Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный
реклама
На правах рукописи ЛЕВЧЕНКО АРТЕМ ВИКТОРОВИЧ Фармакология и применение цинка сукцината Специальность: 06.02.03 -ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Краснодар – 2013 1 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте Россельхозакадемии Научные руководители: кандидат ветеринарных наук, доцент Трошин Андрей Николаевич, доктор ветеринарных наук, профессор, Лимаренко Александр Александрович Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Онищук Филипп Давыдович кандидат ветеринарных наук, Каблучеева Татьяна Ивановна Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ставропольский государ- ственный аграрный университет» Защита диссертации состоится 30 августа 2013 года в 14-00 на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина,13) С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044 г. Краснодар ул. Калинина,13 Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://www.kubsau.ru и официальном сайте ВАК РФ- http://vak.ed.gov.ru. Автореферат разослан «..» июля 2013года Ученый секретарь диссертационного совета доктор ветеринарных наук, профессор Родин И.А. 2 1 ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Вопросам развития птицеводства в нашей стране уделяется большое внимание. Однако уровень показателей многих инкубаторно- птицеводческих станций значительно отстает от возрастающих требований жизни. До сих пор не совсем ясны причины смертности зародышей кур при искусственной инкубации, их отходы составляют 15-20% невылупившихся цыплят от количества инкубационных яиц. В первую очередь высокую продуктивность птицы и хорошие инкубационные качества яиц обеспечивает полноценное кормление маточного стада. Если же рацион не сбалансирован по всем питательным веществам, то яйценоскость падает, одновременно снижается масса яиц и ухудшаются результаты вывода и выводимости. Для этого необходимо искать методы стимуляции эмбриогенеза различными препаратами, позволяющими стимулировать выживаемость, рост и развитие эмбрионов. В литературе опубликованы результаты экспериментов по использованию цинка сукцината для стимуляции эмбриогенеза птицы и получения более жизнеспособного молодняка (Танатаров А.Б., 1990). Исходя из этого для прединкубанного орошения яиц кур использован водный раствор сукцината цинка различной концентрации. Цель и задачи исследования: Целью настоящей работы было изучить фармако-токсикологические характеристики сукцината цинка, его влияние на организм птиц и разработать показания к применению. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1. Разработать показания к применению и установить эффективность сукцината цинка. 2. Изучить фармакологические и токсикологические характеристики сукцината цинка 3 3. Разработать применение сукцината цинка. Научная новизна. Определены основные показания, установлены оптимальные дозы к применению сукцината цинка в ветеринарии. Впервые изучены токсикологические и фармакологические свойства сукцината цинка. Практическая значимость. Использование сукцината цинка в животноводстве способствовало повышению сохранности цыплят и птицы, увеличению живой массы и продуктивности животных, а также увеличению сохранности цыплят, лучшему росту плода и повышению резистентности организма. Основные положения, выносимые на защиту: 1. Применение сукцината цинка 2. Фармако-токсикологическая характеристика препарата. 3. Влияние сукцината цинка на обмен углеводов Объект и предмет исследования. Объектом исследований являются цыплята-бройлеры, предметом исследования препарат сукцинат цинка. Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 4-х печатных работах, в том числе две в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК России – «Труды Кубанского аграрного университета» Структура и объем диссертационной работы. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и предложений. Список литературы включает 112 источников, в том числе 18 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 42 таблицами. 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ В работе представлены материалы экспериментальных исследований, проведенных в период с 2006 по 2012 гг. Лабораторные опыты и исследова4 ния проводились в Виварии ветеринарного факультета Кубанского государственного аграрного университета и в Краснодарском научно- исследовательском ветеринарном институте в лаборатории фармакологии. Производственные опыты проводились в сельскохозяйственных предприятиях Краснодарского края: ЗАО «ПФ Дружба» ст.