Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ ÄÅÉÑÒÂÈÅ ÎÏÓÕÎËÅÂÛÕ ÊËÅÒÎÊ ÊÀÐÖÈÍÎÌÛ ØÅÉÊÈ ÌÀÒÊÈ ÍÀ ÒÐÎÌÁÎÖÈÒÛ ×ÅËÎÂÅÊÀ Ë.Ì. Øèøëî1, Å.Â. Øàìîâà2, Å.Í. Àëåêñàíäðîâà1, Â.È. Ïðîõîðîâà1 1 2 ÐÍÏÖ ÎÌÐ èì. Í.Í. Àëåêñàíäðîâà, ã. Ìèíñê Áåëîðóññêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò, ã. Ìèíñê Êëþ÷åâûå ñëîâà: àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ, êëåòêè ëèíèè HeLa, ìåòàñòàçèðîâàíèå, òðîìáîîáðàçîâàíèå.  ñòàòüå ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ äåéñòâèÿ êóëüòóðû îïóõîëåâûõ êëåòîê ëèíèè HeLa íà òðîìáîöèòû ÷åëîâåêà. Óñòàíîâëåíî, ÷òî êëåòêè êàðöèíîìû øåéêè ìàòêè ÷åëîâåêà â äèàïàçîíå êîíå÷íûõ êîíöåíòðàöèé 1,2×102–2,3×104 êëåòîê/ìë èíäóöèðîâàëè àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, êîòîðàÿ èìåëà êîíöåíòðà-öèîííîçàâèñèìûé õàðàêòåð. Ìèêðîñêîïè÷åñêèé àíàëèç êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè ïîêàçàë íàëè÷èå êàê ãîìîàãðåãàòîâ òðîìáîöèò-òðîìáîöèò, òàê è áîëüøèõ ãåòåðîàãðåãàòîâ òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ êëåòêà. Ïîäîáðàíû îïòèìàëüíûå óñëîâèÿ äëÿ äàëüíåéøåãî èçó÷åíèÿ ìåõàíèçìîâ HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, óñòàíîâëåíèå êîòîðûõ áóäåò ñïîñîáñòâîâàòü ðàçðàáîòêå íîâûõ ïîäõîäîâ â ëå÷åíèè îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ, íàïðàâëåííûõ íà ñíèæåíèå óðîâíÿ ìåòàñòàçèðîâàíèÿ è òðîìáîîáðàçîâàíèÿ. THE EFFECT OF UTERINE CERVIX CARCINOMA CELLS ON HUMAN PLATELETS L.M. Shishlo, E.V. Shamova, E.N. Alexandrova, V.I. Prokhorova Key words: platelet aggregation, HeLa line cells, metastasizing, thrombogenesis. The paper presents the results of investigating the effect of HeLa line tumour cells culture on human platelets. It was found that human cervical carcinoma cells in the final concentration range of 1.2×102–2.3×104 cell/ml induced platelet aggregation which was of concentration-related character. The microscopic analysis of the cellular suspension showed the presence of both platelet-platelet homoaggregates and large platelet-tumour cell heteroaggregates. The optimal settings for further investigation of HeLa-induced platelet aggregation mechanisms were selected. The determination of these mechanisms would facilitate