåìåííî ñ ïîñåâîì íà ïëîòíûå ñðåäû ïðîèçâîäÿò ïîñåâ ìàòåðèàëà äëÿ íàêîïëåíèÿ ñàëüìîíåëë â îäíó èç ñðåä îáîãàùåíèÿ (ñåëåíèòîâûé Ô-áóëüîí, Ìþëëåðà, Êàóôìàíà, Êèëëèàíà, õëîðèñòîìàãíèåâóþ ñðåäó «Ì»). Äëÿ ýòîãî 20 ñì3 âçâåñè èç ìûøö è ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ âíîñÿò â îäèí ôëàêîí (êîëáó), à 20 ñì3 âçâåñè èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ â äðóãîé.  êàæäûé ôëàêîí íàëèâàþò ïî 50 ñì3 ñðåäû îáîãàùåíèÿ. Ïðè îòñóòñòâèè ãîìîãåíèçàòîðà äîïóñêàåòñÿ ïîñåâ êóñî÷êà ïðîáû ðàçìåðîì íå ìåíåå 2,0×1,5×2,5 ñì (ïóòåì íàíåñåíèÿ îòïå÷àòêîâ ðàçíûìè ñòîðîíàìè ïðîáû íà ïîâåðõíîñòü ïèòàòåëüíîé ñðåäû â ÷àøêàõ ñ ïðåäâàðèòåëüíî ïîäñóøåííûì ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì è ýëåêòèâíîé ñðåäîé Ýíäî, Ëåâèíà). Ïðè ýòîì íåîáõîäèìî ïðîèçâåñòè òàêæå ïîñåâ íà ýëåêòèâíûå ñðåäû èç ëèìôàòè÷åñêîãî óçëà ïå÷åíè èëè ñîñêîáà ñ âíóòðåííåé ñòåíêè æåë÷íîãî ïóçûðÿ. Ïîñåâ â ñðåäó îáîãàùåíèÿ ïðîèçâîäÿò âî ôëàêîíû Ñîêñëåòà (êîëáû), â êîòîðûå ïðåäâàðèòåëüíî íàëèòî ïî 50 ñì3 ñðåäû îáîãàùåíèÿ (ñåëåíèòîâîé Ô-áóëüîí, Ìþëëåðà, Êàóôìàíà, Êèëëèàíà, õëîðèñòîìàãíèåâàÿ ñðåäà «Ì»).  îäèí ôëàêîí âíîñèòñÿ èçìåëü÷åííàÿ ïðîáà èç ìûøö è ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ ìàññîé 10 ã, à â äðóãîé 10 ã èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ. Ñëåäóåò èìåòü â âèäó, ÷òî íà ñåëåíèòîâîì Ô-áóëüîíå S. typhi suis è S. cholerae suis, êàê ïðàâèëî, íå ðàñòóò. Íàèëó÷øèé ðîñò S. cholerae suis íàáëþäàåòñÿ íà ñðåäå Êèëëèàíà. 3.3.6. Ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. ×åðåç 18 ÷ ÷àøêè ñ ïåðâè÷íûìè ïîñåâàìè íà ïëîòíûõ ñðåäàõ èçâëåêàþò èç òåðìîñòàòà è ïðîñìàòðèâàþò âèçóàëüíî, ïðè íåîáõîäèìîñòè ÷åðåç ëóïó èëè ïîä ìàëûì óâåëè÷åíèåì ìèêðîñêîïà. Ïðè îòñóòñòâèè ðîñòà ÷åðåç 18 ÷ ïîñåâû âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå äîïîëíèòåëüíî äî 24 ÷. Íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå îòûñêèâàþò êîëîíèè, õàðàêòåðíûå äëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû, ðîæè, ïàñòåðåëëåçà, ëèñòåðèîçà, êîêêîâûõ èíôåêöèé è äð. Íà ÷àøêàõ ñ ýëåêòèâíûìè ñðåäàìè (Ýíäî, Ëåâèíà) îòûñêèâàþò êîëîíèè, õàðàêòåðíûå äëÿ áàêòåðèé ñåìåéñòâà êèøå÷íûõ. Ïðè îáíàðóæåíèè â ìàçêàõ ìèêðîáîâ, ïîäîçðèòåëüíûõ íà ñèáèðñêóþ ÿçâó, ïîñåâû íà ýëåêòèâíóþ ñðåäó è ñðåäó îáîãàùåíèÿ íå ïðîèçâîäÿò. 4. ÏÐÎÂÅÄÅÍÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÉ 4.1. Áàêòåðèîñêîïè÷åñêîå èññëåäîâàíèå Èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ (ïå÷åíè, ïî÷åê, ñåëåçåíêè) ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ òóøè èëè èç ïîðàæåííûõ ó÷àñòêîâ îðãàíà è òêàíè ïðèãîòîâëÿþò 210 ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ (â çàâèñèìîñòè îò õàðàêòåðà ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé è ïðåäïîëàãàåìîãî äèàãíîçà). Ïðåïàðàòû âûñóøèâàþò íà âîçäóõå, ôèêñèðóþò è îêðàøèâàþò îäíîâðåìåííî è ïî Ãðàìó è 2 %-íûì ðàñòâîðîì ñàôðàíèíà èëè ðàñòâîðîì Ðåáèãåðà. Ïðè áàêòåðèîñêîïèè ìàçêîâ ïðåæäå âñåãî îáðàùàþò âíèìàíèå íà íàëè÷èå âîçáóäèòåëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû. Ïðè îêðàñêå ñàôðàíèíîì ñèáèðåÿçâåííûå áàöèëëû îêðàøèâàþòñÿ â êèðïè÷íî-êðàñíûé öâåò, à êàïñóëû, òåíè (ñëåäû ðàñïàäà áàêòåðèé) â ñâåòëî-æåëòûé. Ïðè îêðàñêå ðàñòâîðîì Ðåáèãåðà ñèáèðåÿçâåííûå áàöèëëû îêðàøèâàþòñÿ â òåìíî-ôèîëåòîâûé öâåò, à êàïñóëû â êðàñíî-ôèîëåòîâûé.  ìàçêàõ èç ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ èëè äðóãèõ òêàíåé ñâèíåé, êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà ïðè î÷àãîâîì ïîðàæåíèè, íàðÿäó ñ òèïè÷íûìè êàïñóëüíûìè ïàëî÷êàìè, ìîãóò îáíàðóæèâàòüñÿ àòèïè÷íûå áàöèëëû ñèáèðñêîé ÿçâû â âèäå ñèëüíî èçîãíóòûõ èëè ïåðåêðó÷åííûõ äëèííûõ íèòåé, ðàçáóõøèõ è ïîòåðÿâøèõ ïðàâèëüíûå êîíòóðû, èëè ðàñïàâøèõñÿ íà îòäåëüíûå, êàê áû îñêîëêè áàöèëë èëè òåíåé ðàçëè÷íîé âåëè÷èíû, îòðèöàòåëüíî îêðàøèâàþùèõñÿ ïî Ãðàìó èëè â âèäå êîíãëîìåðàòà êàïñóë, íàïîëíåííûõ ìåëü÷àéøèìè âêëþ÷åíèÿìè. 78 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 11 Íàëè÷èå â ìàçêàõ ãðàìïîëîæèòåëüíûõ ïàëî÷åê ñ îáðóáëåííûìè êîíöàìè, à ïðè îêðàñêå ñàôðàíèíîì èëè ðàñòâîðîì Ðåãèáåðà ïàëî÷åê èëè öåïî÷åê ñ êàïñóëàìè èëè òåíåé â ìàçêàõ èç ëèìôàòè÷åñêèõ óçëîâ ñâèíåé ñî ñïåöèôè÷åñêîé äëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû ïàòîëîãè÷åñêîé êàðòèíîé, äàåò ïðåäâàðèòåëüíîå çàêëþ÷åíèå îá îáíàðóæåíèè (áàêòåðèîñêîïè÷åñêè) ìèêðîáîâ, õàðàêòåðíûõ äëÿ âîçáóäèòåëÿ ñèáèðñêîé ÿçâû. Ïðè íàëè÷èè â ìàçêàõ àòèïè÷íûõ áàöèëë îäíîâðåìåííî ñ áàêòåðèîñêîïèåé ñòàâÿò ðåàêöèþ ïðåöèïèòàöèè.  çàâèñèìîñòè îò ðåçóëüòàòîâ áàêòåðèîñêîïèè è õàðàêòåðà ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ ïðîâîäÿò èññëåäîâàíèÿ íà íàëè÷èå îïðåäåëåííûõ ìèêðîáîâ. 4.2. Ìåòîäû âûÿâëåíèÿ àýðîáíûõ áàêòåðèé 4.2.1.  û ÿ â ë å í è å á à ö è ë ë ñ è á è ð ñ ê î é ÿ ç â û 4.2.1.1 Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè èõ õàðàêòåðíîé ìîðôîëîãèè, â îïðåäåëåíèè õàðàêòåðà ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è âûÿâëåíèè ïàòîãåííîñòè ïóòåì çàðàæåíèÿ ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ. 4.2.1.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ Áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû îáíàðóæèâàþò â òðè ïîñëåäîâàòåëüíûõ ýòàïà: áàêòåðèîñêîïèÿ ìàçêîâ èç ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà; ïîëó÷åíèå è èçó÷åíèå ñâîéñòâ ÷èñòîé êóëüòóðû íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ; áèîëîãè÷åñêàÿ ïðîáà íà ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ è, ïðè íåîáõîäèìîñòè, ñåðîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå. Ïðè áàêòåðèîñêîïèè ìàçêîâ èç ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà îáðàùàþò âíèìàíèå íà ôîðìó è ðàñïîëîæåíèå îòäåëüíûõ ìèêðîáîâ è íàëè÷èå êàïñóë. Õàðàêòåðíûé âèä ñèáèðåÿçâåííûõ ïàëî÷åê è îáèëèå èõ â ìàçêå íåðåäêî ïîçâîëÿåò ïîñòàâèòü äèàãíîç óæå ïî ðåçóëüòàòàì áàêòåðèîñêîïè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ. Áàöèëëû ñèáèðñêîé ÿçâû íà ÷àøêàõ ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ÷åðåç 1624 ÷ ðàñòóò â âèäå ñåðîáåëûõ øåðîõîâàòûõ ñ áàõðîì÷àòûìè êðàÿìè êîëîíèé, íàïîìèíàþùèõ ïîä ëóïîé èëè ïðè ìàëîì óâåëè÷åíèè ìèêðîñêîïà «ãîëîâêó ìåäóçû», «ëüâèíóþ ãðèâó». Èç ïîäîçðèòåëüíîé êîëîíèè äåëàþò ïîñåâ â ïðîáèðêó ñ ìÿñî-ïåïòîííûì áóëüîíîì. Íà ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå ñèáèðåÿçâåííûå áàöèëëû ðàñòóò â âèäå êðóïíûõ õëîïüåâ, îñåäàþùèõ íà äíî ïðîáèðêè ê êîíöó ïåðâûõ ñóòîê, ñ îáðàçîâàíèåì îñàäêà, íàïîìèíàþùåãî êîìîê âàòû, áóëüîí îñòàåòñÿ ïðîçðà÷íûì. Èç áóëüîííîé êóëüòóðû ãîòîâÿò ïðåïàðàò «ðàçäàâëåííàÿ» èëè «âèñÿ÷àÿ êàïëÿ». Ïðè ìèêðîñêîïèðîâàíèè ïðåïàðàòà îáíàðóæèâàþòñÿ íåïîäâèæíûå ñèáèðåÿçâåííûå ïàëî÷êè. Ïðè íåîáõîäèìîñòè äèôôåðåíöèàöèè ñèáèðåÿçâåííûõ áàöèëë îò ñàïðîôèòíûõ áàöèëë, êîòîðûå ìîðôîëîãè÷åñêè î÷åíü ñõîäíû, âûäåëåííóþ ÷èñòóþ êóëüòóðó íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå èëè ìÿñîïåïòîííîì áóëüîíå èññëåäóþò: íà òåñò «æåì÷óæíîå îæåðåëüå», ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê ñèáèðåÿçâåííîìó ôàãó, ñâåðòûâàåìîñòü æåëòêà êóðèíîãî ÿéöà, ãåìîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü, êàïñóëîîáðàçîâàíèå. Ò å ñ ò «æ å ì ÷ ó æ í î å î æ å ð å ë ü å» îñóùåñòâëÿþò îäíèì èç äâóõ ñïîñîáîâ: Ïåðâûé ñïîñîá. Ïîñòàíîâêó òåñòà íà÷èíàþò ñ ðàçâåäåíèÿ ïåíèöèëëèíà ïî ï. 3.1.23.  òðè ïðîáèðêè ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì, â êàæäîé èç êîòîðûõ ñîäåðæèòñÿ ïî 0,5 è 0,05 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 (ïî ï. 3.1.24), è â êîíòðîëüíóþ ïðîáèðêó áåç ïåíèöèëëèíà âíîñÿò ïî 0,25 ñì3 òðåõ÷àñîâûõ áóëüîííûõ êóëüòóð èñïûòóåìûõ øòàììîâ, âûðàùåííûõ â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò â íàêëîííîì ïîëîæåíèè (íà äåðåâÿííóþ ðåéêó èëè ñòåêëÿííóþ òðóáêó) ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. ×åðåç 3 ÷ èç êîíäåíñàöèîííîé æèäêîñòè áåðóò áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé ìàòåðèàë è ãîòîâÿò íà ïðåäìåòíûõ ñòåêëàõ ìàçêè, êîòîðûå âûñóøèâàþò íà âîçäóõå, ôèêñèðóþò â òå÷åíèå 15 ìèí ñïèðòîýôèðíîé ñìåñüþ è îêðàøèâàþò ìåòèëåíîâîé ñèíüþ, ðàçâåäåííûì ôóêñèíîì èëè ïî Ãðàìó. Âòîðîé ñïîñîá. Ê ìÿñî-ïåïòîííîìó áóëüîíó (ðÍ 7,27,4) ñòåðèëüíî äîáàâëÿþò 20 % ñûâîðîòêè êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà áåç êîíñåðâàíòà. Äëÿ ýòîãî áåðóò òðè ïðîáèðêè, â êàæäîé èç êîòîðûõ ñîäåðæèòñÿ ïî 8 ñì3 ìÿñî-ïåïòîííîãî áóëüîíà, è äîáàâëÿþò â êàæäóþ ïðîáèðêó 2,0 ñì3 ñûâîðîòêè êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà.  ïåðâóþ ïðîáèðêó äîáàâëÿþò 0,5 ñì3 ïåíèöèëëèíà, ñîäåðæàùåãî 10 åä. â 1 ñì3 ðàñòâîðà, ïîëó÷àþò áóëüîí, ñîäåðæàùèé â 1 ñì3 0,5 åä. ïåíèöèëëèíà; âî âòîðóþ ïðîáèðêó äîáàâëÿþò 0,5 ñì3 ïåíèöèëëèíà èç ïðîáèðêè, ñîäåðæàùåé 1 åä. ïåíèöèëëèíà â 1 ñì3 ðàñòâîðà; â òðåòüþ ïðîáèðêó ïåíèöèëëèíà íå äîáàâëÿþò, â íåé îñòàåòñÿ ìÿñî-ïåïòîííûé áóëüîí ñ ñûâîðîòêîé êðîâè (êîíòðîëüíàÿ). Áóëüîí ñ ñûâîðîòêîé êðîâè è ïåíèöèëëèíîì ðàçëèâàþò â ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè ïî 2,5 ñì3 è âíîñÿò â êàæäóþ èç íèõ ïî 0,25 ñì3 òðåõ÷àñîâîé áóëüîííîé êóëüòóðû, âûðàùåííîé â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, èñïûòóåìûõ øòàììîâ. Äëÿ êîíòðîëÿ ïðîèçâîäÿò ïîñåâ â áóëüîí ñ ñûâîðîòêîé êðîâè áåç ïåíèöèëëèíà. Ìÿñî-ïåïòîííûé áóëüîí ïåðåä ïîñåâîì íàãðåâàþò íà âîäÿíîé áàíå äî òåìïåðàòóðû 40 °Ñ, è çàñåÿííûå ïðîáèðêè âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 36 ÷. 