Выселки, ООО «ПФ Краснодарская» г. Краснодар, ООО «Птицекомплекс» р. Адыгея, СТФ «Учхоз Краснодарское». Животных для опытов подбирали по принципу аналогов по возрасту и массе тела. Условия кормления и содержания животных всех групп были абсолютно одинаковыми. В опытах было использовано 280 животных, из них: 20 белые крысы, 150 свиноматок на 85-90м дне беременности, 60 поросят, 26 кроликов породы «белый великан», 24 белые мыши, а также 800 цыплят-бройлеров и 18232 инкубационных яйца. В ходе выполнения работы исследовалось общее действие, токсическое действие кислоты на организм животных, раздражающее, эмбриотоксическое и тератогенное действие, а также влияние на качество мясопродуктов, на энергетический обмен животных, на развитие плода, определялось ее ростостимулирующее действие. Изучалось влияние сукцината цинка на эмбриональное и постэмбриональное развитие цыплят, влияние на иммунобиологическую реактивность и резистентность организма цыплят, а также антитоксическое действие. Общее действие на организм животных исследовали на кроликах породы «белый великан» со средней массой тела 2,7 кг. Одна группа была контрольной, а животным остальных групп применяли внутрь в смеси с кормом однократно и в течение 14 дней сукцинат цинка в дозах 0,1; 1,0; 5,0 г/кг в первом опыте. Учитывали поведение, аппетит животных, изменения массы тела, температуры тела, пульса, дыхания, содержание в крови эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина. Хроническую токсичность препарата определяли на 20 белых крысах. 5 Оценивали общее состояние животных, следили за динамикой массы тела. Также проводили исследования периферической крови, функционального состояния печени, почек. Все исследования проводили до эксперимента, а также после начала приема препарата, через 1, 3 и 6 месяцев. Изучение сукцината цинка на раздражающее действие проводили на 10 кроликах. Препарат наносили на кожу из расчета 20 мг/см2 выстриженного участка. Размеры участка аппликации составляли 5x5 см, время экспозиции 4 часа. Реакцию на коже регистрировали по окончании экспозиции через 20 часов. Изучение местного действия препарата на слизистую оболочку проводили на пяти кроликах. Для этого в конъюнктивальный мешок вводили 5 капель препарата, второй глаз служил контролем. Регистрацию изменений слизистой оболочки глаза, склеры и роговицы осуществляли визуально сразу после введении препарата, через 1 час и ежедневно, в течение 14 дней. Исследования по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия были проведены на 20 беременных беспородных крысах. Препарат задавали самкам в смеси с кормом. Первая группа была контрольная, животным второй группы препарат скармливали в дозе 500 мг/кг массы тела с 6 по 16 дни беременности. Третья группа получала препарат в дозе 250 мг/, в четвертой группе животные получали препарат в дозе 100 мг/кг. Взвешивание беременных самок производили на 1, 14 и 20 день беременности. На 20 день беременности после эвтаназии изучали репродуктивные органы самок и плоды. В качестве критериев повреждающего действия рассматривались пред- и постэмбриональная смертность, масса и длина плодов, масса плаценты, аномалии развития внутренних органов (визуальное исследование плодов, метод Вильсона-Дыбана). Эксперимент по изучению влияния на качество мясопродуктов был осуществлен органолептически по 9-балльной системе. Оценка проводилась по Дегустационному листу по ГОСТ 9959-91. Для этого были сформированы две группы кроликов. Кролики первой группы служили контролем, и 6 препарат не получали. Животным второй группы в корм препарат вводили в дозе 100 мг/кг массы тела. Препарат поступал в организм один раз в сутки с утренним кормлением в течение 14 дней. На следующие сутки после окончания опыта кролики были забиты. В тот же день провели органолептическую оценку мяса и бульона. Для оценки действия на процессы гликолиза и энергообеспечения организма животных было проведено два опыта. В первом изучали влияние длительного его применения на энергетический обмен у крыс. Сформировали две группы крыс-самцов по 10 голов в каждой. Животные первой группы были контрольными и препарат не получали. Крысам второй группы в течение 14 дней его применяли в смеси с кормом, один раз в сутки, групповым способом, в дозе 0,1 г/кг массы тела. Через сутки после последнего применения препарата животных обеих групп выводили из опыта путем декапитации. В крови, печени и скелетной мускулатуре определили показатели, характеризующие энергетический обмен (АТФ, АДФ, АМФ, неорганический фосфор). Во втором опыте изучали влияние длительного его применения на энергетический обмен у 20 поросят. Было сформировано 2 группы животных по принципу аналогов по 10 поросят в каждой. Животные первой группы были контрольными. Поросятам второй группы в течение 14 дней применяли препарат в смеси с кормом. Перед применением препарата и в конце опыта у животных брали кровь для определения показателей, характеризующих энергетический обмен. В эксперименте по применению его супоросным свиноматкам, для выяснения ее влияния на развитие плода, было сформировано три аналогичных группы свиноматок по 50 голов в каждой, на 85-90 дне супоросности, которые размещались в корпусе фермы. Изучали влияние препарата на развитие плода. Первая группа была контрольной и получала только основной рацион. Вторая и третья группы животных были опытными и получали препарат с кормом в виде добавки. Доза для свиноматок второй группы была 7 0,1 г/кг массы тела, а для третьей группы - 0,2 г/кг массы тела. Препарат вводили в корм в течение 60 дней через день. Для оценки эффективности препарата на свиноматках и поросятах проводили ряд исследований: зоотехнические (многоплодие, живая масса плода при рождении, состояние жизнеспособности новорожденных); химико-физиологические (температура тела, пульс, дыхание, аппетит, поедаемость кормов, двигательная активность, состояние слизистых оболочек), гематологические (уровень гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкоформула). Для определения ростостимулирующего действия у поросят-сосунов было сформировано три аналогичных группы Первая группа получала только основной рацион и служила контролем. Поросята второй группы получали препарат в дозе 0,1 г/кг массы тела. Вводили его один раз в сутки в 10 первых дней жизни. Животные третьей группы получали препарат по 0,05 г/кг массы тела. На всем протяжении опыта (32 дня подсосного периода) за животными вели клиническое наблюдение. Учитывали сохранность поросят, живую массу при отъеме. Физиологическое состояние поросят оценивали по показателям температуры, пульса, по количеству дыхательных движений, по состоянию слизистых оболочек, по двигательной активности. Также проводили исследования крови по общепринятым гематологическим показателям (количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина). Для изучения влияния на инкубационные яйца было создано две группы яиц. Первая была контрольной – обработки не подвергалась. Вторая группа была опытной. Для обработки этих яиц использовали 0,1% раствор сукцината цинка. Затем стеллажи с яйцами помещали в инкубатор. После вылупления цыплят учитывали их заболеваемость и сохранность. Исследование влияния на организм цыплят при стрессе проводили на двух группах цыплят, по 200 голов в каждой. Препарат вводили в организм с комбикормом в дозе 0,1 г/кг массы тела в течение 14 дней. После этого производили пересадку цыплят в другие клетки, чем и вызывали стресс. 8 Перед началом эксперимента и в конце производили взятие крови для исследований. Определяли лизоцимную, бактерицидную активность сыворотки крови, концентрацию общего белка и его фракций, соотношение Т и В лимфоцитов. Для исследования антитоксического действия было подобрано две группы аналогичных цыплят бройлеров, по 200 голов в каждой. Контрольные цыплята получали только основной рацион, а опытным его добавляли в корм в дозе 0,1 г/кг массы тела. Скармливали групповым способом один раз в сутки в течение 10 дней. В ходе выполнения работы использовали следующие лабораторные исследования: Морфологический состав крови определяли в счетной камере Горяева; рит в капиллярах с центрифугой МЦГ-8; содержание гемоглобина определяли методом Сали; гликоген - по методу Шомоди (Мильман Л.С. с соавт, 1974); глюкозу - в безбелковом инфильтрате по методу Сомоджи; виноградную кислоту в крови, печени и мышцах - по дифицированному методу Умбрайта (Бабаскин П.М., 1976); молочную кислоту в крови, печени, и мышцах - по методу Баркера и Саммерсона Прохорова М.И., Тупикова З.М., 1965); лимонную кислоту в крови, печени и мышцахах - по методу Наттельсона (Ещенко Н.Д. с соавт., 1977). Содержание АТФ, АМФ в крови, печени и мышцах проводили методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Силуфол UV-254» с последующей элюацией и спектрофотометрией (Бериташвили Д.Г., Кафиони К.Л., 1975). В качестве подвижной фазы использовали смесь, предложенную Хейнсом и Ишервурдом (Асатиани B.C., 1965). Активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови, печени и мышцах определяли с помощью унифицированного метода Ретмана и Френкеля (Меньшиков В.В., 1973). Активность лактатдегидрогеназы в сыворотке крови, печени и мышцах определяли унифицированным методом П.М. Пыркова с соавт. (1970). Щелочную фосфотазу определяли по гидролизу β-глицерофосфата. 9 В качестве антикоагулянта использовали трилон Б. Для получения сыворотки кровь собирали в пробирку без антикоагулянта. Результаты исследований обрабатывали биометрическим методом вариационной статистики. Математическую и биометрическую обработку полученных данных проводили при помощи программы Windows Vista, MicrosoftExcel 2010, степень достоверности «Р» устанавливали по распределению Стьюдента. 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Разработка, получение и физико-химические свойства Сукцинат цинка получали в виде водного раствора с содержанием действующего вещества от 0,02%. Таблица-1 Физико-химические показатели раствора сукцината цинка. Наименование показателя Внешний вид, цвет, запах и вкус Растворимость Наличие посторонних примесей Наличие осадка Характеристика и норма Прозрачная жидкость, без запаха, кисловатого вкуса со слегка металлическим оттенком. Растворим в воде. Не допускается Допускается наличие до 0,001% легко суспендирующегося при взбалтывании осадка. 4,93-7.1 рН Содержание суммарного 0,02 ± 0,0004 цинка в препарате, мг/мл Плотность, г/см3 . 1,0 – 1,1 Стандартизацию сукцината цинка проводили по органолептическим, физикохимическим показателям. (табл. 1). Яйца, использованные для опытов, были собраны в течении дня и перед закладкой хранились 1 сутки. Все яйца имели правильную форму, чистую и гладкую скорлупу, воздушная камера находится на тупом конце яйца. Постановки опытов проводились методом пар-аналогов. Инкубационные 10 яйца, относящиеся к каждой группе, поместили в отдельные лотки, которые пометили бирками. Затем лотки поместили в инкубатор «Универсал» и проводили их нагревание в течении 5 часов до температуры +37.5 С. После этого лоткипоочередно вынимали из инкубатора и с помощью ручного мелкоструйного опрыскивателя проводили обработку яиц опытной групп раствором исследуемого вещества. Орошение яиц в лотках