the development of new approaches to cancer treatment targeted at reducing the level of metastasizing and thrombogenesis. ÂÂÅÄÅÍÈÅ È ññëåäîâàíèå ìåõàíèçìîâ òðîìáîîáðàçîâàíèÿ è ìåòàñòàçèðîâàíèÿ â îíêîëîãè÷åñêîé ïðàêòèêå óáåäèòåëüíî ïîêàçàëî âàæíóþ ðîëü òðîìáîöèòîâ â ýòèõ ïðîöåññàõ. Ñ îäíîé ñòîðîíû, öèðêóëÿöèÿ â êðîâåíîñíîì ðóñëå îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ áîëüøîãî êîëè÷åñòâà òðîìáîïëàñòèíîâîãî ôàêòîðà è ñïåöèôè÷åñêèõ ïðîêîàãóëÿíòîâ, àêòèâàöèÿ ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ, âëèÿíèå îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà îêàçûâàåò íåãàòèâíîå âîçäåéñòâèå íà òðîìáîöèòàðíîå çâåíî ãåìîñòàçà ïóòåì ïîâðåæäåíèÿ áåëêîâîãî ñëîÿ ìåìáðàí òðîìáîöèòîâ, è ìîæåò ñòàòü ïðè÷èíîé èõ àêòèâàöèè, ïðîâîöèðóþùåé òðîìáîãåííûå îñëîæíåíèÿ ó ýòîé ãðóïïû ïàöèåíòîâ [1–5]. Ñ äðóãîé ñòîðîíû 78 — ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî àêòèâèðîâàííûå òðîìáîöèòû ñîçäàþò áëàãîïðèÿòíûå óñëîâèÿ äëÿ ìåòàñòàçèðîâàíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê. Îïóõîëåâûå êëåòêè ïîïàäàþò â êðîâü ïðè íåêðîçå ïåðâè÷íîãî î÷àãà, à òàêæå ïðè îïåðàòèâíîì óäàëåíèè îïóõîëè. Äî 95% îïóõîëåâûõ êëåòîê, ïîïàâøèõ â êðîâîòîê, ïîãëîùàþòñÿ ìàêðîôàãàìè. Îäíàêî ïðè ïîâûøåíèè àãðåãàöèîííîé àêòèâíîñòè òðîìáîöèòîâ è òðîìáîïëàñòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïëàçìû îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ âîêðóã îïóõîëåâûõ êëåòîê îáðàçóåòñÿ òðîìáîöèòàðíî-ôèáðèíîãåííàÿ îáîëî÷êà, êîòîðàÿ çàùèùàåò èõ îò èììóííîãî íàäçîðà è óâåëè÷èâàåò âåðîÿòíîñòü ìåòàñòàçèðîâàíèÿ [6–8]. Òàêîé ãåòåðîàãðåãàò ñïîñîáåí ëåãêî ïåðåíîñèòüñÿ ñ êðîâîòîêîì è, áëàãîäàðÿ òðîìáîöèòàì, àäãåçèðîâàòü ê ýíäîòåëèþ. Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.2, ¹3 (7), 2008 Êðîìå òîãî, ôàêòîðû ðîñòà, âûäåëÿåìûå àêòèâèðîâàííûìè òðîìáîöèòàìè, ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû îïóõîëåâûìè êëåòêàìè äëÿ ðîñòà. Áîëüøèå ïî ñâîèì ðàçìåðàì àãðåãàòû òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ êëåòêà òàêæå ìîãóò ñòàòü ïðè÷èíîé çàêóïîðêè ñîñóäîâ è íàðóøåíèÿ ìèêðîöèðêóëÿöèè êðîâè. Èìåííî ïîýòîìó, èçó÷åíèå ìåõàíèçìîâ àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, èíäóöèðóåìîé