4-2* 79 Ñ. 12 ÃÎÑÒ 2123775 Äàëüíåéøèé õîä èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäÿò â òîé æå ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, êîòîðàÿ èçëîæåíà â ïåðâîì ñïîñîáå.  ñëó÷àÿõ îòðèöàòåëüíûõ ðåçóëüòàòîâ ìèêðîñêîïèè ÷åðåç 3 ÷ èíêóáàöèè ïîñåâîâ (íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå è ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå) ñëåäóåò ïðîäîëæèòü èíêóáàöèþ äî 6 ÷ è ïîñëå ýòîãî ïðîâåñòè çàêëþ÷èòåëüíûé ó÷åò òåñòà. Ïðè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè òåñòà «æåì÷óæíîå îæåðåëüå» áàöèëëû ñèáèðñêîé ÿçâû îáðàçóþò öåïî÷êè øàðîîáðàçíîé ôîðìû, êîòîðûå ïðèîáðåòàþò ñõîäñòâî ñ îæåðåëüåì èç áóñ. Ñïîðîâûå ñàïðîôèòíûå àýðîáíûå áàêòåðèè, êàê ïðàâèëî, íå îáðàçóþò øàðîîáðàçíûõ ôîðì, à èìåþò îáû÷íóþ ôîðìó ïàëî÷åê, ò. å. äàþò îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò ïðè ïîñòàíîâêå ýòîãî òåñòà. Ë è ç è ñ ñ è á è ð å ÿ ç â å í í û ì ô à ã î ì «Ã à ì ì à Ì Â À» îñóùåñòâëÿþò îäíèì èç äâóõ ñïîñîáîâ: Ïåðâûé ñïîñîá. Íà ïîâåðõíîñòè ïëàñòèíêè ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì (ðÍ 7,27,4) â ÷àøêå Ïåòðè ñòåðèëüíîé ïðîáèðêîé ñ ðîâíûìè êðàÿìè äåëàþò 56 íàñå÷åê. Áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé èëè ñòåðèëüíîé ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé ñ òîíêî îòòÿíóòûì êîíöîì íà ïîâåðõíîñòü àãàðà â öåíòð íàñå÷êè (êðóæêà) íàíîñÿò îäíó êàïëþ òðåõ÷àñîâîé áóëüîííîé êóëüòóðû èñïûòóåìûõ øòàììîâ. Âíåñåííóþ êàïëþ ðàñïðåäåëÿþò ðàâíîìåðíî ïåòëåé ïî âñåé ïîâåðõíîñòè íàñå÷êè. Çàñåÿííûå ÷àøêè ïîäñóøèâàþò â òå÷åíèå 1520 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, ïîñëå ÷åãî â öåíòð êàæäîãî ïîñåâà íàíîñÿò êàïëþ íåðàçâåäåííîãî ôàãà, âíîâü ïîäñóøèâàþò â òå÷åíèå 10 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, è çàòåì ÷àøêè ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. ×åðåç 68 ÷ â ìåñòå ïîñåâà ìîæíî îáíàðóæèòü ñòåðèëüíîå ïÿòíî, â êîíòðîëüíûõ ÷àøêàõ âñå íàñå÷êè ïîêðûòû êóëüòóðîé, êàê è â ÷àøêàõ, â êîòîðûõ èñïûòûâàëèñü ñàïðîôèòíûå ñïîðîîáðàçóþùèå àýðîáíûå áàêòåðèè. Âòîðîé ñïîñîá ñïîñîá «ñòåêàþùåé êàïëè». Èññëåäóåìóþ êóëüòóðó âûñåâàþò â òðè ïðîáèðêè íà ñêîøåííûé ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð è âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íå áîëåå 20 ìèí. Ïðîáèðêè ñòàâÿò âåðòèêàëüíî â øòàòèâ. Çàòåì íà âåðõíþþ ÷àñòü àãàðà íàíîñÿò êàïëþ íåðàçâåäåííîãî áàêòåðèîôàãà. Îäíó ïðîáèðêó îñòàâëÿþò äëÿ êîíòðîëÿ áåç ôàãà. Äåéñòâèå ôàãà óñòàíàâëèâàþò ÷åðåç 6 8 ÷.  êîíòðîëüíîé ïðîáèðêå ïî âñåé ïîâåðõíîñòè àãàðà íàáëþäàåòñÿ îáû÷íûé ðîñò êóëüòóðû.  ïðîáèðêàõ ñ ôàãîì ïî õîäó ñòåêàíèÿ êàïëè ìèêðîáû íå ðàñòóò, à âîêðóã ýòîé çîíû íàáëþäàåòñÿ îáû÷íûé ðîñò êóëüòóðû â âèäê «áîðäþðà». Íàèáîëåå ÷åòêî ÿâëåíèå ëèçèñà íàáëþäàåòñÿ ÷åðåç 1618 ÷. Ñ â å ð ò û â à å ì î ñ ò ü æ å ë ò ê à ê ó ð è í î ã î ÿ é ö à îïðåäåëÿþò ñëåäóþùèì îáðàçîì. Èñïûòóåìóþ êóëüòóðó âûñåâàþò â ïðîáèðêó ñî ñðåäîé Äðîææåâêèíîé, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.21. Ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà âðåìÿ îò 8 äî 24 ÷. Çà óêàçàííîå âðåìÿ ñèáèðåÿçâåííàÿ ïàëî÷êà íå âûçûâàåò êîàãóëÿöèþ æåëòêà êóðèíîãî ÿéöà, à áîëüøèíñòâî ñïîðîîáðàçóþùèõ àýðîáíûõ áàêòåðèé êîàãóëèðóþò æåëòîê óæå ÷åðåç 68 ÷. Ãåìîëèòè÷åñêóþ àêòèâíîñòü îïðåäåëÿþò ñëåäóþùèì îáðàçîì. Èñïûòûâàåìóþ êóëüòóðó âûñåâàþò íà ÷àøêó ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ñ êðîâüþ èëè â ïðîáèðêó áóëüîíà ñ êðîâüþ. ×àøêó èëè ïðîáèðêó ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà 2024 ÷. Ïðè íàëè÷èè áàöèëë ñèáèðñêîé ÿçâû íà ÷àøêå âûðàñòàþò õàðàêòåðíûå êîëîíèè áåç ãåìîëèçà, áóëüîí ñ êðîâüþ òàêæå íå ãåìîëèçèðóåòñÿ. Ïðè íàëè÷èè äðóãèõ ñàïðîôèòíûõ ñïîðîîáðàçóþùèõ áàöèëë, â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ, âîêðóã êîëîíèé îáðàçóåòñÿ çîíà β-ãåìîëèçà è íàñòóïàåò ãåìîëèç áóëüîíà ñ êðîâüþ. Î ï ð å ä å ë å í è å ê à ï ñ ó ë î î á ð à ç î â à í è ÿ in vitro. Èñïûòóåìóþ êóëüòóðó ïåòëåé âûñåâàþò â ïðîáèðêó ñî ñðåäîé «ÃÊÈ», ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.20, ïðîáèðêó ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. ×åðåç 30120 ìèí ó îòäåëüíûõ ñèáèðåÿçâåííûõ ïàëî÷åê íà÷èíàåòñÿ êàïñóëîîáðàçîâàíèå, à ÷åðåç 1618 ÷ âñå èëè áîëüøèíñòâî ñèáèðåÿçâåííûõ áàöèëë îáðàçóþò êàïñóëó. Ñî ñðåäû ãîòîâÿò ìàçêè, ôèêñèðóþò èõ 15 ìèí â ìåòàíîëå è îêðàøèâàþò ñèíüþ Ëåôôëåðà â òå÷åíèå 15 ìèí. Ïðè ìèêðîñêîïèè îáíàðóæèâàþò ñèíèå ïàëî÷êè è íèòè, îêðóæåííûå ðîçîâîé êàïñóëîé. Îäíîâðåìåííî ñ áàêòåðèîñêîïèåé èñõîäíîãî ìàòåðèàëà â ñîìíèòåëüíûõ ñëó÷àÿõ ïðîèçâîäÿò ðåàêöèþ ïðåöèïèòàöèè. Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè ïðåöèïèòàöèè 2 ã ìàòåðèàëà ìåëêî íàðåçàþò â ïðîáèðêó è çàëèâàþò 10 ñì3 êàðáîëèçèðîâàííîãî 0,5 %-íîãî ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Åñëè èññëåäóþò ñâåæèé ìàòåðèàë, òî åãî ïðåäâàðèòåëüíî âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå â òå÷åíèå 1824 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Çàòåì ýêñòðàêò êèïÿòÿò â òå÷åíèå 3040 ìèí è ôèëüòðóþò ÷åðåç àñáåñòîâóþ íåéòðàëüíóþ âàòó äî ïîëíîé ïðîçðà÷íîñòè. 0,250,3 ñì3 ïðîçðà÷íîãî ýêñòðàêòà âíîñÿò â óçêóþ ïðîáèðêó è ïîä íåãî ïîäñëàèâàþò òàêîå æå êîëè÷åñòâî ïðåöèïèòèðóþùåé ñèáèðåÿçâåííîé ñûâîðîòêè, ïðîôèëüòðîâàííîé ÷åðåç áóìàæíûé ôèëüòð. 80 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 13 Ðåàêöèÿ ñ÷èòàåòñÿ ïîëîæèòåëüíîé, åñëè íà ãðàíèöå ñûâîðîòêè è ýêñòðàêòà ÷åðåç 38 ìèí ïîÿâëÿåòñÿ ïðåöèïèòèðóþùåå êîëüöî; ñîìíèòåëüíîé, åñëè îíî ïîÿâëÿåòñÿ ÷åðåç 1015 ìèí è îòðèöàòåëüíîé ïðè îòñóòñòâèè êîëüöà. Ïðè ïðîâåäåíèè ðåàêöèè ïðåöèïèòàöèè êîíòðîëîåì ñëóæàò: çàâåäîìî ñèáèðåÿçâåííûé àíòèãåí ñ ñèáèðåÿçâåííîé ïðåöèïèòèðóþùåé ñûâîðîòêîé, íîðìàëüíàÿ ñûâîðîòêà ñ èññëåäóåìûì ýêñòðàêòîì è ïðåöèïèòèðóþùàÿ ñûâîðîòêà ñ ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì. Ïðè ïåðâîì êîíòðîëå äîëæíî ïîëó÷èòüñÿ áåëîå êîëüöî, à ïðè âòîðîì è òðåòüåì êîëüöî îòñóòñòâóåò. Ïîñòàíîâêà áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû Äëÿ ïîñòàíîâêè áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû íà æèâîòíûõ ÷àñòü èñõîäíîãî ìàòåðèàëà ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñî ñòåðèëüíûì ïåñêîì è íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. 0,5 ñì3 âçâåñè âïðûñêèâàþò äâóì áåëûì ìûøàì ïîä êîæó â îáëàñòè ñïèíû. Ïðè èññëåäîâàíèè ìàòåðèàëà îò ñâèíåé (ïîä÷åëþñòíûå ëèìôàòè÷åñêèå óçëû) îïûòíûõ æèâîòíûõ çàðàæàþò òîëüêî ïîëó÷åííîé ÷èñòîé êóëüòóðîé.  ñëó÷àå ãèáåëè ìûøåé, ÷òî îáû÷íî íàáëþäàåòñÿ ÷åðåç 2472 ÷, èõ âñêðûâàþò: èç êðîâè ñåðäöà, ïå÷åíè, ñåëåçåíêè è ìåñòà çàðàæåíèÿ ïðèãîòîâëÿþò ìàçêè, à èç îðãàíîâ äåëàþò ïîñåâû.  ìàòåðèàëå èç ñâèíåé íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå êîëîíèè ñèáèðåÿçâåííûåõ áàöèëë ìîãóò áûòü àòèïè÷íûìè, îñëàáëåííîé âèðóëåíòíîñòè èëè íåâèðóëåíòíûìè, íî îáëàäàþùèìè âñåìè äðóãèìè õàðàêòåðíûìè ïðèçíàêàìè ñèáèðåÿçâåííûõ âîçáóäèòåëåé. 4.2.1.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ Îñíîâàíèåì äëÿ ïîñòàíîâêè äèàãíîçà íà ñèáèðñêóþ ÿçâó ÿâëÿþòñÿ: íàëè÷èå â ìàçêàõ èç ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà êàïñóëîîáðàçóþùèõ ïàëî÷åê, à èç êîëîíèé ãðàìïîëîæèòåëüíûõ íåïîäâèæíûõ áàöèëë; õàðàêòåðíûé ðîñò íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ; ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ ïðåöèïèòàöèè è ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû. 4.2.2  û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é ð î æ è ñ â è í å é, ë è ñ ò å ð è î ç à è ï à ñ ò åðåëëåçà 4.2.2.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, ëèñòåðèîçà è ïàñòåðåëëåçà çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ñïåöèôè÷åñêîãî ðîñòà ýòèõ ìèêðîîðãàíèçìîâ íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå è èõ äèôôåðåíöèàöèè ïî ìîðôîëîãè÷åñêèì, êóëüòóðíûì è áèîëîãè÷åñêèì ñâîéñòâàì. 4.2.2.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ Íàëè÷èå ðîñòà íà ÷àøêàõ ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ìåëêèõ ïðîçðà÷íûõ êîëîíèé òðåáóåò ïðîâåäåíèÿ èññëåäîâàíèé íà ïðèñóòñòâèå áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, ëèñòåðèîçà è ïàñòåðåëëåçà. Èç ïîäîçðèòåëüíûõ êîëîíèé ïðèãîòîâëÿþò ìàçêè ñ îêðàñêîé ïî Ãðàìó, èññëåäóþò íà ïîäâèæíîñòü è ïðîèçâîäÿò ïîñåâ íà ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð è ìÿñî-ïåïòîííûé áóëüîí. Äèôôåðåíöèàëüíûé äèàãíîç ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà ïðîâîäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ ïîêàçàòåëÿìè, óêàçàííûìè â òàáë. 1. Òàáëèöà 1 Íàèìåíîâàíèå ïîêàçàòåëÿ Ìàçêè-îòïå÷àòêè Õàðàêòåðèñòèêà áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé Íåñïîðîîáðàçóþùèå, òîíêèå, ïðÿìûå èëè ñëåãêà èçîãíóòûå ïàëî÷êè, èíîãäà íèòè Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå Ìåëêèå ðîñèí÷àòûå, ïðîçðà÷íûå êîëîíèè Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå Ëåãêîå ïîìóòíåíèå, ïîäíèìàþùèéñÿ ïðè âñòðÿõèâàíèè îñàäîê Ìàçêè èç êóëüòóðû 4-31106 Êîðîòêèå, ïðÿìûå èëè ñëåãêà èçîãíóòûå ïàëî÷êè; ïðè õðîíè÷åñêîì òå÷åíèè èíôåêöèè êàê êîðîòêèå òîíêèå ïàëî÷êè, òàê è óäëèíåííûå öåïî÷êè è íèòè 81 ëèñòåðèîçà Íåñïîðîîáðàçóþùèå, êîðîòêèå ïàëî÷êè ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè. Ðàñïîëàãàþòñÿ ïîîäèíî÷êå, ïîïàðíî, â ôîðìå ðèìñêîé öèôðû V èëè â âèäå ïàëèñàäà Ìåëêèå ðîñèí÷àòûå, ïðîçðà÷íûå êîëîíèè. ×åðåç 23 ñóòîê íàáëþäàåòñÿ ïîìóòíåíèå êîëîíèé Íåáîëüøîå