Тест-система для экспрессного количественного определения токсичности воды с помощью люминесцентного бактериального теста (Биосенсор Эколюм-10) Номер по каталогу ИФ 21-01 ТУ 6-09-20-236-01 Опасность загрязнения воды определяется уровнем ее возможного отрицательного влияния на контактирующие среды, пищевые продукты и прямо или опосредовано на человека. Результаты обследования качества воды учитывают при определении и прогнозе степени ее опасности для здоровья и условий проживания населения в населенных пунктах, технических решений по реабилитации и охране водосборных территорий, оценке эффективности санитарно-экологических мероприятий и текущего санитарного контроля над объектами, воздействующими на окружающую среду населенного пункта. Острая химическая токсичность питьевых, поверхностных пресных, грунтовых, сточных и очищенных сточных вод, атмосферных осадков в лабораторных и полевых условиях определяется с использованием в качестве тестобъекта биолюминесцентных микроорганизмов “Эколюм” и измерительного прибора серии “Биотокc”. Определение токсичности воды проводится в соответствии с Методическими рекомендациями «Методика экспрессного определения токсичности воды с помощью люминесцентного бактериального теста «Эколюм», утвержденными Департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России 08.06.2000 г. МР№ 11-1/13309, Свидетельство об аттестации методики выполнения измерений № 223.1.01.17.37/2010 от 26.04.2010. Люминесцентный бактериальный тест «Эколюм» - это биосенсоры на основе люминесцентных бактерий и препаратов бактериальной люциферазы. Измеряемым параметром является биолюминесценция в видимой области спектра. Это быстрый интегральный, чувствительный и объективный тест на загрязнение окружающей среды и токсичность образцов. Это корреляция отклика на токсичность вещества с их действием на высшие организмы, это недорогая и безвредная технология. Биосенсор интегрирует эффекты смесей токсикантов, обеспечивая общий индекс токсичности образца. Тем самым метод предпочтителен в качестве первичного теста и способен быстро ответить на вопрос: присутствуют или нет в среде токсические агенты в опасной для живого организма концентрации. Принцип метода В качестве тест-объекта используются препараты лиофилизированных люминесцентных бактерий или ферментных препаратов бактериальной люциферазы. Методика основана на определении изменения интенсивности биолюминесценции биосенсора при воздействии химических веществ, присутствующих в анализируемой пробе, по сравнению с контролем. Люминесцентные бактерии оптимальным образом сочетают в себе различные типы чувствительных структур, ответственных за генерацию биоповреждений (клеточная мембрана, цепи метаболического обмена, генетический аппарат), с экспрессностью, объективным и количественным характером отклика целостной системы на интегральное воздействие токсикантов. Уменьшение интенсивности биолюминесценции пропорционально токсическому эффекту. СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА Принцип измерения токсичности образца состоит в следующем. Перед проведением анализа на токсичность приводят биосенсор в рабочее состояние, т.е. проводят регидратацию препарата. Для этого вскрывают флакон с лиофилизированным биореагентом и добавляют 10 мл дистиллированной воды. Через 30 минут ее разводят дистиллированной водой до получения рабочей суспензии. Наливают в две кюветы от люминометра по 0.1 мл рабочей суспензии препарата «Эколюм». К контрольной кювете добавляют 0.9 мл дистиллированной воды, к опытной добавляют равный объем измеряемого образца и через 30 минут измеряют интенсивность биолюминесценции контроля и затем опыта. Измерения токсичности проводится на специализированном люминометре «Биотокс-10», который автоматически определяет интегральный индекс токсичности, усредненную величину токсичности многих измерений, ошибку измерения, представляет данные об основных токсикологических характеристиках образца и осуществляет компьютерную обработку результатов анализа с созданием банка данных. Количественные оценки тест-реакции выражаются в виде безразмерной величины индекса токсичности «T» и функциональными токсикологическими параметрами ЕС20 и ЕС50. Индекс токсичности «T», равный отношению T=100(Io-I)/Iо, где Io и I соответственно интенсивность биолюминесценции контроля и опыта при фиксированном времени экспозиции исследуемой пробы с бактериями. Методика допускает три пороговых уровня индекса токсичности: 1) допустимая степень токсичности образца: индекс токсичности T меньше 20; 2) образец токсичен: индекс T равен или больше 20 и меньше 50; 3) образец сильно токсичен: индекс токсичности T равен или более 50. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТ-СИСТЕМЫ Чувствительность теста: определение микроколичеств любого токсиканта. Время проведения анализа: 5-30 минут. Воспроизводимость результатов: ошибка не более 10%. Количество анализируемого образца: 1 мл. Количество анализов: 1 флакон рассчитан на проведение 100 анализов. Срок годности набора: 12 месяцев. Температура хранения набора: от -18оС до +4оС. Простота аналитической процедуры: небольшое число вспомогательных операций и автоматическое определение индекса токсичности пробы. Корреляция с другими биотестами: высокая корреляция отклика с действием токсикантов на животных. Малогабаритная аппаратура измерения: возможность проведения анализов в лабораторных и полевых условиях. ОСНОВНЫЕ ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ • Постоянный мониторинг питьевой воды, водоемов, почв, воздуха, материалов и изделий на токсический эффект. • Экспрессный контроль отходов и сбросов промышленных предприятий. • Контроль технологических процессов в режиме реального времени. • Определение качества новой продукции. • Медицина и фармацевтика, контроль токсических эффектов материалов, лекарственных веществ и парфюмерно-косметической продукции. • Пищевая индустрия, гарантия безопасности и качества продуктов питания. • Проведение научных исследований в области аналитической химии и экологии. Методики с использованием биосенсора «Эколюм» имеют свидетельство о метрологической аттестации (4/7-93), зарегистрированы в ФЦГиЭ Роспотребнадзора и предназначены для измерения токсичности проб воды (№ 01.021-07), почв (№ 01.019-07), воздушной среды (№ 01.020-07), материалов и изделий (№ 01.018-07), алкогольной продукции (№ 01.017-07), моющих средств ( № 01.037-08) и парфюмерно-косметической продукции (№ 01.038-08). Методика определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод и отходов тест-системой «Эколюм» зарегистрирована в Министерстве природных ресурсов РФ (ПНД Ф Т 14.1:2:3:4.11-04 16.1:2.3:3.8-04), имеет Свидетельство об аттестации методики выполнения измерений № 223.1.01.17.37/2010.