SLA/LP IgG - ЛабМир» | labmir.ru

1
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
SLA/LP IgG
(Anti- SLA/LP ELISA (IgG))
Иммуноферментный тест для полуколичественного или количественного определения антител класса IgG к
SLA/LP (растворимому антигену печени/печеночно-панкреатическому антигену) в сыворотке и плазме крови
человека
Номер по каталогу: EA 1302-9601 G
Набор рассчитан на 96 определений
ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ
Повышение уровня трансаминаз по невыясненным причинам, при подозрении на аутоиммунный гепатит.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Набор для иммуноферментного анализа SLA/LP IgG (Anti-SLA/LP ELISA (IgG)) предназначен для
полуколичественного или количественного in vitro определения аутоантител класса IgG к растворимому
антигену печени/печеночно-панкреатическому антигену (SLA/LP) в сыворотке и плазме крови человека. В
набор включен планшет из 8-луночных стрипов, разделяемых на отдельные лунки; на поверхности лунок
иммобилизованы антигены SLA/LP. На первой реакционной стадии в лунках инкубируют разведенные
исследуемые образцы. Имеющиеся в положительных образцах специфичные антитела класса IgG (а также
классов IgA и IgM) к SLA/LP связываются с антигенами. Для выявления связавшихся антител проводят
вторую инкубацию, используя меченные ферментом антитела к IgG человека (конъюгат фермента),
способные вызвать цветную реакцию. Интенсивность формирующейся окраски прямо пропорциональна
содержанию антител к SLA/LP в образце.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Состав набора:
Компоненты набора
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Лунки микропланшета
с иммобилизованными антигенами; 12 стрипов 8-луночных
(разделяемых на отдельные лунки), в рамке-держателе;
готовые к использованию
Калибратор 1
200 ОЕд/мл (IgG человека); готовый к использованию
Калибратор 2
20 ОЕд/мл (IgG человека); готовый к использованию
Калибратор 3
2 ОЕд/мл (IgG человека); готовый к использованию
Положительный контроль
(IgG человека); готовый к использованию
Отрицательный контроль
(IgG человека); готовый к использованию
Конъюгат фермента
меченные пероксидазой антитела к IgG человека
(кроличьи); готовый к использованию
Буфер для разведения образцов
готовый к использованию
Промывочный буфер
10х концентрат
10. Раствор хромогена/субстрата
ТМБ/Н2О2; готовый к использованию
11. Стоп-реагент
0,5 М раствор серной кислоты; готовый к использованию
12. Инструкция к набору
13. Протокол с целевыми значениями
Цвет
---
Количество
темнокрасный
красный
1 × 2,0 мл
CAL 1
1 × 2,0 мл
CAL 2
розовый
1 × 2,0 мл
CAL 3
синий
1 × 2,0 мл
POS CONTROL
зеленый
1 × 2,0 мл
NEG CONTROL
зеленый
1×12 мл
голубой
1 × 100 мл
SAMPLE BUFFER
бесцветный
1 × 100 мл
WASH BUFFER 10x
бесцветный
бесцветный
---
1 × 12 мл
SUBSTRATE
1 × 12 мл
STOP SOLUTION
---
1 шт.
12 × 8
Символ
STRIPS
CONJUGATE
1 шт.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
2
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Серия
Для in vitro диагностики
Температура хранения
Невскрытый набор использовать до
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ НАБОРА
Набор должен храниться при температуре 2-8 °С. Замораживание набора не допускается. Невскрытые
компоненты набора стабильны до истечения указанного срока годности.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Обращайтесь с исследуемыми образцами, калибраторами, контролями и проинкубированными стрипами
планшетов как с потенциально инфицированными материалами. Все реагенты и материалы, являющиеся
отходами, должны быть обработаны в соответствии с действующими нормативами.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание. Перед использованием все реагенты должны быть доведены до комнатной температуры (1825 °С), примерно, в течение 30 минут. После первого использования все реагенты стабильны до истечения
указанного срока годности при хранении при температуре 2-8 °С и предохранении от микробной
контаминации, если ниже не оговорены особые условия хранения.