ïîìóòíåíèå ñ îáðàçîâàíèåì ñëèçèñòîãî îñàäêà, ïîäíèìàþùåãîñÿ ïðè âñòðÿõèâàíèè â âèäå êîñè÷êè Êîðîòêèå, ïðÿìûå, îâîèäíûå ïàëî÷êè, èíîãäà ïî÷òè êîêêè, ðàñïîëàãàþòñÿ ïîîäèíî÷êå èëè êó÷êàìè Ñ. 14 ÃÎÑÒ 2123775 Ïðîäîëæåíèå Õàðàêòåðèñòèêà áàêòåðèé Íàèìåíîâàíèå ïîêàçàòåëÿ ðîæè ñâèíåé Îêðàñêà ïî Ãðàìó Ïîëîæèòåëüíàÿ Ïîäâèæíîñòü Íåïîäâèæåí Ïðîáà íà êàòàëàçó Îòðèöàòåëüíàÿ ëèñòåðèîçà Ïîëîæèòåëüíàÿ Ïîäâèæåí â ìîëîäîé 620 ÷ êóëüòóðå, âûðàùåííîé ïðè òåìïåðàòóðå 2022 °Ñ Ïîëîæèòåëüíàÿ Äëÿ ïðîâåäåíèÿ ïðîáû íà êàòàëàçó ê ñóòî÷íîé êóëüòóðå äîáàâëÿþò 1 ñì3 10 %-íîãî ðàñòâîðà ïåðåêèñè âîäîðîäà. Áàêòåðèè ëèñòåðèîçà, âûäåëÿÿ êàòàëàçó, ðàçëàãàþò ïåðåêèñü âîäîðîäà ñ îáðàçîâàíèåì ïóçûðüêîâ ãàçà. Ïðè íåîáõîäèìîñòè äîïîëíèòåëüíîé äèôôåðåíöèàöèè áàêòåðèé ëèñòåðèîçà îò áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé ïðèìåíÿþò ïîñåâû: íà æåëàòèí, íà óãëåâîäíóþ ñðåäó ñ ñàëèöèíîì, íà ìÿñî-ïåïòîííûé ïå÷åíî÷íûé àãàð ñ 0,01 % òåëëóðèòà êàëèÿ, íà ìÿñî-ïåïòîííûé àãàð ñ êðîâüþ, à òàêæå ñòàâÿò êîíúþíêòèâàëüíóþ ïðîáó íà ìîðñêèõ ñâèíêàõ. Áàêòåðèè ëèñòåðèîçà, â îòëè÷èå îò áàêòåðèé ðîæè ñâèíåé, íà æåëàòèíå äàþò ìåäëåííûé ðîñò â âèäå óçëîâàòîé íèòè ñ íåðîâíûìè êðàÿìè è ïóøèñòûìè îòðîñòêàìè, æåëàòèí íå ðàçæèæàþò, ôåðìåíòèðóþò ñàëèöèí, âûçûâàþò β-ãåìîëèç íà àãàðå ñ êðîâüþ, ðàñòóò íà ìÿñî-ïåïòîííîì ïå÷åíî÷íîì àãàðå ñ 0,5 % ãëþêîçû, 3 % ãëèöåðèíà è 0,01 % òåëëóðèòà êàëèÿ â âèäå ìåëêèõ ÷åðíûõ êîëîíèé è âûçûâàþò êåðàòîêîíúþíêòèâèò ó ìîðñêèõ ñâèíîê. Áàêòåðèè ïàñòåðåëëåçîâ, âûäåëåííûå èç òóø è èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ, ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé åäèíûé ðîä áàêòåðèé ñ îäèíàêîâûìè ìîðôîëîãè÷åñêèìè êóëüòóðàëüíûìè è ôåðìåíòàòèâíûìè ñâîéñòâàìè, íî ðàçëè÷àþùèõñÿ ïî âèðóëåíòíûì ñâîéñòâàì. Äèôôåðåíöèàëüíûé äèàãíîç ïàñòåðåëëåçà ïðîâîäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ ïîêàçàòåëÿìè, óêàçàííûìè â òàáë. 2. Òàáëèöà 2 Íàèìåíîâàíèå ïîêàçàòåëÿ Õàðàêòåðèñòèêà áàêòåðèé ïàñòåðåëëåçà Ìàçêè-îòïå÷àòêè èç ìàòåðèàëà Íåñïîðîîáðàçóþùèå, ìåëêèå, áèïîëÿðíî îêðàøèâàþùèåñÿ ïàëî÷êè Îòðèöàòåëüíàÿ Îêðàñêà ïî Ãðàìó Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì àãàðå Ìåëêèå, ðîñèí÷àòûå, ñëåãêà îïàëåñöèðóþùèå ïðîçðà÷íûå êîëîíèè, êîòîðûå ïðèíèìàþò ÷åðåç 23 ñóòîê ñåðîâàòî-áåëûé öâåò Ðîñò íà ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå Ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ñ îñàäêîì Ìàçêè èç êóëüòóð Áèïîëÿðíîñòü ïî÷òè âñåãäà îòñóòñòâóåò Ïîäâèæíîñòü Íåïîäâèæíû 4.2.2.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ Î íàëè÷èè áàêòåðèé ñóäÿò â ñîîòâåòñòâèè ñ õàðàêòåðèñòèêàìè òàáë. 1 è 2. 4.2.3.  û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é ê î ê ê î â î é ã ð ó ï ï û 4.2.3.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé êîêêîâîé ãðóïïû (ñòàôèëîêîêêîâ, ñòðåïòîêîêêîâ) çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ìîðôîëîãèè, îïðåäåëåíèè õàðàêòåðà ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è ñïîñîáíîñòè îòäåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ êîàãóëèðîâàòü öèòðàòíóþ ïëàçìó êðîâè êðîëèêà ïîä âîçäåéñòâèåì ôåðìåíòà êîàãóëàçû. 4.2.3.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèé Íàëè÷èå íà ÷àøêàõ ñ ìÿñî-ïåïòîííûì àãàðîì ìåëêèõ ïðîçðà÷íûõ èëè ìóòíîâàòûõ êîëîíèé, èíîãäà îáðàçóþùèõ ðàçëè÷íûå ïèãìåíòû, âûçûâàåò ïîäîçðåíèå íà ïðèñóòñòâèå âîçáóäèòåëåé êîêêîâûõ èíôåêöèé (äèïëîêîêêîçà, ñòàôèëîêîêêîçà, ñòðåïòîêîêêîçà). Äèôôåðåíöèàëüíûé äèàãíîç ñòàâÿò íà îñíîâàíèè ìèêðîñêîïè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ (ãðàìïîëîæèòåëüíûå, íåïîäâèæíûå, íåñïîðîîáðàçóþùèå, êðóãëûå êëåòêè, ðàñïîëàãàþùèåñÿ îäèíî÷íî, öå82 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 15 ïî÷êàìè, ãðîçäÿìè è â âèäå ëàíöåòîâèäíûõ äèïëîêîêêîâ), à òàêæå îïðåäåëåíèÿ õàðàêòåðà ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ. Íà ìÿñî-ïåïòîííîì áóëüîíå ñòàôèëîêîêêè è äèïëîêîêêè äàþò ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ñ âûïàäåíèåì îáèëüíîãî îñàäêà. Ïðè ðîñòå ñòðåïòîêîêêîâ íà áóëüîíå ñ 2 % ãëþêîçû áóëüîí îñòàåòñÿ ïðîçðà÷íûì, à íà äíî ïðîáèðêè âûïàäàåò îñàäîê. Ïàòîãåííîñòü ñòàôèëîêîêêîâ îïðåäåëÿþò ðåàêöèåé êîàãóëèðîâàíèÿ ïëàçìû êðîâè. Ïëàçìó êðîâè êðîëèêà, ïðèãîòîâëåííóþ ïî ï. 3.1.16, ðàçëèâàþò ïî 0,5 ñì3 â äâå ñòåðèëüíûå ïðîáèðêè, â îäíó ïðîáèðêó âíîñÿò ïåòëåé ñóòî÷íóþ àãàðîâóþ êóëüòóðó èñïûòóåìîãî ñòàôèëîêîêêà, äðóãàÿ ïðîáèðêà ÿâëÿåòñÿ êîíòðîëüíîé. Âíåñåííóþ êóëüòóðó òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò, ïîñëå ÷åãî îáå ïðîáèðêè ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Ïðîáèðêè îñòîðîæíî, èçáåãàÿ âñòðÿõèâàíèÿ, ïðîñìàòðèâàþò. Ðåçóëüòàòû ðåàêöèè êîàãóëÿöèè ó÷èòûâàþò â òå÷åíèå 24 ÷ è ÷åðåç 24 ÷. Øòàììû ñòàôèëîêîêêà, ïðîäóöèðóþùèå ôåðìåíò ïëàçìîêîàãóëàçó, âûçûâàþò ñâåðòûâàíèå ïëàçìû, âñëåäñòâèå ÷åãî îíà ïðåâðàùàåòñÿ â ñòóäíåîáðàçíóþ ìàññó, íå âûëèâàþùóþñÿ ïðè ïåðåâåðòûâàíèè ïðîáèðêè. Ñâåðòûâàíèå ïëàçìû îáîçíà÷àåòñÿ çíàêîì «+» ñ óêàçàíèåì âðåìåíè, â òå÷åíèå êîòîðîãî ïðîèçîøëà ðåàêöèÿ. 4.2.3.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ Ïðè ïîëó÷åíèè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè ïëàçìîêîàãóëÿöèè ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî â ìÿñå îáíàðóæåí ïàòîãåííûé ñòàôèëîêîêê. 4.2.4.  û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é ð î ä à ñ à ë ü ì î í å ë ë 4.2.4.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ ñàëüìîíåëë çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè èõ õàðàêòåðíîãî ðîñòà íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ è óñòàíîâëåíèè ôåðìåíòàòèâíûõ è ñåðîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ ñàëüìîíåëë. 4.2.4.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ Âûÿâëåíèå ñàëüìîíåëë ïðîâîäèòñÿ â ÷åòûðå ïîñëåäîâàòåëüíûõ ýòàïà: ïåðâè÷íûé (ïðÿìîé) ïîñåâ, îáîãàùåíèå, ïîñåâ ñî ñðåäû îáîãàùåíèÿ è ïîäòâåðæäåíèå. Ïåðâè÷íûé ïîñåâ ïðîèçâîäèòñÿ ïóòåì ïîñåâà âçâåñè èññëåäóåìîãî ìàòåðèàëà íà ïëîòíûå ýëåêòèâíûå ñðåäû. Ýòè ñðåäû âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ è èññëåäóþò íà ïðèñóòñòâèå êîëîíèé, êîòîðûå ÿâëÿþòñÿ òèïè÷íûìè èëè ïîäîçðèòåëüíûìè íà ñàëüìîíåëëû. Íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñàëüìîíåëëû ðàñòóò, îáðàçóÿ õàðàêòåðíûå êîëîíèè: - íà ôóêñèí-ñóëüôèòíîì àãàðå (àãàðå Ýíäî) ñàëüìîíåëëû ðàñòóò â âèäå êðóãëûõ, áåñöâåòíûõ èëè ñëåãêà ðîçîâàòûõ ïðîçðà÷íûõ, èëè ïîëóïðîçðà÷íûõ êîëîíèé; - íà ýîçèí-ìåòèëåíîâîì ñèíåì àãàðå (àãàðå Ëåâèíà) ñàëüìîíåëëû ðàñòóò â âèäå ïðîçðà÷íûõ, áëåäíûõ, íåæíî-ðîçîâûõ èëè ðîçîâàòî-ôèîëåòîâûõ êîëîíèé. Îáîãàùåíèå ïðîâîäÿò ïóòåì ïîñåâà íà æèäêèå ñåëåêòèâíûå ñðåäû. Ýòè ñðåäû âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Íà ñåëåíèòîâîì Ô-áóëüîíå ëó÷øåé òåìïåðàòóðîé äëÿ íàêîïëåíèÿ ñàëüìîíåëë ÿâëÿåòñÿ 43 °Ñ. Ïåðåñåâ ïðîèçâîäÿò ïîñëå îáîãàùåíèÿ èç æèäêèõ ñðåä íà ïëîòíûå ñåëåêòèâíûå äèàãíîñòè÷åñêèå ñðåäû, êîòîðûå ïîñëå òåðìîñòàòèðîâàíèÿ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ èññëåäóþò íà ïðèñóòñòâèå êîëîíèé òèïè÷íûõ èëè ïîäîçðèòåëüíûõ íà ñàëüìîíåëëû. Íà ñåëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñàëüìîíåëëû ðàñòóò, îáðàçóÿ õàðàêòåðíûå êîëîíèè: - íà áàêòîàãàðå Ïëîñêèðåâà ñàëüìîíåëëû ðàñòóò â âèäå áåñöâåòíûõ êîëîíèé, íî êîëîíèè áîëåå ïëîòíûå è íåñêîëüêî ìåíüøåãî ðàçìåðà, ÷åì íà ñðåäå Ýíäî; - íà âèñìóò-ñóëüôèòíîì àãàðå ñàëüìîíåëëû, êàê ïðàâèëî, ðàñòóò â âèäå ÷åðíûõ èëè êîðè÷íåâûõ êîëîíèé ñ õàðàêòåðíûì ìåòàëëè÷åñêèì áëåñêîì. Ïðè ýòîì íàáëþäàåòñÿ ïðîêðàøèâàíèå â ÷åðíûé öâåò ó÷àñòêà ñðåäû ïîä êîëîíèåé. Èñêëþ÷åíèå ñîñòàâëÿþò íåêîòîðûå ñåðîëîãè÷åñêèå òèïû èç ãðóïïû Ñ, êîòîðûå íà ýòîé ñðåäå ðàñòóò â âèäå íåæíûõ ñâåòëî-çåëåíûõ èëè êðóïíûõ ñåðîâàòî-çåëåíûõ êîëîíèé. Ïîäòâåðæäåíèå íàëè÷èÿ áàêòåðèé èç ðîäà ñàëüìîíåëë ïðîâîäÿò ïóòåì îïðåäåëåíèÿ ñîîòâåòñòâóþùèõ áèîõèìè÷åñêèõ è ñåðîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ êîëîíèé.  ñëó÷àå îòñóòñòâèÿ ðîñòà áàêòåðèé ñàëüìîíåëë ïðè ïåðâè÷íîì (ïðÿìîì) ïîñåâå íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ, ÷åðåç 1224 ÷ ïðîâîäÿò âûñåâ íà ñåëåêòèâíûå ñðåäû ñî ñðåä îáîãàùåíèÿ: èç ñðåä Ìþëëåðà, Êàóôìàíà è Êèëëèàíà ÷åðåç 1216 ÷, èç ñåëåíèòîâîãî Ô-áóëüîíà è õëîðèñòî-ìàãíèåâîé ñðåäû «Ì» ÷åðåç 1824 ÷. Ñîäåðæèìîå ôëàêîíîâ ïåðåä ïåðåñåâîì òùàòåëüíî ïåðåìåøèâàþò è âûñåâàþò øòðèõîì ïåòëåé äèàìåòðîì 2,53 ìì íà ÷àøêó ñ âèñìóò-ñóëüôèòíûì àãàðîì, áàêòîàãàðîì Ïëîñêèðåâà èëè àãàðîì Ýíäî. Ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 1824 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ, à ïîñåâû íà âèñìóò-ñóëüôèòíîì àãàðå íà 48 ÷. Ïðè îáíàðóæåíèè íà ÷àøêàõ ðîñòà ïîäîçðèòåëüíûõ êîëîíèé èññëåäóþò òðèïÿòü êîëîíèé ñ êàæäîé ÷àøêè. 4-3* 83 Ñ. 16 ÃÎÑÒ 2123775 Ïîäîçðèòåëüíûå êîëîíèè áàêòåðèé ñàëüìîíåëë èññëåäóþò â ñëåäóþùåì ïîðÿäêå: èç ÷àñòè êîëîíèé ïðèãîòîâëÿþò ìàçîê è îêðàøèâàþò ïî Ãðàìó, çàòåì ïðîâîäÿò èññëåäîâàíèå íà ïîäâèæíîñòü. Áàêòåðèè ñàëüìîíåëëû, êàê è âñå áàêòåðèè ñåìåéñòâà êèøå÷íûõ, ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ïàëî÷êè ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè, íåñïîðîîáðàçóþùèå, â áîëüøèíñòâå ïîäâèæíûå (S. pullorum è S. gallinarum íåïîäâèæíûå), îêðàøèâàþùèåñÿ ïî Ãðàìó îòðèöàòåëüíî. Îñòàâøóþñÿ ÷àñòü êîëîíèè ðàñòèðàþò â êîíäåíñàöèîííîé âîäå ñêîøåííîãî àãàðà èëè â îäíîéäâóõ êàïëÿõ äîáàâëåííîãî ê àãàðó ñòåðèëüíîãî áóëüîíà. Ïîëó÷åííàÿ âçâåñü ñëóæèò èñõîäíûì ìàòåðèàëîì äëÿ äàëüíåéøåãî èññëåäîâàíèÿ. ×àñòü âçâåñè èñïûòûâàþò â ðåàêöèè àããëþòèíàöèè íà ïðåäìåòíîì ñòåêëå. Ðåàêöèþ ñòàâÿò ñ ïîëèâàëåíòíîé àäñîðáèðîâàííîé àããëþòèðóþùåé Î-ñûâîðîòêîé ãðóïï À, Â, Ñ, D è Å.  