М. bovis
реклама
Содержание Туберкулез Историческая справка Патогенные микобактерии Морфологические свойства Культивирование Биохимические свойства Устойчивость Токсигенность Антигенная структура Патогенез Диагностика Серологическая и аллергическая диагностика Особенности иммунитета и аллергия Туберкулез КРС Клинические признаки Биопроба Паталогоанатомические изменения Дигностика Материал для исследования Туберкулез свиней и лошадей , мелкого рогатого скота и птиц Лаболаторная диагностика Биопроба Материал для исследования Туберкулез Туберкулез. Это хроническое инфекционное заболевание домашних и диких животных, в том числе птиц, а также человека. Характеризуется образованием туберкулов (бугорков) в различных органах и тканях. Наиболее восприимчивы к туберкулезу крупный рогатый скот, свиньи и куры. Туберкулез легких Туберкулез печени Историческая справка Ещё задолго до открытия природы инфекционных заболеваний предполагали, что туберкулёз — заразная болезнь. В вавилонском Кодексе Хаммурапи было закреплено право на развод с больной женой, у которой имелись симптомы лёгочного туберкулёза. В Индии, Португалии и Венеции были законы, требующие сообщать о всех подобных случаях. В 1819 г. Рене Лаэннек предложил метод аускультации легких; это имело большое значение в разработке методов диагностики туберкулеза. В середине XIX в. французский морской врач Б. Вильмен наблюдал распространение туберкулёза на корабле от одного больного матроса. Для доказательства инфекционной природы Вильмен собирал мокроту больных и пропитывал ею подстилку для морских свинок. Свинки заболевали туберкулёзом и умирали от него. Вильмен пришел к выводу, что туберкулёз – заразная («вирулентная») болезнь. Инфекционную природу туберкулёза подтвердил также патолог Ю. Конгейм в 1879 г. Он помещал кусочки органов больных туберкулёзом в переднюю камеру глаза кролика и наблюдал образование туберкулёзных бугорков. Туберкулез почек. В 1852 году Н.И. Пирогов обнаружил в туберкулёзном бугорке гигантские клетки. В 1882 г. в Германии Роберт Кох после 17 лет работы в лаборатории открыл возбудителя туберкулёза, которого назвали бациллой Коха. Он обнаружил возбудителя при микроскопическом исследовании мокроты больного туберкулёзом после окраски препарата везувином и метиленовым синим. Впоследствии он выделил чистую культуру возбудителя и вызвал ею туберкулёз у подопытных животных. В настоящее время фтизиатры пользуются термином МБТ (микобактерия туберкулёза). В 1882 году итальянский врач К. Форлани предложил метод лечения туберкулёза посредством искусственного пневмоторакса. В России этот метод впервые применил А.Н. Рубель в 1910 г. В 1882 – 1884 годах Ф. Циль и Ф. Нельсен предложили эффективный метод окраски кислотоустойчивых микобактерий туберкулёза. В 1887 г. в Эдинбурге открыт первый противотуберкулёзный диспансер. В 1890 г. Кох впервые получил туберкулин, который описал как «водноглицериновую вытяжку туберкулёзных культур». В 1912 г. чешский патологоанатом А. Гон описал обызвествленный первичный туберкулёзный очаг (очаг Гона). В 1919 г. французский микробиолог А. Кальметт и ветеринарный врач К. Герен создали вакцинный штамм микобактерии туберкулёза для противотуберкулезной вакцинации людей. Штамм был назван «бациллы Кальметта-Герена (BCG – Bacilles Calmette – Guerin). Впервые вакцина БЦЖ была введена новорождённому ребёнку в 1921 г. В 1943 г. З. Ваксман совместно с Шацу и Бужи получил стрептомицин – первый противомикробный препарат, который оказывал бактериостатическое действие на микобактерии туберкулёза. Туберкулез носовой полости. С 1954 г. во фтизиатрии начали применять парааминосалициловую кислоту (ПАСК), тибон, препараты изоникотиновой кислоты (изониазид, фтивазид, салюзид, метазид). В начале 1970-х г. началось применение рифампицина и этамбутола. К концу XX века спектр препаратов, применяемых во фтизиатрии, значительно