- Стрипы с иммобилизованными антигенами
Стрипы готовы к использованию. Вскройте предохраняющую упаковку микропланшета за бороздку над
застежкой. Перед вскрытием упаковки стрипы должны быть доведены до комнатной температуры во
избежание конденсации влаги внутри лунок. После вскрытия упаковки неиспользуемые стрипы сразу
верните в пакет и плотно закройте его имеющейся на пакете самоуплотняющейся застежкой. (Не
удаляйте пакет с влагопоглотителем).
После первого вскрытия упаковки стрипы можно хранить в сухом месте при температуре 2-8 °С по
меньшей мере в течение 4 месяцев.
- Калибраторы и контроли
Калибраторы и контроли готовы к использованию. Перед использованием эти реагенты необходимо
тщательно перемешать.
- Конъюгат фермента
Конъюгат фермента готов к использованию. Перед использованием конъюгат необходимо тщательно
перемешать.
- Буфер для разведения образцов
Буфер для разведения образцов готов к использованию.
- Промывочный буфер
Промывочный буфер является 10-кратным концентратом. Если в концентрате промывочного буфера
о
образовались кристаллы, необходимо подогреть флакон с буфером при температуре 37 С и тщательно
перемешать перед разведением. С помощью чистой пипетки отберите необходимое количество
концентрата буфера и разведите деионизированной или дистиллированной водой (1 часть реагента плюс
9 частей дистиллированной воды).
Например, для одного стрипа: 5 мл концентрата плюс 45 мл воды.
Приготовленный разведенный промывочный буфер стабилен в течение 4 недель при хранении при
температуре 2-8 °С и соблюдении правил использования.
- Раствор хромогена/субстрата
Раствор хромогена/субстрата готов к использованию. Закрывайте флакон сразу после использования,
поскольку содержащийся в нем раствор чувствителен к свету. Используемый раствор
хромогена/субстрата должен быть бесцветен. Не используйте раствор, если он окрасился в голубой цвет.
- Стоп-реагент
Стоп-реагент готов к использованию.
Внимание! Калибраторы и контроли были проверены на наличие антигена гепатита В, а также антител к
вирусу гепатита С, ВИЧ-1 и ВИЧ-2 с помощью методов иммуноферментного анализа и непрямой
иммунофлюоресценции, и при этом показали отрицательные результаты. Однако, все используемые
материалы следует считать потенциально инфекционно опасными и обращаться с ними, соблюдая
необходимые меры предосторожности. Часть реагентов содержит токсическое вещество азид натрия.
Избегайте контакта реагентов с кожей.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
3
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
Исследуемые образцы
Сыворотка крови или взятая в ЭДТА, гепарин или цитрат плазма крови.
Стабильность
Исследуемые образцы сыворотки или плазмы крови могут храниться до 14 дней при температуре 2-8 °С.
Разведенные образцы следует исследовать в течение одного рабочего дня.
Разведение образцов
Образцы сыворотки или плазмы крови пациентов разводят 1:101 буфером для разведения образцов.
Например, разведите 10 мкл сыворотки крови в 1,0 мл буфера для разведения образцов и тщательно
перемешайте на вортексе (пипетка для перемешивания не пригодна).
ПРИМЕЧАНИЕ: Калибраторы и контроли уже предварительно разведены и готовы к использованию,
разводить их не следует.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
При полуколичественном анализе используют калибратор 2, а также положительный и отрицательный
контроли и исследуемые образцы. При количественном анализе используют калибраторы 1, 2 и 3, а
также положительный и отрицательный контроли и исследуемые образцы.
Инкубация образцов
(1-я стадия)
Внесите в отдельные лунки планшета по 100 мкл калибраторов, положительного
и отрицательного контролей или разведенных образцов сыворотки или плазмы
крови в соответствии со схемой внесения реагентов. Инкубируйте при комнатной
температуре (18-25 °С) в течение 30 минут.
Промывка
Вручную. Удалите содержимое лунок, затем последовательно промойте все
лунки 3 раза, каждый раз внося по 300 мкл приготовленного промывочного
буфера в каждую лунку.