îïóõîëåâûìè êëåòêàìè, ïðåäñòàâëÿåò èíòåðåñ è ÿâëÿåòñÿ íåîáõîäèìûì äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ òðîìáîãåííûõ îñëîæíåíèé è ðàñïðîñòðàíåíèÿ îïóõîëåâîãî ïðîöåññà ãåìàòîãåííûì ïóòåì. Öåëüþ íàñòîÿùåé ðàáîòû ÿâèëèñü èññëåäîâàíèå ñïîñîáíîñòè îïóõîëåâûõ êëåòîê ëèíèè HeLa (êàðöèíîìû øåéêè ìàòêè ÷åëîâåêà) àêòèâèðîâàòü òðîìáîöèòû ÷åëîâåêà è ïîäáîð îïòèìàëüíûõ óñëîâèé äëÿ äàëüíåéøåãî èçó÷åíèÿ ìåõàíèçìîâ äàííîãî ïðîöåññà. ÌÀÒÅÐÈÀËÛ È ÌÅÒÎÄÛ Ïîëó÷åíèå îòìûòûõ òðîìáîöèòîâ. Äîíîðñêóþ öèòðàòíóþ êðîâü, ïîëó÷àëè èç Ðåñïóáëèêàíñêîé ñòàíöèè ïåðåëèâàíèÿ êðîâè. Îáîãàùåííóþ òðîìáîöèòàìè ïëàçìó (ÎÒÏ) ïîëó÷àëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì êðîâè ïðè 200g â òå÷åíèå 10 ìèíóò ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. Îòìûòûå òðîìáîöèòû ïîëó÷àëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì ÎÒÏ ïðè 1200g â òå÷åíèå 3 ìèí. Ñóñïåíçèþ òðîìáîöèòîâ ïîëó÷àëè äâóêðàòíûì îòìûâàíèåì îñàäêà êëåòîê òðèñ-áóôåðîì (13,3 ìÌ Tris, 120 ìÌ NaCl, 15,4 ìÌ KCl, 6 ìÌ D-ãëþêîçà, 1,5 ìÌ ÝÄÒÀ, pH 6,9) è ñîõðàíÿëè ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå â êîíöåíòðàöèè 2,5×109 êëåòîê/ìë [9]. Ïîëó÷åíèå êóëüòóðû îïóõîëåâûõ êëåòîê. Îïóõîëåâûå êëåòêè ëèíèè HeLa, ïîëó÷àëè èç ÍÈÈ ýïèäåìèîëîãèè è ìèêðîáèîëîãèè. Êóëüòóðó êëåòîê âûðàùèâàëè ïðè òåìïåðàòóðå 37 °C â ïèòàòåëüíîé ñðåäå 199 ñ äîáàâëåíèåì 10 % ñûâîðîòêè êðîâè ïëîäîâ êîðîâû è 50 ìêã/ìë êàíàìèöèíà, êàæäûå 5–7 äíåé ïåðåñåâàëè âî ôëàêîíû ñî ñâåæåé ïèòàòåëüíîé ñðåäîé. Äëÿ èññëåäîâàíèÿ ñïîñîáíîñòè îïóõîëåâûõ êëåòîê âûçûâàòü àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ èñïîëüçîâàëè êóëüòóðó êëåòîê â ëîãàðèôìè÷åñêîé ñòàäèè ðîñòà — ÷åðåç 24 ÷àñà ïîñëå ðàññåâà. Äëÿ ïîëó÷åíèÿ êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè ìîíîñëîé êëåòîê ïðîìûâàëè 0,02%-íûì ðàñòâîðîì âåðñåíà, çàòåì èíêóáèðîâàëè â òå÷åíèå 5 ìèíóò ïðè òåìïåðàòóðå 37 °C, âñòðÿõèâàëè, äîáàâëÿëè âî ôëàêîí ñâåæóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó è ïèïåòèðîâàëè. Ïîäñ÷åò êîëè÷åñòâà êëåòîê ïðîâîäèëè â êàìåðå Ãîðÿåâà. Êîíöåíòðàöèÿ êëåòîê â ñóñïåíçèè ñîñòàâëÿëà 3,5×106/ìë, à æèçíåñïîñîáíîñòü êëåòîê, ïî êðèòåðèþ èñêëþ÷åíèÿ êðàñèòåëÿ òðèïàíîâîãî ñèíåãî (0,1 %), — íå ìåíåå 95 % [10–11]. Çàòåì