Дополнительная профессиональная программа повышения квалификации «Специалист в области доклинических исследований» РЕФЕРАТ на тему: «ТРЕБОВАНИЯ К ОБЪЕМУ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ» Выполнил: Савельев С.А. Организация: АО «МБНПК «Цитомед» Санкт-Петербург 2021 Содержание Стр. Список сокращений 3 Введение 4 1. Общая токсичность 7 1.1. Токсичность при однократном введении 8 1.2. Токсичность при повторном (многократном) введении 10 1.3. Местная переносимость (местнораздражающее действие) 13 2. Специфические виды токсичности 14 2.1. Генотоксичность и мутагенность 14 2.2. Канцерогенность 14 2.3. Репродуктивная и онтогенетическая токсичность, эмбрио-, 16 фетотоксичность, тератогенность и др. 2.4. Иммунотоксичность 17 2.5. Аллергенность 18 2.6. Фототоксичность 19 3. Объем доклинических токсикологических исследований для 20 отдельных групп лекарственных препаратов 3.1. Оригинальные ЛП 20 3.2. Гибридные ЛП 21 3.3. Комбинированные ЛП 21 3.4. Воспроизведенные ЛП (генерики) 22 3.5. Гомеопатические ЛП 23 3.6. Растительные ЛП (фитопрепараты) 25 4. Оптимизация программы доклинических токсикологических 25 исследований Заключение 26 Список литературы 27 2 Список сокращений: ЛП лекарственный препарат АФС активная фармацевтическая субстанция ЖКТ желудочно-кишечный тракт КИ клиническое исследование ЛФ лекарственная форма ЛД50 полулетальная доза GLP good laboratory practice (надлежащая лабораторная практика) NOAEL no-observed-adverse-effect level (уровень воздействия на организм, при котором не наблюдается значимого неблагоприятного воздействия тестируемого вещества) ИМП инструкция по медицинскому применению ГЛС готовое лекарственное средство 3 увеличения ВВЕДЕНИЕ Неотъемлемой частью разработки любого нового лекарственного препарата (ЛП) являются доклинические токсикологические исследования. Их проведение токсических направлено на эффектов, выявление и возникающих оценку при выраженности взаимодействии фармакологического вещества с организмом лабораторных животных. Конечная цель проведения доклинических токсикологических исследований состоит в проверке биологического действия ЛП, подборе эффективных доз и режима дозирования, установления выполнимости предполагаемого клинического пути введения, выявления потенциальных рисков применения ЛП. Наличие отчетов доклинических токсикологических исследований необходимо для проведения клинических исследований с последующей государственной регистрацией ЛП. В рамках токсикологических исследований выделяют общую и специфическую токсичность. Общая токсичность включает в себя токсичность при однократном и многократном введениях, а также местная переносимость (местнораздражающее действие). Специфическая токсичность генотоксичность/мутагенность, включает в себя, концерогенность, как правило, репродуктивную и онтогенетическую токсичность, иммуннотоксичность и аллергенность. В некоторых случаях могут потребоваться исследования фототоксичности, туморогенности, лекарственной зависимости и прочих. Объем программы токсикологических исследований зависит от типа лекарственного оригинальный препарата: оригинальный биологический ЛП, ЛП химического синтеза, комбинированный ЛП, генерический/воспроизведенный ЛП, биоаналоговый ЛП, гибридный ЛП, радиофармпрепарат, иммунобиологический ЛП, гомеопатический фитопрепарат, орфанный препарат, хорошо изученный ЛП и т.д. 4 ЛП, Проведение доклинических токсикологических исследований регламентируется правилами GLP [9] и следующими нормативными документами Российской Федерации и ЕАЭС: 1. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под общ. ред. А.Н. Миронова. Часть первая. – М.: Гриф и К, 2012. – 944 с. 2. Руководство лекарственных по проведению средств доклинических исследований (Иммунобиологические лекарственные препараты) / Под общ. ред. А.Н. Миронова. Часть вторая. – М.: Гриф и К, 2012. – 536 с. 3. Федеральный закон № 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств». 4. Принципы надлежащей лабораторной практики (OECD Guide 1:1998, IDT) / Межгосударственный стандарт ГОСТ 33044-2014. – Москва: Стандартинформ, 2015. 5. Нормативные правовые акты в сфере обращения лекарственных средств в рамках Евразийского экономического союза. Том 4. Регистрация и экспертиза лекарственных средств. – М.: Ремедиум, 2017. – 544 с. 6. Фармацевтическая рекомендации. разработка: концепция Научно-практическое и практические руководство для фармацевтической отрасли / Под ред. Быковского С.Н., проф., д.х.н. Василенко И.А., проф., д.фарм.н. Деминой Н.Б., к.фарм.н. Шохина И.Е., к.х.н. Новожилова О.В., Мешковского А.П., Спицкого О.Р. – М.: Изд-во Перо, 2015. – 472 с. 7. Решение ЕЭК от 03.11.2016 № 78 «О правилах регистрации и экспертизы лекарственных средств для медицинского применения». 8. Решение ЕЭК от 03.11.2016 № 89 «Об утверждении Правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза». 5 9. Решение ЕЭК от 03.11.2016 № 81 «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств». 10.Решение ЕЭК от 26.11.2019 № 202 «Об утверждении Руководства по доклиническим исследованиям безопасности в целях проведения клинических исследований и регистрации лекарственных препаратов». 11.Рекомендация Коллегии Евразийской экономической комиссии № 10 «О Руководстве по доклиническому изучению токсичности при повторном (многократном) введении лекарственных средств для медицинского применения. 