êà÷åñòâå êîíòðîëÿ ïðèìåíÿþò êàïëþ ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Äëÿ ïðîâåäåíèÿ ðåàêöèè àããëþòèíàöèè íà ïðåäìåòíîå ñòåêëî íàíîñÿò êàïëþ ïîëèâàëåíòíîé àäñîðáèðîâàííîé ñûâîðîòêè è ðÿäîì êàïëþ ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Çàòåì áàêòåðèîëîãè÷åñêîé ïåòëåé çàõâàòûâàþò ÷àñòü âçâåñè è ðàñòèðàþò åå â êàïëå ñûâîðîòêè, íà÷èíàÿ ñ êðàÿ êàïëè, ïîñòåïåííî çàõâàòûâàÿ âñþ êàïëþ. Ïåòëþ îáæèãàþò, çàõâàòûâàþò ïåòëåé åùå âçâåñè è âíîñÿò â êàïëþ ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà (êîíòðîëüíîãî), òàêæå ðàñòèðàÿ äî ïîëó÷åíèÿ ðàâíîìåðíîé âçâåñè. Ïðè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè ÷åðåç 12 ìèí â êàïëå ñûâîðîòêè îáðàçóþòñÿ õëîïüÿ èëè êîìî÷êè, à ñàìà æèäêîñòü ïðîñâåòëÿåòñÿ, ÷òî îñîáåííî çàìåòíî ïðè ïîêà÷èâàíèè ñòåêëà.  ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå (êîíòðîëüíîì) íàáëþäàåòñÿ ðàâíîìåðíàÿ ìóòü. Ïðè ïîëó÷åíèè ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ñ àäñîðáèðîâàííîé ïîëèâàëåíòíîé ñûâîðîòêîé ïðîâîäÿò ðåàêöèþ àããëþòèíàöèè íà ñòåêëå ñ àäñîðáèðîâàííûìè ìîíîðåöåïòîðíûìè Î-ñûâîðîòêàìè. Ñëåäóåò íà÷èíàòü ñ áîëåå ðàñïðîñòðàíåííûõ ãðóïï Â, Ñ, D è Å, â ÷àñòíîñòè, â ãðóïïå  ñ IV, â ãðóïïå D c IX, â ãðóïïå Ñ ñ VII, â ãðóïïå Å ñ III, X. Ïðè îòðèöàòåëüíîé ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ñ îäíîé êîëîíèåé äîïîëíèòåëüíî èññëåäóþò åùå íå ìåíåå òðåõ-÷åòûðåõ êîëîíèé. Ïðè õàðàêòåðíîì ðîñòå íà äèôôåðåíöèàëüíîé ñðåäå, èçáèðàòåëüíîé ïîëîæèòåëüíîé ðåàêöèè àããëþòèíàöèè ñ ìîíîðåöåïòîðíîé Î-ñûâîðîòêîé è ïðè íàëè÷èè ïîäâèæíûõ ãðàìîòðèöàòåëüíûõ ïàëî÷åê äàåòñÿ ïðåäâàðèòåëüíîå çàêëþ÷åíèå î òîì, ÷òî âûäåëåííàÿ êóëüòóðà îòíîñèòñÿ ê ñàëüìîíåëëàì. Îäíîâðåìåííî ñ ðåàêöèåé àããëþòèíàöèè ìàòåðèàë çàñåâàþò íà òðåõñàõàðíûé àãàð ÊðóìâèäåÎëüêåíèöêîãî â ìîäèôèêàöèè Êîâàëü÷óêà, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.13. Ïîñåâ íà òðåõñàõàðíûé àãàð äåëàþò ñíà÷àëà øòðèõîì ïî ñêîøåííîé ïîâåðõíîñòè, à çàòåì óêîëîì â ãëóáèíó ñòîëáèêà. Ñðåäó èíêóáèðóþò â òåðìîñòàòå â òå÷åíèå 1618 ÷. Ïðè íàëè÷èè ñàëüìîíåëë ÿíòàðíûé öâåò ñðåäû Êðóìâèäå-Îëüêåíèöêîãî â ìîäèôèêàöèè Êîâàëü÷óêà èçìåíÿåòñÿ ñëåäóþùèì îáðàçîì: ñòîëáèê æåëòî-áóðûé, ñêîøåííàÿ ïîâåðõíîñòü öâåò íå èçìåíÿåò. Ïî íàëè÷èþ òðåùèí è ðàçðûâó ñòîëáèêà àãàðà óñòàíàâëèâàþò îáðàçîâàíèå ãàçà, ïî èçìåíåíèþ îêðàñêè ñòîëáèêà (ïî÷åðíåíèå) íàëè÷èå ñåðîâîäîðîäà. Ñàëüìîíåëëû, íå îáðàçóþùèå ñåðîâîäîðîäà, èçìåíÿþò öâåò ñòîëáèêà àãàðà â æåëòûé öâåò. Áàêòåðèè, íå îòíîñÿùèåñÿ ê ñàëüìîíåëëàì, ðàñùåïëÿþùèå ìî÷åâèíó, îêðàøèâàþò ñòîëáèê è ñêîøåííóþ ïîâåðõíîñòü â ÿðêî-êðàñíûé öâåò, à áàêòåðèè, ñáðàæèâàþùèå ëàêòîçó è ñàõàðîçó, èçìåíÿþò öâåò ñðåäû â ñèíèé. Åñëè êóëüòóðû ôåðìåíòèðóþò ëàêòîçó è ãëþêîçó ñ îáðàçîâàíèåì ãàçà è ðàñùåïëÿþò ìî÷åâèíó, îíè íå ïðèíàäëåæàò ê áàêòåðèÿì ðîäà ñàëüìîíåëë. Êóëüòóðû, íå ôåðìåíòèðóþùèå ëàêòîçó è ñàõàðîçó è íå ðàñùåïëÿþùèå ìî÷åâèíó, íî ôåðìåíòèðóþùèå ãëþêîçó (ñ îáðàçîâàíèåì ãàçà) ïîäâåðãàþò äàëüíåéøåìó èññëåäîâàíèþ, äëÿ ÷åãî êóëüòóðó ñî ñðåäû Êðóìâèäå-Îëüêåíèöêîãî â ìîäèôèêàöèè Êîâàëü÷óêà èññëåäóþò ñ ìîíîðåöåïòîðíîé Î-ñûâîðîòêîé (ìàòåðèàë áåðóò ñ âåðõíåé ÷àñòè ñêîøåííîé ïîâåðõíîñòè). Çàòåì ýòó êóëüòóðó àããëþòèíèðóþò ñ ìîíîðåöåïòîðíûìè Í-ñûâîðîòêàìè, ñíà÷àëà ñ ïåðâîé ôàçîé, çàòåì ñî âòîðîé ôàçîé Í-àíòèãåíà, âõîäÿùåãî â äàííóþ ãðóïïó (äëÿ àããëþòèíàöèè ñ Í-ñûâîðîòêàìè êóëüòóðó áåðóò áëèæå ê êîíäåíñàöèîííîé æèäêîñòè â ïðîáèðêå, ãäå îñîáè áîëåå ïîäâèæíû) è óñòàíàâëèâàþò ñåðîëîãè÷åñêèé òèï ñàëüìîíåëë. Åñëè êóëüòóðû äàþò îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû àããëþòèíàöèè ñ ìîíîðåöåïòîðíûìè Î-ñûâîðîòêàìè, íî ïðè õàðàêòåðíîì ðîñòå íà ýëåêòèâíîé ñðåäå è ñîîòâåòñòâóþùèõ ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïðèçíàêàõ (ãðàìîòðèöàòåëüíûå ïîäâèæíûå ïàëî÷êè) äåëàþò ïîñåâ íà ñðåäû ñ óãëåâîäàìè: â êîðîòêèé ïåñòðûé ðÿä (âêëþ÷àÿ ñðåäû ñ ãëþêîçîé, ëàêòîçîé, ñàõàðîçîé, ìàííèòîì).  áóëüîí Õîòòèíãåðà äëÿ îïðåäåëåíèÿ îáðàçîâàíèÿ èíäîëà è ñåðîâîäîðîäà ïîä ïðîáêó â ïðîáèðêó ñ áóëüîíîì ïîìåùàþò èíäèêàòîðíûå áóìàæêè, ïðèãîòîâëåííûå ïî ïï. 3.1.25 è 3.1.26. Ïîñåâû âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 1820 ÷, ïîñëå ÷åãî èõ ïðîñìàòðèâàþò ïîä ìèêðîñêîïîì. 84 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 17 Ê áàêòåðèÿì èç ðîäà ñàëüìîíåëë îòíîñÿòñÿ áàêòåðèè, íå ôåðìåíòèðóþùèå ëàêòîçó è ñàõàðîçó è ôåðìåíòèðóþùèå ãëþêîçó è ìàííèò (S. typhi suis íå ôåðìåíòèðóåò ìàííèò), îáðàçóþùèå ñåðîâîäîðîä (S. cholerae suis è S. typhi suis ñåðîâîäîðîä íå îáðàçóþò) è íå îáðàçóþùèå èíäîë. Ïðè íåîáõîäèìîñòè ïîëíîé òèïèçàöèè ñàëüìîíåëë ïðîâîäÿò ïîñåâ íà ðàñøèðåííûé ïåñòðûé ðÿä äëÿ îïðåäåëåíèÿ áèîõèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ è èññëåäóþò èõ àíòèãåííûå ñâîéñòâà (òàáë. 3). Òàáëèöà 3 Àíòèãåíû Áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + (+) + + + + + + 85 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Ó + + + + + + + + ½ ½ + + + + + + + + + + Ó + + + + + + + + + + + + + + + Ó + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Ó + Ó + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +½ + + + + + + + + Ãðóïïà Ìî÷åâèíà 1, 5 1, 5 1, 2 enz# 1, 5 1, 5 1, 2 1, 2 1, 5 1, 7 1, 5 1, 5 enx Èíäîë d gms mt k lv lv y c z 29 d eh r lv k d gm gp gp.u gq lv lw + Ó + + Ó + + + + + + + + Ó + + + + + Ó Ó Ó Ó + + + + + + + + + + Ó + + + + Ñåðîâîäîðîä 6, 7 6, 7 6, 7 6, 7 6, 7 6, 7 6, 7 6, 7 6, 7 6, 8 6, 8 6, 8 6, 8 6, 8 9, 12VE 1, 9, 12 1, 9, 12 1, 9, 12 9, 12 1, 9, 12 1, 9, 12 1, 9, 12 1, 9, 12 + + + Ó Ó + + + + + Ó + + + Ó + + + Ó Ó + + + + + + Ó Ó + + + + + + + + + + + + Ó + + Ó ½ + + + ½ + ½ Ðàìíîçà ïî Áèòòåðó + + + + + + + + + + + + + + + + Êñèëîçà Ìàííèò Òðåãàëîçà Ñàõàðîçà Ãëèöåðèí ïî Øòåðíó Ëàêòîçà + + + + + + + + + + + + + + + + Ðàìíîçà ãàç + + + + + + + + + + + + + + + + Èíîçèò êèñëîòà 1, 2 1, 2 1, 2 enx 1, 5 1, 2 enz# 1, 2 enx enx 1, 6 1, 5 1, 5 1, 5 Äóëüöèò 2-ÿ ôàçà (íåñïåöèôè÷íàÿ) a b d eh eh h fg i lv r b c c c Àðàáèíîçà 1-ÿ ôàçà (ñïåöèôè÷íàÿ) 1, 2, 12 1, 4, 5, 12 1, 4, 5, 12 1, 4, 5, 12 4, 5, 12 4, 5, 12 1, 4, 5, 12 1, 4, 5, 12 1, 4, 12 1, 4, 5, 12 4, 12 1, 4, 12, 27 4, 12 6, 7 6, 7 6, 7 Òèï ñàëüìîíåëë A S. paratyphi A B S. paratyphi B S. stanley S. saint-paul S. chester S. reading S. derby S. typhi murium S. brandenburg S. heidelberg S. abortus equi S. abortus bovis S. abortus ovis C S. paratyphi C S. cholerae suis S. cholerae suis kunzendorf S. mission S. montevideo S. oraniengburd S. thompson S. concord S. potsdam S. bareilly S. typhi suis S. tennessee S. muenchen S. newport S. bovis morbificans S. manchester S. blockley D S. typhi S. enteritidis S. dublin S. rostock S. moscow S. panama S. daressalaam S. gallinarum S. pullorum Ãëþêîçà Î-àíòèãåí Í-àíòèãåí (+) + Ó Ó + + +() + + + + + + + + + + + + + + + ½ + + + Ó + Ó + + + + () + + Ó Ó + Ó + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Ó + Ó + Ñ. 18 ÃÎÑÒ 2123775 Ïðîäîëæåíèå Àíòèãåíû Áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà Äóëüöèò Èíîçèò Ðàìíîçà Ãëèöåðèí ïî Øòåðíó Òðåãàëîçà Êñèëîçà Ðàìíîçà ïî Áèòòåðó Ñåðîâîäîðîä Èíäîë Ìî÷åâèíà + + + + + + + + + + Àðàáèíîçà ãàç 1, 6 1, 6 lw 1, 2 1, 5 êèñëîòà eh lv eh r(i) z.10 Ìàííèò 10 10 10 10 10 Ñàõàðîçà 3, 3, 3, 3, 3, Ãëþêîçà Ëàêòîçà Å S. anatum S. london S. meleagridis S. seegefeld S. lecxington 2-ÿ ôàçà (íåñïåöèôè÷íàÿ) Ãðóïïà Î-àíòèãåí Òèï ñàëüìîíåëë 1-ÿ ôàçà (ñïåöèôè÷íàÿ) Í-àíòèãåí + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Ó Ó Ó + + + + + Ó ñ ë î â í û å î á î ç í à ÷ å í è ÿ: «» îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò; «+» îòðèöàòåëüíûé, èíîãäà ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò; «+» ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò; «+» ïîëîæèòåëüíûé, ðåäêèå òèïû îòðèöàòåëüíûå; «Ó» ðàçëè÷íûå áèîõèìè÷åñêèå òèïû; «½» ïîçäíèé èëè íåïîñòîÿííûé ïîëîæèòåëüíûé, èëè îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò.  ñëó÷àå âûÿâëåíèÿ êóëüòóð ñàëüìîíåëë ñ îòêëîíåíèåì îò òèïè÷íûõ ñâîéñòâ, äëÿ èõ îêîí÷àòåëüíîé èäåíòèôèêàöèè ïðè íåîáõîäèìîñòè ïðîâîäÿò äîïîëíèòåëüíûå èññëåäîâàíèÿ. Åñëè êóëüòóðà îáëàäàåò ôåðìåíòàòèâíûìè ñâîéñòâàìè, òèïè÷íûìè äëÿ ñàëüìîíåëë, íî íå àããëþòèíèðóåòñÿ ñàëüìîíåëëåçíûìè Î- è Í-ñûâîðîòêàìè, ñëåäóåò èñïûòàòü åå ñïîñîáíîñòü ëèçèðîâàòüñÿ ñàëüìîíåëëåçíûì Î-ôàãîì. Ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò ðåàêöèè ÿâëÿåòñÿ äîïîëíèòåëüíûì ïðèçíàêîì, óêàçûâàþùèì íà ïðèíàäëåæíîñòü êóëüòóðû ê ðîäó ñàëüìîíåëë. Äëÿ èñïûòàíèÿ êóëüòóð íà ÷óâñòâèòåëüíîñòü ê Î-áàêòåðèîôàãó íà ïëàñòèíêå õîðîøî ïîäñóøåííîãî ùåëî÷íîãî àãàðà (ðÍ 7,27,4) ñòåðèëüíîé ïðîáèðêîé ñ ðîâíûìè êðàÿìè äåëàþò 56 íàñå÷åê. Íà êàæäóþ íàñå÷êó íàíîñÿò ïî äâå êàïëè 4- èëè 18-÷àñîâîé áóëüîííîé êóëüòóðû èñïûòóåìîãî øòàììà ñ ïîìîùüþ òîíêîé îòòÿíóòîé ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêè èëè ïåòëè. Âçàìåí áóëüîííîé êóëüòóðû ìîæíî èñïîëüçîâàòü âçâåñü ñóòî÷íîé àãàðîâîé êóëüòóðû íà ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå. Ïîñëå ïîäñûõàíèÿ êóëüòóðû íà íàíåñåííûå êàïëè ïåòëåé èëè ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé ìåíüøåãî äèàìåòðà íàíîñÿò êàïëþ Î-áàêòåðèîôàãà, íà äðóãóþ â êà÷åñòâå êîíòðîëÿ íàíîñÿò êàïëþ áóëüîíà. Ôàã íàíîñÿò â ðàçâåäåíèè 10-êðàòíîì è 100-êðàòíîì (â çàâèñèìîñòè îò óêàçàííîãî íà ýòèêåòêå). Íà îäíîé ÷àøêå ìîæíî èñïûòûâàòü îäíîâðåìåííî 56 êóëüòóð. ×àøêè ñ íàíåñåííûìè êóëüòóðàìè è Î-áàêòåðèîôàãîì ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà 1820 ÷, ïîñëå ÷åãî ó÷èòûâàþò ðåçóëüòàòû. Ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò ðåàêöèè îïðåäåëÿåòñÿ ïî ïîÿâëåíèþ íà ìåñòå íàíåñåíèÿ ôàãà ÷åòêî î÷åð÷åííîé çîíû ëèçèñà (ñëèâíîãî èëè îòäåëüíûõ íåãàòèâíûõ êîëîíèé), êîòîðàÿ îò÷åòëèâî âèäíà íåâîîðóæåííûì ãëàçîì. Îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò ðåàêöèè îïðåäåëÿþò îòñóòñòâèåì ëèçèñà; â ìåñòàõ íàíåñåíèÿ ôàãà èìååò ìåñòî ðîñò êóëüòóðû, êàê â êîíòðîëüíîì ìåñòå. Î-ôàã ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàí òàêæå äëÿ ïðåäâàðèòåëüíîãî èñïûòàíèÿ êóëüòóðû. Äëÿ ýòîãî ïîäîçðèòåëüíûå êîëîíèè, âûðîñøèå íà ÷àøêàõ ñ äèôôåðåíöèàëüíîé ñðåäîé (Ýíäî, Ïëîñêèðåâà, âèñìóò-ñóëüôèòíûì àãàðîì è äð.), ñíèìàþò è ïåðåñåâàþò íà îäèí èç ñåêòîðîâ ÷àøêè Ïåòðè ñî ñëàáîùåëî÷íûì àãàðîì.  öåíòð êàæäîãî çàñåÿííîãî ñåêòîðà òîíêîé ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé èëè ïåòëåé íàíîñÿò êàïëþ Î-ôàãà, ÷àøêè ïîìåùàþò â òåðìîñòàò è íà ñëåäóþùèé äåíü ó÷èòûâàþò ðåçóëüòàòû. 4.2.4.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ Îáíàðóæåíèå ïîäâèæíûõ (êðîìå S. pullorum è S. gallinarum) ïàëî÷åê, îòðèöàòåëüíûõ ïî Ãðàìó, íå ôåðìåíòèðóþùèõ ëàêòîçó è ñàõàðîçó, ôåðìåíòèðóþùèõ ãëþêîçó è ìàííèò ñ îáðàçîâàíèåì êèñëîòû 86 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 19 è ãàçà (S. typhi suis íå ôåðìåíòèðóåò ìàííèò), äàþùèõ ïîëîæèòåëüíóþ ðåàêöèþ àããëþòèíàöèè ñ ìîíîðåöåïòîðíûìè Î- è Í-ñàëüìîíåëëåçíûìè ñûâîðîòêàìè, óêàçûâàåò íà ïðèñóòñòâèå â ìÿñå áàêòåðèé èç ðîäà ñàëüìîíåëë. 4.2.5.  û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é è ç ð î ä à ê è ø å ÷ í î é ï à ë î ÷ ê è Ý ø å ð èõèé 4.2.5.1. Ñóùíîñòü âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé èç ðîäà êèøå÷íîé ïàëî÷êè Ýøåðèõèé çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ìîðôîëîãèè, õàðàêòåðà ðîñòà íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñ ëàêòîçîé è îòñóòñòâèÿ ñïîñîáíîñòè îáðàçîâûâàòü öèòîõðîìîêñèäàçó, óòèëèçèðîâàòü öèòðàò, îáðàçîâûâàòü ñåðîâîäîðîä è ñïîñîáíîñòè ïðîäóöèðîâàòü èíäîë. 4.2.5.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ Íàëè÷èå ðîñòà íà ÷àøêàõ ñ ýëåêòèâíûìè ñðåäàìè (Ýíäî, Ëåâèíà, Ïëîñêèðåâà) îêðàøåííûõ êîëîíèé, âñëåäñòâèå ôåðìåíòàöèè èìè ëàêòîçû è èçìåíåíèÿ öâåòà èíäèêàòîðà ëàêòîçîïîëîæèòåëüíûõ âàðèàíòîâ êèøå÷íîé ïàëî÷êè (èëè íå èçìåíÿþùèõ öâåòà ñðåäû êîëîíèé ëàêòîçîîòðèöàòåëüíûõ) òðåáóåò èõ îïðåäåëåíèÿ äëÿ óñòàíîâëåíèÿ ïðèñóòñòâèÿ èõ â ìÿñå èëè ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíàõ è äèôôåðåíöèàöèè ïî áèîõèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì îò äðóãèõ ñõîäíûõ áàêòåðèé èç ñåìåéñòâà êèøå÷íûõ. Íà àãàðå Ýíäî áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ðàñòóò â âèäå êðàñíûõ ñ ìåòàëëè÷åñêèì áëåñêîì (èëè áåç áëåñêà) ðîçîâûõ ñ êðàñíûì öåíòðîì èëè áåëûõ êîëîíèé; íà ýîçèí-ìåòèëåíîâîì ñèíåì àãàðå (àãàðå Ëåâèíà) â âèäå òåìíî-ôèîëåòîâûõ áëåñòÿùèõ êîëîíèé; íà áàêòîàãàðå Ïëîñêèðåâà â âèäå êèðïè÷íî-êðàñíûõ ñ ãëÿíöåâîé ïîâåðõíîñòüþ êîëîíèé. Èç êîëîíèé, õàðàêòåðíûõ äëÿ áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè, ãîòîâÿò ìàçêè, îêðàøèâàþò ïî Ãðàìó è ìèêðîñêîïèðóþò. Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ìåëêèå ïàëî÷êè ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè ïî Ãðàìó îêðàøèâàþòñÿ îòðèöàòåëüíî. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ïîäâèæíîñòè êóëüòóðû ãîòîâÿò ïðåïàðàò «ðàçäàâëåííàÿ êàïëÿ» è ìèêðîñêîïèðóþò. Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ÷àùå ïîäâèæíû. Ïðè íàëè÷èè êîëîíèé, õàðàêòåðíûõ äëÿ áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè, èõ äèôôåðåíöèðóþò îò äðóãèõ ñõîäíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïî áèîõèìè÷åñêèì ñâîéñòâàì, óêàçàííûì â òàáë. 4. Òàáëèöà 4 Ðîä ìèêðîáà Áèîõèìè÷åñêèå äèôôåðåíöèðóþùèå ñâîéñòâà Áèîõèìè÷åñêèå âàðèàíòû Escherichia Proteus 1 2 3 4 5 6 Pr. vulgaris Pr. mirabilis Îáðàçîâàíèå ñåðîâîäîðîäà íà òðåõñàõàðíîì àãàðå ñ äâîéíîé ñåðíîêèñëîé ñîëüþ çàêèñè æåëåçà è àììîíèÿ (ñîëüþ Ìîðà) + + Îáðàçîâàíèå ãàçà íà ãëþêîçå íà òðåõñàõàðíîì àãàðå ñ äâîéíîé ñåðíîêèñëîé ñîëüþ çàêèñè æåëåçà è àììîíèÿ (ñîëüþ Ìîðà) Ôåðìåíòàöèÿ 10 %-íîé ëàêòîçû + + + + + + + + + Îáðàçîâàíèå èíäîëà + + + + + Ðàñùåïëåíèå ìî÷åâèíû + + Ðàçëè÷íî Óòèëèçàöèÿ öèòðàòà (íà ñðåäå Ñèììîíñà) Ïîäâèæíîñòü Ôåðìåíòàöèÿ ìàëüòîçû Ôåðìåíòàöèÿ ìàííèòà Ðàçëè÷íî +/ +/ +/ +/ +/ +/ + + + + + + + + + + + + + + + Ó ñ ë î â í û å î á î ç í à ÷ å í è ÿ: «+» ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò; «» îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò; «+/» ïîëîæèòåëüíûé èëè îòðèöàòåëüíûé ðåçóëüòàò. 87 Ñ. 20 ÃÎÑÒ 2123775 Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñåðîâîäîðîäà èñïûòóåìóþ êóëüòóðó çàñåâàþò íà òðåõñàõàðíûé àãàð, ïðèãîòîâëåííûé ïî ï. 3.1.13 óêîëîì ñòîëáèê, è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè íå îáðàçóþò ñåðîâîäîðîäà, è ñòîëáèê àãàðà ïî÷åðíåíèÿ íå äàåò. Äëÿ óñòàíîâëåíèÿ ñïîñîáíîñòè áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ðàñùåïëÿòü ìî÷åâèíó, èñïûòóåìóþ êóëüòóðó çàñåâàþò íà òðåõñàõàðíûé àãàð ñ ìî÷åâèíîé è âûäåðæèâàþò 24 ÷ â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè íå ðàñùåïëÿþò ìî÷åâèíó è íå èçìåíÿþò öâåò ñðåäû. Ïðè íàëè÷èè áàêòåðèé, ðàñùåïëÿþùèõ ìî÷åâèíó, ðåàêöèÿ ñðåäû ñòàíîâèòñÿ ðåçêî ùåëî÷íîé, è ñðåäà îêðàøèâàåòñÿ â ÿðêî-êðàñíûé öâåò. Ôåðìåíòàöèþ ëàêòîçû óñòàíàâëèâàþò ïîñåâîì èñïûòóåìîé êóëüòóðû êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè â ñðåäó Ãèññà, ñîäåðæàùóþ 10 % ëàêòîçû, áîëüøèíñòâî áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ôåðìåíòèðóþò 10 %-íóþ ëàêòîçó. Èíäîë îïðåäåëÿþò ïðè ïîìîùè èíäèêàòîðíîé áóìàæêè, ïðèãîòîâëåííîé ïî ï. 3.1.25, áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè ÷àùå îáðàçóþò èíäîë è îêðàøèâàþò èíäèêàòîðíóþ áóìàæêó â êðàñíûé öâåò. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñïîñîáíîñòè óòèëèçèðîâàòü öèòðàòû èñïûòóåìóþ êóëüòóðó çàñåâàþò íà ñêîøåííûé àãàð Ñèììîíñà, ïðèãîòîâëåííûé ïî ï. 3.1.19, ïîñåâû ïîìåùàþò â òåðìîñòàò íà 24 ÷ ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Áàêòåðèè êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè íå ðàñòóò íà ýòîé ñðåäå è íå ìåíÿþò åå öâåòà, áàêòåðèè, àññèìèëèðóþùèå öèòðàò, ðàñòóò, ïîäùåëà÷èâàÿ ñðåäó è èçìåíÿÿ åå öâåò èç îëèâêîâîçåëåíîãî â ñèíèé. 4.2.5.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ Îáíàðóæåíèå îòðèöàòåëüíûõ ïî Ãðàìó ïàëî÷åê, îáðàçóþùèõ õàðàêòåðíûå êîëîíèè íà ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ñ ëàêòîçîé, ôåðìåíòèðóþùèõ 10 %-íóþ ëàêòîçó, îáðàçóþùèõ èíäîë, íå ðàñùåïëÿþùèõ ìî÷åâèíó, íå àññèìèëèðóþùèõ öèòðàòû, íå îáðàçóþùèõ ñåðîâîäîðîä, óêàçûâàåò íà íàëè÷èå áàêòåðèé êèøå÷íîé ïàëî÷êè-Ýøåðèõèè. 4.2.6.  û ÿ â ë å í è å á à ê ò å ð è é è ç ð î ä à ï ð î ò å ÿ 4.2.6.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ìîðôîëîãèè, îïðåäåëåíèè ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è ñïîñîáíîñòè ãèäðîëèçîâàòü ìî÷åâèíó, îáðàçîâàíèè ñåðîâîäîðîäà è îòñóòñòâèè ôåðìåíòàöèè ìàííèòà. 4.2.6.2. Ïðîâåäåíèå èññëåäîâàíèÿ Íàëè÷èå íà ñðåäàõ â ÷àøêàõ âóàëåîáðàçíîãî íàëåòà (Í-ôîðìà), ïðè ìèêðîñêîïèè êîòîðîãî îáíàðóæèâàþò ïîëèìîðôíûå ïîäâèæíûå ïàëî÷êè, îêðàøèâàþùèåñÿ ïî Ãðàìó îòðèöàòåëüíî, óêàçûâàåò íà ïðèñóòñòâèå âóëüãàðíîãî ïðîòåÿ; íàðÿäó ñ êîëîíèÿìè, êîòîðûå äàþò ðàñïëûâàþùèéñÿ ïî ïîâåðõíîñòè ðîñò, ìîãóò âñòðå÷àòüñÿ èçîëèðîâàííûå êîëîíèè ñðåäíåé âåëè÷èíû, íåæíûå ïîëóïðîçðà÷íûå ñ ðîçîâàòûì öåíòðîì, ïàëî÷êè èç ýòèõ êîëîíèé ëèøåíû æãóòèêîâ è íåïîäâèæíû (Î-ôîðìà). Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ íàëè÷èÿ ïðîòåÿ (Í-ôîðìà) ïðîèçâîäÿò ïîñåâ â êîíäåíñàöèîííóþ âîäó ñêîøåííîãî àãàðà (ñïîñîá Øóêåâè÷à). Äëÿ îáíàðóæåíèÿ «íåðîÿùèõñÿ» Î-ôîðì ïðîèçâîäÿò ïîñåâ íà àãàð Ïëîñêèðåâà. Î-ôîðìà ïðîòåÿ ðàñòåò íà ýòîé ñðåäå â âèäå ïðîçðà÷íûõ êîëîíèé, îáëàäàþùèõ õàðàêòåðíûì çàïàõîì è ñëåãêà ïîäùåëà÷èâàþùèõ ñðåäó, êîòîðàÿ îêðàøèâàåòñÿ îêîëî íèõ â æåëòûé öâåò. Áîëåå ñòàðûå êîëîíèè íåðåäêî ìóòíåþò, à èõ öåíòð ïðèíèìàåò áóðóþ îêðàñêó. Áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ ïðèâåäåíû â òàáë. 4. 4.2.6.3. Îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ Îáíàðóæåíèå ïîëèìîðôíûõ ãðàìîòðèöàòåëüíûõ ïàëî÷åê, îáðàçóþùèõ õàðàêòåðíûé ðîñò íà ñðåäàõ Í-ôîðìà, ïîäâèæíûõ (Î-ôîðìà íåïîäâèæíûå), ôåðìåíòèðóþùèõ ãëþêîçó è ìî÷åâèíó, íå ôåðìåíòèðóþùèõ ëàêòîçó è ìàííèò, óêàçûâàåò íà íàëè÷èå áàêòåðèé èç ðîäà ïðîòåÿ. 4.3. Ìåòîä óñêîðåííîãî âûÿâëåíèÿ âîçáóäèòåëåé ðîæè ñâèíåé, ëèñòåðèîçà, ñàëüìîíåëëåçà ïðè ïîìîùè ôëóîðåñöèðóþùèõ àíòèòåë 4.3.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè ñïîñîáíîñòè àíòèòåë èììóííûõ ñûâîðîòîê ïðè ñîåäèíåíèè ÷åðåç êàðáàìèäíûå ãðóïïû ñî ñïåöèàëüíûìè êðàñèòåëÿìè (ôëóîðîõðîìàìè) âñòóïàòü â ñïåöèôè÷åñêóþ ñâÿçü ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè àíòèãåíàìè. Îáðàçóþùèéñÿ ïðè ýòîì êîìïëåêñ «àíòèãåíàíòèòåëî» ôëóîðåñöèðóåò è ëåãêî îáíàðóæèâàåòñÿ ïðè ëþìèíåñöåíòíîé ìèêðîñêîïèè. Ìåòîä ìîæåò áûòü ïðèìåíåí â êà÷åñòâå ýêñïðåññíîãî è äëÿ óñêîðåííîé èäåíòèôèêàöèè ìèêðîáîâ. Ýêñïðåññíûé ìåòîä ïðîâîäèòñÿ â íà÷àëå èññëåäîâàíèÿ íàðÿäó ñ áàêòåðèîñêîïèåé è íå òðåáóåò âûäåëåíèÿ ÷èñòîé êóëüòóðû ìèêðîáîâ èç èññëåäóåìîãî ìàòåðèàëà. Ïîëó÷åííûé â òå÷åíèå 26 ÷ îòâåò ÿâëÿåòñÿ ïðåäâàðèòåëüíûì, ñèãíàëüíûì, òðåáóþùèì ïîäòâåðæäåíèÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêèì ìåòîäîì. 