êëåòêè îòìûâàëè îò ñðåäû êóëüòèâèðîâàíèÿ ôîñôàòíî-ñîëåâûì áóôåðîì, íå ñîäåðæàùèì Ñà2+, Mg2+ (10ìÌ; ðÍ 7,35) è ñîõðàíÿëè â êîíöåíòðàöèè 1,7×107 êëåòîê/ìë ïðè òåìïåðàòóðå 2–8 °Ñ. Èññëåäîâàíèå àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ. Àãðåãàöèþ òðîìáîöèòîâ, èíäóöèðîâàííóþ êëåòêàìè HeLa, èññëåäîâàëè îïòè÷åñêèì ìåòîäîì ñ ïðèìåíåíèåì àíàëèçàòîðà ÀÐ2110 íàó÷íî-ïðîèçâîäñòâåííîãî öåíòðà «Solar» [12– 13].  êþâåòó àãðåãîìåòðà âíîñèëè 30 ìêë îòìûòûõ òðîìáîöèòîâ è 340 ìêë ôîñôàòíîñîëåâîãî áóôåðà ñ Ñà2+ è Mg2+ (137 ìÌ NaCl, 2,7 ìÌ KCl, 10 ìÌ Na2HPO4/KH2PO4, 1 ìÌ CaCl2, 0,5 ìÌ MgCl2 pH 7,35), èíêóáèðîâàëè ïðè 37 °Ñ è ïåðåìåøèâàëè â òå÷åíèå 2 ìèíóò, à çàòåì äîáàâëÿëè 5 ìêë êëåòîê HåLà (1,7×104–1,7×107 êëåòîê/ìë). Ïðîöåññ àãðåãàöèè íåïðåðûâíî ðåãèñòðèðîâàëñÿ êàê èçìåíåíèå ñâåòîïðîïóñêàíèÿ êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè. Àãðåãàöèþ îöåíèâàëè ïî òðåì êðèòåðèÿì: ñòåïåíü àãðåãàöèè (ìàêñèìóì ñâåòîïðîïóñêàíèÿ, %), ëàã-ôàçà (âðåìÿ ñ ìîìåíòà äîáàâëåíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê äî íà÷àëà ïðîöåññà àãðåãàöèè, ìèí.), âèä êðèâîé (îäíîôàçíàÿ, äâóõôàçíàÿ). Ìèêðîñêîïè÷åñêèé àíàëèç. Ñôîðìèðîâàííûå êëåòî÷íûå àãðåãàòû èññëåäîâàëè ñ ïîìîùüþ îïòè÷åñêîãî ìèêðîñêîïà Olympus BX51WI (×400). Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà äàííûõ. Ðåçóëüòàòû ïðåäñòàâëåíû êàê ñðåäíåå çíà÷åíèå ± îøèáêà ñðåäíåãî äëÿ 5 íåçàâèñèìûõ ýêñïåðèìåíòîâ. ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ È ÎÁÑÓÆÄÅÍÈÅ Íà ðèñ. 1 ïðèâåäåíû òèïè÷íûå àãðåãàöèîííûå êðèâûå, ïîëó÷åííûå íàìè ïðè äîáàâëåíèè êëåòîê ÍåLa â êîíå÷íîé êîíöåíòðàöèè 1,2×102– 2,3×104 êëåòîê/ìë ê ñóñïåíçèè òðîìáîöèòîâ. Îêàçàëîñü, ÷òî â ïðèñóòñòâèè îïóõîëåâûõ êëåòîê èíäóöèðóåòñÿ àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ, êîòîðàÿ íà÷èíàåòñÿ ÷åðåç 10–14 ìèíóò (ëàã-ôàçà) ïîñëå âíåñåíèÿ êóëüòóðû êëåòîê. Ïðè÷åì ïðè óâåëè÷åíèè èõ êîíöåíòðàöèè âðåìÿ ëàã-ôàçû óìåíüøàåòñÿ, â òî âðåìÿ êàê ñòåïåíü àãðåãàöèè íåçíà÷èòåëüíî óâåëè÷èâàåòñÿ. Òàê, èçìåíåíèå êîíöåíòðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê ñ 1,2×102 äî 79 Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ Ðèñóíîê 1 – Êèíåòè÷åñêèå êðèâûå àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, àêòèâèðîâàííûõ êëåòêàìè HeLa â ðàçëè÷íûõ êîíöåíòðàöèÿõ (1 – 2,3×104, 2 – 2,3×103, 3 – 2,3×102, 4 – 1,2×102 êë/ìë) Ðèñóíîê 2 – Äâóõôàçíàÿ êðèâàÿ HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ 2,3×104 êëåòîê/ìë ïðèâåëî ê óâåëè÷åíèþ ñòåïåíè HåLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ íà 18,8 ± 4,2 %. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ïðè èñïîëüçîâàíèè êëåòîê HeLa â êîíöåíòðàöèè âûøå 2,3×104 êëåòîê/ìë, íàáëþäàëîñü ñíèæåíèå ñâåòîïðîïóñêàíèÿ è óâåëè÷åíèå ëàã-ôàçû. Ýòî îáúÿñíÿåòñÿ òåì, ÷òî òðîìáîöèòû è îïóõîëåâûå êëåòêè çíà÷èòåëüíî ðàçëè÷àþòñÿ ïî ðàçìåðàì. Óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê ïðèâîäèò ê çíà÷èòåëüíîìó ïîâûøåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè, ÷òî çàòðóäíÿåò ðåãèñòðàöèþ ïðîöåññà àãðåãàöèè îïòè÷åñêèì ìåòîäîì. Òàêèì îáðàçîì, â íàñòîÿùåé ðàáîòå âûÿâëåíî, ÷òî íàèáîëåå îïòèìàëüíûì ÿâëÿåòñÿ èñïîëüçîâàíèå êëåòîê HeLa â êîíöåíòðàöèè 1,2×102– 2,3×104 êëåòîê/ìë, ÷òî ïîçâîëÿåò èñïîëüçîâàòü äàííûé êîíöåíòðàöèîííûé äèàïàçîí äëÿ èçó÷åíèÿ àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, àêòèâèðîâàííûõ îïóõîëåâûìè êëåòêàìè. Èíòåðåñåí òîò ôàêò, ÷òî ïðè èññëåäîâàíèè ÍåLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ àãðåãàöèîííûå êðèâûå èìåëè äâóõôàçíûé õàðàêòåð, êàê ïîêàçàíî íà ðèñ. 2. Íàëè÷èå âòîðîé âîëíû àãðåãàöèè íà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ êðèâûõ ñâèäåòåëüñòâóåò î ðåàêöèè âûñâîáîæäåíèÿ èç âíóòðèêëåòî÷íûõ ãðàíóë òðîìáîöèòîâ ñîáñòâåííûõ èíäóêòîðîâ è ïîñëåäóþùåì óñèëåíèè àãðåãàöèè êëåòîê. Äëÿ äàëüíåéøåãî èññëåäîâàíèÿ ïîëó÷åííûõ êëåòî÷íûõ àãðåãàòîâ, áûë ïðîâåäåí ìèêðîñêîïè÷åñêèé àíàëèç êëåòî÷íîé ñóñïåíçèè (ðèñ. 3). Óñòàíîâëåíî, ÷òî ïðè äîáàâëåíèè êëåòîê HeLa ê ñóñïåíçèè òðîìáîöèòîâ îáðàçóþòñÿ íå òîëüêî ãîìîàãðåãàòû òðîìáîöèò-òðîìáîöèò, íî è áîëüøèå ãåòåðîàãðåãàòû òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ êëåòêà. Êëþ÷åâàÿ ðîëü òðîìáîöèòîâ â èíèöèàöèè òðîìáîîáðàçîâàíèÿ è ìåòàñòàçèðîâàíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê ó îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ óêàçûâàåò íà íåîáõîäèìîñòü èçó÷åíèÿ âîçìîæíûõ ìåõàíèçìîâ, ëåæàùèõ â îñíîâå ýòèõ ïðîöåññîâ.  