Описание лаборатории

Лаборатория плазмид
Руководитель: Пётр Свобода
Умение работать с рекомбинантной ДНК – необходимый
навык современного молекулярного биолога. Во время
выполнения нашего проекта студенты приобретут базовые знания
и умения для создания и репродуцирования рекомбинантной ДНК
в бактерии. Проект начнется с амплифицирования (модификации)
выбранных генов мыши, которые обычно активируются на ранней эмбриональной стадии.
В нашем проекте будут исследоваться и использоваться два вида генов мыши: (1) гены,
кодирующие белки - факторы транскрипции, которые вероятно активируют другие гены в
момент начала развития, и (2) длинные некодирующие РНК (lncRNA), недавно открытый и
малоизученный класс генов. Выбранные нами примеры lncRNA являются совершенно
новыми и не-опубликованными; единственное, что мы о них знаем - это то, что они
экспрессируются в раннем эмбриональном развитии. Мы будем использовать
полимеразную
цепную
реакцию
(ПЦР)
для
амплификации
выбранных
последовательностей генов. Затем полученные последовательности будут вставлены
внутрь специальной кольцевой молекулы ДНК (плазмиды), которая будет помещена внутрь
бактерии для последующей амплификации. Впоследствии плазмида будет отделена от
растущей бактерии, и правильность вставки будет подтверждена с помощью эндонуклеазы
рестрикции (рестриктаза). Полученная плазмида будет использоваться для изучения
функций гена на ранней стадии мышиного эмбриогенеза. Плазмида также содержит
кодирующую последовательность зеленого флюорисцентного белка (GFP). И если
позволит время, мы попытаемся поместить плазмиды в живую клетку для того, чтобы
увидеть, экспрессируют ли они белок-кодирующие гены, соединенные с GFP.