88 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 21 Ïðèìåíåíèå ìåòîäà ëþìèíåñöèðóþùèõ ñûâîðîòîê äëÿ èäåíòèôèêàöèè âûäåëåííîé êóëüòóðû ìèêðîáîâ èìååò öåëüþ óñêîðåíèå èññëåäîâàíèÿ, èñêëþ÷àþùåãî â ðÿäå ñëó÷àåâ îïðåäåëåíèå êóëüòóðàëüíûõ è áèîõèìè÷åñêèõ ñâîéñòâ, ñåðîëîãè÷åñêèå ðåàêöèè è òèïèðîâàíèå. 4.3.2. À ï ï à ð à ò ó ð à, ì à ò å ð è à ë û è ð å à ê ò è â û Ïðè ïðîâåäåíèè èññëåäîâàíèÿ ïðèìåíÿþò äîïîëíèòåëüíî àïïàðàòóðó, ìàòåðèàëû è ðåàêòèâû, êðîìå óêàçàííûõ â ðàçä. 2: ìèêðîñêîï ëþìèíåñöåíòíûé èëè ëþìèíåñöåíòíîå óñòðîéñòâî ÎÈ-17 ñ ïðèñòàâêîé ê áèîëîãè÷åñêîìó ìèêðîñêîïó; ñûâîðîòêè ïðîòèâ ðîæè ñâèíåé ôëóîðåñöèðóþùèå; ñûâîðîòêè ïðîòèâ ëèñòåðèîçà ñåðîòèïîâ 1, 4à, 4á, ôëóîðåñöèðóþùèå; ñûâîðîòêè ôëóîðåñöèðóþùèå ãðóïïîâûå è êîìïëåêñíûå ñàëüìîíåëëåçíûå; ñûâîðîòêà ïîëèâàëåíòíàÿ ñàëüìîíåëëåçíàÿ; ñûâîðîòêà (ìå÷åíàÿ ÔÈÒÖ) ïðîòèâ ãàììà-ãëîáóëèíîâ êðîëèêà, îñëèíàÿ; àëüáóìèí èç êðîâè êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì; ìàñëî íåôëóîðåñöèðóþùåå èììåðñèîííîå èëè åãî çàìåíèòåëü, èçãîòîâëåííûé èç äèìåòèëôòàëàòà ÷èñòîãî 100 ñì3, íàôòàëèíà ñóáëèìèðîâàííîãî 1,75 ã èëè òèìîëà ÷èñòîãî 5 ã; ãëèöåðèí ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì (â ðàçâåäåíèè 9:1 ðÍ áóôåðà 8,0); ðàñòâîð ôèçèîëîãè÷åñêèé ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì, ðÍ 7,4. 4.3.3. Ï î ä ã î ò î â ê à ê è ñ ñ ë å ä î â à í è þ Ïðèãîòîâëåíèå ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì. Íà àíàëèòè÷åñêèõ âåñàõ îòâåøèâàþò 9,078 ã õ.÷. îäíîçàìåùåííîãî ôîñôàòà êàëèÿ, ïîìåùàþò åãî â ìåðíóþ êîëáó è äîâîäÿò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé äî 1000 ñì3. Çàòåì îòâåøèâàþò 11,876 ã äâóçàìåùåííîãî ôîñôàòà íàòðèÿ è â äðóãîé ìåðíîé êîëáå äîâîäÿò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé äî îáúåìà 1000 ñì3. Ïðè èñïîëüçîâàíèè äâóçàìåùåííîãî ôîñôàòà íàòðèÿ, ñîäåðæàùåãî 12 ìîëåêóë âîäû, äëÿ ïîëó÷åíèÿ 1000 ñì3 ðàñòâîðà áåðóò íàâåñêó ìàññîé 23,752 ã, à áåçâîäíîãî ðåàêòèâà 9,476 ã. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ áóôåðà ñ ðÍ 7,4 ñìåøèâàþò ÷åòûðå ÷àñòè ðàñòâîðà äâóçàìåùåííîãî ôîñôàòà íàòðèÿ è îäíó ÷àñòü ðàñòâîðà îäíîçàìåùåííîãî ôîñôàòà êàëèÿ. Ïîëó÷åííûé áóôåð äîáàâëÿþò ê ôèçèîëîãè÷åñêîìó ðàñòâîðó â ñîîòíîøåíèè 1:50. Åñëè ïðè ñìåøèâàíèè ôîñôàòîâ (4:1) íå ïîëó÷àþò ðÍ 8,0, òî èçìåíÿÿ ñîîòíîøåíèå ðàñòâîðîâ, äîñòèãàþò íåîáõîäèìîé âåëè÷èíû ðÍ (ïðè ïîâûøåííîé êèñëîòíîñòè äîáàâëÿþò äâóçàìåùåííûé ôîñôàò íàòðèÿ, à ïðè ùåëî÷íîì ðÍ äîáàâëÿþò îäíîçàìåùåííûé ôîñôàò êàëèÿ). Åñëè ïðè äîáàâëåíèè áóôåðà â ñîîòíîøåíèè 1:50 ê ôèçèîëîãè÷åñêîìó ðàñòâîðó ïîñëåäíèé áóäåò èìåòü ðÍ íèæå 7,4, òî óâåëè÷åíèåì êîëè÷åñòâà äîáàâëåííîãî áóôåðà äîáèâàþòñÿ íóæíîé ðåàêöèè ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. 4.3.4. Ï ð î â å ä å í è å ë þ ì è í å ñ ö å í ò í î-ñ å ð î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î è ñ ñ ë å ä îâàíèÿ âîçáóäèòåëåé ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà â êóëüòóðå Äëÿ èññëåäîâàíèÿ èñïîëüçóþò 1824-÷àñîâûå ÷èñòûå èëè ñìåøàííûå êóëüòóðû, èç êîòîðûõ ãîòîâÿò ïî òðè ìàçêà íà îòäåëüíûõ ïðåäìåòíûõ ñòåêëàõ. Îäèí èç ìàçêîâ èñïîëüçóþò äëÿ îáðàáîòêè ðîæèñòîé ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêîé, äâà äðóãèõ äëÿ îáðàáîòêè ëèñòåðèîçíûìè ëþìèíåñöèðóþùèìè ñûâîðîòêàìè (ñåðîòèïîâ 1, 4à, 4á). Ïåðåä ïðèìåíåíèåì ôëþîðåñöèðóþùóþ ñûâîðîòêó ðàçâîäÿò ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì (ðÍ 7,4) äî ðàáî÷åãî ðàçâåäåíèÿ, óêàçàííîãî íà ýòèêåòêå àìïóëû. Ñûâîðîòêè â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè ìîãóò õðàíèòüñÿ ïðè òåìïåðàòóðå 24 °Ñ â òå÷åíèå 2 ñóòîê. Ìàçêè ãîòîâÿò ñðåäíåé ãóñòîòû (íåñêîëüêî äåñÿòêîâ ìèêðîáîâ â ïîëå çðåíèÿ ìèêðîñêîïà) ðàçìåðîì íå áîëåå 1 ñì2. Ìåñòî íàíåñåíèÿ êóëüòóðû î÷åð÷èâàþò êàðàíäàøîì ïî ñòåêëó ñ îáðàòíîé ñòîðîíû, ïîäñóøèâàþò ìàçêè íà âîçäóõå, ìàðêèðóþò è ôèêñèðóþò ýòèëîâûì ñïèðòîì â òå÷åíèå 15 ìèí; ìàçêè äëÿ ôèêñàöèè ïîãðóæàþò â âåðòèêàëüíîì ïîëîæåíèè â ñòåêëÿííûé ñîñóä ñî ñïèðòîì. Êàæäîå ñòåêëî îòäåëÿþò ìåòàëëè÷åñêîé ïðîâîëî÷êîé èëè ñòåêëÿííîé ñîëîìêîé. Ïîñëå ôèêñàöèè è èñïàðåíèÿ ñïèðòà ìàçêè îïîëàñêèâàþò ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì (ðÍ 7,4). Íà ñëåãêà ïîäñóøåííûé ìàçîê íàíîñÿò îäíó-äâå êàïëè ñîîòâåòñòâóþùåé ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêè â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè. Ìàçêè ñ ñûâîðîòêîé ïîìåùàþò âî âëàæíóþ êàìåðó (â ÷àøêè Ïåòðè ñ âëàæíîé ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé íà äíå) è âûäåðæèâàþò â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 30 ìèí. Äîïóñêàåòñÿ ìàçêè îïîëàñêèâàòü ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì èëè äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé áåç ôîñôàòíîãî áóôåðà. 89 Ñ. 22 ÃÎÑÒ 2123775 Çàòåì ñûâîðîòêó îòìûâàþò, ïîãðóæàÿ ìàçêè â êþâåòó, ñîäåðæàùóþ ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð ñ ôîñôàòíûì áóôåðîì ðÍ 7,4 íà 20 ìèí. Ðàñòâîð â êþâåòå ïåðèîäè÷åñêè ïîìåøèâàþò è ìåíÿþò ÷åðåç 10 ìèí. Îòìûòûå ìàçêè îïîëàñêèâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âûñóøèâàþò íà âîçäóõå. Äëÿ áûñòðîòû âûñóøèâàíèÿ ìîæíî èñïîëüçîâàòü âåíòèëÿòîð. 4.3.4.1. Íà ïîâåðõíîñòü ìàçêà íàíîñÿò íåáîëüøóþ êàïëþ ãëèöåðèíà ñ áóôåðîì ðÍ 8,0, íàêðûâàþò ïîêðîâíûì ñòåêëîì, èçëèøåê ãëèöåðèíà óäàëÿþò. Íà ïîêðîâíîå ñòåêëî íàíîñÿò íåôëóîðåñöèðóþùåå èììåðñèîííîå ìàñëî èëè åãî çàìåíèòåëü è ïðîèçâîäÿò ëþìèíåñöåíòíóþ ìèêðîñêîïèþ. 4.3.4.2. Äèàãíîñòè÷åñêàÿ îöåíêà èíòåíñèâíîñòè ñâå÷åíèÿ âîçáóäèòåëåé ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà: «+ + + +» ÿðêàÿ, ñâåðêàþùàÿ çåëåíàÿ ëþìèíåñöåíöèÿ ìîðôîëîãè÷åñêè òèïè÷íûõ áàêòåðèé ñ áîëåå èíòåíñèâíûì ñâå÷åíèåì ïî èõ ïåðèôåðèè (ïîëîæèòåëüíàÿ); «+ + +» îò÷åòëèâî âûðàæåííàÿ, äîñòàòî÷íî ÿðêàÿ, çåëåíîâàòàÿ ëþìèíåñöåíöèÿ ìîðôîëîãè÷åñêè òèïè÷íûõ áàêòåðèé ñ áîëåå èíòåíñèâíûì ñâå÷åíèåì ïî èõ ïåðèôåðèè (ïîëîæèòåëüíàÿ); «+ +» íåäîñòàòî÷íî ÿðêàÿ æåëòîâàòî-çåëåíîâàòàÿ ëþìèíåñöåíöèÿ, ïåðèôåðè÷åñêèé îáîäîê âûÿâëÿåòñÿ ñ òðóäîì (ñîìíèòåëüíàÿ); «+» ëþìèíåñöåíöèÿ î÷åíü ñëàáàÿ, ìîðôîëîãèÿ áàêòåðèé ðàçëè÷àåòñÿ ñ òðóäîì (îòðèöàòåëüíàÿ); «» ëþìèíåñöåíöèÿ îòñóòñòâóåò, âèäíû ëèøü òåíè áàêòåðèé (îòðèöàòåëüíàÿ). Âèäîâóþ ïðèíàäëåæíîñòü îáíàðóæåííîãî âîçáóäèòåëÿ óñòàíàâëèâàþò ïî îïðåäåëåííîé ñûâîðîòêå, êîòîðàÿ âûçûâàåò ñïåöèôè÷åñêîå ñâå÷åíèå èññëåäóåìîé êóëüòóðû èíòåíñèâíîñòüþ íå ìåíåå ÷åì íà òðè êðåñòà. 4.3.5. Ï ð î â å ä å í è å ë þ ì è í å ñ ö å í ò í î-ñ å ð î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î è ñ ñ ë å ä îâ à í è ÿ á à ê ò å ð è é ð î æ è ñ â è í å é è ë è ñ ò å ð è î ç à â ì ÿ ñ å è ï à ð å í õ èìàòîçíûõ îðãàíàõ Ìàòåðèàë äëÿ èññëåäîâàíèÿ äîëæåí áûòü ñâåæèì. Äëÿ ëþìèíåñöåíòíîé ìèêðîñêîïèè èç ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ ãîòîâÿò âçâåñü íà ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå õëîðèäà íàòðèÿ â ñîîòíîøåíèè 1:5. Ïîñëå îñàæäåíèÿ êðóïíûõ ÷àñòèö âçâåñè èç ðàçíûõ ó÷àñòêîâ åå ïîâåðõíîñòè ãîòîâÿò ïî äâà-òðè ìàçêà íà êàæäûé âèä ñûâîðîòêè. Îáðàáîòêó ïðåïàðàòîâ è ëþìèíåñöåíòíóþ ìèêðîñêîïèþ ïðîâîäÿò òàê, êàê óêàçàíî ïðè èññëåäîâàíèè êóëüòóð (ï. 4.3.4.1). 4.3.6. Ä è à ã í î ñ ò è ÷ å ñ ê à ÿ î ö å í ê à è í ò å í ñ è â í î ñ ò è ñ â å ÷ å í è ÿ á à êòåðèé ðîæè ñâèíåé è ëèñòåðèîçà Ïðè îáíàðóæåíèè âîçáóäèòåëÿ ñ òèïè÷íîé ìîðôîëîãèåé, ñïåöèôè÷åñêèì ñâå÷åíèåì è èíòåíñèâíîñòüþ íå íèæå ÷åì íà òðè êðåñòà, ñòàâÿò ïîëîæèòåëüíûé ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêèé äèàãíîç ñîîòâåòñòâåííî òîé ñûâîðîòêå, êîòîðàÿ âûçâàëà ñâå÷åíèå âîçáóäèòåëÿ. Ïðè ñîìíèòåëüíûõ èëè îòðèöàòåëüíûõ ðåçóëüòàòàõ (ñëàáîå ñâå÷åíèå íà îäèí èëè äâà êðåñòà, ñâå÷åíèå ìèêðîáîâ ñ àòèïè÷íîé ìîðôîëîãèåé èëè îòñóòñòâèå ñâå÷åíèÿ âîçáóäèòåëÿ â ìàçêàõ) äèàãíîç óòî÷íÿþò ëþìèíåñöåíòíîé ìèêðîñêîïèåé êóëüòóð, âûäåëåííûõ èç ïîñåâîâ ïàòîëîãè÷åñêîãî ìàòåðèàëà. 4.3.7. Ï ð î â å ä å í è å ë þ ì è í å ñ ö å í ò í î -ñ å ð î ë î ã è ÷ å ñ ê î ã î è ñ ñ ë å ä îâàíèÿ ñàëüìîíåëë Äëÿ èññëåäîâàíèÿ ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû ìàçêè-îòïå÷àòêè èç îðãàíîâ è òêàíåé, ïðîáû ìÿñà ïîñëå ïîäðàùèâàíèÿ â òåðìîñòàòå â òå÷åíèå 46 ÷, à òàêæå ìàçêè, ïðèãîòîâëåííûå èç áàêòåðèàëüíûõ êóëüòóð (êàê ÷èñòûõ, òàê è ñìåøàííûõ). Ñóõóþ ôëóîðåñöèðóþùóþ ñàëüìîíåëëåçíóþ ñûâîðîòêó è àëüáóìèí, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì, ïåðåä ïðèìåíåíèåì ðàñòâîðÿþò êàæäûé â îòäåëüíîñòè äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé â îáúåìå, óêàçàííîì íà ýòèêåòêå àìïóëû. Ïðè èñïîëüçîâàíèè ñûâîðîòêè ñîâìåñòíî ñ àëüáóìèíîì äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ðàáî÷åé ñìåñè, ôëóîðåñöèðóþùóþ ñàëüìîíåëëåçíóþ ñûâîðîòêó è àëüáóìèí, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì, ðàçâîäÿò êàæäûé â îòäåëüíîñòè 0,15 ìîëü/äì3 ðàñòâîðîì õëîðèñòîãî íàòðèÿ (ðÍ 7,27,4) íà îäíî ðàçâåäåíèå ìåíüøå, ÷åì èõ ðàáî÷èå òèòðû, óêàçàííûå íà ýòèêåòêàõ ïðåïàðàòîâ. Ðàçâåäåííóþ ôëóîðåñöèðóþùóþ ñûâîðîòêó è àëüáóìèí, ìå÷åíûé ðîäàìèíîì, ñìåøèâàþò â ðàâíûõ îáúåìàõ. Ðàáî÷óþ ñìåñü õðàíÿò â ïðîáèðêå ñ ïëîòíîé ðåçèíîâîé ïðîáêîé â òåìíîì ìåñòå ïðè òåìïåðàòóðå 4 °Ñ. 90 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 23 4.3.7.1. Ïðîâåäåíèå ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ñàëüìîíåëë â êóëüòóðå ïðÿìûì ñïîñîáîì Èññëåäîâàíèþ ïîäëåæàò ìîëîäûå, ÷èñòûå èëè ñìåøàííûå êóëüòóðû, âûðàùåííûå â æèäêèõ èëè ëó÷øå íà ïëîòíûõ ýëåêòèâíûõ ñðåäàõ ïîñëå ïîÿâëåíèÿ ìàêðîñêîïè÷åñêè âèäèìîãî ðîñòà. Èç äâóõ-òðåõ òèïè÷íûõ äëÿ ñàëüìîíåëë êîëîíèé ãîòîâÿò ìàçêè íà ïðåäìåòíûõ ñòåêëàõ ñîîòâåòñòâåííî ÷èñëó ñûâîðîòîê, êîòîðûå äîëæíû áûòü ïðèìåíèìû äëÿ èññëåäîâàíèÿ. Ïðåïàðàòû ïîìåùàþò â ÷àøêè Ïåòðè ñ âëàæíîé ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé íà äíå, íà êàæäûé ìàçîê íàíîñÿò îäíó-äâå êàïëè ñûâîðîòêè â ðàáî÷åì ðàçâåäåíèè èëè ñûâîðîòêó ñ àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì ðîäàìèíîì, ñûâîðîòêó ðàñïðåäåëÿþò ïî âñåé ïîâåðõíîñòè ìàçêà è âûäåðæèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 30 ìèí èëè â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí. Çàòåì ñûâîðîòêó îòìûâàþò äâàæäû ïî 10 ìèí 0,15 ìîëü/äì3 ðàñòâîðîì õëîðèñòîãî íàòðèÿ. Îòìûòûå ìàçêè îïîëàñêèâàþò äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âûñóøèâàþò íà âîçäóõå èëè â òåðìîñòàòå. Îáðàáîòêó è ìèêðîñêîïèþ ìàçêîâ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.4.1. 