осуществлялось в течении 15-20 секунд и их выдерживали вне шкафа инкубатора при температуре воздуха +18+20 С в течении 10 минут, после чего опять помещали в инкубатор. В процессе инкубации яиц в каждом из опытов соблюдался режим инкубации представленный в таблице №2. Таблица-2 Режим инкубации Дни инкубации 1-7 8-11 12-18,5 1 2 3 Температура, 0 С Влажность 37,8-38 30,5-31 37,5-37,7 29-29,5 37,2-37,4 28-28,5 На выводе: 37,4 29-29,5 37,2 30-31 37,2 32 и более Заслонки Закрыты Открыты Открыты Закрыты Закрыты Закрыты После вывода проводили сортировку молодняка. По окраске пуха работники инкубатория отд елили курочек от петушков (рис.3). Все отходы инкубации были вскрыты для определения примерного времени гибели эмбрионов, после чего они были о тправлены на утилизацию. Исходя из этого для прединкубанного орошения яиц кур мы использовали водный раствор сукцината цинка различной концентрации. Сукцинат цинка при применении для обработки инкубационных яиц повышает сохранность и жизнеспособность цыплят, а также активизирует резистентность организма. Препарат рекомендуется в форме 0,02% водного 11 раствора в дозе 0,2-0,3 мл на 1 яйцо. При этом в опытной группе по сравнению с контролем количество эмбрионов задохликов снижается на 2,9%, а замерших эмбрионов на 1,8%. За счет снижения эмбриональной смертности в опытных группах вывод кондиционных цыплят по сравнению с контролем был выше на 4,2-4,6%, а выводимость яиц на 3,8-3,9%. Признаков заболеваний инфекционной этиологии не выявлено. Таблица-3Показатели инкубации яиц кур при орошении их цинка сукцинатом (п=282) Показатель Концентрация препарата в воде, % Неоплодотворенные яйца, % контрольная - Наименование групп 1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная 0,02 0,005 0,01 9,6+2,1 10,6±2,4 9,3+2,0 9,2±2,2 Кровяные кольца, % 3,9+1,1 4,6+1,2 3,7+1,3 4,3±1,4 Замершие эмбрионы, % 2,5+0,6 1,1+0,4 2,1+0,5 0,7+0,2** Задохлики, % 5,0+0,7 3,9+1,0 2,1 + 1,1* 2,5+0,6** Некондиционные цыплята, % 1,0+0,3 1,0+0,4 0,6±0,1 0,7±0,2 Выводимость яиц, % 89,0+1,1 88,3±1,6 92,9+1,7* 92,8+1,0* Вывод цыплят, % 78,0+1,2 78,8+1,4 82,2+1,8* 82,6+1,5* Примечание: * р < 0,05; **р<0,01 Обработка инкубационных яиц цинка сукцинатом оказало существенное влияние на морфометрические показатели эмбрионов кур. При этом в среднем живая масса, а также длина тела была выше контроля соответственно 0,06 г и 5,2 мм. В 12 дневном возрасте эти цифры составили соответственно на 1,11 г и 3,48 мм. В опытной группе отмечен рост пуха, хорошо выражены рост волосяных сосочков. Таблица-4 Морфологические показатели у эмбрионов кур при обработке яиц растворами цинка сукцината (п=10) 12 Возраст эмбриона, суток Показатель Контрольная группа 2-я опытная Концентрация препарата в воде, % 0,01 Масса эмбриона, г 6 0,58+0.011 0,60±0,018 Длина эмбриона, мм Масса эмбриона, г 6 12 15,02+0,75 5,67+0.019 17,58±0,81* 6,44±0,064*** Длина эмбриона, мм 12 30,41+0,96 32,93+0,75* Масса эмбриона, г 18 25,1210,08 30,07+0,09*** Длина эмбриона, мм 18 60,93±0,94 64,84+1,02** 3-я опытная 0,02 0,64+0,025 * 20,22±0,89 *** 6,78±0,071 *** 33,89+1,02 * 31,36±0,07 *** 66,33±1,01 *** В 18 дневном возрасте эти показатели продолжали улучшаться у опытных эмбрионов отмечено хорошее развитие, конечности прижаты к скорлупе. Желточный мешок расположен между головой и конечностями. Хорошо выражена пигментация и кровеносные сосуды. Все тело покрыто пухом. Все это указывает на положительное влияние цинка на эмбрионы. Таблица-5 Динамика живой массы цыплят при инкубации Возраст, Контрольная группа сут. Абсолютная Среднесуточмасса ный прирост г % г % 1 31 100 7 81 100 7,1 100 Опытная группа Абсолютная масса г % 32 103 83 102 Среднесуточный прирост Г % 7,32 102,8 14 143 8,6 139 100 8,3 100 103 103,6 Опытные цыплята были активными и подвижными, пух ровный блестящий, клюв короткий и толстый, киль упругий, туловища закрыто, без кровотечений, клока розовая и чистая. Препарат стимулировал гемо и эритропоэз выработку общего белка прирост массы в двухнедельном возрасте был выше на 3,6%. 3.2 Применение сукцината цинка в других показаниях У опытных цыплят отмечались лучшие показатели стимуляция иммунитета против болезни Ньюкасла. Оценка РЗГА после вакцинации против болезни Ньюкасла проведенная в 32 дневном возрасте показала, что цыплята 13 в 3 опытной группе имели более высокие показатели. Таблица-6 Показатели напряженности иммунитета Группы Титры цыплят 2 4 8 Контроль1 ная 1 опытная 1 2 опытная Так средний титр 16 32 64 128 6 3 11 4 256 средний титр 1 : 56,64 ± 7,64 5 5 11 3 1 : 53,44 ± 6,99 4 4 11 5 1 : 64,00 ± 7,5 антигемагглютининов в 1-й и 2-й опытных группах был выше, чем в контроле на 12,9%, 5,1% соответственно. Таким образом наиболее высокий и длительный эффект стимуляции развития, роста и жизнеспособности установлен при двукратной обработке яиц. При изучении противострессового действия сукцината цинка установлено, что препарат хорошо предохранял , его положительное действие на содержание БАСК, ЛАСК, γ-глобулиновые фракции. На следующий день после окончания введения препарата в организм производили пересадку птицы в другие клетки, чем и вызывали стресс. После перегруппировки и перемещения все цыплята находились в угнетенном состоянии, отказывались от корма. Но бройлеры из опытной группы быстрее начали приходить в норму, что было видно по восстановлению двигательной активности и аппетиту. Перед началом эксперимента и в конце производили взятие крови для исследований. Определяли лизоцимную, бактерицидную активность сыворотки крови, концентрацию общего белка и его фракций (таблица 28), соотношение Т и В лимфоцитов. При анализе результатов по исследованию лизоцимной активности сыворотки крови было отмечено ее увеличение в обеих группах: в контрольной на 11,0%, а в опытной на 33,4%. На момент окончания эксперимента ЛАСК в опытной группе была выше, чем в контрольной на 25,2%. Таблица-7 Показатели неспецифической резистентности у цыплят. 