расширился. Первые санатории. Первый шаг к лечению туберкулеза сделал в XIX веке страдающий от этой болезни студент из Силезии Герман Бремер (Hermann Brehmer, 1826– 1889). Врачи посоветовали ему сменить климат на более «здоровый», Бремер отправился в путешествие по Гималаям и вернулся выздоровевшим. После этого он занялся медициной и в 1854 году представил диссертацию с сенсационным на то время названием: «Туберкулез — излечимая болезнь». В 1859 году Бремер построил в Грёберсдорфе (Groebersdorf) заведение, в котором пациенты питались качественными продуктами и должны были подолгу находиться на свежем воздухе среди хвойных деревьев. Это заведение стало первым санаторием. Роберт Кох. Роберт Кох открыл бактерии, ответственные за заражение человека сибирской язвой, туберкулезом и холерой. Постулаты Коха (последовательность методов выявления болезнетворных бактерий) до сих пор остаются руководством к действию для современных эпидемиологов и микробиологов 6 ПАТОГЕННЫЕ МИКОБАКТЕРИИ Общая характеристика. Микобактерии — это микроорганизмы, относящиеся к классу Actinomycetales, характеризующиеся способностью к ветвлению и имеющие ряд сходных признаков с ак-тиномицетами. Микобактерии не образуют мицелия, тела имеют палочковидную форму, они ветвятся, распадаясь также на сферические формы. Микобактерии обитают в различных местах: в почве, воде, ротовой полости, обнаружены в молоке. По классификации Bergey (1990) они отнесены к роду Mycobacterium (от лат. Mycos — гриб). Микобактерии вызывают туберкулез многих видов животных, в том числе птиц, и человека, паратуберкулезный энтерит рогатого скота, некроз и поражение тканей, называемое микобактериозами. К микобактериям относятся около 50 видов. По биологической классификации микобактерии подразделяют на кислотоустойчивые сапрофиты (Mycobacterium phlei, M.smegmatis, M. lacticola), возбудители болезней хладнокровных (М. fortuitum, M. thamnopheos, M. marimum, М. poikilothermorum), возбудители болезней человека (М. tuberculosis, M. bovis, M. leprae, M. ulcerans, M. africans), возбудители болезней крупного рогатого скота (М. bovis, М. paratuberculosis), возбудители болезней птиц (М. avium), возбудители болезней грызунов (М. mikroti, M. leprae murium). Род Mycobacterium включает также атипичные микобактерии, отличающиеся от сапрофитов и истинных патогенных микробактерий рядом признаков. Размеры М. tuberculosis: длина—1,5...3,5 мкм, диаметр — 0,4 мкм; М. bovis: длина — 2,5...3 мкм, диаметр — 0,6 мкм; М. avium: длина — 5...6 мкм, диаметр — 0,3 мкм. В отличие от бактерий клеточная стенка микобактерий имеет положительный заряд и состоит из трех слоев: а) внутреннего, толщиной 0,1 нм, связанного с цитоплазматической мембраной; б) среднего, толщиной 0,05 нм; в) наружного, толщиной 0,1 нм, такого же плотного, как и внутренний. Общая толщина клеточной стенки микобактерий составляет примерно 0,25 нм. Цитоплазма. Цитоплазма характеризуется значительными морфологическими вариациями. У молодых клеток она гомогенная и вся клетка находится в состоянии тургора. В клетках более поздней степени развития цитоплазма содержит более или менее компактные уплотнения и светлые зоны. Цитоплазма — это типичная коллоидная система. Гранулы. Гранулы (зерна) представляют собой внутриклеточные тела, характерные для микобактерий. Гранулированные массы бывают двух типов: а) большие и плотные — макрогранулы; б) микрогранулы. Размеры гранул колеблются от С,3...0,4 до 1 мкм. Гранулы имеют сложный цикл развития. Вакуоли. Вакуоли обнаруживаются в молодых и старых микобактериях в виде четко ограниченных светлых зон. Имеется два типа вакуолей: а) окруженные собственной, хорошо организованной стенкой; б) отличающиеся от цитоплазмы лишь неодинаковым химическим составом. Их рассматривают как капельки водорастворимых продуктов обмена. Ядерный аппарат. В настоящее время большинство микробиологов считают, что