12.European Medicines documentation for Agency. mixed Guidance marketing on the non-clinical authorization applications (CPMP/SWP/799/95).2005. 13.ICH M3(R2) Guidance on nonclinical safety studies for the human clinical trials and marketing authorization for pharmaceuticals, 2009. 14.Приказ МЗ РФ № 558н «Об утверждении Правил проведения экспертизы лекарственных средств для медицинского применения и особенности препаратов экспертизы для лекарственных препаратов, отдельных медицинского препаратов, видов лекарственных применения (референтных воспроизведенных лекарственных биологических лекарственных препаратов, биоаналоговых (биоподобных) лекарственных препаратов (биоаналогов), гомеопатических лекарственных препаратов, лекарственных растительных препаратов, комбинаций лекарственных препаратов), форм заключений комиссии экспертов». При создании программы проведения доклинических токсикологических исследований необходим дифференцированный подход для того, чтобы, с одной стороны, выполнить необходимый объем исследований, гарантирующий безопасность применения ЛП и, с другой 6 стороны, оптимизировать программу с целью исключения проведения повторных и излишних исследований. В целом необходимо при планировании следовать принципу токсикологических по 3R исследований использованию животных (replacement, reduction, refinement): замена высокоорганизованных животных низкоорганизованными или использование альтернативных методов исследования (тканевые культуры in vitro, компьютерное моделирование in silico), сокращение количества животных без ущерба для научного результата и минимизация стресса для животных [6]. Научно обоснованное поэтапное описание всех планируемых видов доклинических токсикологических регламентирующих документов исследований и специфики на основании отдельно взятого лекарственного средства является залогом успешной регистрации ЛП. 1. ОБЩАЯ ТОКСИЧНОСТЬ Целью изучения общетоксических свойств ЛП является определение органов-мишеней токсического воздействия, определение диапазона токсических доз, дозы NOAEL. При исследовании общетоксического действия решаются следующие задачи: А) выявляются переносимые и токсические дозы активной организма, наиболее фармацевтической субстанции (АФС); Б) устанавливаются органы и системы чувствительные к изучаемой АФС, определяется характер и степень патологических изменений; В) определяется зависимость токсических эффектов от дозы и длительности применения АФС и обратимость патологических изменений. Токсикологические исследования обязательны для АФС оригинального ЛП и всех лекарственных форм (ЛФ) на его основе. При комбинации нескольких АФС в одной ЛФ (фиксированная комбинация) изучают токсичность в целом и каждого ингредиента в отдельности, если он 7 не был ранее разрешен для применения в медицинской практике. При изменении способа получения АФС или ЛФ проводится повторная токсикологическая оценка на одном наиболее чувствительном виде животных. Токсикологические исследования проводят на здоровых половозрелых животных, полученных из сертифицированных питомников и прошедших карантин в течение 10-14 дней. Используют несколько видов животных (мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, мини-пиги и обезьяны), причем наряду с грызунами обязательно использовать не грызунов. Токсикологические исследования проводят на животных обоего пола одного возраста, разброс по исходной массе не должен превышать ±10%. Условия проведения токсикологических исследований могут отличаться от описанных выше. Например, согласно ГОСТ 32519-2013 (OECD, Test №452:2008, IDT) «Изучение хронической токсичности при внутрижелудочном поступлении» отклонения массы животных не должны превышать ±20% от средней массы особей обоего пола, а предпочтительной тест-системой выступают грызуны (мыши и крысы). 1.1. Токсичность при однократном введении Острая токсичность – токсикометрическая характеристика вещества, выражающая его способность вызывать гибель животных при однократном введении или при введении через короткие (не более 6 ч) интервалы времени в течение суток. Основной параметр острой токсичности ЛД50, используется для определения класса опасности вещества по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности», ГОСТ 326442014 «Острая пероральная токсичность – метод определения класса острой токсичности» (OECD, Test №423:2001, IDT). Целью является определение переносимых, токсических и летальных доз АФС и причин наступления гибели животных с анализом клинической картины интоксикации. 8 Острая токсичность изучается на нескольких видах животных (обычно двух), обязательно берут тот вид, на котором была показана специфическая фармакологическая активность вещества, и которые будут использоваться при исследовании хронической токсичности. Исследование на самцах и самках проводят раздельно, минимальный размер группы 5-6 особей грызунов, 3-5 особей не грызунов (собаки, кролики). Полученные данные должны адекватно обеспечить возможность вычисления ЛД50. Токсичность АФС исследуют при нескольких путях введения, причем обязательно используется тот путь, при котором была показана специфическая фармакологическая активность вещества, и путь, который предполагается для клинического применения. АФС, предназначенные для системного введения, вводят перорально и парентерально (внутрибрюшинно, если они не растворимы в воде, внутривенно и подкожно, если они растворимы). Общая продолжительность наблюдения за животными при исследовании острой токсичности должна составлять не менее 14 дней, причем в первый день после введения животные должны находиться под непрерывным наблюдением. Ранее токсичность при однократном введении (острая токсичность) входила в список обязательных для проведения токсикологических исследований. В настоящее время не требуется проводить самостоятельное исследование, т.