êðîâåíîñíûõ ñîñóäàõ èíèöèàöèÿ òðîìáîçà ïðîèñõîäèò â ðåçóëüòàòå àäãåçèè, àêòèâàöèè è àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ. Ïðè íàðóøåíèÿõ âíóòðåííåãî ýíäîòåëèàëüíîãî ñëîÿ ñîñóäà (ïðè îïåðàòèâíûõ âìåøàòåëüñòâàõ, õðîíè÷åñêèõ çàáîëåâàíèÿõ ñîñóäîâ) òðîìáîöèòû ïðèêðåïëÿþòñÿ ê ó÷àñòêó ïîâðåæäåíèÿ, âçàèìîäåéñòâóÿ ñ êîëëàãåíîâûìè âîëîêíàìè è ôàêòîðîì Âèëëåáðàíäà. Ñâÿçûâàíèå ñ ýòèìè ñóáñòðàòàìè, à òàêæå ñ ðàçëè÷íûìè ïðîòðîìáîãåííûìè àãîíèñòàìè, âûñâîáîæäàþùèìèñÿ â ïëàçìó êðîâè áîëüíûõ ðàêîì èç îïóõîëåâûõ êëåòîê, 80 Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.2, ¹3 (7), 2008 Ðèñóíîê 3 – Ìèêðîôîòîãðàôèè òðîìáîöèòîâ è îïóõîëåâûõ êëåòîê, ïîëó÷åííûå äî (à) è ïîñëå (á) àãðåãàöèè êëåòîê (×400) ïðèâîäèò ê àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ è îáðàçîâàíèþ òðîìáîöèòàðíî-îïóõîëåâûõ àãðåãàòîâ. Àíàëèç ëèòåðàòóðíûõ äàííûõ ïîêàçûâàåò, ÷òî ñïîñîáíîñòü îïóõîëåâûõ êëåòîê îáðàçîâûâàòü àãðåãàòû ñ òðîìáîöèòàìè êîððåëèðóåò ñ èõ ìåòàñòàòè÷åñêèì ïîòåíöèàëîì è íîñèò êîíöåíòðàöèîííî-çàâèñèìûé õàðàêòåð (îò êîíöåíòðàöèè îïóõîëåâûõ êëåòîê). Ýòî ðàññìîòðåíî â ðÿäå ðàáîò â ýêñïåðèìåíòå ñ ëèíèÿìè îïóõîëåâûõ êëåòîê àäåíîêàðöèíîìû (Ñàñî-2), ôèáðîñàðêîìû (ÍÒ-1080) [14, 15].  íàñòîÿùåé ðàáîòå ïðè èçó÷åíèè ÍåLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, òàêæå óñòàíîâëåíà îáðàòíàÿ êîíöåíòðàöèîííàÿ çàâèñèìîñòü ñî âðåìåíåì ëàã-ôàçû àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ è ïðÿìàÿ ñî ñòåïåíüþ àãðåãàöèè.  íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ àãðåãàöèÿ êëåòîê èìåëà äâóõñòàäèéíûé âèä, ÷òî ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü î ñïîñîáíîñòè êëåòîê HeLa èíäóöèðîâàòü ñåêðåöèþ âíóòðèêëåòî÷íûõ ãðàíóë òðîìáîöèòîâ. Äàííûé ïðîöåññ èãðàåò âàæíóþ ðîëü â óñèëåíèè ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè òðîìáîöèòîâ, òàê êàê â ðåçóëüòàòå ñåêðåöèè èç âíóòðèêëåòî÷íûõ ãðàíóë âûñâîáîæäàþòñÿ òàêèå èíäóêòîðû àãðåãàöèè, êàê ÀÄÔ è òðîìáîêñàí À 2. Êðîìå òîãî, â ëèòåðàòóðå èìåþòñÿ äàííûå, ÷òî êëåòêè ÍeLa èíèöèèðóþò ïðîöåññ ãåíåðàöèè òðîìáèíà [16], ïîýòîìó â HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ íàðÿäó ñ ÀÄÔ è òðîìáîêñàíîì À2 âîçìîæíûì èíäóêòîðîì àêòèâàöèè òðîìáîöèòîâ ÿâëÿåòñÿ òðîìáèí. Àãîíèñòû àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, ñâÿçûâàÿñü ñ ðåöåïòîðàìè ïîâåðõíîñòè êëåòîê, çàïóñêàþò ðÿä ïðîöåññîâ âíóòðèêëåòî÷íîé ñèãíàëèçàöèè, ïðèâîäÿùèõ ê ðåîðãàíèçàöèè öèòîñêåëåòà, ýêñïðåññèè àäãåçèîííûõ ðåöåïòîðîâ è îáðàçîâàíèè ìåæêëåòî÷íûõ êîíòàêòîâ. Èçâåñòíî, ÷òî â ïðîöåññå îáðàçîâàíèÿ ãåòåðîàãðåãàòà òðîìáîöèò-îïóõîëåâàÿ êëåòêà ìîãóò ïðèíèìàòü ó÷àñòèå òàêèå àäãåçèîííûå ðåöåïòîðû êàê GPIb-IÕ-V, GPIIb/IIIa è P-ñåëåêòèí [17– 18]. Ñëåäîâàòåëüíî, èñïîëüçîâàíèå àíòàãîíèñòîâ äàííûõ ðåöåïòîðîâ, à òàêæå èíãèáèòîðîâ ôåðìåíòîâ, ó÷àñòâóþùèõ â ÀÄÔ-, òðîìáîêñàí À 2- è òðîìáèí-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ ïîçâîëèò óñòàíîâèòü ìåõàíèçìû HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ. Òàêèì îáðàçîì, îïóõîëåâûå êëåòêè ëèíèè HeLa àêòèâèðóþò ïðîöåññ àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, â ðåçóëüòàòå êîòîðîãî îáðàçóþòñÿ êàê òðîìáîöèòàðíûå, òàê è îïóõîëåâî-òðîìáîöèòàðíûå àãðåãàòû. Íàìè ïîäîáðàíû îïòèìàëüíûå óñëîâèÿ äëÿ äàëüíåéøåãî èçó÷åíèÿ ìåõàíèçìîâ HeLa-èíäóöèðîâàííîé àãðåãàöèè òðîìáîöèòîâ, óñòàíîâëåíèå êîòîðûõ ïîçâîëèò ðàçðàáîòàòü íîâûå ïîäõîäû â îíêîëîãèè, íàïðàâëåííûå íà ñíèæåíèå óðîâíÿ ìåòàñòàçèðîâàíèÿ è òðîìáîîáðàçîâàíèÿ â îðãàíèçìå îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ. Ñïèñîê èñïîëüçîâàííûõ èñòî÷íèêîâ 1. Cancer procoagulant and blood platelet activation / B. Olas [et al.] // Cancer Lett. — 2001. — Vol. 169. — P. 165–171. 2. Ñïîíòàííàÿ àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ â îöåíêå ðèñêà òðîìáîãåííûõ îñëîæíåíèé ïîñëåîïåðàöèîííîãî ïåðèîäà ïðè ðàêå ëåãêîãî / À.Í. Àôàíàñüåâà [è 81 Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ äð.] // Êëèí. ëàáîð. äèàãíîñò. — 2003. — ¹ 12. — Ñ. 42–43. 3. Increased Platelet Aggregation and Production of Platelet-Derived Microparticles after Surgery for Upper Gastrointestinal Malignancy / M.D. Masataka [et al.] // J. Surg. Res. — 2003. — Vol. 115. — P. 174–183. 4. Èçìåíåíèå êîàãóëÿöèîííûõ ñâîéñòâ êðîâè â çàâèñèìîñòè îò ðàñïðîñòðàíåííîñòè îïóõîëåâîãî ïðîöåññà ïðè ðàêå ìîëî÷íîé æåëåçû / Â.Þ. Áàðñóêîâ [è äð.] // Ñèáèðñêèé îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë. — 2007, ¹ 3. — Ñ. 73–76. 5. Òåð-Îâàíåñîâ, Ì.