микробная клетка микобактерий обладает ядерной системой, морфологически отличающейся от ядра клетки у высших организмов, но функционально эквивалентной ему. Митохондрии и рибосомы. Митохондрии имеют круглую или эллипсоидную структуру, но у них нет классических перегородок (крист). Рибосомы. Пользуясь аналитической центрифугой, удалось выделить фракции гомогенатов микобактерий со скоростью оседания от 70S до 50S. Было установлено, что величина Svedeberg (S) таких формаций клеток микобактерий соответствует величинам рибосомальных фракций клетки у высших растений. Химический состав Химический состав микобактерий сложен: Н20 —85,9%, соли — 2,55 %, липиды — 1/3... 1/5 от массы сухого вещества. Обнаружено три фракции липидов: фосфатиды, жиры, воски. В со став липидов входят жирные кислоты: масляная, стеариновая, а также кислоты: туберкулостеариновая и фтионовая. Белки составляют 56 % сухого вещества и носят название туберкулопротеидов; из них 47,5 % — нуклеопротеиды и 8,5 % — свободные нуклеиновые кислоты. В состав белковых фракций входят валин, фенилала-нин, пролин, тирозин. Роль и значение отдельных химических составных частей микобактерий еще окончательно не выяснены. Липидную фракцию считают носителем кислотоустойчивости и устойчивости вообще. Имеются данные о важной роли полисахаридов в иммуногенезе. Интересно отметить, что наибольшее количество липидов обнаружено у микобактерий туберкулеза человека, а наименьшее — в сапрофитных микобактериях. Важнейшую роль в патогенезе и иммуногенезе играют не отдельные составные части, взятые в той или иной комбинации, а лишь живые микобактерий туберкулеза. Белки микобактерий туберкулеза способны к стимулированию продукции макрофагов и гигантских клеток, образующих туберкулы. Культивирование. Микобактерии — факультативные аэробы, гетеротрофы. Основной источник N2 — аминокислоты (аспарагиновая, глутаминовая, аланин). Исключительно важным для роста микобактерий (лимитирующим фактором роста) является амид аспарагиновой кислоты — аспарагин. Соли аммония в комбинации с глицерином также могут быть использованы в качестве источника азота. Первое звено обмена аминокислот— дезаминирование, а выделяющийся NH3 микобактерий используют в качестве материала для синтеза аминокислот с использованием кето- и оксикислот. Источником углерода, помимо аминокислот, являются углеводы и продукты их распада в виде органических кислот. Исключительно важен для роста микобактерий глицерин (трехатомный спирт). Биохимические свойства. Ферментативная активность микобактерий весьма разнообразна. Микобактерий расщепляют липиды, обладают протеазами, способны расщеплять мочевину, производят каталазу, пероксидазу, имеют хорошо выраженные редуцирующие свойства. Ферментативная активность микобактерий. Вид микобактерий Уреаза Никотинамидаза Пиразинамидаза Ниацин М. tuberculosis + + + + М. bovis + — — — М. avium — + + — М. microti + + — + М. leprae — — — — Обозначения: «+» — положительная реакция; «—» — отрицательная реакция. Сапрофиты, патогенные виды и атипичные микобактерий дифференцируют с учетом их ферментативной активности. При этом установлено, что сапрофиты обладают более высокой окислительной способностью, чем вирулентные микобактерий. Свежевыделенные микобактерий могут размножаться лишь на полноценных питательных средах, таких как яичные, кровяные, картофельные, содержащие особые ростовые вещества (среды Сотона, Модели, Левенштейна—Йенсена, Гельберге, Финна). Размножаются микобактерий простым делением, почкованием. Патогенность. Различные виды микобактерий туберкулеза обладают способностью к миграции на разные виды животных, птиц и на человека. Отдельные виды патогенных микобактерий адаптированы к тому или иному виду животных. У крупного рогатого скота, маралов, овец, коз, свиней туберкулез вызывает М. bovis. К этому виду наиболее чувствительны кролики и морские свинки. Заболевает человек. М. avium вызывает туберкулез у кур, индеек, уток, голубей, цесарок и др. Восприимчивы домашние животные и человек. Наиболее чувствительны кролики. При заражении кроликов М. avium у них развивается септическая форма болезни. Инкубационный период в зависимости от вида животного и птицы длится от нескольких недель до нескольких лет. Доказано наличие в организме L-форм и их реверсия в истинные микобактерий. Устойчивость. Благодаря содержанию липидов, восков в клетке микобактерий туберкулеза они отличаются гидрофобностью и высокой устойчивостью к химическим реагентам (кислотам, щелочам и спиртам). Корд-фактор микобактерий туберкулеза предотвращает их фагоцитоз и бактериолиз. В высушенном состоянии микобактерий туберкулеза сохраняются годами, в воде 2 года, в почве несколько лет. Установлено размножение микобактерий во влажных природных субстратах. Низкие температуры не приводят к гибели микобактерий. •Ультрафиолетовые лучи и нагревание губительно действуют на микобактерий. Во влажных субстратах при температуре 65, 70...80 и 80...90 "С они погибают соответственно через 15, 10 и 5 мин. Микобактерий туберкулеза обладают сравнительно высокой устойчивостью к дезинфицирующим веществам (4%ный формалин разрушает возбудитель через 3 ч). Токсигенность. Микобактерий синтезируют эндотоксины (ту-беркулины). К химическим структурам микобактерий, обладающих токсичностью, относятся жирные кислоты (масляная, пальмитиновая, туберкулостеариновая), полисахариды. Токсичные вещества микобактерий приводят к распаду клеток, творожистому перерождению тканей, разрушению митохондрий. Антигенная структура. Микобактерии содержат такие антигены, как туберкулины и полисахаридобелково-липидный комплекс, который назван полным антигеном, так как лишь при его введении в организме образуются антитела. Антитела выявляют в РА, РП, РСК и др. Патогенез. После аэрогенного, алиментарного или другого проникновения в организм микобактерии попадают в лимфу, кровь и разносятся по всем органам и тканям. Размножение микобактерии туберкулеза происходит в тканях в соответствии с органотропностью возбудителя. В пораженных тканях возникает очаг воспаления и формируется первичный комплекс. Исходом первичного воспаления может быть инкапсуляция, Диагностика. Прижизненная диагностика включает аллергические исследования, серологические тесты. Для бактериологического исследования от животных берут мокроту, экссудат, молоко, фекалии, от трупов — пораженные ткани, лимфатические узлы. Бактериологическое исследование. Включает микроскопию (окраска по Цилю—Нильсену) мазковпрепаратов, обработку биоматериала реагентами (щелочь, кислота) с целью удаления сопутствующей микрофлоры, концентрацию возбудителя (центрифугирование, флотация). Культивируют посевы на специальных элективных питательных средах (картофельноглицериновая, МПГА и перечисленные выше среды). Для дифференциации патогенных, атипичных микобактерии и кислото-, щелоче- и спиртоустойчивых сапрофитов посевы выдерживают при разных температурных режимах (24, 37...38, 39...41 °С). Патогенные виды (М. tuberculosis, M. bovis, М. avium) различаются также скоростью роста, характером колоний, биохимическими свойствами и степенью патогенности по отношению к кроликам, морским свинкам и курам. Серологическая и аллергическая диагностика. РГА, РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с эритроцитами барана, нагруженными полисахаридами из туберкулезных микобактерии или туберкулином, позволяют выявить специфические антитела. Особенности иммунитета и аллергия. Врожденная резистентность к туберкулезу свойственна многим представителям животного мира («прусаки», черные тараканы, тутовый шелкопряд, бабочка павлиний глаз, из птиц — гуси, утки). Высокой резистентностью обладают козы, собаки," крысы, лошади, буйволы, ослы, зебувидный скот. В иммунитете при туберкулезе, бесспорно, ведущую роль