Автоматическая. Промойте лунки 3 раза, внося по 400 мкл приготовленного
промывочного буфера в каждую лунку (программирование устройства для
промывания планшетов в режиме переполнения: “Overflow Modus”).
Оставляйте промывочный буфер в каждой лунке в течение 30 – 60 секунд во
время каждого цикла промывки, затем удаляйте содержимое лунок. После
промывки (вручную или автоматической) тщательно удаляйте остатки
промывочного буфера из лунок, постукивая перевернутым планшетом о
фильтровальную бумагу.
Примечание. Остатки жидкости (>10 мкл), скапливающейся в лунках после
промывки, могут повлиять на субстратную реакцию и привести к получению
ложно заниженных значений оптической плотности. Неправильная промывка
(например, менее 3 промывочных циклов, слишком маленькие объемы
промывочного буфера или слишком короткое время реакции) может привести к
ложно завышенным значениям оптической плотности.
Инкубация конъюгата
(2-я стадия)
Внесите во все лунки планшета по 100 мкл конъюгата фермента (меченных
пероксидазой антител к IgG человека). Инкубируйте при комнатной температуре
(18-25 °С) в течение 30 минут.
Промывка
Удалите содержимое лунок. Промойте, как описано выше.
Инкубация субстрата
(3-я стадия)
Внесите во все лунки планшета по 100 мкл раствора хромогена/субстрата.
Инкубируйте при комнатной температуре (18-25 °С) в течение 15 минут,
предохраняя от воздействия прямых солнечных лучей.
Остановка реакции
Внесите во все лунки планшета по 100 мкл стоп-реагента в той же
последовательности и с той же скоростью, как и раствор хромогена/субстрата.
Измерение
С помощью планшетного спектрофотометра измеряют интенсивность
окрашивания в лунках при длине волны 450 нм (значение референтной длины
волны между 620 нм и 650 нм) в течение 30 минут после добавления стопреагента. Перед измерением осторожно встряхните микропланшет для
обеспечения равномерного распределения раствора.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
4
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
СХЕМА ВНЕСЕНИЯ ОБРАЗЦОВ И КОНТРОЛЕЙ
A
B
C
D
E
F
G
H
1
С2
pos.
neg.
Р1
Р2
Р3
Р4
Р5
2
Р6
Р7
Р8
Р9
Р10
Р11
Р12
Р13
3
Р14
Р15
Р16
Р17
Р18
Р19
Р20
Р21
4
Р22
Р23
Р24
5
6
7
С1
С2
С3
pos.
neg.
Р1
Р2
Р3
8
Р4
Р5
Р6
Р7
Р8
Р9
Р10
Р11
9
Р12
Р13
Р14
Р15
Р16
Р17
Р18
Р19
10
Р20
Р21
Р22
Р23
Р24
11
12
Схема внесения реагентов в лунки стрипов 1–4 представляет собой образец заполнения лунок при
полуколичественном анализе 24 образцов сыворотки или плазмы крови пациентов (Р1–Р24).
Схема внесения реагентов в лунки стрипов 7–10 представляет собой образец заполнения лунок при
количественном анализе 24 образцов сыворотки или плазмы крови пациентов (Р1–Р24).
Каждый из калибраторов (С1–С3), положительный (pos.) и отрицательный (neg.) контроли и каждый из
образцов сыворотки или плазмы крови пациентов вносят в отдельную лунку. Надежность
иммуноферментного анализа можно повысить внесением каждой пробы в дубликатах.
Стрипы можно разделить на отдельные лунки. Это позволяет отмерить точное количество реагентов по
числу исследуемых образцов и снизить расход реагентов.
Как положительный, так и отрицательный контроли служат внутренними контролями правильности
постановки анализа. Контроли необходимо включать в каждую постановку анализа.
РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Полуколичественный анализ
Оценка результатов полуколичественного анализа производится путем расчета соотношения оптической
плотности контроля или исследуемого образца и оптической плотности калибратора 2. При вычислениях
руководствуются следующей формулой:
Оптическая плотность контроля или исследуемого образца
Оптическая плотность калибратора 2
= Соотношение
EUROIMMUN рекомендует следующую интерпретацию результатов:
Соотношение < 1,0
Соотношение > 1,0
отрицательный
положительный
Количественный анализ
Для определения концентрации антител к SLA/LP в образцах по измеренной оптической плотности строится
калибровочная кривая. По оси Y откладывают линейные значения измеренной оптической плотности 3
калибраторов, по оси X - соответственно линейные значения концентраций антител к SLA/LP в этих
калибраторах, затем соседние точки соединяются. Концентрацию антител в исследуемых образцах можно
вычислить и с помощью компьютера, используя кусочно-линейный способ расчета калибровочной кривой
(“point-to-point”).
Ниже приводится образец типичной калибровочной кривой. Пожалуйста, не используйте эту кривую для
определения концентрации антител в исследуемых образцах.
2,0
1,8
Оптическая плотность
1,6
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
ОЕд/мл
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
5
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Если значение оптической плотности исследуемого образца превышает значение оптической плотности
калибратора 1 (200 ОЕд/мл), результат записывают как “>200 ОЕд/мл”. Рекомендуется провести повторный
анализ этого образца после разведения его 1:400. Полученный при расчете по калибровочной кривой
результат в ОЕд/мл следует умножить на фактор разведения 4.
EUROIMMUN рекомендует верхний предел нормальных значений (значение cut-off или уровень
отсечения) равный 20 относительным единицам (ОЕд)/мл. EUROIMMUN рекомендует следующую
интерпретацию результатов:
< 20 ОЕд/мл
> 20 ОЕд/мл
отрицательный
положительный
При постановке анализа в дубликатах следует использовать среднее из значений в двух лунках. Если два
значения существенно отличаются друг от друга, анализ образца следует повторить.
При постановке диагноза наряду с результатами анализа сыворотки или плазмы крови следует всегда
учитывать и клинические симптомы.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Калибровка
Поскольку не существует международной референтной сыворотки для антител к SLA/LP, набор
откалиброван в относительных единицах (ОЕд).
Для каждой группы выполненных тестов значения оптической плотности калибраторов и значения в
относительных единицах и/или соотношения, определенные для положительного и отрицательного
контролей, должны укладываться в указанные для данной серии набора диапазоны. К набору прилагается
протокол, включающий эти целевые значения. Если значения концентраций контролей выходят за рамки
заданных диапазонов, следовательно, результаты анализа могут быть недостоверными, и тест необходимо
повторить.
Активность использованного фермента термозависима, поэтому значения оптических плотностей могут
изменяться, если не используется термостат. Чем выше комнатная температура (18-25 °С) во время
инкубации субстрата, тем будут выше значения оптических плотностей. Сходные колебания связаны и с
изменением времени инкубации. Однако, калибраторы, контроли и исследуемые образцы подвергаются
одним и тем же воздействиям, так что результаты оказываются в значительной степени
скомпенсированными при расчете по калибровочной кривой.
Антиген
На лунках планшета иммобилизованы рекомбинантные SLA/LP. Использованная смесь антигенов содержит
все значимые белки. Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в E. coli. После
идентификации SLA/LP на уровне ДНК было осуществлено клонирование соответствующего антигена в 1998
г. (A.W. Lohse, University Hospital of Mainz). SLA/LP, по-видимому, является цитоплазматической молекулой с
молекулярной массой 50 кДа, участвующей в регуляции биосинтеза белка [белка, ассоциированного с
супрессором кодона UGA тРНК (UGA-suppressor-tRNA associated protein)]. Ранее высказывавшиеся
предположения о том, что SLA представляет собой цитокератины печени 8 и 18 или глутатион-Sтрансферазу, очевидно, являются ошибочными.