Ä. Òðîìáîòè÷åñêèå îñëîæíåíèÿ â îíêîëîãèè: îïûò, ðåàëèçîâàííûé íà ïðàêòèêå / Ì.Ä. Òåð-Îâàíåñîâ, À.Â. Ìàäæóãà // Ïðàêòè÷åñêàÿ îíêîëîãèÿ. — 2001. — ¹ 1. — Ñ.25–32. 6. Protection from tumor necrosis factor-mediated cytolysis by platelets / C. Philippe [et al.] // Am. J. Pathol. — 1993. — Vol. 143. — P. 1713–1723. 7. Àôàíàñüåâà, À.Í. Èññëåäîâàíèå ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè òðîìáîöèòîâ â îíêîëîãè÷åñêîé ïðàêòèêå / À.Í. Àôàíàñüåâà // Ñèáèðñêèé îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë. — 2002, ¹ 2. — Ñ. 67–68. 8. Äàíèëîâ, È.Ï. Ðîëü ãåìîñòàçà â ìåòàñòàçèðîâàíèè îïóõîëåâûõ êëåòîê / È.Ï. Äàíèëîâ // Çäðàâîîõðàíåíèå. — 2005, ¹ 8. — Ñ.21–22. 9. Ñàìàëü, À.Á. Àãðåãàöèÿ òðîìáîöèòîâ: ìåòîäû èçó÷åíèÿ è ìåõàíèçìû / À.Á. Ñàìàëü, Ñ.Í. ×åðåíêåâè÷, Í.Ô. Õìàðà. — Ìí.: Óíèâåðñèòåòñêîå, 1990. — 104 ñ. 10. Ïîë, Ä. Êóëüòóðà êëåòîê è òêàíè / Ä. Ïîë — Ïåð. ñ àíãë. Ìåäãèç, 1963 — 347ñ. 82 11. Êóëüòóðà æèâîòíûõ êëåòîê. Ìåòîäû: Ïåð. ñ àíãë. / Ïîä ðåä. Ð. Ôðåøíè. — Ì.: Ìèð, 1989 — 333ñ. 12. Ðóäåíêî, Ñ.Â. Àðòåôàêòû òðàäèöèîííîé àãðåãîìåòðèè / Ñ.Â. Ðóäåíêî // Êëèí. ëàáîð. äèàãíîñò. — 2005, ¹ 7. — Ñ. 41–46. 13. Platelet function assays / Rand M.L [et al.] // Transfus. Apher. Sci. — 2003. — Vol. 28. — P. 307–317. 14. Medina, C. Platelet Aggregation-Induced by Caco-2 Cells: Regulation by Matrix Metalloproteinase2 and Adenosine Diphosphate / C. Medina // J. Pharmacol. Exp. Ther. — 2006. — Vol. 317. — P. 739 – 745. 15. Jurasz, P. Matrix Metalloproteinase 2 in Tumor Cell-induced Platelet Aggregation: Regulation by Nitric Oxide1 / P. Jurasz [et al.] // J. Cancer Res. — 2001. — Vol. 61. — P.376–382. 16. Sheu, J.R. Triflavin, an Arg-Gly-Asp-containing peptide, inhibits tumor cell-induced platelet aggregation / J.R. Sheu [et al.] // J. Cancer Res. — 1993. —Vol. 84, ¹ 10. — P.1062–71. 17. Oleksowicz, L. Adhesive receptors expressed by tumor cells and platelets: novel targets for therapeutic anti-metastatic strategies / L. Oleksowicz, J.P. Dutcher / / Med. Oncol. — 1995. — Vol. 12, ¹ 2. — P. 95–102. 18. Jurash, P. Platelet-cancer interaction: mechanisms and pharmacology of tumour cell-induced platelet aggregation / P. Jurash [et al.] // Br. J. Pharmacol. — 2004. — Vol. 143. — P. 819–826.