14 Время исслед. Группы ЛАСК, БАСК, до опыта контроль опыт 16,4 19,2 79,6 67,2 после опыта контроль опыт 27,4 52,6 85,6 93,7 Альбумины, Глобулины,% α β γ 49,6 49,9 12,1 13,4 15,6 13,9 22,8 22,9 43,1 40,6 16,8 15,3 15,9 16,6 24,2 27,5 Бактерицидная активность сыворотки крови за период эксперимента также увеличилась в обеих группах. В контроле она возросла на 6%, тогда как в опыте на 26,5%. Разница между ними составила 8,1% в пользу опытной группы. Перед применением препарата концентрации белковых фракций в сыворотке крови опытных и контрольных цыплят находились приблизительно на одном уровне. По окончании эксперимента картина изменилась. В опыте увеличилась концентрация всех глобулиновых фракций. В опытной группе (3-глобулинов было на 4,2% больше, чем в сыворотке крови цыплят контрольной группы, а у-глобулинов было больше, чем в контроле на 12%. За период опыта количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула крови цыплят опытной и контрольной групп заметно не различались и не выходили за пределы физиологических норм. Но произошли изменения в морфологическом составе лимфоцитов (опытная группа). Было установлено увеличение количества Т лимфоцитов по отношению к В лимфоцитам. Разница составила 23,3%. Кроме того, в Т лимфоцитах было отмечено большее количество гранул. В опытной группе за период эксперимента сохранность составила 197,5%, тогда как в контрольной после перегруппировки пало два цыпленка. Таким образом, в контроле сохранность оказалась 83%. После воздействия стресс-фактора произвели взвешивание цыплят. К этому времени их возраст был 35 суток. Отмечено преимущество опытной группы. Средняя масса одного цыпленка в ней была 930 г, а в контроле 892 г, что на 4,3% меньше. Среднесуточные привесы в контрольной группе были 15 121,8 г, а в опытной - 24,3 г. Таким образом, сукцинат цинка оказывает положительное влияние на показатели гуморального и клеточного иммунитета и показатели резистентности организма цыплят. Цыплята опытной группы легче переносили стрессовое воздействие на организм, чем цыплята контрольной группы. Препарат проявлял антитоксическое действие при микотоксикозах, он повышал антитоксическое действие, за счет повышения показателей антиоксидантной защиты, препятствовал увеличению продуктов перекисного окисления липидов. Были проведены санитарные исследования кормов, после которых стало известно, что в пробах присутствуют микотоксины. По клиническим признакам установлено, что это Т-2 токсин и охратоксин А. Для исследования антитоксического действия препарата было (подобрано две группы аналогичных цыплят бройлеров, по 200 голов в каждой. Контрольные цыплята получали только основной рацион, а опытным добавляли в корм препарат в дозе 0,1 г/кг массы тела. Скармливали препарат групповым способом один раз в сутки в течение 10 дней. Сохранность за время эксперимента в контрольной группе составила 180%. В опытной группе за 10 дней пало десять цыплят, таким образом сохранность равнялась 95%. Перед началом эксперимента средний вес одного цыпленка в контрольной группе был 755 гр., после опыта средний вес 926 гр. В опытной группе до опыта цыпленок весил 769 гр., после опыта 985 гр. Среднесуточные привесы были следующими: в контрольной группе 20,8 гр., а в опытной - 21,6 гр. Применение препарата препятствовало увеличению продуктов перекисного окисления липидов. Некоторое снижение активности ферментов системы антиоксидантной защиты, таких как каталаза, пероксидаза, связано с поступлением в организм экзогенного антиоксиданта. В связи с этим, меньше расходуется антиоксидант - витамин Е. 16 Таблица-8 Влияние на биохимические показатели крови цыплят Показатели Группа Контроль Опыт Диеновые конъюгаты 0,325±0,023 0,309±0,022 МДА 1,77±0,15 1,43±0,12 Основания Шиффа 0,422±0,053 0,287±0,033 Общие SH-группы 11,2±1,72 14,1±0,55 Витамин Е 23,7±1,85 38,8±2,30 Каталаза 49,8±2,95 43,3±2,25 Пероксидаза 45,6±1,77 42,7±1,77 Данные, приведенные в таблице №5, свидетельствуют о том, что применение препарата снижает содержание в крови продуктов перекисного окисления липидов. Уровень диеновых конъюгатов был ниже по сравнению с контролем на 5%, малонового диальдегида - на 19%, а оснований Шиффа на 32%, по сравнению с цыплятами, не получавшими сукцинат цинка. При исследованиях установлено, что применение сукцината цинка повышает также уровень показателей антиоксидантной защиты, таких как сульфгидрильные группы (на 26%), витамин Е (на 64%). В уровне других исследуемых показателей антиоксидантной защиты существенных изменений, по сравнению с контролем, не установлено. Результаты