GFP
реклама
Оптимизация условий экспрессии в бактериальной системе и очистки зеленого флуоресцентного белка (TagGFP2) Крат Сергей, МБФ, гр. 4004 Руководитель: н.с. ЦНИЛ Першина А.Г. Актуальность • Оценка эффективности трансфекции и экспрессии генетического материала в клетке • Модельный белок для иммобилизации на наночастицах Fluorescent Proteins and Their Applications in Imaging Living Cells and Tissues, Chudacov et. Al, 2010 TagGFP2 • Мономер • Флуоресценция (105% от EGFP) • Не агрегирует • Не токсичен • Быстро созревает • Фотостабилен • Не требует доп.факторов созревание флуорофора http://www.evrogen.ru/protein-descriptions/TagGFP2-description.pdf Задачи исследования • Провести трансформацию E.coli XL-blue плазмидой pQE30-TagGFP2 • Оптимизировать условия экспрессии TagGFP2 в бактериальной системе • Выделить и очистить белок TagGFP2 • Разработать методику определения концентрации белка с использованием флуориметра Материалы и методы • Трансформация с использованием хлористого кальция (Маниатис, 1984) • Оптимизация экспрессии при варьировании концентрации IPTG (0.1мМ – 1мМ) и температуры (25-40°C) • Очистка белка с использованием Ni-NTA агарозы (Qiagen) • Определение концентрации флуориметрическим (VersaFluor, Bio-Rad) и спекртофотометрическим методом (Лоури, Nanodrop 2000, Thermo scientific) Планируемые результаты • Будут подобраны оптимальные условия экспрессии, выделения и очистки флуоресцентного белка TagGFP2 • Будет получен высокоочищенный препарат TagGFP2 Благодарю за внимание!