к. сведения о дозолимитирующей токсичности при краткосрочном введении могут быть получены в рамках исследования при многократном введении. Также определение летальности/ЛД50 также не является обязательной конечной точкой. Так, согласно Решению ЕЭК № 202 при наличии сведений об острой токсичности однократным из других введением исследований, проводить отдельные не исследования требуется. с Исследования, предоставляющие сведения об острой токсичности, допускается ограничить только клиническим способом введения; эти данные допускается получить из не-GLP-исследований, если клиническое 9 введение обосновано соответствующими GLP-исследованиями токсичности с многократным введением. 1.2. Токсичность при повторном (многократном) введении Цель – характеристика повреждающего действия АФС при его длительном введении, выявление наиболее чувствительных органов и систем организма, а также возможности обратимости вызываемых повреждений. Продолжительность введения АФС при изучении хронической токсичности зависит от предполагаемой длительности его применения в клинике, планируемой фазы КИ и видовой принадлежности лабораторных животных (табл.1). Табл.1. Продолжительность введения фармакологического вещества при изучении хронической токсичности [3]. Планируемая длительность применения препарата у человека Длительность введения фармакологического вещества животным 5-7 дней 14 дней 1 месяц 2-4 месяца 6-12 месяцев Однократное введение 2-6 дней 7-14 дней 15-30 дней 1-6 месяцев С другой стороны, согласно ГОСТ 32519-2013 (OECD, Test №452:2008, IDT) «Изучение хронической токсичности при внутрижелудочном поступлении» общая продолжительность исследования при многократном введении всегда должна составлять 12 месяцев. Предполагается, что за этот период будут очевидны любые проявления кумулятивной токсичности, не смешиваясь при этом с проявлениями возрастных изменений. Однако такие длительные исследования не всегда могут понадобиться. Поэтому можно начать с 28-дневного теста согласно ГОСТ 32641-2014 (OECD, Test №407:2008, IDT) «Определение токсичности при повторном/многократном пероральном поступлении вещества на грызунах. 28-дневный тест», а по его результатам решить вопрос о необходимости проведения дальнейшего, 10 более долгосрочного исследования. Такое исследование также может предоставить информацию, касающуюся подбора концентрации вещества для более долгосрочного исследования. Данные 28-дневного теста должны позволить характеризовать токсичность тестируемого вещества с указанием зависимости ответной реакции от дозы и определить уровень отсутствия наблюдаемого вредного воздействия (NOAEL). Хроническую токсичность изучают не менее чем на двух видах животных. Желательно использовать животных, на которых были получены сведения о специфической фармакологической активности вещества. Изучение хронической токсичности проводится на крысах, кроликах и/или собаках. Группы животных формируют из самок и самцов. Путь введения АФС должен соответствовать рекомендованному для КИ. Хроническая токсичность АФС при его системном применении исследуют в 2-3 дозах. АФС, предназначенные для ежедневного применения у человека, вводят животным 7 дней в неделю. При изучении хронической токсичности нового вещества рекомендуется использовать три дозы вещества. Минимальная доза ЛП может быть близкой к терапевтической дозе для животных или человека. Максимальная доза должна вызывать симптомы интоксикации, чтобы можно было выявить органы и системы организма наиболее чувствительные к изучаемому веществу. Третья доза выбирается с учетом возможности установить терапевтическую широту ЛП. Наблюдения за животными проводят ежедневно в течение всего периода исследования. Ранее исследования токсичности при многократном введении (субхроническая или подострая и хроническая токсичность) должны были быть завершены до начала клинических исследований. Сейчас таких требований нет. Предусмотрена возможность поэтапного проведения исследований. Так, согласно Решению ЕЭК № 202, исследования токсичности с многократным введением на двух видах животных (один из 11 которых негрызуны) с минимальной продолжительностью в две недели (табл.2), как правило, достаточны для обоснования всех КИ разработки продолжительностью до 2 недель. КИ большей продолжительности следует обосновывать исследованиями токсичности с многократным введением, по меньшей мере, эквивалентной длительности. 