исследований свидетельствуют о том, что препарат применяемый в дозе 0,1 г/кг массы тела цыплятам при отравлениях, снижает действие микотоксинов. Применение сукцината цинка способствует увеличению привесов, а также повышает сохранность поголовья. Его антиоксидантные свойства проявляются в некотором снижении уровня промежуточных и конечных продуктов перекисного окисления липидов. Механизм действия обусловлен существенной мобилизацией в метаболизм углеводов и липидов, снижением уровня перекисного окисления липидов и сохранением стабильности показателей антиоксидантной защиты. Некоторое снижение активности ферментов системы антиоксидантной 17 защиты, таких как каталаза, пероксидаза, связано с поступлением в организм экзогенного антиоксиданта. В связи с этим, меньше расходуется антиоксиданта - витамин Е. В эксперименте было обнаружено ростостимулирующее действие. Об этом свидетельствуют результаты периодических взвешиваний животных. За время всего эксперимента (6 месяцев) средняя масса одного животного контрольной групп возросла на 70 гр., а в опытных на 125, 100 и 90 гр. соответственно. Максимальный прирост массы был отмечен во 2 группе, животные которой получали препарат в дозе 100 мг/кг массы тела. Минимальный прирост массы среди опытных групп, был зарегистрирован у животных, которые получали препарат в дозе 500 мг/кг массы тела. Биохимические исследования выявили изменения таких показателей как АсАТ и АлАТ, что свидетельствует о воздействии на функцию печени. Был выбрана оптимальная схема применения препарата: 3, 4 и 6 неделя выращивания. Интенсивность роста бройлеров представлена в Таблице №9 Таблица-9 Суточные приросты цыплят-бройлеров под действием препаратов Группа Суточные привесы по периодам, г 21-30 30-40 40-50 50-60 1 группа 42,0 41,6 41,4 45,6 2 группа 42,7 42,2 34,0 41,8 3 группа 39,4 41,0 43,8 43,9 4 группа 37,9 40,2 34,8 49,9 5 группа 37,14 40,2 33,9 38,5 На рост и развитие бройлеров оптимально влияет добавка препарата сукцината цинка в дозе 20 мг/кг живой массы. Чистая янтарная кислота в опыте не оказала особого ростостимулирующего эффекта, хотя птицы, получавшие ее весили больше, чем контрольные. Сукцинат цинка в дозе 50 мг/кг живой массы вызвал ростостимуляцию по сравнению с контрольными птицами, но эффект был слабее, чем в других группах. Наиболее выраженные ростимулирующее действие сукцината цинка оказал в дозе 20 мг/кг живой массы. Сукцинат цинка не снижал поедаемости корма и не вызывал отклонений от нормы клинико-физиологических пара18 метров птицы, оказав положительное влияние на сохранность и рост цыплят. 3.3 Фармакологические свойства сукцината цинка Препарат стимулировал углеводный обмен организма и ускорял обеспечение углеводами печень. Таблица-10 Показатели обмена углеводов под влиянием сукцината цинка в организме крыс. Показатели Сукцинат цинка Контроль Сукцинат цинка Контроль Сукцинат цинка Контроль Сукцинат цинка Контроль Кровь Печень Мышцы 1,34±0,115 1,19±0,077 5,97±0,290 5,54±0,320 1,14±0,044 1,27±0,061 2,14±0,150 2,11±0,Ю2 0,96±0,057 1,11±0,045 0,72±0,063 0,66±0,051 Н.Ф., ммоль/л 1,62±0,030 9,64±0,280 1,56±0,088 9,49±0,260 17,10±0,190 17,60±0,190 АТФ, ммоль/л 0,45±0,034 0,44±0,077 АДФ, ммоль/л 0,21±0,003 0,22±0,037 АМФ, ммоль/л 0,06±0,010 0,05±0,016 3.4 Токсикологические свойства При изучении подострой и хронической токсичности сукцината цинка установлено, что продолжительное введение препарата при сухронической токсичности не установлено гибели птицы. Падение массы тела составившее около 30%, несмотря на то что произошло резкое увеличение мочевины. При убое резкое увеличение массы печени и снижение массы тимуса. Начиная с 18 суток у птиц развивалась адинамия вялость, паралич, истечения из ротовой и носовой полости слизи. На 20 сутки отмечали гибель при картине тремора мышц и крыльев. При хронической токсичности гибели птицы не регистрировали. В крови увеличивалось содержание мочевины (2,5 раза), глюкозы, АЛТ. В опытах на кроликах показано, что увеличение препарата в 10 раз от терапевтического не оказывает отрицательного влияния на аппетит, поведение, показатели температуры, пульса и дыхания. 19 Увеличение терапевтической дозы в два раза увеличивает привесы на 66,7%, а в 10 раз на 33,3%. Среднесуточный привес у контрольных животных составил 21,4 г; во 2-й группе- 35,8; в 3 и 4 по 28,6. Эти данные свидетельствуют о ростостимулирующем действии препарата. При этом количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкоцитов и клеток лейкоформулы существенно не менялось. Имевшие место колебания показателей были незначительными. Наибольший прирост был при дачи препарата в дозе 100 мг/кг. Полученные результаты указывают на благоприятное влияние препарата на состав периферической крови, гемопоэз, улучшение лейкоцитов. При патологоанатомическом вскрытии изменения в печени, сердце, желудочно-кишечном тракте, отмечена жировая дистрофия печени крупнокапельная жировая инфильтрация. Под перекардом скопления светлосоломенного цвета жидкости. Исчерченность мышечных волокон выражена слабо. На слизистой пищевода, зоба, под кутикулой, мышечно желудка полосчатые кровоизлияния. В кишечнике скопление слизи. Установлено некоторое изменения: зернистая дистрофия печени гепатоцитов, жировая инфильтрация