α1-кислый гликопротеид (орозомукоид) – участвует в транспорте

Запорізький державний медичний університет
Кафедра біохімії та лабораторної діагностики
Фракційний склад загального
білка. Пара- та диспротеїнемії.
Типи протеїнограм.
Лектор: к.біол.н. Горбачова С.В.
2014 – 2015 учебный год
Общий белок
Альбумины
Альбумин и преальбумин
Глобулины
α1-глобулины
α2-глобулины
β-глобулины
γ-глобулины
Альбумин
40% плазма + 60% внеклеточная жидкость
Функции:
1. Поддержание коллоидно-осмотического (онкотического)
давления
2. Транспорт эндогенных и экзогенных веществ – свободные
жирные кислоты, билирубин, стероидные гормоны, кальций,
магний, лекарственные препараты (антибиотики, сердечные
гликозиды, барбитураты)
Метод определения:
фотометрический с использованием красителя
бромкрезолового зеленого, который при взаимодействии с
альбумином в слабокислой среде образует окрашенный
комплекс синего цвета.
α1-глобулины
α1-антитрипсин – ингибитор плазменных протеаз (трипсина,
химотрипсина, плазмина)
α1-кислый гликопротеид (орозомукоид) – участвует в транспорте
половых гормонов, является острофазным белком
С-реактивный белок
α1-липопротеин – участвует в транспорте липидов
острые воспалительные процессы
повреждение и распад тканей
тяжелые деструктивные заболевания печени (циррозы,
болезнь Боткина, гепатолентикулярная дегенерация,
хронический активный гепатит)
Первичная деструктивная эмфизема легких (врожденный
дефицит α1-антитрипсина )
α2-глобулины
α2-макроглобулин – регулятор иммунной системы и участвует в
развитии инфекционных и воспалительных реакций
гаптоглобин – гликопротеин, который образует комплекс с
гемоглобином, высвобождающимся из эритроцитов при
внутрисосудистом гемолизе, и предупреждает потерю железа и
повреждение им почек
Церулоплазмин – связывает ионы меди, является оксидазой
аскорбиновой кислоты, адреналина, диоксифенилаланина (ДОФА),
активирует свободные радикалы
Аполипопротеин В – участвует в транспорте липидов
острые воспалительные процессы
повреждение и распад тканей
болезни соединительной ткани (коллагенозы)
нефротический синдром
беременность
гемолиз, гемоглобинурия
повреждение ткани поджелудочной железы - панкреатит,
СД (дефицит α2-макроглобулина)
β-глобулины
трансферрин – осуществляет транспорт железа
гемопексин – связывает гем и предотвращает его выведение
почками
Компоненты комплемента – участвуют в реакция иммунитета
β-липопротеин – участвует в транспорте холестерина и
фосфолипидов
первичные и вторичные гиперлипопротеинемии (βлипопротеин)
хронические заболевания с активацией иммунной системы:
хронические инфекции, цирроз печени, болезни
соединительной ткани, злокачественные новообразования,
аутоиммунные и аллергические заболевания (компоненты
комплемента)
абеталипопротеинемия (β-липопротеин)
атрансферинемия (дефицит трансферрина)
γ-глобулины
Иммуноглобулины G, A, M, E
заболевания с активацией иммунной системы: хронические
инфекции, заболевания печени, аутоиммунные и
аллергические заболевания (иммуноглобулины)
парапротеинемии: миеломная болезнь, макроглобулинемия
Вальденсрема, болезнь «тяжелых цепей»
длительные хронические заболевания с истощением
иммунной системы (хронические инфекции,
злокачественные новообразования, болезни печени и др.)
лечение цитостатиками, иммунодепрессантами,
глюкокортикоидами, лучевая терапия
иммунодефицитные заболевания с поражением В- и Тлимфоцитов – агаммаглобулинемия Брутона, СПИД
избыточная потеря белка (энтериты, обширные ожоги,
нефротический синдром)
Референтные значения белковых фракций
(норма для взрослых)
альбумины
α1-глобулины
α2-глобулины
β-глобулины
γ-глобулины
52 – 65%
2,5 – 5%
6 – 11%
8 – 14%
15 – 22%
Диспротеинемия – нарушение нормального
соотношения фракций белков плазмы,
встречается при многих заболеваниях,
значительно чаще, чем изменение общего
количества белка.
Диспротеинемии обладают большой
динамикой, связанной с фазой развития
процесса, его длительностью и
интенсивностью проводимых лечебных
мероприятий
Парапротеинемия - появление на электрофореграмме дополнительной
дискретной полосы, говорящей о присутствии в большом количестве
однородного (моноклонального) белка, в норме не встречающегося.
К парапротеинам относят криоглобулины, белок Бенс-Джонса
По своей химической структуре парапротеины близки к «нормальным»
иммуноглобулинам, однако в отличие от них свойствами антител не обладают.
Обнаруживаются чаще всего при миеломной болезни (плазмоцитоме),
макроглобулинемии Вальденстрема. Аналогичные процессы происходят при
«болезни иммунных комплексов» и криоглобулинемии.
Методы разделения белков плазмы
1. Высаливание нейтральными солями
2. Электрофорез на бумаге
3. Электрофорез в агаровом геле
4. Электрофорез в крахмальном или
полиакриламидном геле
5. Иммуноэлектрофорез
Высаливание
Растворимость белков сильно
зависит от концентрации солей
В дистиллированной
воде белки чаще всего
растворяются плохо, однако
их растворимость возрастает по
мере увеличения ионной силы.
При этом все большее
количество гидратированных
неорганических ионов (светлосиние кружочки) связывается с
поверхностью белка и тем самым
уменьшается степень его
агрегации (засаливание).
При высокой ионной
силе молекулы белков лишаются
гидратирующих оболочек, что
приводит к агрегации и
выпадению белка в осадок
(высаливание). Используя различие
в растворимости, можно с помощью
обычных солей, например
(NН4)2SО4, разделить
(фракционировать) смесь белков.
Иммуноэлектрофорез
Электрофорез в ПАГ в
присутствии додецилсульфата
Na
Метод основан на свойстве заряженных частиц
перемещаться под действием электрического
поля. Обычно скорость миграции зависит от
величины молекул, формы молекул и суммарного
заряда. Поэтому предварительно белки
денатурируют с тем, чтобы скорость миграции
зависела только от молекулярной массы. Для
этого анализируемую смесь обрабатывают
додецилсульфа-том натрия [ДСН (SDS)]
(C12H25OSO3Na), который представляет
собой детергент с сильно выраженными
амфифильными свойствами. Под действием ДСН
олигомерные белки диссоциируют на субъединицы и
денатурируют. Развернутые полипептидные цепи
связывают ДСН (примерно 0,4 г/г белка) и
приобретают отрицательный заряд. Для
полной денатурации в среду добавляют тиолы,
которые расщепляют дисульфидные мостики (1).
Электрофорез проводят в тонком
слое полиакриламида (2). После
завершения электрофореза, зоны белков выявляют
c помощью красителей
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
2.7
2.8
2.1 - нормальное содержание фракций.
2.2 - слабовыраженный парапротеин в гамма-фракции.
2.3 - новая полоса в альфа2-фракции: гемолиз.
2.4 - новая полоса в бета-гамма фракции: фибриноген.
2.5 - "бета-гамма блок" при циррозе печени: повышение синтеза IgA.
2.6 - увеличение бета-фракции липопротеинов при нефротическом
синдроме.
2.7 - гипергаммаглобулинемия.
2.8 - гипогаммаглобулинемия.