играет генетический фактор. У однояйцевых близнецов конкордантность (сходство близнецов по исследуемому признаку) по заболеваемости составляет 65 %, у двуяйцевых — 25,6 %, у братьев и сестер — 25,6 %. В сыворотках больных туберкулезом обнаруживают агглютинины, преципитины, опсонины, хотя наличие их не отражает напряженности иммунитета. Фагоцитарная реакция. Фагоцитарная реакция также не определяет состояние невосприимчивости, так как фагоцитоз при туберкулезе нередко является незавершенным. Большое значение в устойчивости организма при туберкулезе имеют его реактивность, воспалительная реакция, гиперчувствительность замедленного типа, барьерная функция тканей и органов, приводящая к фиксированию микобактерий путем образования гранул и препятствующая их распространению в организме, а также антибактериальные вещества. В общем комплексе защиты организма определенную роль играет интерференция, которая происходит между истинными и невирулентными микобактериями, которые способны блокировать чувствительные клетки тканей и органов к вирулентным микобактериям туберкулеза. Природа туберкулиновой аллергии заключается в повышенной чувствительности организма к повторному воздействию на иммунокомпетентные клетки туберкулина. Туберкулиновая аллергия может быть в эксперименте пассивно передана целыми или разрушенными лимфоцитами от реагирующей особи. ТУБЕРКУЛЕЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Клинические признаки. Болезнь чаще всего протекает хронически, вначале бессимптомно. Зараженных животных в таких случаях можно выявить только аллергическим исследованием. Если обширные поражения вызывают нарушения жизнедеятельности организма, признаки болезни становятся заметными. При туберкулезе легких отмечают (непостоянно) повышение температуры тела до 39,5...40°С, короткий и сухой (позднее влажный) кашель. Если болезнь прогрессирует, кашель становится болезненным и частым, появляется одышка, снижаются упитанность и продуктивность. При аускультации легких устанавливают изменение перкуторного звука. Он заметно усиливается при наличии каверн. При поражении кишечника отмечают периодические расстройства его деятельности, быстро наступает истощение животного (кахексия). В случаях туберкулеза вымени пальпацией устанавливают уплотнение ткани; значительное поражение ведет к изменению конфигурации долей вымени, атрофии железистой ткани, прекращению лактации. Довольно часто отмечают только увеличение надвыменных лимфатических узлов. Пораженные поверхностные лимфатические узлы увеличены, плотные, безболезненные. Патологоанатомические изменения. Характеризуются наличием в различных органах и тканях специфических узелков (туберку лов) различной величины — от еле заметных до довольно крупных, величиной с куриное яйцо и более, особенно в легких, вымени. При разрезе в одних случаях обнаруживают гной, в других — творожистое содержимое, в третьих — обызвествление. В легких кроме туберкулов можно обнаружить каверны. При поражении кишечника на слизистой оболочке находят язвы с валикообразными краями. Особой формой туберкулеза у крупного рогатого скота является жемчужница — поражение плевры, брюшины, перикарда с образованием множества узелков с творожистым или некротическим содержимым, покрытых капсулой из фиброзной ткани. Диагностика . Бактериологический диагноз основан на микроскопии мазков-препаратов из патологического материала, выделении чистой культуры возбудителя туберкулеза и заражении лабораторных животных. Исходя из того, что туберкулез протекает преимущественно в скрытой форме (латентно), для своевременного выявления больных применяют аллергический метод диагностики при помощи аллергена туберкулина. Для бактериологического анализа направляют (при жизни животного) истечения из носа, бронхиальную слизь, молоко, особенно при увеличении надвыменных лимфатических узлов, реже мочу (200 мл). Посмертно или