Линейность
Линейность ИФА определяли, используя серийные разведения образцов сыворотки крови пациентов с
высокой концентрацией антител. На рисунке ниже приведены типичные кривые линейности для образцов
сывороток крови 3 пациентов. Набор Анти-SLA/LP ИФА (IgG) обладает линейностью в диапазоне
концентраций 2–200 ОЕд/мл.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
6
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
Аналитическая чувствительность
Предел определения антител к SLA/LP в наборе Анти-SLA/LP ИФА (IgG) рассчитан на основании значения
оптической плотности образца, не содержащего аналита, плюс утроенное среднее квадратичное
отклонение, и является наименьшим определяемым титром антител. Предел определения антител в наборе
Анти-SLA/LP ИФА (IgG) составляет около 1 ОЕд/мл.
Аналитическая специфичность
Перекрестная реактивность набора Анти-SLA/LP ИФА (IgG) не выявлена.
Влияние гемоглобина, триглицеридов и билирубина
Не отмечено искажения результатов при исследовании данным набором гемолизированных, липемических
или желтушных образцов сывороток с концентрацией гемоглобина до 10 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл
и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Воспроизводимость
Воспроизводимость ИФА оценивали по коэффициенту вариации (CV) в пределах одной постановки и между
постановками, проводя повторные исследования 3 образцов сыворотки крови с различным содержанием
антител. Коэффициент вариации в пределах одной постановки оценивали по 20 определениям,
коэффициент вариации между постановками – по 4 определениям, выполненным в течение 6 разных дней.
Вариабельность в пределах постановки,
n = 20
Сыворотка
крови
1
2
3
Среднее значение
(ОЕд/мл)
41
110
154
CV
(%)
2,6
2,3
3,7
Вариабельность между постановками,
n=4х6
Сыворотка
крови
1
2
3
Среднее значение
(ОЕд/мл)
44
118
169
CV
(%)
4,4
3,6
3,8
Распространенность и специфичность
Содержание антител к SLA/LP определяли набором Анти-SLA/LP ИФА (IgG) в 454 образцах сыворотки крови
пациентов с аутоиммунным гепатитом (АИГ), 165 образцах сыворотки крови пациентов с другими
заболеваниями печени и 200 образцах сыворотки крови здоровых доноров. Распространенность антител к
SLA/LP у пациентов с АИГ, не являющихся жителями Японии, оказалась в пределах 15-19%. Специфичность
теста составила 100%.
Группа пациентов (n=817)
Аутоиммунный гепатит
АИГ (анти-LKM-1 положительные)
Первичный билиарный цирроз
печени
Инфицированные вирусом гепатита
В
Инфицированные вирусом гепатита
С
Стеатогепатит
Токсическое поражение печени
Доноры крови
Источник сывороток
n
Prof. Lohse, Univ. Mainz
Панель сывороток крови из
Бразилии
Панель сывороток крови из Японии
Панель сывороток крови из Америки
Dr. Gruber, Univ. München
Dr. Gruber, Univ. München
PhD Dr. Wick. Klinikum Großhadem
108
Анти-SLA/LP
положительные
21 (19%)
154
25 (16%)
43
149
18
2 (5%)
23 (15%)
0
30
0
40
0
39
0
24
14
200
0
0
0
Labor Dr. Stöcker, Lübek
Prof. Lohse, Univ. Mainz
Labor Dr. Stöcker, Lübek
Prof. Lohse, Univ. Mainz
Prof. Lohse, Univ. Mainz
Med. Univ. Lübek
Ожидаемые значения
Уровни антител (IgG) к SLA/LP анализировали с помощью набора EUROIMMUN Анти-SLA/LP ИФА (IgG) на
панели сывороток 200 здоровых доноров крови. При уровне отсечения (значение cut-off) 20 ОЕд/мл все
доноры крови оказались анти-SLA/LP отрицательными.
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
7
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Определение аутоантител к растворимому антигену печени/печеночно-панкреатическому антигену (SLA/LP)
является новым и очень важным компонентом диагностики аутоиммунных заболеваний печени.
Аутоиммунные заболевания печени включают:
- аутоиммунный гепатит (АИГ)
- первичный билиарный цирроз печени (ПБЦ) и
- первичный склерозирующий холангит (ПСХ).