6-месячные исследования на грызунах и 9-месячные исследования на негрызунах, как правило, обосновывают дозирование в КИ, превышающее 6 месяцев. Табл.2. Рекомендуемая продолжительность исследований с многократным введением, необходимых для обоснования проведения КИ. Максимальная продолжительность КИ До 2 недель От 2 недель до 6 месяцев >6 месяцев Рекомендуемая минимальная продолжительность исследований токсичности с многократным введением для обоснования КИ Грызуны Негрызуны 2 недели 2 недели Такая же, как в КИ Такая же, как в КИ 6 месяцев 9 месяцев Продолжительность исследований токсичности с многократным введением, необходимых для обоснования регистрации приведена в табл. 3. Табл.3. Рекомендуемая продолжительность исследований с многократным введением, необходимых для обоснования регистрации. Продолжительность применения к показанию До 2 недель >2 недель до 1 месяца >1 месяца до 3 месяцев >3 месяцев Грызуны Негрызуны 1 месяц 3 месяца 6 месяцев 6 месяцев 1 месяц 3 месяца 6 месяцев 9 месяцев Правила ЕАЭС рекомендуют проводить 2 исследования: краткосрочное (продолжительность 2-4 недели) и долгосрочное. Причем продолжительность долгосрочного зависит от продолжительности клинического применения ЛП. Цель в данном случае – экспериментальное определение и описание потенциальных нежелательных явлений, которые должны быть учтены при проведении КИ. 12 1.3. Местная переносимость (местнораздражающее действие) В отечественной практике местная переносимость исследуется в рамках изучения общетоксических свойств, тогда как в других странах она является параметром специфической токсичности [2]. Не все ЛП требуют проведения отдельного исследования местной переносимости, например для пероральных ЛП, поскольку оценка влияния на слизистую оболочку ЖКТ в обязательном порядке осуществляется в рамках исследования общетоксических свойств. Целесообразно проводить испытания на местную переносимость в рамках других токсикологических исследований, например исследований острой или подострой токсичности; отдельные исследования, как правило, не требуются. Препараты, разрабатываемые для офтальмологического применения или ЛП, который может попасть в глаза при его стандартном клиническом применении (мазь для лица) подлежат испытанию на офтальмопереносимость. Препараты, наносимые на кожу (в т.ч. трансдермальные пластыри) подлежат испытанию на кожную переносимость при многократном нанесении. Препараты, вводимые парентерально (внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, интратекально, подкожно) подлежат определению переносимости в месте введения. Препараты, вводимые ректально или вагинально, необходимо оценивать на предмет сенсибилизирующего потенциала. При наличии удовлетворительных литературных данных о местной переносимости отдельных веществ или составов проводить исследование не требуется. 13 2. СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ВИДЫ ТОКСИЧНОСТИ 2.1. Генотоксичность и мутагенность Цель изучения мутагенной активности – выявление возможности вещества вызывать изменения генетического аппарата зародышевых и соматических клеток, что может соответственно приводить к наследуемым патологиям и мутациям, приводящим к онкологии. Тестированию на мутагенную активность подвергаются новые оригинальные АФС/ЛП, созданные химическими, биотехнологическими, генно-инженерными и иными способами, включая полученные из сырья природного происхождения и фитопрепараты, а также новые фиксированные комбинации, планируемые для широкого клинического применения. По правилам ЕАЭС исследования генотоксичности также являются обязательными для всех новых активных веществ. Для целей обоснования проведения КИ с однократным введением, достаточно провести испытание на генные мутации, полная же батарея тестов на генотоксичность должна быть завершена до начала КИ II фазы [10]. Исследования генотоксичности не требуются для биотехнологических ЛП [8]. 2.2. Канцерогенность Заключение о канцерогенной активности ЛП проводится на основании краткосрочных скриннинговых тестов Краткосрочные скриннинговые тесты и хронических предназначены исследований. для выявления потенциальной канцерогенности. Вопрос о возможности перехода к КИ с точки зрения канцерогенной безопасности АФС может решаться на основании краткосрочных скрининговых тестов, а не после получения результатов 2-3 летних экспериментов по индукции опухолей у животных, которые в случае недостаточной эффективности АФС в клинике могут оказаться излишними. 14 При отрицательных тестах в краткосрочных скрининговых тестах дополнительная оценка потенциальной канцерогенности на млекопитающих традиционным методом необходима для ЛП, имеющих структурное сходство с известными канцерогенами или при получении неопределенных или противоречивых результатов. Новые фиксированные комбинации, планируемые для широкого клинического применения, при структурном сходстве любого из компонентов комбинации с известными канцерогенами, мутагенами или их метаболитами также подвергаются исследованию на млекопитающих. Исследование канцерогенности вещества в хроническом эксперименте предполагает введение ЛП в максимально переносимой дозе крысам в течение 24 месяцев, мышам – 18 месяцев. Умершие и животные опытных и контрольных групп по окончании введения препарата подвергаются патологоанатомическому исследованию. Если у животных опытной группы зарегистрировано статистически значимое увеличение частоты опухолевого роста по сравнению с контролем, ЛП относится к канцерогенным. При решении вопроса о тестировании