после убоя отправляют кусочки органов с изменениями и бронхиальные, заглоточные, средостенные, предлопаточные, надвыменные лимфатические узлы. Мазки окрашивают по Цилю—Нильсену. Получив чистую культуру микобактерий, определяют видовую принадлежность. Одним из распространенных методов дифференциации является культивирование в глицериновом бульоне с 5 % желчи. Каждый вид микобактерий растет в присутствии желчи соответствующего вида животного: М. avium — в присутствии только птичьей желчи, М. bovis — с добавлением желчи крупного рогатого скота. Наличие миколовой кислоты в клетках способствует тому, что патогенные штаммы растут на питательных средах в виде косичек, хорд. Биопробу используют для определения патогенности и дифференциации видов бактерий туберкулеза. Заражают морских свинок, кроликов и при необходимости кур, предварительно проверенных аллергическим методом для исключения спонтанного туберкулеза. Для заражения У морских свинок в положительных случаях через 2...3 нед на месте введения образуется уплотнение, затем язва, одновременно увеличиваются регионарные лимфатические узлы. Этим свинкам через 2...3 нед подкожно вводят туберкулин, что приводит к бурной генерализации процесса и гибели животных. При вскрытии из типичных туберкулов готовят мазки и делают посевы. М. bovis вызывает генерализованный туберкулезный процесс у кроликов и морских свинок. М. Для дифференциации отдельных видов микобактерий лучше заражать животных суспензией выращенных культур. Если у выделенных культур слабая вирулентность и атипичный рост, то микобактерий необходимо дифференцировать от атипичных кислотоустойчивых сапрофитов. Для этого используют следующие тесты. 1. Определение каталазной активности. В пробирку с выросшей на яичной среде культурой вносят 50%-ный раствор пергидроля в таком объеме, чтобы вся поверхность среды с культурой была покрыта раствором. С момента появления пузырьков газа учитывают результат — столбик пены измеряют в миллиметрах. Каталазной активностью обладают все кислотоустойчивые бактерии, но у сапрофитов она выражена интенсивнее. 2. Определение лекарственной устойчивости осуществляют с культурами, выращенными на питательных средах с добавлением туберкулостатических препаратов (стрептомицин, ПАСК и др.) в различных концентрациях. Вирулентные штаммы М. tuberculosis, М. bovis, как правило, чувствительны к действию этих препаратов. Между тем атипичные штаммы, кислотоустойчивые сапрофиты и М. avium обладают устойчивостью в отношении антитуберкулезных лечебных препаратов, особенно к фтивазиду и ПАСК (пара-аминосалициловой кислоте). 3. Аллергический метод применяют в хозяйстве для массовой диагностики скрытых форм туберкулезного процесса. С этой целью используют специфические препараты — туберкулин для крупного рогатого скота и отдельно для птиц. ТУБЕРКУЛЕЗ СВИНЕЙ, ЛОШАДЕЙ, МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА, ПТИЦ Туберкулез свиней регистрируют главным образом в хозяйствах, неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота и птицы. Болезнь протекает бессимптомно, но иногда можно обнаружить увеличение подчелюстных, заглоточных и шейных лимфатических узлов, а также поражения легких, кишечника, особенно при заражении возбудителем туберкулеза птиц. Животные других видов — овцы, козы, лошади — заболевают редко, и туберкулез у них обычно протекает бессимптомно. Туберкулез у птиц также протекает бессимптомно, но при генерализации инфекции появляются такие признаки заболевания, как вялость и малоподвижность, диарея, исхудание, анемичность гребня и бородки, прекращение яйцекладки. При пальпации иногда обнаруживают увеличение печени. Патологоанатомические изменения. . При туберкулезе свиней очаги поражения находят преимущественно в лимфатических узлах, у больных лошадей — в легких, у овец и коз — на серозных покровах, в легких и лимфатических узлах. Трупы павшей от туберкулеза птицы истощены, серо-белые или желто-белые очаги поражения обнаруживают преимущественно в печени, кишечнике, селезенке, реже — в легких, яичниках и других органах. Микроскопия. Микроскопия препаратов из исходного материала. Микобактерии — прямые или слегка изогнутые палочковидные клетки размером (0,2...0,6) х (1... 