кровоизлияния под перикардом застойная гиперемия легких, точечные кровоизлияния на слизистой желудка и пищевода. Эта картина характерна при применении больших доз в 20 раз превышающих терапевтическую. Раздражающее действие препарата не отмечалось за исключением быстропроходящий в течении суток гиперемия глаз. У крыс, получавших сукцинатв дозе от 100 до 500 мг/кг массы тела, отсутствовали какие-либо изменения функции почек: на протяжении 6месячного эксперимента сохранялся нормальный суточный объем мочи, близкие к физиологическим нормам значения рН мочи, в ней не содержался сахар и белок, также отсутствовали кровь и гемоглобин. Количество креатинина аналогично с таковыми у контрольных животных. Увеличение диуреза к концу эксперимента на 1-1,5 мл связано с возрастными особенностями крыс и находится в пределах физиологической нормы. 20 Основные морфологические изменения были обнаружены у тех животных, которые получали препарат в дозе 500мг/кг массы тела. В печени (точечные кровоизлияния под капсулой, разрастания соединительной ткани в просвете желчных протоков), сердце (слабая выраженность поперечной исчерченности или ее полное отсутствие, дряблость) и желудочно-кишечном тракте (полосчатые кровоизлияния под слизистой оболочкой пищевода и желудка, очаговая гиперемия). При изучении раздражающего действия сукцината цинка было установлено, что после нанесения суспензии препарата и снятия аппликации отека не было, пальпация безболезненна, цвет кожи идентичен цвету При введении в конъюнктивальный мешок 5 капель раствора препарата также было установлено, что сукцинат цинка не обладает раздражающим действием. При изучении эмбриотоксического и тератогенного действия сукцинат цинка было установлено, что она не вызывает нарушения беременности и Препарат скармливали в дозах от 100 до 500 мг/кг массы тела крысам в разные сроки беременности. На 17-20-й день беременности животные были забиты, а плоды подвергнуты изучению. Исследования показали, что число живых плодов практически не различалось как в контрольной, так и в опытных группах. Установлено, что при применении препарата в фармакологически эффективной дозе 1(100 мг/кг массы тела) достигаются минимальные показатели общей эмбриональной смертности, предимплантационной и постимплантационной смертности. Также в этой группе были самые крупные плоды, как по длине (3 см) так и по массе (2,7 г). Исследовали влияние сукцината на эмбриональное и постэмбриональное развитие цыплят-бройлеров. Установлено, что он не влияет на выживаемость куриных эбрионов в применяемых дозах. Тератогенного и эмбриотоксического действия при применении сукцината цинка не установлено. Наиболее эффективной для эмбрионального развития была доза 100 мг/кг. При применении препарата при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы лучшие показатели были при назначении препарата. С содержании ме21 таболитов гликолиза в крови, печени и мышцах не образующем существенных различий между контролем и опытом. Отмечено увеличение уровня пирувата в крови, печени и мышцах и снижения соотношения пирувата/лактата. Препарат стимулировал прирост массы тела, уровень молочной кислоты уменьшался, пировиноградная увеличилась, содержание неорганического фосфора уменьшалось. Влияние препарата на качество мясопродуктов исследовали на кроликах. При органолептической оценке была отмечена разница между качеством проб мяса и бульона у животных контрольной и опытной групп в пользу опытной. Пробы мяса животных, получавших препарат, имели отличный, присущий данному продукту внешний вид, цвет, аромат, приятный вкус, нежную консистенцию и достаточную сочность. Бульоны были чистые, прозрачные, золотистого цвета с капельками жира, достаточно ароматные и приятные на вкус. Полученные данные свидетельствуют о том, что мясо животных, получавших сукцинат цинка, можно использовать в пищу без ограничений. ВЫВОДЫ 1.Сукцинат цинка при применении для обработки инкубационных яиц повышает сохранность и жизнеспособность цыплят, а также активизирует резистентность организма. Препарат рекомендуется в форме 0,02% водного раствора в дозе 0,2-0,3 мл на 1 яйцо. При этом в опытной группе по сравнению с контролем количество эмбрионов задохликов снижается на 2,9%, а замерших эмбрионов на 1,8%. За счет снижения эмбриональной смертности в опытных группах вывод кондиционных цыплят по сравнению с контролем был выше на 4,2-4,6%, а выводимость яиц на 3,8-3,9%. Признаков заболеваний инфекционной этиологии не выявлено. Обработка инкубационных яиц цинка сукцинатом оказало существенное влияние на морфометрические показатели эмбрионов кур. При этом в среднем живая масса, а также длина тела была выше контроля соответственно 0,06 г и 5,2 мм. В 12 дневном возрасте эти цифры составили соответствен22 но на 1,11 г и 3,48 см. В опытной группе отмечен рост пуха, хорошо выражены рост волосяных сосочков. При этом вывод кондиционных цыплят выше чем в контроле на 2,8%, а выводимость яиц больше на 4,9%. При патологоанатомическом вскрытии болезней инфекционной патологии не обнаружено. Препарат стимулировал гемо и эритропоэз выработку общего белка прирост массы в двухнедельном возрасте был выше на 3,6%. У опытных цыплят отмечались лучшие показатели стимуляция иммунитета против болезни Ньюкасла. 