ЛП на канцерогенность в хроническом эксперименте необходимо принимать во внимание, что: обязательному тестированию полученные на ЛП, канцерогенность должны рекомендуемые в подвергаться качестве впервые профилактических, контрацептивных, лечебно-косметических ЛП; для применения в детской практике, а также для лечения беременных женщин и в период лактации; для применения в течение всей жизни или длительными повторными курсами; гормональные и гормоноподобные вещества; ЛП, полученные биотехнологическими и генно-инженерными методами. Практически такие же требования выдвигаются и в правилах ЕАЭС: канцерогенный потенциал оценивается, если ЛП предназначен для длительного непрерывного или периодического (с перерывами) применения в течение всей жизни больного; при проведении исследований токсичности при многократном введении ЛП выявлены изменения с предполагаемым 15 канцерогенным потенциалом в тест-системах; активное вещество принадлежит к химическому классу или близко по структуре к известным канцерогенам либо ко-канцерогенам (если препарат относится к тому же фармакологическому (химическому) классу соединений либо имеет аналогичную структуру или если вывод сделан на основании данных исследования токсичности при многократном введении). Если ЛП предназначены для лечения онкологических заболеваний у детей или принимаются однократно или краткосрочными неповторяющимися курсами, вопрос об исследовании канцерогенности рассматривается отдельно. Тестирование на канцерогенность не обязательно для ЛП, предлагаемых для лечения злокачественных новообразований у взрослых; для лечения заболеваний, представляющих непосредственную угрозу для жизни; генерические ЛП, если имеются достаточно обоснованные сведения, подтверждающие отсутствие канцерогенных свойств аналога. По правилам ЕАЭС не нужно проводить исследования канцерогенного потенциала безусловно генотоксичных соединений. Следует иметь в виду, что отсутствие мутагенных свойств не позволяет предполагать отсутствие канцерогенности. 2.3. Репродуктивная и онтогенетическая токсичность, эмбрио-, фетотоксичность, тератогенность и др. Определение репродуктивной токсичности проводят в трех направлениях: изучение влияния вещества на репродуктивную функцию; изучение эмбрио- и фетотоксического действия в антенатальном периоде развития; выявление нарушений эмбрионального развития, проявляющихся в постнатальном периоде. Токсическое действие вещества на репродуктивную функцию оценивают по влиянию на созревание и качество сперматозоидов и яйцеклеток; полового поведения; способности животных к зачатию. 16 Эмбриотоксичность оценивают по изменению уровня эмбриональной смертности, изменению массы, кранио-каудальных размеров плодов, анатомических, гистологических, цитологических, биохимических отклонений, увеличению перинатальной смертности. С целью выявления нарушений эмбрионального развития, проявляющихся в постнатальном периоде, исследуют физическое развитие потомства; скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов в период вскармливания самкой; двигательную активность и эмоциональную реактивность, выработку условных рефлексов. Тестированию на репродуктивную токсичность подвергаются все новые оригинальные АФС. Исключение составляют вещества с противоопухолевой активностью, если их применение ограничивается только онкологической практикой и вещества, рекомендуемые для применения по жизненным показаниям. Изучению подлежит АФС и/или ЛФ. При комбинации нескольких АФС в одной ЛФ (фиксированная комбинация) изучают комбинацию в целом и каждого ингредиента в отдельности, если он не был ранее разрешен для применения в медицинской практике. 2.4. Иммунотоксичность Влияние на иммунную систему ЛП изучают при однократном введении вещества, используя в качестве критерия выработку антителообразующих клеток при иммунизации мышей Т-зависимым антигеном – эритроцитами барана. При повторном введении вещества влияние на гуморальный иммунный ответ оценивают посредством антителообразования при иммунизации животных тест-антигенами; клеточный иммунный ответ – индукцией реакции гиперчувствительности замедленного типа к корпускулярному антигену; активность фагоцитов – оценкой фагоцитарной и бактерицидной активности фагоцитирующих клеток разной локализации. На следующем этапе исследуют митогенное действие ЛП на лимфоциты, 17 поликлональную активацию различных клонов антителообразующих клеток, функциональная активность лимфоцитов, резистентность мышей к экспериментальной инфекции. Обязательному тестированию на иммунотоксичность подвергаются все новые, оригинальные АФС, особенно полученные с использованием биотехнологических методов [8], а также ЛП, для которых отсутствуют данные об изучении иммунотоксичности, рекомендуемые для применения длительными повторными курсами; для применения в детской практике, а также для лечения беременных женщин и при назначении в период лактации; для использования в качестве профилактических средств и контрацептивов. В случае если ЛП предназначен для лечения злокачественных образований и/или применяется однократно и коротким неповторяющимся курсом, вопрос о необходимости проведения иммунотоксичности рассматривается индивидуально. И, наконец, не требуется проводить тесты на иммуноксичность, если ЛП предполагается для лечения заболеваний, представляющих непосредственную угрозу для жизни; для ЛП, безопасность применения которых была изучена ранее в рамках исследования специфической активности; для генерических ЛП, если в литературе имеется достаточно обоснованных сведений экспериментального и ретроспективного характера, подтверждающих отсутствие иммунотоксических свойств генерика. 