Наборы для ПЦР-диагностики инфекций экспрессдетектированием с помощью тест-полоски с ДНКзондами Молекулярные методы используются в качестве более быстрой альтернативы традиционным методам ввиду высокой чувствительности и скорости анализа. Часто в ПЦР-наборах используют дорогостоящие или недостаточно чувствительные системы детекции. Наборы Speed-Oligo (Vircell, Испания) используют ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение патогенов. Благодаря двойной гибридизации продуктов амплификации увеличиваются специфичность и чувствительность их детекции. Порядок работы с набором В зависимости от принятых в лаборатории автоматизированной или ручных методик пробоподготовки и модели циклера, выделение ДНК занимает от 20 мин до 1 часа, амплификация - до 1,5 час, а для детекции результатов на стрипе требуется всего 5-10 мин. Реакционная смесь для ПЦР поставляется в лиофилизованном виде, что облегчает транспортировку и хранение. Процедура включает три этапа: 1.Экстракция ДНК из исследуемого материала (с помощью коммерчески доступных наборов, приобретаемых лабораторией), 2.Специфическая амплификация; 3.Детекция ампликонов, реагенты которые входят в состав тест-набора. Тест включает внутренний контроль на отсутствие ингибиторов и правильную сборку смеси для амплификации. Для детекции используется стрип с нанесёнными ДНК-зондами. По завершении амплификации, контрольный и исследуемые ампликоны денатурируют. Продукты ПЦР взаимодействуют с комплементарными олигонуклеотидами, конъюгированными с частицами коллоидного золота на стрипе. Этот комплекс перемещается по мембране стрипа до зон с нанесёнными зондами, специфичными к контрольным и исследуемым ампликонам, где, при наличии комплементарности, происходит вторая гибридизация. Избыток конъюгата с коллоидным золотом гибридизуется в отдельной полосе (контроль конъюгата, КК). При наличии гибридизации на мембране появляется полоса красного цвета. Этот метод более чувствительнее и специфичнее чем традиционная ПЦР. Двойная гибридизация дискриминирует продукты специфической и неспецифической амплификации. В качестве исследуемого материала используются клинические образцы и образцы культуры (мультиплексный анализ микобактерий). Интерпретация результатов: Полоса контроля конъюгата: должна быть окрашена всегда и это свидетельствует о том, что олигонуклеотидный конъюгат с коллоидным золотом стабилен и гибридизируется в соответствии с заявленными условиями, а гибридизационный раствор сохраняет необходимые характеристики. Полоса контрольного ампликона (контроль амплификации): отсутствие красной полосы в этой зоне свидетельствует о присутствии в образце ингибиторов ПЦР. В этом случае необходимо повторить анализ с вновь отобранным образцом. Однако отсутствие полосы контрольного ампликона при наличии сильного положительного специфического результата не говорит об недостоверности анализа – имеет место конкуренция матричных ДНК за фермент. Полоса специфического ампликона (ПСА): наличие красной окраски этой зоны свидетельствует о наличии в исследуемом образце искомого патогенна, результат анализа - положительный. Несмотря на появление и широкое распространение антибактериальных средств и наличие вакцин против некоторых возбудителей, острые бактериальные менингиты остаются одной из серьёзных причин смертности и нейрологических осложнений. Они остаются в списке десяти главных причин детской смертности в развитых странах. В своё время тремя главными возбудителями менингитов были Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis и Streptococcus pneumoniae. Быстрая и точная диагностика имеет важное значение для выбора лечения и помогает снизить смертность и остановить развитие долгосрочных нейрологических поражений. Выделение культуры рассматривается в качестве золотого стандарта диагностики бакменингитов. Однако, этот метод требует больших затрат времени (идентификация патогена обычно занимает 1-2 дня), наличия жизнеспособных микроорганизмов для культивирования, а на чувствительность напрямую влияет начало антибиотикотерапии. Латексно-агглютинационный тест проводится быстрее, но недостаток чувствительности ограничивает его клиническое использование. Набор бактериальные менингиты Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение: Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis и Streptococcus pneumoniae в образцах спинномозговой жидкости. Рутинный пренатальный скрининг на стрептококковые инфекции (GBS; Streptococcus agalactiae) приводит к снижению количества заболевших. Однако, они остаются ведущей причиной неонатальной смертности. Стрептококковые инфекции регистрируются в самом раннем возрасте – около 80% детей заболевают в течение первых дней жизни. Инфекция характеризуется сепсисом и пневмонией. Инфекционные заболевания с отложенным началом возникают у детей в возрасте от 1 недели до трёх месяцев и протекают