4.3.7.2. Ïðîâåäåíèå ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ñàëüìîíåëë â ìÿñå è ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíàõ ïðÿìûì ñïîñîáîì  ñâåæèõ ïðîáàõ ïðè îòñóòñòâèè ïàòîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé òèïè÷íûå ôîðìû ñàëüìîíåëë ìîæíî îáíàðóæèòü â ðåäêèõ ñëó÷àÿõ. Ïîýòîìó ëþìèíåñöåíòíóþ ìèêðîñêîïèþ ïðîâîäÿò ïîñëå íàêîïëåíèÿ ñàëüìîíåëë. Äëÿ ýòîãî îò âñåõ îðãàíîâ îòðåçàþò êóñî÷êè ðàçìåðîì 2×3×4 ñì è ïîìåùàþò èõ â çàêðûòûõ ÷àøêàõ â òåðìîñòàò íà 46 ÷ äëÿ ïîäðàùèâàíèÿ; èõ èññëåäóþò ïðè îòðèöàòåëüíîì ðåçóëüòàòå ïåðâè÷íîé ìèêðîñêîïèè. Ãîòîâÿò äâå ñåðèè ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ (ïî òðè ìàçêà â êàæäîé ñåðèè). Îäíó ñåðèþ ìàçêîâ îêðàøèâàþò ïî Ãðàìó è èññëåäóþò ïî îáùåïðèíÿòîé ìåòîäèêå. Âòîðóþ ñåðèþ îêðàøèâàþò ëþìèíåñöèðóþùèìè ñàëüìîíåëëåçíûìè ñûâîðîòêàìè èëè ñìåñüþ ëþìèíåñöèðóþùåé ñàëüìîíåëëåçíîé ñûâîðîòêè ñ àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì ðîäàìèíîì. Îêðàñêó âåäóò àíàëîãè÷íî îêðàñêå ñàëüìîíåëë â êóëüòóðå. Îáðàáîòêó è ìèêðîñêîïèþ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.4.1. 4.3.7.3. Äèàãíîñòè÷åñêàÿ îöåíêà èíòåíñèâíîñòè ñâå÷åíèÿ ñàëüìîíåëë Ïðè ìèêðîñêîïèè ìàçêîâ èç êóëüòóðû èëè ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ èç îðãàíîâ è òêàíåé áàêòåðèè ñàëüìîíåëë äàþò ÿðêîå èçóìðóäíî-çåëåíîâàòîå ñâå÷åíèå ïî ïåðèôåðèè áàêòåðèé ñ õîðîøî âûðàæåííîé öåíòðàëüíîé òåìíîé çîíîé. Ôîí ïðåïàðàòà òåìíûé ñ îðàíæåâî-êðàñíûì îêðàøèâàíèåì ïîñòîðîííåé ìèêðîôëîðû, òêàíåâûõ ýëåìåíòîâ è äðóãèõ îðãàíè÷åñêèõ ÷àñòèö (ïðè ïðèìåíåíèè àëüáóìèíà, ìå÷åíîãî ðîäàìèíîì), ñîäåðæàùèõñÿ â èññëåäóåìûõ ïðåïàðàòàõ. Õàðàêòåðíîå ñâå÷åíèå êîíòóðà (îáîäêà) ïðè âèçóàëüíîì îñìîòðå îöåíèâàåòñÿ â êðåñòàõ: «+ + + +» ñèÿþùåå çåëåíîâàòî-æåëòîâàòîå ñâå÷åíèå; «+ + +» ÿðêîå æåëòîâàòî-çåëåíîâàòîå ñâå÷åíèå; «+ +» óìåðåííîå æåëòîâàòî-çåëåíîâàòîå èëè áåëîâàòîå ñâå÷åíèå îò÷åòëèâî çàìåòíîãî êîíòóðà; «+» ñëàáîå áåëîâàòîå ñâå÷åíèå ðàçëè÷èìîãî êîíòóðà; «» êëåòêè â âèäå ñåðîâàòûõ òåíåé, êîíòóð îòñóòñòâóåò èëè ñëàáî çàìåòåí íà îòäåëüíûõ ó÷àñòêàõ ïåðèôåðèè êëåòîê (íå ó âñåõ ìèêðîáîâ). 4.3.7.4. Ïîëîæèòåëüíûì ðåçóëüòàòîì îáíàðóæåíèÿ ñàëüìîíåëë ñ÷èòàåòñÿ ñâå÷åíèå òèïè÷íûõ äëÿ ñàëüìîíåëë ôîðì, îöåíèâàåìîå íå íèæå ÷åì íà äâà êðåñòà ïðè óñëîâèè, ÷òî â êîíòðîëüíûõ ïðåïàðàòàõ, îêðàøåííûõ ðàáî÷èì ðàçâåäåíèåì ãåòåðîëîãè÷åñêîé ñûâîðîòêè, îíî îöåíèâàåòñÿ îòðèöàòåëüíî, à òàêæå ïðè îòðèöàòåëüíûõ ðåçóëüòàòàõ îêðàøèâàíèÿ ñàëüìîíåëëåçíûìè ôëóîðåñöèðóþùèìè ñûâîðîòêàìè ãåòåðîëîãè÷åñêèõ áàêòåðèé (êèøå÷íîé ïàëî÷êè, ïðîòåÿ). Ñâå÷åíèå íà îäèí êðåñò îöåíèâàåòñÿ êàê ñîìíèòåëüíîå, è èññëåäîâàíèå ïîâòîðÿþò. 4.3.7.5. Ïðîâåäåíèå ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ñàëüìîíåëë â êóëüòóðàõ, ìÿñå è ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíàõ íåïðÿìûì ñïîñîáîì Ëþìèíåñöåíòíî-ñåðîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ñîñòîèò èç äâóõ ýòàïîâ. Ïåðâûé ýòàï. Îáðàáîòêà ìàçêîâ èç êóëüòóð, ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ èììóííîé ñûâîðîòêîé. Ïîñëå ôèêñàöèè ìàçêîâ ýòèëîâûì ñïèðòîì, íà ìàçêè èç êóëüòóð èëè ìàçêè-îòïå÷àòêè èç ìÿñà èëè îðãàíîâ íàíîñÿò ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé îäíó-äâå êàïëè ïîëèâàëåíòíîé ñàëüìîíåëëåçíîé ñûâîðîòêè, ðàçâåäåííîé ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì 1:32. Ìàçêè ïîìåùàþò â ÷àøêè Ïåòðè ñ âëàæíîé ôèëüòðîâàëüíîé áóìàãîé è âûäåðæèâàþò 30 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå èëè 15 ìèí ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. Íåñâÿçàâøóþñÿ èììóííóþ ñûâîðîòêó îòìûâàþò 5 ìèí âîäîïðîâîäíîé âîäîé, ìàçêè âûñóøèâàþò íà âîçäóõå èëè â òåðìîñòàòå ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ. 91 Ñ. 24 ÃÎÑÒ 2123775 Âòîðîé ýòàï. Îêðàñêà ìàçêîâ èç êóëüòóð, ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêîé ïðîòèâ ãàììà-ãëîáóëèíà êðîëèêà (ìå÷åíîãî ÔÈÒÖ) èëè ñìåñüþ ñûâîðîòêè ñ àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì ðîäàìèíîì. Ïðè îêðàñêå ñìåñüþ ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêè ïðîòèâ ãàììà-ãëîáóëèíà êðîëèêà (ìå÷åíîãî ÔÈÒÖ) èëè ñìåñüþ ëþìèíåñöèðóþùåé ñûâîðîòêè ñ àëüáóìèíîì, ìå÷åíûì ðîäàìèíîì, ãîòîâÿò ðàáî÷óþ ñìåñü, êàê óêàçàíî â ï. 4.3.7. Îáðàáîòêó è ìèêðîñêîïèþ ìàçêîâ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.4.1. Äèàãíîñòè÷åñêóþ îöåíêó èíòåíñèâíîñòè ñâå÷åíèÿ ïðîèçâîäÿò ïî ï. 4.3.7.3. 4.4. Ìåòîä âûÿâëåíèÿ àíàýðîáíûõ áàêòåðèé 4.4.1. Ñóùíîñòü ìåòîäà âûÿâëåíèÿ àíàýðîáíûõ áàêòåðèé çàêëþ÷àåòñÿ â îïðåäåëåíèè èõ ñïîñîáíîñòè ðàñòè â îòñóòñòâèè êèñëîðîäà âîçäóõà, ìîðôîëîãèè âîçáóäèòåëåé, ðîñòà íà ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ è íà âûÿâëåíèè ïàòîãåííîñòè âîçáóäèòåëåé ïóòåì çàðàæåíèÿ ëàáîðàòîðíûõ æèâîòíûõ. Óäîâëåòâîðèòåëüíûå àíàýðîáíûå óñëîâèÿ ñîçäàþòñÿ â æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå, ãäå â êà÷åñòâå âîññòàíîâèòåëÿ ïðèìåíÿþò ìÿñî, ïå÷åíü, êîòîðûå îäíîâðåìåííî ñëóæàò è èñòî÷íèêîì ïèòàíèÿ. Ñðåäà äîëæíà áûòü ôàñîâàíà âî ôëàêîíû èëè ïðîáèðêè òàêèì îáðàçîì, ÷òîáû ïëîùàäü ïîâåðõíîñòè ñðåäû ïî àáñîëþòíîé âåëè÷èíå íå ïðåâûøàëà 1/10 åå îáúåìà, è ïîâåðõíîñòü åå áûëà èçîëèðîâàíà îò êèñëîðîäà âîçäóõà. Èññëåäîâàíèå íà àíàýðîáíûå áàêòåðèè ïðîâîäÿò ïðè ïîäîçðåíèè íà ñëåäóþùèå çàáîëåâàíèÿ: ýìôèçåìàòîçíûé êàðáóíêóë (ýìêàð), çëîêà÷åñòâåííûé ðàíåâîé ãàçîâûé îòåê, áðàäçîò îâåö, äèçåíòåðèþ ÿãíÿò, ýíòåðîòîêñåìèþ îâåö, ñòîëáíÿê, íåêðîáàêòåðèîç, áîòóëèçì. 4.4.2. Ï ð î â å ä å í è å è ñ ñ ë å ä î â à í è ÿ Ìàòåðèàëîì äëÿ èññëåäîâàíèÿ ïðè ýìêàðå è çëîêà÷åñòâåííîì ðàíåâîì ãàçîâîì îòåêå ÿâëÿþòñÿ êóñî÷êè ïîðàæåííûõ ìûøö, îòå÷íûå òêàíè, ëèìôàòè÷åñêèå óçëû, ïå÷åíü è ñåëåçåíêà; ïðè áðàäçîòå îâåö êðîâü èç ñåðäöà, ñëèçèñòàÿ îáîëî÷êà ñû÷óãà è òîíêîãî îòäåëà êèøå÷íèêà, èíôèëüòðàò ïîäêîæíîé êëåò÷àòêè; ïðè äèçåíòåðèè ÿãíÿò è ýíòåðîòîêñåìèè îâåö ñîäåðæèìîå êèøå÷íèêà, ïîðàæåííàÿ ïî÷êà; ïðè ñòîëáíÿêå ðàíåâîé ñåêðåò, ãíîé, êóñî÷êè òêàíåé, êîòîðûå áåðóò èç ãëóáîêèõ ñëîåâ ïîðàæåííûõ ó÷àñòêîâ; ïðè íåêðîáàêòåðèîçå íåêðîòè÷åñêèå ôîêóñû ïàðåíõèìàòîçíûõ îðãàíîâ; ïðè áîòóëèçìå ñîäåðæèìîå æåëóäêà, òîëñòûõ êèøîê, ñåëåçåíêà, êóñîê ïå÷åíè è ãîëîâíîé ìîçã. Äèàãíîç íà àíàýðîáíûå èíôåêöèè ñòàâÿò íà îñíîâàíèè áàêòåðèîñêîïèè, ïîñåâà ìàòåðèàëà è áèîïðîáû íà æèâîòíûõ. Äëÿ áàêòåðèîñêîïèè èç ìàòåðèàëà ãîòîâÿò íåñêîëüêî ìàçêîâ èëè ìàçêîâ-îòïå÷àòêîâ, êîòîðûå îêðàøèâàþò ìåòèëåíîâîé ñèíüþ èëè ïî Ãðàìó. Ïðè ïðîñìîòðå ìàçêîâ îáðàùàþò âíèìàíèå íà ôîðìó, ðàñïîëîæåíèå îòäåëüíûõ ìèêðîáîâ, íàëè÷èå è ðàñïîëîæåíèå ñïîð, íàëè÷èå êàïñóë è îòíîøåíèå ê îêðàñêå ïî Ãðàìó. Äëÿ ïîñåâà ìàòåðèàë îáæèãàþò è íàâåñêó ìàññîé 10 ã ðàñòèðàþò â ñòåðèëüíîé ñòóïêå ñ äîáàâëåíèåì äâîéíîãî êîëè÷åñòâà ôèçèîëîãè÷åñêîãî ðàñòâîðà. Ïî 35 ñì3 ïðèãîòîâëåííîé âçâåñè çàñåâàþò â ÷åòûðå áîëüøèå ïðîáèðêè ñ ìÿñíîé ñðåäîé òèïà Òàðîööè, çàëèòîé ñëîåì âàçåëèíîâîãî ìàñëà òîëùèíîé 0,5 ñì, ïðåäâàðèòåëüíî ïðîãðåòîé â êèïÿùåé âîäÿíîé áàíå â òå÷åíèå 2030 ìèí, à çàòåì áûñòðî îõëàæäåííîé äî òåìïåðàòóðû íå íèæå 50 °Ñ. Ïîñåâû ïåðåä òåðìîñòàòèðîâàíèåì ïðîãðåâàþò äëÿ âñåõ óêàçàííûõ àíàýðîáîâ äâå ïðîáèðêè ïðè òåìïåðàòóðå 80 °Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí; ïðè èññëåäîâàíèè íà Cl. botulinum òèïà Å îäíó ïðîáèðêó ïðè òåìïåðàòóðå 60 °Ñ â òå÷åíèå 15 ìèí (ïðè ýòîì ñîõðàíÿþòñÿ ñïîðû Cl. botulinum òèïà Å), à äðóãóþ ïðè 80 °Ñ â òå÷åíèå 20 ìèí. Îñòàëüíûå ïðîáèðêè îñòàâëÿþò íåïðîãðåòûìè. Ïðè ïîäîçðåíèè íà Cl. botulinum äëÿ âûÿâëåíèÿ òèïà Å äâå ïðîáèðêè îäíó íåïðîãðåòóþ è îäíó ïðîãðåòóþ ïðè 60 °Ñ âûäåðæèâàþò ïðè òåìïåðàòóðå 28 °Ñ. Äðóãèå äâå ïðîáèðêè (íåïðîãðåòóþ è ïðîãðåòóþ ïðè 80 °Ñ) èíêóáèðóþò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °Ñ íà äðóãèå àíàýðîáíûå áàêòåðèè. Òåðìîñòàòèðîâàíèå ïðîâîäÿò â òå÷åíèå 510 ñóòîê; íàáëþäåíèå çà ðîñòîì ïðîèçâîäÿò åæåäíåâíî. Ïðè îáíàðóæåíèè ðîñòà ïðîèçâîäÿò ìèêðîñêîïè÷åñêîå èññëåäîâàíèå. Ìîðôîëîãèÿ è õàðàêòåð ðîñòà íà ñðåäå Êèòò-Òàðîööè îòäåëüíûõ ïàòîãåííûõ àíàýðîáíûõ áàêòåðèé ïðèâåäåíû â òàáë. 5. Âûäåëåíèå ÷èñòîé êóëüòóðû ïðîèçâîäèòñÿ ïî ñëåäóþùåé ìåòîäèêå (ìåòîä ðàññåâà ïî Âåéîíó Âèíüÿëþ). Íà ìàðòåíîâñêîì áóëüîíå ãîòîâÿò ïîëóæèäêèé àãàð (0,5 %) ñ 0,5 % ãëþêîçû è ðàçëèâàþò â ïðîáèðêè ïî 9 ñì3; àãàð ïîäîãðåâàþò äî òåìïåðàòóðû 55 °Ñ è ïðîèçâîäÿò ïîñåâ â óáûâàþùåì ïîðÿäêå: â ïåðâóþ ïðîáèðêó çàñåâàþò 1 ñì3 êóëüòóðû èç áóëüîíà Êèòò-Òàðîööè, âî âòîðóþ 1 ñì3 èç ïåðâîé ïðîáèðêè, â òðåòüþ 1 ñì3 èç âòîðîé è òàê äî ïÿòîé ïðîáèðêè. 