2. При изучении противострессового действия сукцината цинка установлено, что препарат хорошо предохранял , его положительное действие на содержание БАСК, ЛАСК, γ-глобулиновые фракции. Препарат проявлял антитоксическое действие при микотоксикозах, он повышал антитоксическое действие, за счет повышения показателей антиоксидантной защиты, препятствовал увеличению продуктов перекисного окисления липидов. Наиболее выраженные ростимулирующее действие сукцината цинка оказал в дозе 20 мг/кг живой массы. Сукцинат цинка не снижал поедаемости корма и не вызывал отклонений от нормы клинико-физиологических параметров птицы, оказав положительное влияние на сохранность и рост цыплят. К семинедельному возрасту сохранность цыплят опытной группы была выше по сравнению с контролем на 1,3-1,5%. Среднесуточный прирост массы тела был больше на 3,2-5,8 г, а живая масса на 7,1 и 12,6% к контролю. При этом в крови увеличивалось содержание глюкозы, общих липидов, общий белок. Более высокое содержание витаминов А, Е, что свидетельствует о лучшей антиоксидантной защиты организма и более эффективном участии печени в обменных процессах. 3.При изучении подострой и хронической токсичности сукцината цинка установлено, что продолжительное введение препарата при сухронической токсичности не установлено гибели птицы. Падение массы тела составившее 23 около 30%, несмотря на то что произошло резкое увеличение мочевины. При убое резкое увеличение массы печени и снижение массы тимуса. Начиная с 18 суток у птиц развивалась адинамия вялость, паралич, истечения из ротовой и носовой полости слизи. На 20 сутки отмечали гибель при картине тремора мышц и крыльев. При патологоанатомическом вскрытии птицы изменения в печени, сердце, желудочно-кишечном тракте, отмечена жировая дистрофия печени крупнокапельная жировая инфильтрация. Под перикардом скопления светлосоломенного цвета жидкости Исчерченность мышечных волокон выражена слабо. На слизистой пищевода, зоба, под кутикулой, мышечного желудка полосчатые кровоизлияния. Препарат стимулировал углеводный обмен организма и ускорял обеспечение углеводами печень. 4.В опытах на кроликах показано, что увеличение препарата в 10 раз от терапевтического не оказывает отрицательного влияния на аппетит, поведение, показатели температуры, пульса и дыхания. Увеличение терапевтической дозы в два раза увеличивает привесы на 66,7%, а в 10 раз на 33,3%. Среднесуточный привес у контрольных животных составил 21,4 г; во 2-й группе- 35,8; в 3 и 4 по 28,6. Эти данные свидетельствуют о ростостимулирующем действии препарата. При этом количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкоцитов и клеток лейкоформулы существенно не менялось. Имевшие место колебания показателей были незначительными. Наибольший прирост был при дачи препарата в дозе 100 мг/кг. Полученные результаты указывают на благоприятное влияние препарата на состав периферической крови, гемопоэз, улучшение лейкоцитов. 5. При проведении патоморфологических исследований установлено некоторое изменения: зернистая дистрофия печени гепатоцитов, жировая инфильтрация кровоизлияния под перикардом застойная гиперемия легких, точечные кровоизлияния на слизистой желудка и пищевода. Эта картина ха24 рактерна при применении больших доз в 20 раз превышающих терапевтическую. Раздражающее действие препарата не отмечалось за исключением быстропроходящий в течении суток гиперемия глаз. 6.Тератогенного и эмбриотоксического действия при применении сукцината цинка не установлено. Наиболее эффективной для эмбрионального развития была доза 100 мг/кг. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Практической ветеринарии рекомендуется применять сукцинат цинка для обработки инкубационных яиц с целью повышения сохранности и жизнеспособности цыплят, а также для повышения резистентности организма. Препарат рекомендуется применять в качестве ростстимулирующего препарата, а также для стимуляции развития плода. Для орошения яиц сукцинат цинка рекомендуется в форме 0,02% водного раствора в дозе 0,2-0,3 мл на 1 яйцо. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ 1.Левченко А.В. Снижение эмбриональной смертности цыплят путем прединкубационного орошения яиц куп растворами цинка сукцината / Лимаренко А.А., Логинова И.В.// Профилактика и лечение болезней животных.- Краснодар,2007-С.85-89. 2.Левченко А.В. Применение марганца сукцината при инкубации яиц кур / А.В. Левченко// Материалы 9 международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта «Развитие агропромышленного комплекса».- Троицк, 2007.-С.62-64. 3.Левченко А.В. Стимуляция эмбриогенеза кур прединкубационным орошением яиц растворами цинка сукцината /А.А.Лимаренко, Т.А. Щербатова // Труды Кубанского государственного аграрного университета. – Краснодар 1(ч.2)2009. - С.43-45. 25 Левченко А.В. Применение цинка сукцината для прединкубационной обработки яиц кур / А.А.Лимаренко, А.Ю.Шантыз, Н.В. Меринкова // Труды Кубанского государственного аграрного университета.- Краснодар 4(37) 2012. - С.196-198. 4. Подписано в печать 17.07.2013 г. Формат А5 Бумага офсетная Заказ № 5 Оперативная печать Печ.л. 2,3 Тираж 100 экз. Отпечатано в типографии ГНУ Краснодарского НИВИ Россельхозакадемии 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, 1 26