с развитием менингита и сепсиса. Новорожденные с ранней формой заболевания получают возбудителя интранатально от матерей. Предотвратить заболевание можно путём интранатальной профилактики антибиотиками. У женщин в предродовой и послеродовой период стрептококковая инфекция вызывает клиническую картину в диапазоне от сглаженных проявлений инфекции мочевыводящих путей до угрожающих жизни сепсиса и менингита. Заболевания могут наблюдаться у взрослых пациентов с ослабленным иммунным статусом. При скрининге беременных, детекция стрептококков имеет первостепенное значение. Женщины с положительными результатами пренатального скрининга являются кандидатами на интранатальную антибиотическую профилактику. Быстрый метод детекции важен для определения группы риска среди детей, рождённых матерями с неопределённым инфекционным статусом. Выделение культуры имеет ограничения по времени анализа, так как требует не менее 36 часов. Детекция антигенов в целом показывает результаты низкой точности. Вместо этих методов для высокочувствительного обнаружения микроорганизма можно использовать ПЦР. Тест Speed-Oligo на стрептококковую инфекцию обеспечивает быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение S. agalactiae в мазках из влагалища и аноректальной области. Образцы для неонатальных исследований берут с поверхности тела перед первым купанием, используют также мазки из глотки, задних отверстий полости носа, внешних слуховых проходов, ануса или пупка, кровь и спинномозговую жидкость. Комбинированный тест на бактериальные пневмонии Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae и Legionella pneumophila в клинических образцах. Для анализа можно использовать мазки из носоглотки, выделения из носа и глотки, мокроту, стимулированную мокроту, смывы из бронхов, ткани, инфицированные клетки или культуры. «Vircell» предлагает также наборы для независимой детекции этих возбудителей. Микобактерии – одна из групп патогенов, имеющих важное клиническое значение. Около трети населения Земли инфицировано бациллами туберкулёза. С практической точки зрения в пределах рода микобактерий можно выделить 3 группы: 1) комплекс возбудителей туберкулёза, включающий виды M. tuberculosis, M. bovis (включая BCG), M. africanum, M. microti; 2) M. leprae – возбудитель проказы; 3) прочие менее патогенные возбудители (часто оппортунистических инфекций или сапрофитные), дающие нетуберкулёзную симптоматику. M. tuberculosis complex Естественным резервуаром для M. tuberculosis является человек, M. bovis - крупный рогатый скот. Туберкулёз – хроническое гранулематозное заболевание, поражающее, как правило, лёгкие, но может локализоваться и в других частях тела или быть диссеминированным. M. avium-intracellulare complex Широко распространённый в природе вид микобактерий. Встречается, главным образом, у пациентов с пониженным иммунным статусом или больных СПИД, поражая локализовано или рассеянно: лёгкие, желудочно-кишечный тракт или лимфоузлы. M. Scrofulaceum Является возбудителем лимфаденита у детей. M. Kansasii Вызывает у человека хроническое лёгочное заболевание, напоминающее туберкулёз. Диссеминированная инфекция встречается у пациентов с пониженным иммунным статусом. M. abscessus Может быть возбудителем хронической лёгочной инфекции, колонизировать хирургические раны и место ввода катетеров. Диссеминированная инфекция встречается у пациентов с пониженным иммунным статусом. M. chelonae Патоген с высокой резистентностью, часто высевается у пациентов с пониженным иммунным статусом. M. fortuitum Может колонизировать хирургические раны и места ввода катетеров, встречается у больных остеомиелитом и целлюлитом. M. gordonae Обычно выявляется в качестве контаминанта микробиологических лабораторий, хотя иногда является причиной патологий у пациентов с пониженным иммунным статусом. Тест на обнаружение микобактерий Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение рода Mycobacterium и 12 различных видов бактерий: M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. microti, M. africanum), M. avium-intracellulare-scrofulaceum complex, M. chelonae-abscessus complex, M. kansasii, M. fortuitum и M. gordonae. Для анализа используют ДНК из бактерий, растущих как на агаризованной, так и в жидкой среде. Информация для заказа: SPEED-OLIGO BACTERIAL MENINGITIS SPEED-OLIGO BACTERIAL PNEUMONIA COMBI SPEED-OLIGO BORDETELLA SPEED-OLIGO CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE SP006 SP008 SP011 SP003 К-во тестов 24 теста 24 теста 40 тестов 40 тестов SPEED-OLIGO DIRECT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS SP016 40 тестов SPEED-OLIGO GROUP B STREPTOCOCCUS SPEED-OLIGO LEGIONELLA PNEUMOPHILA SPEED-OLIGO MYCOBACTERIA SPEED-OLIGO MYCOPLASMA PNEUMONIAE SPEED-OLIGO NOVEL INFLUENZA A H1N1 SP004 SP002 SP005 SP001 SP015 40 тестов 40 тестов 40 тестов 40 тестов 40 тестов Набор Кат.№