10) мкм, без спор, капсул и жгутиков; грам-положительные, кислото- и спиртоустойчивые. Кислотоустойчи-вость связана с присутствием в клеточной стенке липидов и ми-коловой кислоты (до 60 %). В цитоплазме располагаются кислотолабильные гранулы, состоящие в основном из метафос-фата (зерна Муха). Липиды и воскоподобные вещества придают микробной клетке гидрофобность, т. е. способность В препаратах М. tuberculosis обнаруживают в виде тонких прямых (изогнутых) палочек, М. bovis представляет собой короткие и толстые палочки, М. avium мельче остальных видов, со склонностью к полиморфизму Бактериоскопический метод отличает невысокая чувствительность: с его помощью возбудитель выявляют при концентрации микобатерий (1...5)105/мл. Более результативна люминесцентная микроскопия (окраска аурамин-родамином), благодаря которой выявляют даже незначительное количество микобактерии, которые окрашены в бело-желтый Выделение и идентификация культуры возбудителя. Микобакте-рии —аэробы, температурный оптимум 37...38 "С, рН 6,4...7. Растут медленно. Для культивирования микобактерий туберкулеза используют сложные питательные среды, содержащие глицерин, картофель, яйца, витамины. Рост бактерий стимулируют аспарагиновая кислота, альбумин, глюкоза, биотин, никотиновая кислота, соли аммония и др. Наиболее часто применяют среды Пет-раньяни, Левенштейна—Иенсена, Гельберга. Рост микобактерий бычьего вида на плотных средах чаще обнаруживают на 20...60-е сутки, человеческого вида —на 14.. 40-е сутки, птичьего — на 10...20-е сутки . М. bovis на плотных питательных средах формирует мелкие гладкие шаровидные колонии цвета слоновой кости, иногда с морщинистым сероватым налетом. На жидких средах образует пленку на поверхности сначала в виде единичных островков, позднее — сливающихся в сплошную пленку. М. tuberculosis на плотных питательных средах дает рост в виде сухого морщинистого налета кремового цвета. У колоний приподнятый центр, они крошковидные, с приятным запахом, по виду напоминают цветную капусту, плохо смачиваются водой. На жидких средах рост наблюдают на 5...7-е сутки в виде сухой морщинистой пленки, поднимающейся на края пробирок, среда остается прозрачной. На жидких средах и при внутриклеточном развитии образуется корд-фактор (трегалоза-6,6-дипиколат), способствующий сближению бактериальных клеток в микроколониях и их расположению в виде серпантинообразных кос . 1,5-месячный рост микобактерий туберкулеза птичьего типа на среде Петраньяни (штаммные № 6, 15, ЗП, 25) "Косы " из микобактерий Биопроба. Метод применяют не только для обнаружения возбудителя в исследуемом материале, но и для определения его видовой принадлежности. Биопробу ставят параллельно с культу-ральными исследованиями. Биопрепараты. Вакцина БЦЖ (BCG) представляет собой живую лиофильно высушенную культуру вакцинного штамма туберкулезных микобактерий бычьего типа. Вакцинный штамм BCG (Bacillus Calmette — Guerin) был получен в 1924 г. французскими учеными Кальметтом и Гереном путем длительного культивирования (в течение 18 лет) вирулентного штамма М. bovis на картофельно-глицериновой среде с добавлением бычьей желчи. Для приготовления противотуберкулезной вакцины штамм БЦЖ выращивают на специальных средах в течение 20 дней. Приготовленную вакцину высушивают методом лиофилизации и применяют для профилактики туберкулеза у людей (прививают всех новорожденных). В ветеринарной практике вакцину БЦЖ используют в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах для профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота.
