Кузнецова Метод NASBA

реклама
Метод NASBA
в алгоритме обследований пациентов
Ирина А. Кузнецова
Специалист по продукции
Метод NASBA
Более 5 лет в клинической практике
Предназначен для выявления только живых микроорганизмов
Выявляет возбудителей в количествах недостаточных для
проведения альтернативных методов диагностики
Принцип метода NASBA –
амплификация РНК
ПЦР
Плазмиды, ДНК
рибосомальная
РНК – маркер
жизнеспособности
микроорганизма
Хромосома, ДНК
1 копия/клетка
NASBA
103-104 копий/клетка
5-20 копий/клетка
очень высокая
чувствительность метода
ПЦР и метод NASBA
Сходство с ПЦР:
• прямой метод выявления возбудителя;
• можно использовать то же самое оборудование;
• те же этапы проведения анализа, процедура получения
клинического материала
• очень высокие чувствительность и специфичность
Отличия от ПЦР:
• мишень – рибосомальная РНК
• выявляются живые возбудители (РНК деградирует при
гибели микроорганизма);
• аналитическая чувствительность выше чем у ПЦР
• контаминационная опасность ниже чем у
ПЦР(основной продукт – быстро деградирующая РНК)
Выявление методом NASBA целесообразно только
для облигатных патогенов
Возбудители ИППП,
выявление которых
является основанием для
назначения лечения
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
Основная целевая группа :
 Пациенты со стертой клинической симптоматикой
 Спорные диагностические случаи
 Ранний контроль терапии
 Беременные женщины
 Новорожденные дети
 Подготовка и ведение беременности
 Экстренная диагностика после незащищенного
полового акта
РНК очень нестабильна во
внешней среде
после гибели
микроорганизма его РНК
быстро деградирует
рРНК содержится
только в клетках живых
микроорганизмов
метод NASBA
обнаруживает только
живых возбудителей
ограничения по
хранению РНК
и
высокие требования
к условиям работы и
квалификации
лаборантов (как при
работе с ВИЧ и HCV)
Применение NASBA-real-time для контроля эрадикации возбудителя
Лица после проведенной
этиотропной терапии
(контроль лечения)
ДНК «…»
НЕ обнаружена
Эрадикация
ПЦР – «…»:
N.gonorrhoeae
C.trachomatis
T.vaginalis
M.genitalium
РНК «…»
НЕ обнаружена
≤ 1 недели – не полная элиминация
≥ 1-2 недель – рецидив инфекции
≥ 1-3 мес – рецидив инфекции-?
реинфекция-?
ДНК «…»
обнаружена
NASBAисследование
РНК «…»
обнаружена
NASBA и контроль эрадикации
микроорганизмов
• Если микроорганизмов мало, но они живые
(хроническая инфекция, неэффективное
лечение) - результат NASBA
положительный
• В случае гибели микроорганизмов
(результат аутосанации или лечения) –
результат NASBA - отрицательный даже
при избытке ДНК погибших клеток
Проблема: расхождение результатов ПЦР с
результатами «традиционных» методов
• Высокая чувствительность ПЦР →
несовпадение с результатами «традиционных
методов»
• Отсутствие специфических признаков
инфекции
• Бессимптомное или малосимптомное
течение инфекций
Как подтверждать/опровергать результаты
ПЦР в таких случаях?
Применение NASBA-real-time для анализа дискордантных результатов
Микроскопия (бак. посев) – «не обнаружено», ПЦР – «обнаружено»
Screening Tests
To Detect Chlamydia trachomatis
and Neisseria gonorrhoeae
Infections --- 2002
… Because of the greater sensitivity of NAATs, a NAAT is the only
recommended additional test to verify a result from another NAAT…
… В связи с высокой чувствительностью МАНК
верификацию их результатов следует проводить
на основе альтернативных МАНК- тестов…
Тесты с аналитической чувствительностью
меньшей, чем у метода ПЦР (ПИФ, бак. посев) не
корректно использовать для подтверждения его
результатов!
Анализ несовпадающих результатов МАНК
предполагает введение проверочного метода
• Аналитическая
чувствительность
проверочного метода
сопоставима с исследуемым
методом
• Другая мишень для
амплификации
• Другой принцип
амплификации
NASBA
NASBA-real-time
(NASBA в реальном времени)
– наиболее современная
модификация метода
• Результат в течение 4 часов
• Опасность контаминации минимальна
• Удобство протоколирования результатов
NASBA-Real-Time
Тест-системы
• «АмплиСенс Chlamydia trachomatis
РИБОТЕСТ»
• «АмплиСенс Neisseria gonorrhoeae
РИБОТЕСТ»
• «АмплиСенс Mycoplasma genitalium
РИБОТЕСТ»
• «АмплиСенс Trichomonas vaginalis
РИБОТЕСТ»
«АмплиСенс Mycoplasma
genitalium РИБОТЕСТ»
«АмплиСенс Trichomonas
vaginalis РИБОТЕСТ»
«АмплиСенс Chlamydia
trachomatis РИБОТЕСТ»
«АмплиСенс Neisseria
gonorrhoeae РИБОТЕСТ»
 Оборудование : ПЦР лаборатория,
оснащенная
амплификатором Rotor-Gene и
инкубатором
Спасибо за
внимание!
Вопросы?
Скачать