2.5. Аллергенность Аллергизирующую активность веществ изучают на моделях аллергических реакций «немедленного» или «замедленного» типа (in vivo, in vitro): кожные тесты, конъюктивальная проба, реакция общей анафилаксии, реакция непрямой дегрануляции тучных клеток, определение гистамина в крови. Учет сенсибилизирующих свойств обязателен и проводится после оценки токсичности всех новых АФС. Особенно тщательной проверке должны быть подвергнуты вещества, содержащие белковые примеси и 18 высокомолекулярные соединения. При комбинации нескольких АФС в одной ЛФ (фиксированная комбинация) изучают аллергенность комбинации в целом и каждого ингредиента в отдельности, если он не был ранее разрешен для применения в медицинской практике. При изменении состава ЛФ, технологии ее изготовления или состава вспомогательных веществ необходимо заново испытать новую комбинацию на аллергенность. При решении вопроса об исследовании неоригинального ЛП следует исходить из наличия достаточно обоснованных литературных сведений экспериментального и ретроспективного характера о способности оригинального ЛП вызывать состояние сенсибилизации и степени ее проявления. Исследования проводят на морских свинках (масса тела 250-300 г), белых крысах линии Вистар (масса тела 200-225 г), мышах линии Balb/c, C57BL/6, CBA (масса тела 18-20 г). Разброс в экспериментальных группах по исходной массе не должен превышать ±10%. Чувствительность самцов и самок к одному и тому же препарату может быть неодинакова, поэтому эксперимент проводят на животных обоего пола. Для низкомолекулярных соединений исследования аллергенности обычно не проводятся [2]. Аллергический потенциал устанавливается либо в исследованиях иммунотоксичности низкомолекулярных соединений, либо в исследованиях иммуногенности биологических веществ. 2.6. Фототоксичность Изучение фототоксичности необходимо проводить только для ЛП при смене пути введения (в случае перехода с пероральной формы на трансдермальную), для дерматологических ЛП и в случае, если такой вид токсичности ожидаем исходя из физико-химических и других свойств ЛП. Необходимо провести первоначальную оценку фототоксического потенциала, исходя из фотохимических свойств и фармакологического/ 19 химического класса. Только после этого следует проводить экспериментальную оценку фототоксического потенциала (in vitro или in vivo). 3. ОБЪЕМ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ДЛЯ ОТДЕЛЬНЫХ ГРУПП ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ Кроме описанных выше требований, объем токсикологических исследований зависит и от вида ЛП. 3.1. Оригинальные ЛП Для оригинальных ЛП, которые могут быть биологическими или химического синтеза, требуется проведение полного объема токсикологических исследований. Нет необходимости в проведении всех видов токсичности до начала КИ, поэтапное выполнение программы токсикологических исследований возможно (табл.4). Табл.4. Поэтапного проведения доклинических токсикологических исследований оригинальных ЛП. Вид ДКТИ Требование проведению исследования + Токсичность при однократном введении Токсичность при к Готовность этапу КИ К фазе I многократном введении – + К фазе I многократном введении – + после фазы III Местная переносимость + К фазе I Генотоксичность + К фазе I и III Иммунотоксичность + К фазе I Репродуктивная токсичность + К фазе I Эмбриотоксичность + К фазе III Канцерогенность + минимальный курс Токсичность при максимальный курс 20 после фазы III к 3.2. Гибридные ЛП Гибридными ЛП являются препараты, не подпадающие под определение воспроизведенного ЛП при невозможности подтверждения его биоэкивалентности с помощью исследований биодоступности, а также в случае, если в данном препарате произошли изменения действующего вещества, показаний к применению, дозировки, ЛФ или пути введения по сравнению с оригинальным препаратом. Иными словами, ЛП признается гибридным, если, в отличие от воспроизведенного ЛП, он не по всем своим значимым характеристикам совпадает с соответствующим ему референтным ЛП [2]. Для гибридных ЛП рекомендуется проводить генотоксичность, канцерогенность, репродуктивную особенно при смене пути и онтогенетическую токсичность, введения или продолжительности курса применения. 3.3. Комбинированные ЛП В отношении большинства комбинаций, содержащих два вещества, находящихся на поздней стадии разработки и имеющих достаточный клинический опыт совместного введения, в отсутствие существенных токсикологических опасений проведение доклинических исследований комбинации для обоснования проведения КИ и регистрации не требуется. В случае комбинаций, содержащих два вещества, находящихся на поздней стадии разработки, но не имеющих достаточного клинического опыта совместного применения, в отсутствие по имеющимся данным существенных токсикологических опасений, проведение доклинических исследований для обоснования проведения небольших, относительно краткосрочных КИ (например, исследований II фазы продолжительностью до 3 месяцев), как правило, не требуется. Для проведения продолжительных или крупномасштабных КИ, а также для регистрации, проведение доклинических исследований подобных комбинаций обязательно. 