Аутоиммунный гепатит (АИГ, прежние названия: люпоидный гепатит, хронически активный гепатит)
встречается главным образом у женщин. Проявлениями заболевания являются повышенные уровни
билирубина, ферментов печени и иммуноглобулинов, типичные гистологические изменения (при биопсии
печени выявляется некроз паренхиматозных клеток с инфильтратами лимфоцитов и клеток плазмы крови) и
обнаружение различных аутоантител. Заболевание наблюдается начиная с младенчества и заканчивая
пожилыми людьми, однако чаще всего болеют молодые взрослые люди.
Частота заболевания АИГ в Западной Европе составляет 1,9 случаев на 100 000 человек в год. При
отсутствии лечения аутоиммунный гепатит вскоре перерастает в цирроз печени. Однако если вовремя
начата и постоянно продолжается в течение всей жизни больного иммуносупрессивная низкодозовая
терапия, пациент живет полноценной жизнью. При дифференциальной диагностике необходимо исключить
наличие текущего инфицирования вирусами гепатитов, проводя соответствующие серологические
исследования.
Большое значение в диагностике АИГ приобрели циркулирующие антитела. Они обнаруживаются у
большинства пациентов, но их роль в патогенезе невыяснена. Также нет четкой корреляции между
активностью или прогнозом заболевания и титром антител. Помимо антител к SLA/LP с АИГ ассоциированы
следующие аутоантитела: антитела к ядрам клеток (ANA), нДНК, гладкой мышечной ткани (SMA, с наиболее
важным антигеном-мишенью F-актином), печеночно-почечным микросомам (LKM-1, антиген-мишень:
цитохром Р450 IID6) и гранулоцитам (pANCA). Аутоантитела к SLA/LP, которые теперь можно определять с
помощью набора Анти-SLA/LP ИФА (IgG), по-видимому, имеют наибольшую диагностическую достоверность
среди всех аутоантител, возникающих при аутоиммунном гепатите. Анти-SLA/LP обнаруживаются при АИГ
или одни, или совместно с другими аутоантителами. Хотя они встречаются с частотой от 10% до 30%, их
прогностическое значение составляет почти 100%: каждый положительный результат по существу
свидетельствует о заболевании аутоиммунным гепатитом (при условии, что имеются соответствующие
клинические симптомы).
Определение антител к SLA/LP до настоящего времени было возможно только в нескольких специальных
лабораториях. Ранее предполагали, что антиген SLA идентичен цитокератинам печени 8 и 18 или ферменту
глутатион-S-трансферазе. Лишь недавно было установлено, что это предположение ошибочно. Открытый
антиген-мишень SLA/LP только в настоящее время надежно идентифицирован на уровне ДНК. SLA/LP, повидимому, является цитоплазматической молекулой, участвующей в регуляции биосинтеза белка (белка,
ассоциированного с супрессором кодона UGA тРНК). Теперь большое диагностическое значение
аутоантител к SLA/LP стало очевидно.
Аутоантитела к ядрам клеток (ANA) и к гладкой мышечной ткани (SMA) часто наблюдаются при АИГ, но
встречаются также и у 10-20% пациентов с хроническими вирусными гепатитами и другими заболеваниями.
Аутоантитела к LKM-1 обнаружены только у 1% взрослых пациентов с АИГ, но у детей они встречаются
чаще. Антитела к LKM-1 выявляются также у 1-2% пациентов с положительным результатом исследования
сыворотки крови на гепатит С. В отличие от всех других аутоантител антитела к SLA/LP высокоспецифичны
для АИГ и не обнаружены у пациентов с вирусными гепатитами.
Некоторые авторы классифицируют аутоиммунные гепатиты в соответствии с наличием аутоантител:
Подтип I (ANA,SMA), Подтип II (антитела к LKM-1) и Подтип III (антитела к SLA/LP). Эта классификация, повидимому, не имеет ни клинического, ни терапевтического и прогностического значения.