92 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 25 Òàáëèöà 5 Ìîðôîëîãèÿ Íàèìåíîâàíèå àíàýðîáíûõ áàêòåðèé Âåëè÷èíà ìèêðîáîâ, ìêì äëèíà Âîçáóäèòåëü øóìÿùåãî êàðáóíêóëà Cl. Chauvoei øèðèíà Ôîðìà ïàëî÷åê Ìàçêè èç ìàòåðèàëà 28 0,5 Ñïîðîîáðàçóþùàÿ 1,0 ïîëèìîðôíàÿ (âåðåòåíîîáðàçíàÿ, øàðîâèäíàÿ, ãðóøåâèäíàÿ), òîëñòàÿ ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè ïàëî÷êà, ðàñïîëàãàþùàÿñÿ îäèíî÷íî è ïàðàìè Àíàýðîáíûå áàêòå- 815 2,5 Îòäåëüíûå ïàëî÷ðèè ãðóïïû çëîêà÷å10 êè ñ çàêðóãëåííûìè ñòâåííîãî ðàíåâîãî êðàÿìè, íåðåäêî îòåêà: íèòè, îñîáåííî ñ Cl. septicum ïîâåðõíîñòè ïå÷åíè Cl. oedematiens Ïîäâèæíîñòü Ñïîðû Ôîðìà è ðàñïîëîæåíèå + Îâàëüíàÿ, öåíòðàëüíîå èëè ñóáêîíöåâîå ×åðåç 1620 ÷ ñëàáîå ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå, ãàçîîáðàçîâàíèå + Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáêîíöåâîå; ñâîáîäíî ëåæàùåå ×åðåç 1624 ÷ ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ñ ãàçîîáðàçîâàíèÿìè, â äàëüíåéøåì áóëüîí ïðîñâåòëÿåòñÿ è íà äíå îáðàçóåòñÿ õëîïüåâèäíûé îñàäîê Íåæíûé ðîñò ñî ñëàáûì ãàçîîáðàçîâàíèåì, ÷åðåç 1824 ÷ áóëüîí ïðîñâåòëÿåòñÿ, íà äíå õëîïüåâèäíûé îñàäîê Îáèëüíîå ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå ñ ïîñëåäóþùèì îáðàçîâàíèåì îñàäêà, áåç ãàçîîáðàçîâàíèÿ ×åðåç 56 ÷ ïîÿâëÿåòñÿ ðàâíîìåðíîå ïîìóòíåíèå, áóðíîå ãàçîîáðàçîâàíèå, ÷åðåç 48 ÷ ñðåäà ïðîñâåòëÿåòñÿ Èíòåíñèâíîå ïîìóòíåíèå ñðåäû è ãàçîîáðàçîâàíèå, â ñòàðûõ êóëüòóðàõ äàåò îñàäîê, êîòîðûé òÿíåòñÿ â âèäå ñëèçèñòûõ íèòåé Îáèëüíûé ðîñò ñ ãàçîîáðàçîâàíèåì è íåïðèÿòíûì ãíèëîñòíûì çàïàõîì Èíòåíñèâíàÿ ìóòü, ÷åðåç 4872 ÷ íàñòóïàåò ïðîñâåòëåíèå ñðåäû. Êóëüòóðà èçäàåò çàïàõ ææåíîãî ðîãà Ïîìóòíåíèå ñðåäû, ãàçîîáðàçîâàíèå, êóëüòóðà èçäàåò çàïàõ ïðîãîðêëîãî ìàñëà Òèïà À è  510 0,8 Êðóïíàÿ ïîëèìîð1,0 ôíàÿ ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè ïàëî÷êà + Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå Cl. histolyticum 25 + Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå (ôîðìà èãîëüíîãî óøêà) Cl. perfringens 48 Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå Cl. sordelii 24 + Îâàëüíàÿ, ðàñïîëàãàåòñÿ ê êîíöàì Cl. sporogenes 37 0,8 Ïàëî÷êè ñ çàêðóã1,1 ëåííûìè êîíöàìè, áûñòðî îáðàçóþò ñïîðû Âîçáóäèòåëü ñòîëá- 310 0,4 Ïàëî÷êè ñ çàêðóãíÿêà 0,8 ëåííûìè êîíöàìè Cl. tetani + Îâàëüíàÿ; öåíòðàëüíîå èëè ñóáòåðìèíàëüíîå + Êðóãëàÿ; êîíöåâîå â âèäå áàðàáàííîé ïàëî÷êè À, Â, Ñ, D, E, F 2,6 0,3 Òîëñòàÿ ïàëî÷êà ñ (âîçáóäèòåëü áîòóëèç- 10 0,8 çàêðóãëåííûìè êîíìà) öàìè Cl. botulinum + Îâàëüíàÿ; ñóáòåðìèíàëüíîå («òåííèñíàÿ ðàêåòêà»), ðåæå öåíòðàëüíîå 0,5 Òîíêèå ïàëî÷êè ñ 0,8 çàêðóãëåííûìè êîíöàìè; ðàñïîëàãàþòñÿ îäèíî÷íî, ïàðàìè èëè öåïî÷êàìè 1,0 Òîëñòàÿ ïàëî÷êà ñî 1,5 ñëåãêà çàêðóãëåííûìè îáðóáëåííûìè êîíöàìè.  îðãàíèçìå æèâîòíîãî îáðàçóåò êàïñóëó 1,0 Ïîëèìîðôíàÿ ïà1,5 ëî÷êà ñ çàêðóãëåííûìè êîíöàìè, ðàñïîëîæåíû ïî 23 ÷ëåíèêà, âñòðå÷àþòñÿ öåïî÷êè è íèòè 93 Õàðàêòåð ðîñòà íà ñðåäå Êèòò-Òàðîööè Ñ. 26 ÃÎÑÒ 2123775 Ïðîäîëæåíèå Ìîðôîëîãèÿ Íàèìåíîâàíèå àíàýðîáíûõ áàêòåðèé Âåëè÷èíà ìèêðîáîâ, ìêì äëèíà øèðèíà Ôîðìà ïàëî÷åê Ìàçêè èç ìàòåðèàëà Âîçáóäèòåëü íåêðî0,51,0 Ïàëî÷êè è êîðîòÏîëèìîðô- êèå íèòè îáû÷íî áàêòåðèîçà íàÿ, íèòè îäèíàêîâîé òîëùèBact. necrophorum ðàçëè÷íîé íû, çåðíèñòîäëèíû, êî- îêðàøåííûå íèòè Ïîäâèæíîñòü Ñïîðû Õàðàêòåð ðîñòà íà ñðåäå Êèòò-Òàðîööè Ôîðìà è ðàñïîëîæåíèå Íå îáðàçóþò Èíòåíñèâíàÿ ìóòü, î÷åíü ñëàáîå ãàçîîáðàçîâàíèå ðîòêèå ïàëî÷êè è äàæå ôîðìû êîêêîâ Î á î ç í à ÷ å í è å: «+» ïîäâèæíû; «» íåïîäâèæíû. Ïîñëå òùàòåëüíîãî ïåðåìåøèâàíèÿ ïîëó÷åííûõ ðàçâåäåíèé êóëüòóðû èç êàæäîé ïðîáèðêè ñðåäó íàñàñûâàþò â ñòåêëÿííûå òðóáêè (äëèíîé 20 ñì è äèàìåòðîì 0,75 ñì), îäèí êîíåö êîòîðûõ çàêðûò âàòîé, à äðóãîé îòòÿíóò. Ñðåäó íàñàñûâàþò íà óðîâåíü íå áîëåå 3/4 äëèíû òðóáêè, ïîñëå ÷åãî îòòÿíóòûé êîíåö òðóáêè çàïàèâàþò (ïðè çàïàéêå, âî èçáåæàíèå ðàçáðûçãèâàíèÿ ìàòåðèàëà, íåëüçÿ äåðæàòü ïðîòèâîïîëîæíûé êîíåö çàæàòûì). Òðóáêè ñî ñðåäîé áûñòðî îñòóæàþò ïîä ñòðóåé õîëîäíîé âîäû è ïîìåùàþò â òåðìîñòàò ñ òåìïåðàòóðîé 37 °Ñ. Íà 25 ñóòêè ïîñåâû â òðóáêàõ ïðîñìàòðèâàþò è îòìå÷àþò ðîñò îòäåëüíûõ êîëîíèé. Îáû÷íî àíàýðîáíûå áàêòåðèè ðàñòóò â ãëóáîêèõ ñëîÿõ àãàðà (íèæå 1 ñì îò âåðõíåãî êðàÿ). Ïðè íàëè÷èè ãàçà ñòîëáèê àãàðà ðàçðûâàåòñÿ.  ìåñòàõ íàõîæäåíèÿ îòäåëüíîé êîëîíèè òðóáêó íàäïèëèâàþò, ôëàìáèðóþò íàä ïëàìåíåì è ðàçëàìûâàþò. Êîëîíèþ ñíèìàþò ïåòëåé âìåñòå ñ àãàðîì è ïåðåíîñÿò â ïðîáèðêó ñî ñðåäîé Êèòò-Òàðîööè.  ñëó÷àå íåîáõîäèìîñòè èçó÷àþò êóëüòóðíûå è áèîõèìè÷åñêèå ñâîéñòâà âûäåëåííîé ÷èñòîé êóëüòóðû. Äëÿ áèîëîãè÷åñêîé ïðîáû èñïîëüçóþò èñõîäíûé ìàòåðèàë, à òàêæå êóëüòóðó. Çàðàæåíèå îïûòíûõ æèâîòíûõ ïðîèçâîäÿò òåì æå ìàòåðèàëîì, êîòîðûé èñïîëüçóþò äëÿ áàêòåðèîëîãè÷åñêèõ ïîñåâîâ. Ïðè ïîäîçðåíèè íà ýìôèçàìàòîçíûé êàðáóíêóë çàðàæàþò âíóòðèìûøå÷íî ìîðñêóþ ñâèíêó âçâåñüþ â äîçå 0,51 ñì3, êîòîðàÿ ïîãèáàåò ÷åðåç 1696 ÷; ïðè ïîäîçðåíèè íà çëîêà÷åñòâåííûé îòåê òàêæå çàðàæàþò âíóòðèìûøå÷íî ìîðñêóþ ñâèíêó èëè ìûøü âçâåñüþ â äîçå 1 ñì3, êîòîðàÿ ïîãèáàåò ÷åðåç 1224 ÷ ïîñëå èíúåêöèè; ïðè ïîäîçðåíèè íà áðàäçîò îâåö çàðàæàþò ïîäêîæíî èëè âíóòðèìûøå÷íî ìîðñêóþ ñâèíêó, êîòîðàÿ ïîãèáàåò ÷åðåç 12 ñóòîê; ïðè ïîäîçðåíèè íà äèçåíòåðèþ ÿãíÿò è ýíòåðîòîêñåìèþ îâåö äëÿ âíóòðèìûøå÷íîãî çàðàæåíèÿ èñïîëüçóþò êðîëèêîâ èëè ìîðñêèõ ñâèíîê, êîòîðûå ïîãèáàþò â òå÷åíèå ïåðâûõ ñóòîê; ïðè ïîäîçðåíèè íà ñòîëáíÿê çàðàæàþò ôèëüòðàòîì èç êóëüòóðû â äîçå 0,50,8 ñì3 ïîäêîæíî áåëûõ ìûøåé â îáëàñòè êîðíÿ õâîñòà, æèâîòíûå ïîãèáàþò íà 34 ñóòêè; ïðè ïîäîçðåíèè íà íåêðîáàêòåðèîç çàðàæåíèå â äîçå 0,51 ñì3 êðîëèêîâ è áåëûõ ìûøåé ïðîèçâîäÿò ïîä êîæó â îáëàñòè óõà (êðîëèê) èëè æèâîòà (ìûøü). Íà ìåñòå èíúåêöèè, îñîáåííî íà óõå, ïîÿâëÿþòñÿ íåêðîçû. Æèâîòíûå ïîãèáàþò ÷åðåç 510 ñóòîê, èíîãäà îíè âûæèâàþò. Èññëåäîâàíèå íà îïðåäåëåíèå áîòóëèçìà (òîêñèíîîáðàçîâàíèå) ïðîâîäÿò íà áåëûõ ìûøàõ. Íåéòðàëèçàöèÿ òîêñèíà ïðîòèâîáîòóëèíè÷åñêîé ñûâîðîòêîé Èñïîëüçóåìûé ìàòåðèàë ïðåäâàðèòåëüíî ðàñòèðàþò â ñòóïêå ñî ñòåðèëüíûì ôèçèîëîãè÷åñêèì ðàñòâîðîì â ñîîòíîøåíèè 1:2, âûäåðæèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå 11,5 ÷ äëÿ ýêñòðàãèðîâàíèÿ òîêñèíà, çàòåì íàñòîé ôèëüòðóþò ÷åðåç âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð èëè öåíòðèôóãèðóþò ïðè 3000 îá/ìèí â òå÷åíèå 1520 ìèí. Íåéòðàëèçàöèÿ òîêñèíà: ê 0,50,8 ñì3 ôèëüòðàòà äîáàâëÿþò 0,2 ñì3 ñìåñè äèàãíîñòè÷åñêèõ ìîíîâàëåíòíûõ ïðîòèâîáîòóëèíè÷åñêèõ ñûâîðîòîê òèïîâ À, Â, Ñ, D, E è F ïî 0,04 ñì3 êàæäîãî òèïà. Ñìåñü âûäåðæèâàþò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â òå÷åíèå 30 ìèí. 94 ÃÎÑÒ 2123775 Ñ. 27 Äâóì ìûøàì ââîäÿò ïî 0,50,8 ñì3 èññëåäóåìîãî ôèëüòðàòà èëè öåíòðèôóãàòà âíóòðèáðþøèííî èëè âíóòðèâåííî (âíóòðèâåííî ââîäÿò òîëüêî öåíòðèôóãàò). Äðóãèì äâóì ìûøàì ââîäÿò ñìåñü ôèëüòðàòà è ñûâîðîòêè. Àíàëîãè÷íîå èñïûòàíèå ìîæåò áûòü ïðîâåäåíî ñ 67 ñóòî÷íîé êóëüòóðîé, âûðàùåííîé íà ïå÷åíî÷íîì áóëüîíå.  ýòîì ñëó÷àå îòñàñûâàþò ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé âåðõíèé ñëîé êóëüòóðû, ôèëüòðóþò ÷åðåç âàòíî-ìàðëåâûé ôèëüòð è äàëåå ïîñòóïàþò, êàê è ïðè èñïûòàíèè íàñòîÿ. Åñëè ìûøè, ïîëó÷èâøèå ôèëüòðàò, íåîáðàáîòàííûé ïðîòèâîáîòóëèíè÷åñêîé ñûâîðîòêîé, ïîãèáàþò, ðåçóëüòàò áèîïðîáû ïîëîæèòåëüíûé (â ìÿñå èìååòñÿ òîêñèí). Ìûøè, êîòîðûì ââîäèëàñü ñìåñü ôèëüòðàòà ñ ñûâîðîòêîé (êîíòðîëüíûå), âûæèâàþò.  ñëó÷àå ãèáåëè âñåõ ÷åòûðåõ ìûøåé ñëåäóåò ïîâòîðèòü ðåàêöèþ íåéòðàëèçàöèè ñ ýêñòðàêòàìè, ðàçâåäåííûìè â 5, 10, 20 è äàæå 100 ðàç. Ïðè îáíàðóæåíèè â èñïûòóåìîì ìàòåðèàëå áîòóëèíè÷åñêîãî òîêñèíà ñðàçó æå ñòàâÿò ðàçâåðíóòóþ ðåàêöèþ íåéòðàëèçàöèè äëÿ îïðåäåëåíèÿ òèïà òîêñèíà ñ òèïîñïåöèôè÷åñêèìè äèàãíîñòè÷åñêèìè ñûâîðîòêàìè. ÈÍÔÎÐÌÀÖÈÎÍÍÛÅ ÄÀÍÍÛÅ 1. ÐÀÇÐÀÁÎÒÀÍ È ÂÍÅÑÅÍ Ãîñóäàðñòâåííûì àãðîïðîìûøëåííûì êîìèòåòîì ÑÑÑÐ 2. ÓÒÂÅÐÆÄÅÍ È ÂÂÅÄÅÍ Â ÄÅÉÑÒÂÈÅ Ïîñòàíîâëåíèåì Ãîñóäàðñòâåííîãî êîìèòåòà ñòàíäàðòîâ Ñîâåòà Ìèíèñòðîâ ÑÑÑÐ îò 14.11.75 ¹ 3054 3. ÂÇÀÌÅÍ ÃÎÑÒ 726954 â ÷àñòè ðàçäåëà II 4. ÑÑÛËÎ×ÍÛÅ ÍÎÐÌÀÒÈÂÍÎ-ÒÅÕÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÄÎÊÓÌÅÍÒÛ Îáîçíà÷åíèå ÍÒÄ, íà êîòîðûé äàíà ññûëêà ÃÎÑÒ 17181 ÃÎÑÒ 19577 ÃÎÑÒ 24576 ÃÎÑÒ 77955 ÃÎÑÒ 102767 ÃÎÑÒ 134197 ÃÎÑÒ 177074 ÃÎÑÒ 179167 ÃÎÑÒ 249375 ÃÎÑÒ 287482 ÃÎÑÒ 316478 ÃÎÑÒ 402595 ÃÎÑÒ 415979 ÃÎÑÒ 417078 ÃÎÑÒ 419875 ÃÎÑÒ 420179 ÃÎÑÒ 420872 ÃÎÑÒ 420977 ÃÎÑÒ 423274 ÃÎÑÒ 423377 Íîìåð ïóíêòà Îáîçíà÷åíèå ÍÒÄ, íà êîòîðûé äàíà ññûëêà Íîìåð ïóíêòà 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 1.2 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 ÃÎÑÒ 432877 ÃÎÑÒ 452377 ÃÎÑÒ 554176 ÃÎÑÒ 555681 ÃÎÑÒ 583375 ÃÎÑÒ 596267 ÃÎÑÒ 603879 ÃÎÑÒ 625378 ÃÎÑÒ 625975 ÃÎÑÒ 655280 ÃÎÑÒ 667275 ÃÎÑÒ 669177 ÃÎÑÒ 670972 ÃÎÑÒ 914780 ÃÎÑÒ 928475 ÃÎÑÒ 941293 ÃÎÑÒ 1035482 ÃÎÑÒ 1129389 ÃÎÑÒ 1177376 ÃÎÑÒ 1202676 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 1.2 2.1 2.1 2.1 Îáîçíà÷åíèå ÍÒÄ, íà êîòîðûé äàíà ññûëêà Íîìåð ïóíêòà ÃÎÑÒ 1373978 ÃÎÑÒ 1380576 ÃÎÑÒ 1631787 ÃÎÑÒ 1720696 ÃÎÑÒ 1830087 ÃÎÑÒ 2001588 ÃÎÑÒ 2072975 ÃÎÑÒ 2073075 ÃÎÑÒ 2123993 ÃÎÑÒ 2124189 ÃÎÑÒ 2228076 ÃÎÑÒ 2410488 ÃÎÑÒ 2533682 ÃÎÑÒ 2570683 ÃÎÑÒ 2706886 ÎÑÒ 25113884 ÒÓ 609516984 ÒÓ 609517084 ÒÓ 609548490 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 5. Îãðàíè÷åíèå ñðîêà äåéñòâèÿ ñíÿòî ïî ïðîòîêîëó ¹ 493 Ìåæãîñóäàðñòâåííîãî Ñîâåòà ïî ñòàíäàðòèçàöèè, ìåòðîëîãèè è ñåðòèôèêàöèè (ÈÓÑ 494) 6. ÈÇÄÀÍÈÅ ñ Èçìåíåíèÿìè ¹ 1, 2, óòâåðæäåííûìè â îêòÿáðå 1981 ã., ÿíâàðå 1987 ã. (ÈÓÑ 182, 487) 95