21 Для комбинаций веществ, находящихся на ранней стадии разработки и имеющих опыт клинического применения, с веществами, находящимися на поздней стадии разработки, не имеющих существенных токсикологических опасений, проводить токсикологические исследования комбинации для обоснования проведения КИ по проверке концепции продолжительностью до 1 месяца не требуется. КИ комбинации не должно по продолжительности превышать клинический опыт применения отдельных компонентов. Проведение КИ более поздней стадии и большей продолжительности необходимо обосновать токсикологическими исследованиями комбинации. Для комбинаций, содержащих вещества, находящиеся на ранней стадии разработки, для обоснования проведения КИ необходимо провести токсикологические исследования комбинации. Если в отношении отдельных компонентов выполнена полная программа доклинической разработки и требуется проведение токсикологического исследования комбинации для обоснования проведения КИ, продолжительность исследования комбинации должна быть эквивалентной продолжительности КИ, но не более 90 дней. 90-дневное токсикологическое исследование комбинации также обосновывает регистрацию. Доклиническое исследование комбинации следует, как правило, ограничить одним релевантным видом животных. Если в отношении отдельных компонентов полная программа доклинической разработки не выполнена, допускается провести полную токсикологическую программу исключительно в отношении комбинации при условии того, что отдельные компоненты предназначены только для комбинированного применения [10]. 3.4. Воспроизведенные ЛП (генерики) Генерический ЛП содержит АФС, идентичную запатентованному компанией-первоначальным разработчиком ЛП (референтный препарат). 22 Воспроизведенные биологические ЛП, в отличие от химических, не являются полностью идентичными оригинальному препарату и называются биосимилярами или биоаналогами. Общим принципом токсикологической оценки воспроизведенных ЛП является обязательность сравнительного исследования генерика и препарата сравнения (референтного препарата), в качестве которого может выступать прототип или идентичный прототипу препарат. До 2015 года токсикологическое изучение генериков было обязательным (требовалось проводить субхроническую токсичность с изучением местнораздражающего действия) [1]. В частности, необходимо было проводить сравнительное изучение субхронической токсичности при введении генерического ЛП и препарата сравнения в течение не менее двух недель при способе применения, указанном в ИМП, в дозах, вызывающих токсический эффект, с обязательным гистологическим исследованием внутренних органов и области введения препарата. Рекомендовалось также проведение сравнительного исследования острой токсичности генерического и референтного ЛП на одном виде животных при способе введения, указанном в ИМП. Считалось, что такие исследования позволяют увидеть изменения структуры внутренних органов, что невозможно при оценке биоэквивалентности. В настоящее время такого требования нет [2], а вместо собственных результатов доклинических токсикологических исследований предоставляется обзор литературы [5]. 3.5. Гомеопатические ЛП Согласно решению ЕЭК № 78 «О правилах регистрации и экспертизы лекарственных гомеопатических средств ЛП для медицинского (матричных настоек, применения» тритураций для новых и других компонентов), не указанных в фармакопеях и монографиях: обязательно предоставляются данные токсикологических исследований, обоснование подбора различных дозировок [7]. 23 Необходимо изучить токсичность ГЛС и рассмотреть возможность отдельного изучения АФС, вспомогательных веществ, дополнительных веществ и всех производственных наблюдений может превышать стандартных токсикологических примесей. Продолжительность продолжительность исследованиях, наблюдений поэтому в необходимо учитывать предполагаемый жизненный цикл ЛП. Стандартные исследования канцерогенности и генотоксичности не требуются, за исключением туморогенного потенциала ГЛС. Необходимо изучить иммуногенный и иммунотоксический потенциал. В отношении клеточных ЛП, содержащих клетки животных, необходимо изучить обусловленные ими вопросы безопасности, например, риск передачи человеку ксеногенных патогенов. С другой стороны, при регистрации гомеопатических препаратов, имеющих подтвержденный многолетний опыт применения и в состав которых входят АФС, включенные в фармакопеи, их безопасность может быть подтверждена данными научной литературы об использовании в гомеопатии и обоснованием выбора дозировок гомеопатических субстанций. При этом не требуется предоставления результатов собственных доклинических исследований. Показано, что объективным критерием безопасности гомеопатических ЛП является оценка дозы действующих веществ с учетом первого безопасного разведения гомеопатических субстанций. Оптимальным вариантом обоснования безопасности гомеопатических ЛП является определение первого безопасного разведения по результатам полноценного гомеопатической изучения субстанции. токсических Гарантированная свойств безопасность гомеопатических ЛП, содержащих разведение гомеопатических субстанций от D24 (C12) и выше, позволяет не проводить доклинические токсикологические исследования любых субстанций, в том числе не имеющих установленных токсикологических характеристик [11]. 24 3.6. Растительные ЛП (фитопрепараты) Отличительной особенностью фитопрепаратов является то, что используемое для их производства растительное сырье характеризуется непостоянством состава. В составе растений может содержаться большое количество активных нежелательные компонентов, реакции при их которые могут неправильном спровоцировать применении. В РФ доклинические токсикологические исследования обязательны для всех новых ЛП растительного происхождения, независимо от источника и способа получения, а также для препаратов с измененным количественным и качественным составом, в том числе вспомогательных веществ, и для новых ЛФ [4]. Объем таких исследований включает изучение общетоксического действия, а также специальных видов токсичности: аллергенность, иммунотоксичность, мутагенность и репродуктивная токсичность. ОПТИМИЗАЦИЯ 4. ПРОГРАММЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ Рассмотрим способ оптимизации программы доклинических токсикологических исследований на примере. Допустим, нужно провести токсикологическое исследование при многократном введении (28 дней + 14 дней отсроченного наблюдения) с оценкой местной переносимости на 80 крысах. Кроме этого в программу исследований должна входить оценка аллергизирующего действия в трех тестах (160 животных), иммунотоксичности (180 животных), генотоксичности в двух тестах in vivo (80 животных), оптимизации, репродуктивной дополнительно к токсичности 80 (120 животным, животных). Без используемым для исследования общетоксического действия, нужно использовать еще 540 животных. С учетом оптимизации, перечисленные выше эксперименты можно провести в рамках токсичности при многократном введении. 25 ЗАКЛЮЧЕНИЕ При регистрации ЛП в рамках ЕАЭС подача упрощенного регистрационного досье предусмотрена только для категории хорошо изученных препаратов и воспроизведенных ЛП, для остальных категорий ЛП (оригинальные, гибридные, гомеопатические, фитопрепараты и др.) проведение токсикологических исследований в той или иной мере требуется, однако объем программы токсикологических исследований будет зависеть от многих параметров, в том числе: популяция пациентов (дети, пожилые люди, беременные женщины, женщины в период лактации и т.д.); нозология (заболевания, представляющие угрозу жизни, приема (краткосрочные онкология и т.д.), длительность курса ЛП неповторяющиеся, длительные повторные курсы, в течение всей жизни); тип приема ЛП: профилактический, лечебный, лечебно- косметический, контрацептивный; степень изученности регистрируемый, фармакологического агента воспроизведенный, (впервые фиксированная комбинация, хорошо изученный); физико-химические особенности фармакологического агента (структурное сходства с известными канцерогенами, наличие примесей и т.д.); тип ЛП: оригинальный, воспроизведенный, растительный, гомеопатический и т.д. При правильном и грамотном научном обосновании причин, по которым не возможно или не целесообразно предоставить полную информацию о доклинических токсикологических 26 исследованиях, обязательная программа токсикологических исследований может быть существенно сокращена. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Березовская И.В., Гуськова Т.А., Дурнев А.Д. (2011) Методические рекомендации по изучению безопасности воспроизведенных лекарственных препаратов // Биомедицина, 3: 78-80. 2. Васильев А.Н., Ниязов Р.Р., Гавришина Е.В., Драницына М.А., Куличев Д.А. (2017) Проблемы планирования и проведения доклинических исследований в Российской Федерации // Ремедиум, 9: 6 – 18. 3. Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. Издание второе дополненное. – М.: МДВ, 2008. – 196 с. 4. Крепкова Л.В. (2011) Современные подходы к доклинической оценке безопасности лекарственных средств растительного происхождения // Биомедицина, 4: 150-152. 5. Мильчаков К.С. (2018) Роль обзора научных работ в регистрации воспроизведенного лекарственного средства на территории Российской Федерации и зоне ЕАЭС // Разработка и регистрация лекарственных средств, 4(25): 99-105. 6. Промышленная фармация. Путь создания продукта: монография / Ж.И. Аладышева, В.В. Береговых, Н.Б. Демина [и др.]; под ред. А.Л. Хохлова и Н.В. Пятигорской. – М.: 2019. – 394 с. 7. Решение ЕЭК от 03.11.2016 № 78 «О правилах регистрации и экспертизы лекарственных средств для медицинского применения». 8. Решение ЕЭК от 03.11.2016 № 89 «Об утверждении Правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза». 9. Решение ЕЭК от 03.11.2016 № 81 «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики Евразийского экономического союза в сфере обращения лекарственных средств». 27 10.Решение ЕЭК от 26.11.2019 № 202 «Об утверждении Руководства по доклиническим исследованиям безопасности в целях проведения клинических исследований и регистрации лекарственных препаратов». 11.Сюбаев Р.Д., Енгалычева Г.Н., Горячев Д.В. (2019) Обоснование безопасности гомеопатических лекарственных средств в регистрационном досье // Безопасность и риск фармакотерапии, 7(4): 200-2015. 28