Диагностика АИГ основывается на клинической картине, результатах биохимического и серологического
исследований и гистологическом свидетельстве протекающего воспалительного процесса. При этом должны
быть исключены другие возможные причины возникновения хронического гепатита, такие как вирусная
инфекция, употребление алкоголя или прием лекарств, и проведено разграничение с другими
аутоиммунными заболеваниями печени (первичный билиарный цирроз печени и первичный склерозирующий
холангит). Диагностика АИГ может быть признана правильной, если она удовлетворяет 4 из 5 приведенных
ниже главных критериев. Если имеются все 5 критериев, диагноз очевиден. Диагноз подтверждается, если
лечение иммуносупрессорами оказывается эффективным.
Главные критерии диагностики аутоиммунного гепатита
1. Гистологическое свидетельство гепатита
2. Выявление аутоантител (ANA, SMA, LKM, SLA/LP)
3. Гипергаммаглобулинемия
4. Отрицательный результат исследования сыворотки крови на вирусы гепатитов В и С
5. Выявление антигенов системы гистосовместимости HLA B8, DR3 или DR4
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
8
Anti-SLA/LP ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
_____________________________________________________________________________________________________
У многих пациентов с АИГ выявление в сыворотке крови аутоантител к SLA/LP обеспечивает четкое
разграничение с вирусными гепатитами. Аутоиммунная серология гепатитов, таким образом, обогащена
дополнительным параметром, значение которого следует признать большим, чем значение антител к ядрам
клеток, ДНК, гладкой мышечной ткани и печеночно-почечным микросомам (ANA, нДНК, ASMA, LKM).
Исследование этих антител имеет важные последствия для терапии заболеваний печени: результаты
ошибочного лечения АИГ интерфероном могут быть такими же пагубными, как и лечения вирусных
инфекций иммуносупрессорами.
Первичный билиарный цирроз (ПБЦ) – это цирроз печени, который принимает форму негнойного
деструктивного воспалительного процесса в желчных протоках. Он встречается у женщин в десятки раз
чаще, чем у мужчин. Центральное место в клинической картине этого заболевания занимает холестаз. В
Европе это заболевание ежегодно развивается у 13 человек из 100 000. Поскольку цирроз обнаруживается
не в каждом случае и часто только на поздней стадии, это заболевание лучше называть “хроническим
негнойным деструктивным холангитом”. Характерным для этого заболевания является обнаружение в
сыворотке крови аутоантител к митохондриальной фракции М2 (AMA M2) и к ядерным пятнам (Nuclear
Dots) (кислому белку SP100). Примерно у 10-20% пациентов с ПБЦ развивается вторичный аутоиммунный
гепатит (также называемый перекрывающим синдромом (overlap syndrome)). В этих случаях, как и при
АИГ, часто обнаруживают аутоантитела. Антитела к SLA/LP являются свидетельством вторичного АИГ
(перекрывающего синдрома), при котором необходимо лечение иммуносупрессорами.
Первичный склерозирующий холангит (ПСХ) ежегодно встречается в 4 случаях на 100 000 населения.
Клиническая картина также характеризуется холестазом. Диагностика основана на результатах
лабораторного
анализа,
гистологии
и
ЭРХП
(ERCP)
(эндоскопической
ретроградной
холангиопанкреатикографии). Заболевание развивается главным образом у мужчин, и у половины
пациентов наблюдается сопутствующий язвенный колит (и наоборот, распространенность ПСХ в случаях
язвенного колита составляет 4%). У большинства пациентов с ПСХ выявляются аутоантитела к
гранулоцитам (pANCA). Изредка pANCA также обнаруживаются при АИГ и ПБЦ, и из-за этого их значение
для дифференциальной диагностики ограничено. Однако присутствие pANCA является признаком
протекающего аутоиммунного заболевания печени и, возможно, может быть использовано для
разграничения с инфекционными формами гепатитов. Несмотря на описанное перекрывание ПСХ и АИГ,
антитела к SLA/LP у пациентов с ПСХ не выявлены.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Anti-SLA-LP-EA 1302-9601G_rus.doc
07.07.2004 14:55
Оригинал: Anti-SLA/LP ELISA (IgG)
EA_1302G_A_UK_C01.doc
27.10.2003
_____________________________________________________________________________________________________
 Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2004
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru