ÌÈÍÈÑÒÅÐÑÒÂÎ ÇÄÐÀÂÎÎÕÐÀÍÅÍÈß ÐÅÑÏÓÁËÈÊÈ ÁÅËÀÐÓÑÜ ÌÅÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÐÅÊÎÌÅÍÄÀÖÈÈ
реклама
ÌÈÍÈÑÒÅÐÑÒÂÎ ÇÄÐÀÂÎÎÕÐÀÍÅÍÈß ÐÅÑÏÓÁËÈÊÈ ÁÅËÀÐÓÑÜ ÌÅÒÎÄÈ×ÅÑÊÈÅ ÐÅÊÎÌÅÍÄÀÖÈÈ ÓÒÂÅÐÆÄÀÞ Ïåðâûé çàìåñòèòåëü ìèíèñòðà äðàâîîõðàíåíèÿ Â.Ì.Îðåõîâñêèé ÑÎÃËÀÑÎÂÀÍÎ Çàìåñòèòåëü íà÷àëüíèêà Ãëàâíîãî óïðàâëåíèÿ êàäðîâîé ïîëèòèêè, ó÷åáíûõ çàâåäåíèé è íàóêè Í.È. Äîñòà 26 äåêàáðÿ 2000 ã. 26 äåêàáðÿ 2000 ã. Ðåãèñòðàöèîííûé ¹ 174-0012 ÀÍÒÈÃÅÍÛ ÃËÀÂÍÎÃÎ ÊÎÌÏËÅÊÑÀ ÃÈÑÒÎÑÎÂÌÅÑÒÈÌÎÑÒÈ Â ÏÐÎÃÍÎÇÈÐÎÂÀÍÈÈ ÈÌÌÓÍÍÎÃÎ ÎÒÂÅÒÀ ÎÐÃÀÍÈÇÌÀ ÍÀ ÑÒÀÔÈËÎÊÎÊÊÎÂÛÉ ÀÍÀÒÎÊÑÈÍ Ìèíñê 2000 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Îñíîâíîå ó÷ðåæäåíèå-ðàçðàáîò÷èê: ÍÈÈ ãåìàòîëîãèè è ïåðåëèâàíèÿ êðîâè Ó÷ðåæäåíèå-ñîèñïîëíèòåëü: Ðåñïóáëèêàíñêàÿ ñòàíöèÿ ïåðåëèâàíèÿ êðîâè Àâòîðû: Â.È. Ëåâèí, Ý.Ë. Ñâèðíîâñêàÿ, Ã.Â. Ñåìåíîâ, À.Å. Êàëìûêîâà, Â.Ñ. Áîíäàðåíêî Ðåöåíçåíòû: ä-ð ìåä. íàóê Ì.Ï. Ïîòàïíåâ, êàíä. ìåä. íàóê, äîö. Ë.À. Ñìèðíîâà Íà îñíîâàíèè ñîïîñòàâëåíèÿ ðàçëè÷íûõ ïàðàìåòðîâ ñèñòåìû àíòèãåíîâ ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè (ñèñòåìà HLA) è òèòðîâ ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ñûâîðîòêè êðîâè ó äîíîðîâ, ïðîèììóíèçèðîâàííûõ ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì, ïðåäëîæåíû ìàðêåðû ñèñòåìû HLA, ïðîãíîçèðóþùèå âûñîêèé è íèçêèé óðîâåíü èììóííîãî îòâåòà íà èçó÷åííûé àíòèãåí. Äàíû ðåêîìåíäàöèè äëÿ êîìïëåêòîâàíèÿ ãðóïï èììóíèçèðóåìûõ äîíîðîâ è îáùèå ïðåäñòàâëåíèÿ îá àíòèãåíàõ ñèñòåìû HLA. Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè ïðåäíàçíà÷åíû äëÿ âðà÷åé ñëóæáû êðîâè è âðà÷åé âñåõ ïðîôèëåé, ðàáîòàþùèõ ïî ïðîáëåìå «HLA è áîëåçíè». Ìåòîäè÷åñêèå ðåêîìåíäàöèè óòâåðæäåíû Ìèíèñòåðñòâîì çäðàâîîõðàíåíèÿ Ðåñïóáëèêè Áåëàðóñü â êà÷åñòâå îôèöèàëüíîãî äîêóìåíòà. 2 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Îãëàâëåíèå ÂÂÅÄÅÍÈÅ .......................................................................................................................................................... 4 ÀÍÒÈÃÅÍÛ ÃËÀÂÍÎÃÎ ÊÎÌÏËÅÊÑÀ ÃÈÑÒÎÑÎÂÌÅÑÒÈÌÎÑÒÈ ×ÅËÎÂÅÊÀ ....................... 7 ÒÊÀÍÅÂÎÅ ÒÈÏÈÐÎÂÀÍÈÅ ....................................................................................................................... 18 ÂÛÄÅËÅÍÈÅ ËÈÌÔÎÖÈÒΠ.................................................................................................................... 19 1. Ñåïàðàöèÿ ñóììàðíîé ïîïóëÿöèè ëèìôîöèòîâ .............................................................................................. 19 2. Ïîëó÷åíèå B-ëèìôîöèòîâ äëÿ HLA-DR-òèïèðîâàíèÿ ................................................................................... 19 3. Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè .............................................................................................................................................. 21 4. Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèé â ìèêðîëèìôîöèòîòîêñè÷åñêîì òåñòå ïðè ëþáîì ñïîñîáå îêðàñêè ............ 23 5. Ïðèãîòîâëåíèå ðåàêòèâîâ, èñïîëüçóåìûõ â ìèêðîëèìôîöèòîòîêñè÷åñêîì òåñòå ................................... 23 ÏÐÎÃÍÎÇÈÐÎÂÀÍÈÅ ÓÐÎÂÍß ÈÌÌÓÍÍÎÃÎ ÎÒÂÅÒÀ Ñ ÈÑÏÎËÜÇÎÂÀÍÈÅÌ ÍÅÊÎÒÎÐÛÕ ÏÀÐÀÌÅÒÐΠÑÈÑÒÅÌÛ HLA ..................................................................................... 25 ÇÀÊËÞ×ÅÍÈÅ ................................................................................................................................................ 27 3 Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ÂÂÅÄÅÍÈÅ Òåðàïèÿ ãíîéíî-âîñïàëèòåëüíûõ çàáîëåâàíèé, âûçûâàåìûõ óñëîâíî-ïàòîãåííûìè âîçáóäèòåëÿìè, îòíîñèòñÿ ê àêòóàëüíûì ïðîáëåìàì ñîâðåìåííîé ìåäèöèíû. Ëèäèðóþùåå ïîëîæåíèå ñðåäè âîçáóäèòåëåé äàííîãî âèäà ïàòîëîãèè ïî-ïðåæíåìó çàíèìàþò ñòàôèëîêîêêè. Àíòèáèîòèêîòåðàïèÿ, äàæå ñ èñïîëüçîâàíèåì ïðåïàðàòîâ ïîñëåäíåãî ïîêîëåíèÿ, äàëåêî íå âñåãäà ñïîñîáíà êóïèðîâàòü ïðîãðåññèðîâàíèå èíôåêöèîííîãî ïðîöåññà, îñîáåííî ó íîâîðîæäåííûõ è â ñëó÷àÿõ ðàçâèòèÿ âòîðè÷íîãî èììóíîäåôèöèòà. Íàáëþäàåìîå â ïîñëåäíèå äåñÿòèëåòèÿ ñóùåñòâåííîå ïîâûøåíèå ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè áîëüíûõ ñî ñòàôèëîêîêêîâîé èíôåêöèåé, îñîáåííî â îñòðîì ïåðèîäå çàáîëåâàíèÿ, êîãäà òðåáóåòñÿ áûñòðîå êóïèðîâàíèå ïàòîëîãè÷åñêîãî ïðîöåññà, îáóñëîâëåíî âíåäðåíèåì â ïðàêòèêó çäðàâîîõðàíåíèÿ êîìïîíåíòîâ è ïðåïàðàòîâ êðîâè, ñîäåðæàùèõ èììóíîãëîáóëèíû íàïðàâëåííîãî äåéñòâèÿ. Åäèíñòâåííûì èñòî÷íèêîì èõ ïîëó÷åíèÿ ÿâëÿþòñÿ äîíîðû, â ïëàçìå êðîâè êîòîðûõ ñîäåðæàòñÿ a-àíòèñòàôèëîëèçèíû, âûðàáàòûâàåìûå âñëåäñòâèå íàïðàâëåííîé (èñêóññòâåííîé) èììóíèçàöèè äîáðîâîëüöåâ ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì. Îäíàêî íèçêèå òèòðû ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë, ðåãèñòðèðóåìûå â äîñòàòî÷íî áîëüøîì ïðîöåíòå ñëó÷àåâ ó ïðîèììóíèçèðîâàííûõ äîíîðîâ, îáóñëàâëèâàþò íåïðèãîäíîñòü èõ êðîâè äëÿ ïîëó÷åíèÿ ãèïåðèììóííûõ ïðåïàðàòîâ, ÷òî îãðàíè÷èâàåò øèðîêîå èñïîëüçîâàíèå ïîñëåäíèõ â êëèíè÷åñêîé ïðàêòèêå. Îáúÿñíåíèå óêàçàííîìó îáñòîÿòåëüñòâó íàõîäèòñÿ â îäíîì èç îñíîâíûõ ïðèíöèïîâ ñîâðåìåííîé èììóíîëîãèè êîíöåïöèè î êîíêðåòíîñòè èììóííîãî îòâåòà.  îñíîâå ïîñëåäíåé ëåæèò ïðåäñòàâëåíèå î òîì, ÷òî ñïîñîáíîñòü ê èììóííîìó îòâåòó íà ëþáîé àíòèãåííûé ñòèìóë ãåíåòè÷åñêè äåòåðìèíèðîâàíà è ïîäâåðæåíà çíà÷èòåëüíûì èíäèâèäóàëüíûì êîëåáàíèÿì. Ïðè ýòîì íèçêèé óðîâåíü èììóííîãî îòâåòà èíäèâèäóóìà íà îäèí àíòèãåí ìîæåò ñî÷åòàòüñÿ ñ âûñîêîé îòâå÷àåìîñòüþ íà èììóíèçàöèþ äðóãèì àíòèãåíîì. Òàêèì îáðàçîì, ïîâûøåíèå ýôôåêòèâíîñòè ïðîâîäèìîé èììóíèçàöèè íåïîñðåäñòâåííî 4 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ñâÿçàíî ñ îïðåäåëåíèåì ïîòåíöèàëüíîé èììóíîëîãè÷åñêîé ðåàêòèâíîñòè èíäèâèäà íà êàæäûé êîíêðåòíûé àíòèãåí. Âìåñòå ñ òåì, ñõåìû ïîëó÷åíèÿ ãèïåðèììóííûõ ïðåïàðàòîâ íå ïðåäóñìàòðèâàþò íè îäíîãî êðèòåðèÿ îòáîðà äîíîðîâ, ïîçâîëÿþùèõ ïðîãíîçèðîâàòü èñõîä èììóíèçàöèè. Ñîãëàñíî äåéñòâóþùåé «Èíñòðóêöèè ïî èììóíèçàöèè äîíîðîâ ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì è ïðîâåäåíèþ ïëàçìàôåðåçà äëÿ ïîëó÷åíèÿ àíòèñòàôèëîêîêêîâîé ïëàçìû» (Ìîñêâà, 1977), ïðåäóñìîòðåííûé êîìïëåêñ êëèíèêî-ëàáîðàòîðíîãî îáñëåäîâàíèÿ äîíîðîâ, ïðèâëåêàåìûõ ê èììóíèçàöèè, íàïðàâëåí èñêëþ÷èòåëüíî íà îõðàíó èõ çäîðîâüÿ. Ïðîãíîçèðîâàíèå æå óðîâíÿ îòâåòà îðãàíèçìà íà àíòèãåí, èñïîëüçóåìûé äëÿ èììóíèçàöèè (â íàøåì ñëó÷àå íà ñòàôèëîêîêêîâûé àíàòîêñèí), ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ ðàöèîíàëüíîãî èñïîëüçîâàíèÿ êîíòèíãåíòà äîáðîâîëüöåâ, ïðèâëåêàåìûõ ê èììóíèçàöèè. Èñêëþ÷åíèå èç ãðóïïû èììóíèçèðóåìûõ ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì äîíîðîâ, ó êîòîðûõ ïðåäïîëàãàåòñÿ ïîëó÷åíèå ãèïåðèììóííîé ïëàçìû êðîâè ñ íèçêèì òèòðîì a-àíòèñòàôèëîëèçèíîâ (íèæå 3 ÌÅ), ïîçâîëÿåò ïðèâëåêàòü èõ ê èììóíèçàöèè äðóãèìè àíòèãåíàìè, ÷òî ïðè îãðàíè÷åííîì êîíòèíãåíòå äîíîðîâ ïðåäñòàâëÿåòñÿ äîñòàòî÷íî ïåðñïåêòèâíûì. Âêëþ÷åíèå â ãðóïïó èììóíèçèðóåìûõ ëèö äîíîðîâ ñ ïðîãíîçèðóåìûì âûñîêèì óðîâíåì îòâåòà íà ñòàôèëîêîêêîâûé àíàòîêñèí ïîçâîëÿåò ïîëó÷èòü ïëàçìó êðîâè ñ âûñîêèì òèòðîì àíòèòåë îò áîëüøåãî êîëè÷åñòâà äîíîðîâ, ÷òî äàåò îùóòèìûé ýêîíîìè÷åñêèé ýôôåêò. Ïðè ýòîì ïîâûøàåòñÿ êà÷åñòâî àíòèñòàôèëîêîêêîâûõ ïðåïàðàòîâ êðîâè, à ñëåäîâàòåëüíî, è ëå÷åáíàÿ ýôôåêòèâíîñòü èõ êëèíè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ. Íåñîìíåííûì ïðåèìóùåñòâîì èñïîëüçîâàíèÿ ìåòîäà ïðîãíîçèðîâàíèÿ âûðàæåííîñòè èììóííîãî îòâåòà íà ñòàôèëîêîêêîâûé àíàòîêñèí è íàó÷íî îáîñíîâàííîãî, ïî åãî ðåçóëüòàòàì, îòêëîíåíèÿ àðåàêòèâíûõ äîíîðîâ îò èììóíèçàöèè ÿâëÿåòñÿ èñêëþ÷åíèå íåæåëàòåëüíîé äëÿ íèõ àíòèãåííîé íàãðóçêè, ñâÿçàííîé ñ ïðîâîäèìîé èììóíèçàöèåé. 5 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Äàííûå, ïîëó÷åííûå â ïîñëåäíèå äåñÿòèëåòèÿ â îòíîøåíèè ìåõàíèçìà ïîääåðæàíèÿ èììóíîëîãè÷åñêîãî ãîìåîñòàçà îðãàíèçìà, îïðåäåëèëè âîçìîæíûå ïóòè ïðîãíîçèðîâàíèÿ âûðàæåííîñòè èììóííûõ ðåàêöèé. Ïðåæäå âñåãî ê íèì îòíîñèòñÿ ïîèñê ìàðêåðîâ âûñîêîãî è íèçêîãî óðîâíÿ èììóííîãî îòâåòà îðãàíèçìà íà êîíêðåòíûé àíòèãåííûé ñòèìóë â ñèñòåìå àíòèãåíîâ ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè (ñèñòåìà HLA), âûñîêèé ïîëèìîðôèçì êîòîðîé, ðàâíî êàê è îïðåäåëÿþùàÿ ðîëü â ïîääåðæàíèè ãîìåîñòàçà îðãàíèçìà, â íàñòîÿùåå âðåìÿ íå âûçûâàåò ñîìíåíèé. 6 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ÀÍÒÈÃÅÍÛ ÃËÀÂÍÎÃÎ ÊÎÌÏËÅÊÑÀ ÃÈÑÒÎÑÎÂÌÅÑÒÈÌÎÑÒÈ ×ÅËÎÂÅÊÀ Ñèñòåìà àíòèãåíîâ ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè îòíîñèòñÿ ê íàèáîëåå âàæíûì èç èçâåñòíûõ èììóíîãåíåòè÷åñêèõ ñèñòåì ÷åëîâåêà â ñâÿçè ñ åå âûñîêèì ïîëèìîðôèçìîì è àêòèâíûì ó÷àñòèåì â æèçíåííî âàæíûõ áèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ, ïðîòåêàþùèõ â îðãàíèçìå. Ïåðâûé àíòèãåí ýòîé ñèñòåìû áûë îòêðûò â 1958 ã. Æ. Äîññå ñ ïîìîùüþ ñûâîðîòîê áîëüíûõ, êîòîðûì îñóùåñòâëÿëèñü ìíîãîêðàòíûå òðàíñôóçèè êðîâè. Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè èçâåñòíî áîëåå 200 àíòèãåíîâ ýòîé ñèñòåìû, ñòàíäàðòíàÿ íîìåíêëàòóðà êîòîðîé óñòàíîâëåíà ñïåöèàëüíîé êîìèññèåé ÂÎÇ êàê Human Leukocyte Antigens (ñèñòåìà HLA). Ãëàâíûé êîìïëåêñ ãèñòîñîâìåñòèìîñòè (ÃÊÃÑ) ÷åëîâåêà ðàñïîëîæåí íà êîðîòêîì ïëå÷å 6-é àóòîñîìíîé õðîìîñîìû è çàíèìàåò îáëàñòü 1,52 ñàíòèìîðãàíà. Ðàçìåðû êîìïëåêñà ïîçâîëÿþò ðàçìåñòèòüñÿ â íåì 105106 ãåíîâ.  íàñòîÿùåå âðåìÿ âñå HLA-ãåíû è êîäèðóåìûå èìè àíòèãåíû ïîäðàçäåëÿþòñÿ íà òðè êëàññà. Ê I êëàññó îòíîñÿòñÿ ãåíû, äåòåðìèíèðóþùèå àíòèãåíû ëîêóñîâ À,  è Ñ, èäåíòèôèöèðóåìûå ñåðîëîãè÷åñêè. Àíòèãåíû HLA II êëàññà êîíòðîëèðóþòñÿ, êàê ìèíèìóì, 45 ëîêóñàìè, àëëåëè êîòîðûõ âûÿâëÿþòñÿ ëèáî ïî ðåàêöèè ñ öèòîòîêñè÷åñêèìè Ò-ëèìôîöèòàìè â ñìåøàííîé êóëüòóðå ëèìôîöèòîâ (ëîêóñû D è DP), ëèáî ñåðîëîãè÷åñêè â ìèêðîëèìôîöèòîòîêñè÷åñêîì òåñòå ñ Â-ëèìôîöèòàìè (ëîêóñû DR è DQ). Î÷åâèäíî, ÷òî ïðè ñòîëü áîëüøîì ÷èñëå àëëåëåé â êàæäîì ëîêóñå I è II êëàññîâ ñèñòåìà HLA õàðàêòåðèçóåòñÿ îãðîìíûì ïîëèìîðôèçìîì, óñèëèâàþùèìñÿ ñóùåñòâîâàíèåì àëëîòèïè÷åñêèõ ôîðì ìîëåêóë HLA êëàññà III, êîäèðóþùèõ ïðîäóêöèþ êîìïîíåíòîâ êîìïëåìåíòà Ñ2, Ñ4à, Ñ4b, Âf, à òàêæå ýíçèìû ñòåðîèäîâ (21-ãèäðîêñèëàçà) è öèòîêèíû (ôàêòîð íåêðîçà îïóõîëè) è äð. (ñì. òàáë. 1, 2). 7 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî HLA-àíòèãåíû I êëàññà ýêñïðåññèðîâàíû íà âñåõ ÿäðîñîäåðæàùèõ êëåòêàõ îðãàíèçìà, çà èñêëþ÷åíèåì íåéðîíîâ ÖÍÑ, ñïåðìàòîçîèäîâ ÷åëîâåêà, ýíäîòåëèÿ ðîãîâèöû, òðîôîáëàñòà, êëåòîê ýíäîêðèííûõ è ýêçîêðèííûõ æåëåç. Íåçíà÷èòåëüíî ïðåäñòàâëåíû îíè è íà êðàñíûõ êðîâÿíûõ êëåòêàõ. Àíòèãåíû II êëàññà èìåþò áîëåå îãðàíè÷åííîå ðàñïðîñòðàíåíèå è ðàñïîëàãàþòñÿ íà ïîâåðõíîñòè ìåìáðàíû Â-ëèìôîöèòîâ, àêòèâèðîâàííûõ Ò-ëèìôîöèòîâ, àíòèãåíïðåçåíòèðóþùèõ êëåòîê, âêëþ÷àÿ ìàêðîôàãè, äåíäðèòíûõ êëåòîê, êóïôåðîâñêèõ êëåòîê, ýíäîòåëèîöèòîâ, êðîìå êëåòîê ÖÍÑ è ïëàöåíòû. Íàñëåäîâàíèå HLA-êîìïëåêñà ïðîèñõîäèò ïî êîäîìèíàíòíîìó òèïó, à èç-çà íåðàâíîâåñíîãî ñöåïëåíèÿ íàáëþäàåòñÿ óñòîé÷èâîñòü HLA-ãàïëîòèïîâ. Íåðàâíîâåñíîå ñöåïëåíèå îáúÿñíÿåòñÿ íèçêîé ÷àñòîòîé ðåêîìáèíàöèé äëÿ ñèñòåìû HLA, êîòîðàÿ ñîñòàâëÿåò äëÿ ãåíîâ III, II, I êëàññîâ ñîîòâåòñòâåííî 0,94%, 0,74%, 0,31%. Áèîëîãè÷åñêàÿ ðîëü àíòèãåíîâ ÃÊÃÑ îïðåäåëÿåòñÿ èõ ó÷àñòèåì â ðàçëè÷íûõ ñòîðîíàõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè îðãàíèçìà ÷åëîâåêà, ïðåæäå âñåãî, â ðàçâèòèè èììóííîãî îòâåòà îðãàíèçìà íà àíòèãåííûé ñòèìóë.  îñíîâå îáúÿñíåíèÿ ó÷àñòèÿ HLA-àíòèãåíîâ â êëåòî÷íîì âçàèìîäåéñòâèè ïðè èììóííîì îòâåòå ëåæèò òåîðèÿ «äâîéíîãî ðàñïîçíàâàíèÿ». Ñóùíîñòü òåîðèè ñîñòîèò â òîì, ÷òî ðàñïîçíàþùèå àíòèãåí Ò-ëèìôîöèòû äîëæíû «óäîñòîâåðèòüñÿ», ÷òî ÷óæåðîäíûé àíòèãåí ïðåäñòàâëåí äëÿ ðàñïîçíàâàíèÿ êëåòêîé ñîáñòâåííîãî îðãàíèçìà, ò.å. îäíîâðåìåííî ñ ðàñïîçíàâàíèåì ÷óæåðîäíîãî èäåò è ðàñïîçíàâàíèå «ñâîåãî» ïî àíòèãåíàì ãèñòîñîâìåñòèìîñòè. 8 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Òàáëèöà 1 Íîìåíêëàòóðà àíòèãåíîâ ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè I êëàññà HLA A A1 A2 A 203 A 210 A3 A9 A 10 A 11 A 19 A 23(9) A 24(9) A 2403 9 HLA B B5 B7 B 703 B8 B 12 B 13 B 14 B 15 B 16 B 17 B 18 B 21 HLA B B50 (21) B 51(5) B 5102 B 5103 B 52(5) B 53 B 54(22) B 55(22) B 56(22) B 57(17) B 58(17) B 59 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ HLA C Cw 1 Cw 2 Cw 3 Cw 4 Cw 5 Cw 6 Cw 7 Cw 8 Cw 9(w 3) Cw 10(w 3) Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Ïðîäîëæåíèå òàáëèöû 1 HLA A A 25(10) A 26(10) A 28 A 29(19) A 30(19) A 31(19) A 32(19) A 33(19) A 34(10) A 36 A43 A 66(10) A 68(28) A 69(28) A 74(19) 10 HLA B B 22 B 27 B 35 B 37 B 38(16) B 39(16) B 3901 B 3902 B 40 B 4005 B 41 B 42 B 44(12) B 45(12) B 46 B 47 B 48 B 49(21) HLA B B 60(40) B 61(41) B 62(15) B 63(15) B 64(14) B 65(14) B 67 B 70 B 71(70) B 72(70) B 73 B 75(15) B 76(15) B 77(15) B 7801 Bw 4 Bw 6 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ HLA C Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Íîìåíêëàòóðà àíòèãåíîâ ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè II êëàññà HLA D Dw 1 Dw 2 Dw 3 Dw 4 Dw 5 Dw 6 Dw 7 Dw 8 Dw 9 Dw 10 Dw 11(w7) 11 HLA DR DR 1 DR 103 DR 2 DR 3 DR 4 DR 5 DR 6 DR 7 DR 8 DR 9 DR 10 HLA DQ DQ 1 DQ 2 DQ 3 DQ 4 DQ 5(1) DQ 6(1) DQ 7(3) DQ 8(3) DQ 9(3) Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ HLA DP DPw 1 DPw 2 DPw 3 DPw 4 DPw 5 DPw 6 Òàáëèöà 2 Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Ïðîäîëæåíèå òàáëèöû 2 HLA D Dw 12 Dw 13 Dw 14 Dw 15 Dw 16 Dw 17(w7) Dw 18(w6) Dw 19(w6) Dw 20 Dw 21 Dw 21 Dw 22 Dw 23 Dw 24 Dw 25 Dw 26 12 HLA DR DR 11(5) DR 12(5) DR 13(6) DR 14(6) DR 1403 DR 1404 DR 15(2) DR 16(2) DR 17(3) DR 18(3) DR 51 DR 52 DR 53 HLA DQ Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ HLA DP Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà...  îáåñïå÷åíèè âçàèìîäåéñòâèÿ èììóíîêîìïåòåíòíûõ êëåòîê àíòèãåíû I è II êëàññîâ âûïîëíÿþò ðàçëè÷íûå, çà÷àñòóþ âçàèìîäîïîëíÿþùèå äðóã äðóãà, ôóíêöèè. Ôóíêöèè ðåñòðèêöèè (îãðàíè÷åíèÿ) èììóííîãî îòâåòà íà óðîâíå ðàñïîçíàâàíèÿ ÷óæåðîäíîãî àíòèãåíà è âçàèìîäåéñòâèÿ àóòîëîãè÷íûõ ìàêðîôàãîâ-ìîíîöèòîâ (ïðåäñòàâëÿþùèõ àíòèãåí) ñ Òõåëïåðàìè ïðèíàäëåæàò HLA-D/DR-ðåãèîíó, â òî âðåìÿ êàê âî âçàèìîäåéñòâèè ìåæäó êëåòêîé-ýôôåêòîðîì è ìèøåíüþ îñíîâíàÿ ôóíêöèÿ â îãðàíè÷åíèè èììóííîãî îòâåòà ïðèíàäëåæèò àíòèãåíàì I êëàññà. Ãèïîòåçà àññîöèàòèâíîãî ðàñïîçíàâàíèÿ, íàèáîëåå ñîîòâåòñòâóþùàÿ ñîâðåìåííûì ïðåäñòàâëåíèÿì î ôóíêöèè àíòèãåíîâ II êëàññà â ðåñòðèêöèè èììóííîãî îòâåòà, îñíîâûâàåòñÿ íà òîì, ÷òî ìàêðîôàã, èìåþùèé íà ìåìáðàíå ìîëåêóëû êëàññà II, âçàèìîäåéñòâóåò ñ àíòèãåíîì. Ýòîò êîìïëåêñ ðàñïîçíàåòñÿ Ò-êëåòêàìè è ïðîèñõîäèò îáðàçîâàíèå àêòèâíûõ Ò-õåëïåðîâ, îïîñðåäóþùèõ àíòèãåííûé ñòèìóë íà Â-ëèìôîöèòû ïðîäóöåíòû àíòèòåë. Ðåñïîíäåð (èíäèâèäóóì, àêòèâíî îòâå÷àþùèé íà êîíêðåòíûé àíòèãåííûé ñòèìóë) íåñåò êëîí ìàêðîôàãîâ, êîòîðûé èìååò ìîëåêóëû êëàññà II, àññîöèèðóþùèåñÿ ñ ÷óæåðîäíûì àíòèãåíîì, ðåçóëüòàòîì ÷åãî ÿâëÿåòñÿ ñèëüíûé èììóííûé îòâåò. Ìîëåêóëû àíòèãåíîâ I êëàññà îáðàçóþò êîìïëåêñ ñ ÷óæåðîäíûì àëëîàíòèãåíîì íà êëåòî÷íîé ìåìáðàíå, çàòåì ïðîèñõîäèò âçàèìîäåéñòâèå êîìïëåêñà ñ Ò-êèëëåðàìè, ðåçóëüòàòîì ÷åãî ÿâëÿåòñÿ ãèáåëü êëåòêè-ìèøåíè. ×àñòè÷íî ôóíêöèþ àíòèãåíîâ ëîêóñîâ À,  è Ñ ìîãóò âûïîëíÿòü è àíòèãåíû êëàññà II. Òàêèì îáðàçîì, ìîëåêóëû êëàññà II â îñíîâíîì ôóíêöèîíàëüíî âêëþ÷åíû â «èíèöèàöèþ» èììóííîãî îòâåòà, à ìîëåêóëû êëàññà I â åãî ðåàëèçàöèþ. 13 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ÃÊÃÑ ðåãóëèðóåò âçàèìîäåéñòâèå íå òîëüêî ìåæäó èììóíîêîìïåòåíòíûìè êëåòêàìè (ÈÊÊ), íî è ìåæäó ëþáûìè êëåòêàìè îðãàíèçìà, òåì ñàìûì îáåñïå÷èâàÿ åãî ôóíêöèîíàëüíóþ öåëîñòíîñòü. Ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî ýòà ôóíêöèÿ ïðèíàäëåæèò àíòèãåíàì I êëàññà, â òî âðåìÿ, êàê àíòèãåíû II êëàññà ðàñïîçíàþò «ñâîå ÷óæîå» â îðãàíèçìå ëèøü ïðè âçàèìîäåéñòâèè ÈÊÊ. Ïðèâåäåííûå ëèòåðàòóðíûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî ñèñòåìà àíòèãåíîâ ÃÊÃÑ èãðàåò ïåðâîñòåïåííóþ ðîëü â ïîääåðæàíèè íå òîëüêî èììóíîëîãè÷åñêîãî ðàâíîâåñèÿ, íî è ãîìåîñòàçà îðãàíèçìà â öåëîì. Îäíèì èç ñàìûõ ïåðñïåêòèâíûõ íàïðàâëåíèé â èçó÷åíèè ñèñòåìû HLA íà ñîâðåìåííîì ýòàïå, òåñíî ñâÿçàííûì ñ ïðåäìåòîì íàñòîÿùèõ ìåòîäè÷åñêèõ ðåêîìåíäàöèé, ÿâëÿåòñÿ ðàçðàáîòêà ïðîáëåìû «HLA è áîëåçíè», êîòîðàÿ îõâàòûâàåò âîïðîñû âûÿâëåíèÿ àññîöèàòèâíûõ ñâÿçåé ìåæäó ïàðàìåòðàìè ñèñòåìû HLA è ðàçëè÷íûìè çàáîëåâàíèÿìè, à òàêæå ïàòîãåíåòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ èõ ðåàëèçàöèè. Íà÷àëî ðàçðàáîòêè ýòîãî íàïðàâëåíèÿ èññëåäîâàíèé îòíîñèòñÿ ê 1967 ã., êîãäà ïîÿâèëîñü ñîîáùåíèå î ñâÿçè îïðåäåëåííûõ HLAäåòåðìèíàíò ñ ëèìôîãðàíóëåìàòîçîì. Ê íàñòîÿùåìó âðåìåíè íàêîïëåí áîëüøîé ôàêòè÷åñêèé ìàòåðèàë î íàëè÷èè àññîöèàòèâíûõ ñâÿçåé ìåæäó ðàçëè÷íûìè ïàðàìåòðàìè ñèñòåìû HLA è çàáîëåâàíèÿìè. Íåñòðîãî äåòåðìèíèðîâàííûå ñâÿçè HLA-àíòèãåíîâ è áîëåçíåé îïðåäåëåíû äëÿ ðÿäà ýíäîêðèííûõ, îíêîëîãè÷åñêèõ, ðåâìàòè÷åñêèõ, àóòîèììóííûõ çàáîëåâàíèé è çàáîëåâàíèé íåÿñíîé ýòèîëîãèè. Îñíîâíîé ïåðå÷åíü äîñòîâåðíî ñâÿçàííûõ ñ ÃÊÃÑ HLAçàâèñèìûõ áîëåçíåé ïðèâåäåí â òàáë. 3. 14 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Òàáëèöà 3 Ñâÿçü àíòèãåíîâ ñèñòåìû HLA ñ çàáîëåâàíèÿìè Áîëåçíü Àíêèëîçèðóþùèé ñïîíäèëèò Ñèíäðîì Ðåéòåðà Àääèñîíîâà áîëåçíü Ãåìîõðîìàòîçû Ðàññåÿííûé ñêëåðîç Þâåíèëüíûé ñàõàðíûé äèàáåò Áîëåçíü Ãðåéâñà Ìèàñòåíèÿ Ïñîðèàç Õðîíè÷åñêèé ãåïàòèò Ðåâìàòîèäíûé àðòðèò Ñèñòåìíàÿ êðàñíàÿ âîë÷àíêà Ïîäîñòðûé òèðåîèäèò 15 Àíòèãåí  27  27 Â8  14, À 3 À 3,  7  8,  15 Â8 Â8  13,  17 Â8 Dw 4 B8 B 35 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Îòíîñèòåëüíûé ðèñê > 8890 36 4 9,810 2,2 2,2 3,0 4,0 5,5 13,0 3,0 3,0 36 Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Íàèáîëåå ÿðêèì ïðèìåðîì àññîöèàöèè ìåæäó ñèñòåìîé HLA è áîëåçíÿìè ÿâëÿåòñÿ âûðàæåííàÿ ñâÿçü ìåæäó àíêèëîçèðóþùèì ñïîíäèëèòîì è àíòèãåíîì HLA Â27. Ýòî àíòèãåí èìåþò äî 96% áîëüíûõ, â òî âðåìÿ êàê ñðåäè çäîðîâûõ ëèö ÷àñòîòà åãî âñòðå÷àåìîñòè íå ïðåâûøàåò 37%. Îòíîñèòåëüíûé ðèñê ðàçâèòèÿ áîëåçíè Áåõòåðåâà äëÿ íîñèòåëåé àíòèãåíà Â27 ïðèáëèæàåòñÿ ê 100%. Ñ ó÷åòîì òîãî, ÷òî àíòèãåí HLA Â27 âñòðå÷àåòñÿ ó áîëüíûõ àíêèëîçèðóþùèì ñïîíäèëîàðòðèòîì â 1520 ðàç ÷àùå, ÷åì ó çäîðîâûõ ëþäåé, åãî îïðåäåëåíèå èñïîëüçóåòñÿ ñ äèàãíîñòè÷åñêîé öåëüþ.  ñëó÷àå äðóãèõ çàáîëåâàíèÿõ, äàæå ïðè âûñîêîì îòíîñèòåëüíîì ðèñêå (áîëüøå 20%), HLA-àíòèãåíû-ìàðêåðû ñ äèàãíîñòè÷åñêîé öåëüþ íå èñïîëüçóþòñÿ, à ó÷èòûâàþòñÿ òîëüêî ïðè âûäåëåíèè ãðóïï ïîâûøåííîãî èëè ïîíèæåííîãî ðèñêà ðàçâèòèÿ çàáîëåâàíèÿ. Òàêèì îáðàçîì, îïðåäåëåíèå òîãî èëè èíîãî àíòèãåíà ìîæåò ïðîãíîçèðîâàòü âîçìîæíîñòü ðàçâèòèÿ çàáîëåâàíèÿ èëè îïðåäåëåííîãî óðîâíÿ èììóííîãî îòâåòà. 16 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Ñ êîíöà 70-õ ãã. ôîðìóëèðóåòñÿ ðÿä ãèïîòåç, îáúÿñíÿþùèõ ìåõàíèçìû âîçìîæíîé àññîöèàöèè ñèñòåìû HLA ñ çàáîëåâàíèÿìè. Îäíà èç íèõ íàèáîëåå àäåêâàòíî îáúÿñíÿåò ñóòü ÿâëåíèÿ. Ýòî ãèïîòåçà ñâÿçè ãåíîâ HLA ñ ãåíàìè èììóííîãî îòâåòà (Ir-ãåíàìè). Âûñêàçûâàåòñÿ ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî áîëåçíü, ðàâíî êàê è óðîâåíü èììóííîãî îòâåòà, ìîãóò áûòü àññîöèèðîâàíû íå ñ ñàìèìè ãåíàìè HLA, à ñ ãåíàìè, òåñíî ñöåïëåííûìè ñ íèìè. Ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ íà ìûøàõ ïîêàçàëè ñóùåñòâîâàíèå ãåíà, íàõîäÿùåãîñÿ â òåñíîé ñâÿçè ñ êîìïëåêñîì Í2 (àíàëîãîì ñèñòåìû HLA), êîíòðîëèðóþùåãî ñèëó èììóííîãî îòâåòà. Èññëåäîâàíèÿ ïî èçó÷åíèþ ñâÿçè HLA-ãåíîâ ñ Ir-ãåíàìè ó ÷åëîâåêà ïðîâîäèëèñü êàê ïóòåì ñîïîñòàâëåíèÿ óðîâíåé èììóííîãî îòâåòà ïðè èììóíèçàöèè â çàâèñèìîñòè îò HLA-ôåíîòèïà, òàê è ïî íàëè÷èþ àññîöèàòèâíûõ ñâÿçåé ìåæäó HLA-ôåíîòèïîì è èììóííûì îòâåòîì ó áîëüíûõ ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ. Ïîëó÷åííûå â ýòèõ èññëåäîâàíèÿõ äàííûå ïîäòâåðæäàþò îñíîâíûå ïîëîæåíèÿ ðàçáèðàåìîé ãèïîòåçû. Óñòàíîâëåíû êîððåëÿöèÿ àíòèãåíà HLA Â16 ñ íèçêèì óðîâíåì îòâåòà íà âàêöèíàöèþ æèâîé èíàêòèâèðîâàííîé âàêöèíîé ãðèïïà À. Ïðèñóòñòâèå â ôåíîòèïå àíòèãåíà HLA Â8 àññîöèèðîâàíî ñ àêòèâíîé âûðàáîòêîé àíòèòåë ïðè èììóíèçàöèè ãðèïïîçíûì âèðóñîì. Àêòèâíàÿ âûðàáîòêà àíòèòåë ê âèðóñó êðàñíóõè êîððåëèðîâàëà ñ àíòèãåíàìè HLA Â15, À11 è DR4, ê âèðóñó Ýïøòåéíà Áàððà ñ àíòèãåíîì HLA10, íà òîêñèí ñòîëáíÿêà ñ HLA Â5 è ò.ä. Àññîöèàòèâíûå ñâÿçè ñ âûðàæåííîñòüþ èììóííîãî îòâåòà óñòàíîâëåíû è äëÿ îòäåëüíûõ ãàïëîòèïîâ ñèñòåìû HLA.  íàñòîÿùåå âðåìÿ äîñòàòî÷íî õîðîøî îáîñíîâàíà ãèïîòåçà, ñîãëàñíî êîòîðîé ãàïëîòèï À1Â8DR3 àññîöèèðîâàí ñ ãèïåððåàêòèâíîñòüþ ê ðàçëè÷íûì àíòèãåíàì, êàê ÷óæåðîäíûì, òàê è ñîáñòâåííûì. Ó íîñèòåëåé ãàïëîòèïà À2Â7DR2, íàîáîðîò, îòìå÷àåòñÿ ïîâûøåííàÿ àêòèâíîñòü Ò-ñóïðåññîðîâ è ñíèæåííûé îòâåò Â-ëèìôîöèòîâ íà íåñïåöèôè÷åñêóþ ñòèìóëÿöèþ. 17 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ÒÊÀÍÅÂÎÅ ÒÈÏÈÐÎÂÀÍÈÅ Äëÿ îïðåäåëåíèÿ HLA-ôåíîòèïà ÷åëîâåêà èñïîëüçóåòñÿ äâóõñòóïåí÷àòûé òåñò êîìïëåìåíòçàâèñèìîé ëèìôîöèòîòîêñè÷íîñòè. Ïîñòàíîâêà ìåòîäà ïðîâîäèòñÿ ñ ïðèìåíåíèåì ñòàíäàðòíîãî îáîðóäîâàíèÿ è ðåàêòèâîâ: íàáîð òèïèðóþùèõ ñûâîðîòîê äëÿ èäåíòèôèêàöèè HLA-àíòèãåíîâ I è II êëàññîâ; ìèêðîøïðèöû «Ãàìèëüòîí», 1705RN è 1725RN; äèñïåíñåð Òåðàñàêè ÐÂ600; ôèêîëë 400 (Øâåöèÿ); âåðîãðàôèí; ìèêðîñêîï.  Ðåñïóáëèêå Áåëàðóñü ïàíåëü òèïèðóþùèõ ñûâîðîòîê äëÿ èäåíòèôèêàöèè HLAàíòèãåíîâ I êëàññà, íå óñòóïàþùàÿ ïî êà÷åñòâó òèïèðóþùèì ïàíåëÿì âåäóùèõ ìèðîâûõ ôèðì, âûïóñêàåòñÿ Ðåñïóáëèêàíñêîé ñòàíöèåé ïåðåëèâàíèÿ êðîâè. HLA-àíòèãåíû II êëàññà â Ðåñïóáëèêå âûÿâëÿþòñÿ ñ ïîìîùüþ êîììåð÷åñêèõ òåñò-ïàíåëåé âûøåïåðå÷èñëåííûõ ôèðì. 18 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ÂÛÄÅËÅÍÈÅ ËÈÌÔÎÖÈÒΠ1. Ñåïàðàöèÿ ñóììàðíîé ïîïóëÿöèè ëèìôîöèòîâ Âûäåëåíèå ëèìôîöèòîâ ïðîâîäèòñÿ èç ñâåæåçàãîòîâëåííîé ãåïàðèíèçèðîâàííîé (20 25 åä./ìë êðîâè) èëè äåôèáðèíèðîâàííîé âåíîçíîé êðîâè ìåòîäîì ôëîòàöèè. Äëÿ ýòîãî 5 ìë ñòàáèëèçèðîâàííîé âåíîçíîé êðîâè ñìåøèâàåì ñ 5 ìë çàáóôåðåííîãî ôèçðàñòâîðà (ÇÔÐ) èëè ðàñòâîðà Õýíêñà áåç èîíîâ Ñà2 + è Ìg2 + è íàñëàèâàåì íà 5 ìë ôèêîëë-âåðîãðàôèíîâîãî ãðàäèåíòà ïëîòíîñòüþ 1,0761,078 ã/ìë. Öåíòðèôóãèðóåì â òå÷åíèå 20 ìèí ïðè 450500 g. Îáðàçîâàâøååñÿ â èíòåðôàçå áåëîâàòîå êîëüöî ìîíîíóêëåàðîâ ñîáèðàåì ïàñòåðîâñêîé ïèïåòêîé è äâàæäû îòìûâàåì ðàñòâîðîì ÇÔÐ. 2. Ïîëó÷åíèå B-ëèìôîöèòîâ äëÿ HLA-DR-òèïèðîâàíèÿ 2.1. Âûäåëåíèå ïîïóëÿöèè Â-ëèìôîöèòîâ íà íåéëîíîâîì âîëîêíå 1. Îêîëî 150 ìã íåéëîíîâîé âàòû íàáèâàåì â 2 ìë îäíîðàçîâûé øïðèö. Øïðèö ïðîìûâàåì 10 ìë ñðåäû (McCoy Medium 5À ñ äîáàâëåíèåì 5% èíàêòèâèðîâàííîé òåëÿ÷üåé ñûâîðîòêè), ïîäîãðåòîé äî 37° Ñ. Ïðè ýòîì ñëåäèì, ÷òîáû îòñóòñòâîâàëè ïóçûðüêè âîçäóõà. 2. Øïðèö ñâåðõó è ñíèçó çàêðûâàåì ïàðàôèëüìîì è èíêóáèðóåì 30 ìèí ïðè 37° Ñ. 3. Îêîëî 107 ñóììàðíîé ïîïóëÿöèè ëèìôîöèòîâ, ðåñóñïåíäèðîâàííûõ â 2 ìë òåïëîé (37° Ñ) ñðåäû, íàíîñèì íà íåéëîíîâóþ âàòó. Øïðèö ñíîâà çàêðûâàåì ïàðàôèëüìîì è èíêóáèðóåì 30 ìèí. ïðè 37° Ñ. 4. Ò-ëèìôîöèòû îòäåëÿåì, ïðîìûâàÿ øïðèö 1520 ìë ïîäîãðåòîãî äî 37° Ñ ðàñòâîðà Õýíêñà, è ñîáèðàåì â ïðîáèðêó. 5. Â-ëèìôîöèòû âûìûâàåì 20 ìë ïîäîãðåòîãî äî 37° Ñ ðàñòâîðà Õýíêñà è ñîáèðàåì â öåíòðèôóæíûå ïðîáèðêè. Ïðè ýòîì âàòó íåñêîëüêî ðàç ñèëüíî ñæèìàåì ïîðøíåì øïðèöà. 6. Ò- è Â-ëèìôîöèòû äâàæäû îòìûâàåì ðàñòâîðîì Õýíêñà ïî 5 ìèí. ïðè 1500 îá./ìèí. 19 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... 7. Ïðèãîòàâëèâàåì ðàáî÷óþ âçâåñü Ò- è Â-ëèìôîöèòîâ 20003000 êë/ìë. 2.2. Âûäåëåíèå Â-ëèìôîöèòîâ ñ èñïîëüçîâàíèåì èììóíîìàãíèòíûõ áóñ (Lymphobeads HLA Klasse II (CD19)) Ìàòåðèàëû: Lymphobeads HLA Klasse II (CD19) (Biotest, Art.-Nr 824123); ìàãíèò (Biotest, Art.-Nr 824130, èëè äðóãîé àíàëîãè÷íûé ìàãíèò); ðàñòâîðû: ÇÔÐ (ðÍ 7,2) + 0.6% öèòðàò íàòðèÿ (0,6 ã öèòðàòà íàòðèÿ íà 100 ìë ÇÔÐ); ÇÔÐ; ðàñòâîð äëÿ ðåñóñïåíäèðîâàíèÿ èçîëèðîâàííûõ Â-ëèìôîöèòîâ (McCoy 5A, RPMI 1640, PBS + 5% èíàêòèâèðîâàííàÿ ýìáðèîíàëüíàÿ òåëÿ÷üÿ ñûâîðîòêà (ÝÒÑ)); èçîëÿöèÿ CD19-ïîçèòèâíûõ Â-ëèìôîöèòîâ. 1. Âûäåëåííûå îáùåïðèíÿòûì ñïîñîáîì èç 1520 ìë ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ëèìôîöèòû ðåñóñïåíäèðóåì â 8 ìë õîëîäíîãî (28° Ñ) ÇÔÐ + 0,6% öèòðàòà íàòðèÿ). 2. Îñòîðîæíî è òùàòåëüíî ðåñóñïåíäèðóåì (âî ôëàêîíå) èììóíîìàãíèòíûå áóñû. 3. 100 ìë áóñ äîáàâëÿåì ê êëåòî÷íîé âçâåñè. 4. Èíêóáèðóåì 3 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå (22° Ñ). Ïåðèîäè÷åñêè îñòîðîæíî ïåðåìåøèâàåì. 5. Ïðîáèðêó ïîìåùàåì â ìàãíèò è îñòàâëÿåì íà 90 ñ. 6. Ôèêñèðóÿ ïðîáèðêó â ìàãíèòå, ïåðåâîðà÷èâàåì åå è óäàëÿåì ñîäåðæèìîå. Â-ëèìôîöèòû îñòàþòñÿ íà âíóòðåííåé ñòåíêå ïðîáèðêè â âèäå «äîðîæêè». 7. Èçîëèðîâàííûå Â-ëèìôîöèòû îòìûâàåì: ïðîáèðêó âûíèìàåì èç ìàãíèòà; äîáàâëÿåì 5 ìë õîëîäíîãî ÇÔÐ + 0,6% öèòðàòà íàòðèÿ); ïîìåùàåì ïðîáèðêó â ìàãíèò íà 1 ìèí; óäàëÿåì îòìûâàþùèé ðàñòâîð ïåðåâîðà÷èâàÿ ïðîáèðêó ñ ìàãíèòîì; 20 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ïîâòîðÿåì ïðîöåäóðó. 8. Òðåòèé ðàç îòìûâàåì õîëîäíûì (28° Ñ) ÇÔÐ. 9. Êîíöåíòðàöèþ âûäåëåííûõ Â-ëèìôîöèòîâ äîâîäèì äî 15002000 êë/ìë ðàñòâîðîì äëÿ ðåñóñïåíäèðîâàíèÿ èçîëèðîâàííûõ Â-ëèìôîöèòîâ (McCoy 5A, RPMI 1640, PBS + 5% èíàêòèâèðîâàííàÿ ÝÒÑ). 3. Ïîñòàíîâêà ðåàêöèè 3.1. Èäåíòèôèêàöèÿ HLA-àíòèãåíîâ I êëàññà (ëîêóñû À, Â, è Ñ) 1. Ìèêðîêàìåðû, â ëóíêàõ êîòîðûõ ïîä âàçåëèíîâûì ìàñëîì â îáúåìå 1 ìë ðàñêàïàíû è çàìîðîæåíû ñòàíäàðòíûå àíòè-HLA ñûâîðîòêè ê àíòèãåíàì I êëàññà, îòòàèâàåì â òå÷åíèå 15 ìèí. ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. 2. Äîâîäèì êîíöåíòðàöèþ ëèìôîöèòîâ (ñóììàðíóþ èëè Ò-ëèìôîöèòîâ) äî 2 2,5 ´ 106 êëåòîê/ìë. 3.  êàæäóþ ëóíêó ìèêðîêàìåðû ñ ïîìîùüþ øïðèöà Ãàìèëüòîíà 1705 RN âíîñèì ïî 1 ìë ñóñïåíçèè ëèìôîöèòîâ. 4. Èíêóáèðóåì â òåðìîñòàòå 45 ìèí ïðè 22° Ñ. 5.  êàæäóþ ëóíêó ñ ïîìîùüþ øïðèöà Ãàìèëüòîíà 1725 RN âíîñèì ïî 5 ìë êðîëè÷üåãî êîìïëåìåíòà (ëèîôèëèçîâàííûé êîìïëåìåíò ðàñòâîðÿåì ñîãëàñíî èíñòðóêöèè ôèðìû èçãîòîâèòåëÿ; çàìîðîæåííûé êîìïëåìåíò ðàçìîðàæèâàåì ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå). 6. Èíêóáèðóåì 1 ÷ ïðè 22° Ñ. 7. Ïî çàâåðøåíèè èíêóáàöèè ñóñïåíçèÿ êëåòîê îáðàáàòûâàåòñÿ 0,23% ðàñòâîðîì òðèïàíîâîãî ñèíåãî.  ëóíêó âíîñèòñÿ ïî 3 ìë êðàñêè. Ýêñïîçèöèÿ 15 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå. 21 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... 8. Ïîñëå ñòðÿõèâàíèÿ èçáûòêà êðàñêè, ñ èñïîëüçîâàíèåì èíâåðòèðîâàííîãî ìèêðîñêîïà (óâåëè÷åíèå 100150), ïðîèçâîäèì ó÷åò ðåàêöèè. Ìåðòâûå êëåòêè â ëóíêàõ, â êîòîðûõ ïðîèçîøëà ðåàêöèÿ àíòèãåí-àíòèòåëî, îêðàøèâàþòñÿ â ñèíèé öâåò. Ïðè íàëè÷èè ëþìèíèñöåíòíîãî ìèêðîñêîïà ó÷åò ðåàêöèè ëó÷øå ïðîâîäèòü ïîñëå îêðàñêè êëåòîê ôëóîðåñöåíòíûìè êðàñèòåëÿìè: ðàñòâîðàìè àêðèäèíîâîãî îðàíæåâîãî (ÀÎ) è ýòèäèóìà áðîìèäà (ÝÁ).  ýòîì ñëó÷àå ïåðâûå ÷åòûðå ïóíêòà ïîñòàíîâêè ðåàêöèè íå îòëè÷àþòñÿ îò âûøåîïèñàííîé. Äàëåå: 5. Ñìåøèâàåì 1 ìë ñâåæåïðèãîòîâëåííîãî êðîëè÷üåãî êîìïëåìåíòà ñ 0,04 ìë îñíîâíîãî ðàñòâîðà ÀÎ/ÝÁ. Äîáàâëÿåì ïî 5 ìë ýòîé ñìåñè â êàæäóþ ëóíêó. 6. Èíêóáèðóåì â òåìíîòå 60 ìèí ïðè 22° Ñ. 7. Äëÿ îñòàíîâêè ðåàêöèè â ëóíêó âíîñèòñÿ ïî 5 ìë 1% ðàñòâîðà òóøè. 8. Ðåçóëüòàòû ðåàêöèè ìîæíî ó÷èòûâàòü ÷åðåç 5 ìèí ïîñëå åå ïðåêðàùåíèÿ èëè â òå÷åíèå 24 ÷ ïðè õðàíåíèè ìèêðîêàìåð â õîëîäèëüíèêå (48° Ñ). Ìåðòâûå êëåòêè ôëóîðåñöåíòíûìè êðàñèòåëÿìè îêðàøèâàþòñÿ â êðàñíûé öâåò, æèâûå â çåëåíûé. 3.2. Èäåíòèôèêàöèÿ HLA-àíòèãåíîâ II êëàññà (ëîêóñû DR è DQ) Îïðåäåëåíèå HLA-àíòèãåíîâ II êëàññà îñóùåñòâëÿåòñÿ â ìîäèôèöè-ðîâàííîì ëèìôîöèòîòîêñè÷åñêîì òåñòå, îòëè÷àþùåìñÿ îò âûøåîïèñàííîãî èñïîëüçîâàíèåì ïîïóëÿöèè ëèìôîöèòîâ, îáîãàùåííîé Â-êëåòêàìè è óäëèííåíèåì âðåìåíè èíêóáàöèè àíòèñûâîðîòêà + Â-ëèìôîöèòû äî 60 ìèí è ïîñëå äîáàâëåíèÿ êîìïëåìåíòà 120 ìèí. Ïðè ýòîì â ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ Â-ëèìôîöèòîâ, âûäåëåííûõ íà íåéëîíîâîé âàòå, äîïóñêàåòñÿ ëþáîé èç âûøåîïèñàííûõ ñïîñîáîâ îêðàñêè (òðèïàíîâûé ñèíèé, ôëóîðåñöåíòíûå êðàñèòåëè). Åñëè æå äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïîïóëÿöèè Â-ëèìôîöèòîâ èñïîëüçîâàëèñü èììóíîìàãíèòíûå áóñû, íåîáõîäèìî ïðèìåíÿòü èñêëþ÷èòåëüíî ôëóîðåñöåíòíûå êðàñèòåëè (ÀÎ è ÝÁ). 22 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... 4. Ó÷åò ðåçóëüòàòîâ ðåàêöèé â ìèêðîëèìôîöèòîòîêñè÷åñêîì òåñòå ïðè ëþáîì ñïîñîáå îêðàñêè 100%76% «ìåðòâûõ» êëåòîê ðåàêöèÿ ðåçêî ïîëîæèòåëüíàÿ + + + + ; 75%51% «ìåðòâûõ» êëåòîê ðåàêöèÿ ïîëîæèòåëüíàÿ + + + ; 50%25% «ìåðòâûõ» êëåòîê ðåàêöèÿ ñëàáî ïîëîæèòåëüíàÿ + + ; ìåíåå 25% «ìåðòâûõ» êëåòîê ðåàêöèÿ îòðèöàòåëüíàÿ. HLA-ôåíîòèï âûâîäèòñÿ íà îñíîâàíèè ïîëîæèòåëüíûõ ðåàêöèé (4, 3 è 2 + ) ñ àíòè-HLA ñûâîðîòêàìè è ñîîòâåòñòâóåò HLA-ñïåöèôè÷íîñòÿì ðåàãåíòîâ, ñ êîòîðûìè ïðîèçîøëà ðåàêöèÿ. Íàïðèìåð, 25100% «ìåðòâûõ» êëåòîê çàðåãèñòðèðîâàíî â ëóíêàõ, â êîòîðûõ íàõîäÿòñÿ àíòè-HLA ñûâîðîòêè ê àíòèãåíàì HLA A1, HLA A2, HLA B7, HLA B35, HLA CW1, HLA CW6, HLA DR1, HLA DQ3.  ýòîì ñëó÷àå HLA-ôåíîòèï îáñëåäóåìîãî áóäåò: HLA A1,2 B7,35 CW1,6 DR1 DQ3. Íåîáõîäèìî ïîìíèòü, ÷òî â êàæäîì ëîêóñå ìîæåò ïðèñóòñòâîâàòü ëèáî 1, ëèáî 2 àíòèãåíà. Ïðè èäåíòèôèêàöèè â ëîêóñå äâóõ àíòèãåíîâ ìîæíî ãîâîðèòü î ïîëíîì âûÿâëåíèè ýêñïðåññèðîâàííûõ â îðãàíèçìå îáñëåäóåìîãî HLA-àíòèãåíîâ äàííîãî ëîêóñà (â ïðèâåäåííîì ïðèìåðå ëîêóñû A, B è Ñ). Èäåíòèôèêàöèÿ òîëüêî îäíîãî àíòèãåíà óêàçûâàåò íà åãî ãîìîçèãîòíîñòü â îðãàíèçìå (â ïðèâåäåííîì ïðèìåðå ëîêóñû DR, DQ). Îäíàêî, â ýòèõ ñëó÷àÿõ íàäî èìåòü â âèäó âîçìîæíóþ âåðîÿòíîñòü íåðàñïîçíàâàíèÿ âòîðîãî àíòèãåíà, ò.ê. òèïèðóþùèå ïàíåëè âñåõ ïðîèçâîäèòåëåé ñîäåðæàò àíòèñûâîðîòêè íå êî âñåì èçâåñòíûì â íàñòîÿùåå âðåìÿ HLA-ñïåöèôè÷íîñòÿì. 5. Ïðèãîòîâëåíèå ðåàêòèâîâ, èñïîëüçóåìûõ â ìèêðîëèìôîöèòîòîêñè÷åñêîì òåñòå 1. Ðàñòâîð àêðèäèíîâîãî îðàíæåâîãî è ýòèäèóì áðîìèäà. Îñíîâíîé ðàñòâîð: 15 ìã ÀÎ ðàñòâîðÿåì â 1 ìë 96% ýòàíîëà; 50 ìã ÝÁ ðàñòâîðÿåì â 49 ìë ÇÔÐ. Ñìåøèâàåì îáà ðàñòâîðà äîáàâëåíèåì ÀÎ ê ðàñòâîðó ÝÁ. Ñìåñü èíêóáèðóåòñÿ â âîäÿíîé áàíå 30 ìèí ïðè 55° Ñ. Õðàíèòüñÿ ðàñòâîð ïðè +4° Ñ èëè 20° Ñ. 23 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... 2. Ðàñòâîð ÝÄÒÀ 5%: 5 ã ÝÄÒÀ ðàñòâîðÿåì â 90 ìë ÇÔÐ; äîâîäèì äî êîíå÷íîãî îáúåìà 100 ìë (ÇÔÐ); äîâîäèì ðÍ ðàñòâîðà ñ ïîìîùüþ NaOH äî 7,2. 3. Ðàáî÷èé ðàñòâîð òóøè 1%: 90 ìë 5% ðàñòâîðà ÝÄÒÀ íà ÇÔÐ ñìåøèâàåì ñ 10 ìë èíàêòèâèðîâàííîé ñûâîðîòêè À (IV); äîáàâëÿåì ê 98 ìë ïðèãîòîâëåííîãî ðàñòâîðà 1 ìë 5% ðàñòâîðà àçèäà íàòðèÿ è 1 ìë òóøè ÷åðíîé (ÒÓ 61545886). 4. Ðàñòâîð àçèäà íàòðèÿ 5%: 5 ã àçèäà íàòðèÿ ðàñòâîðÿåì â 100 ìë ÇÔÐ. 5. ÇÔÐ: 0,18g NaH2PO4 ´ 2H2O; 1,98g Na2HPO4 ´ 12H2O; 8,10g NaCl; äî 1000 ìë H2O. 6. Ðàñòâîð òðèïàíîâîãî ñèíåãî 0,23%: 230 ìã òðèïàíîâîãî ñèíåãî ðàñòâîðÿåì â 100 ìë 0,2% ðàñòâîðà õëîðèñòîãî íàòðèÿ; ñìåøèâàåì 4 îáúåìà ðàñòâîðà êðàñêè ñ 1 îáúåìîì ãèïåðòîíè÷åñêîãî ðàñòâîðà Õýíêñà (2,55 ã õëîðèñòîãî íàòðèÿ, ðàñòâîðåííîãî â 100 ìë ñòàíäàðòíîãî Õýíêñà). 24 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ÏÐÎÃÍÎÇÈÐÎÂÀÍÈÅ ÓÐÎÂÍß ÈÌÌÓÍÍÎÃÎ ÎÒÂÅÒÀ Ñ ÈÑÏÎËÜÇÎÂÀÍÈÅÌ ÍÅÊÎÒÎÐÛÕ ÏÀÐÀÌÅÒÐΠÑÈÑÒÅÌÛ HLA Ìàðêåðû ñèñòåìû àíòèãåíîâ ÃÊÃÑ, ïðîãíîçèðóþùèå âåðîÿòíîñòü âûñîêîãî èëè íèçêîãî óðîâíÿ èììóííîãî îòâåòà îðãàíèçìà íà èììóíèçàöèþ ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì, èäåíòèôèöèðîâàëèñü ïî ðåçóëüòàòàì îáñëåäîâàíèÿ 620 êàäðîâûõ äîíîðîâ êðîâè Ðåñïóáëèêàíñêîé ñòàíöèè ïåðåëèâàíèÿ êðîâè. Âñå äîíîðû èììóíèçèðîâàëèñü ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì ïî ìåòîäèêå, èñïîëüçóåìîé âñåìè ó÷ðåæäåíèÿìè ñëóæáû êðîâè, ñîãëàñíî «Èíñòðóêöèè ïî èììóíèçàöèè äîíîðîâ ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì è ïðîâåäåíèþ ïëàçìàôåðåçà äëÿ ïîëó÷åíèÿ ñòàôèëîêîêêîâîé ïëàçìû» (Ìîñêâà, 1977).  ñûâîðîòêå êðîâè ïðîèììóíèçèðîâàííûõ äîíîðîâ îïðåäåëÿëñÿ òèòð a-àíòèñòàôèëîëèçèíîâ â ðåàêöèè íåéòðàëèçàöèè ãåìîëèòè÷åñêîãî äåéñòâèÿ ñòàôèëîêîêêîâîãî a-òîêñèíà íà ýðèòðîöèòû êðîëèêà. Ïðè àíàëèçå ðåçóëüòàòîâ ó÷èòûâàëñÿ ìàêñèìàëüíûé òèòð àíòèòåë, îïðåäåëÿåìûé ó êàæäîãî äîíîðà. Ó âñåõ äîíîðîâ îïðåäåëÿëñÿ ôåíîòèï ïî àíòèãåíàì ÃÊÃÑ I êëàññà (ëîêóñû À,  è Ñ). Ñ èñïîëüçîâàíèåì îáùåïðèíÿòûõ ìåòîäîâ ñòàòèñòè÷åñêîé îáðàáîòêè äàííûõ îïðåäåëÿëàñü êîððåëÿöèîííàÿ ñâÿçü îòäåëüíûõ ïàðàìåòðîâ ñèñòåìû HLA ñ âûðàæåííîñòüþ èììóííîãî îòâåòà. Ïðè ëàáîðàòîðíîì îáñëåäîâàíèè äîíîðîâ êðîâè æèòåëåé Ðåñïóáëèêè Áåëàðóñü âûÿâëåí ðÿä ïàðàìåòðîâ ñèñòåìû àíòèãåíîâ ÃÊÃÑ àññîöèèðîâàííûõ ñ âûñîêèì óðîâíåì èììóííîãî îòâåòà íà èììóíèçàöèþ ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì. Ê íèì îòíîñÿòñÿ HLA-àíòèãåíû: HLA A1, HLA B35, HLA CW4; HLAôåíîòèïû: HLA À1, 2; HLA A 1, 11; HLA A1, 26; HLA AX, 35; è HLA CW 4, 7; HLAãàïëîòèïû: HLA À1 Â8; HLA À1, B35; HLA A2, Â18 HLA À2 Â35 è HLA À11 Â35. Äëÿ áîëüøèíñòâà ïðîèììóíèçèðîâàííûõ äîíîðîâ èõ ïðèñóòñòâèå â îðãàíèçìå êîððåëèðîâàíî ñ òèòðîì a-àíòèñòàôèëîëèçèíîâ áîëåå 5 ÌÅ. 25 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Íàïðîòèâ, ýêñïðåññèÿ â îðãàíèçìå HLA-àíòèãåíîâ: HLA A3; HLA A24 è HLA B7, ðàâíî êàê è HLA-ôåíîòèïîâ: HLA AX, 24; HLA A11, 26; HLA A11, 32; HLA B7, 27; HLA B27, 44 è HLA-ãàïëîòèïîâ: HLA À2 Â7; HLA A3 B7; HLA A24 BX; HLA A24 B13; HLA A24 B27; HLA A24 B55 ñâèäåòåëüñòâîâàëà î âåðîÿòíîñòè íåäîñòàòî÷íîé ýôôåêòèâíîñòè èììóíèçàöèè ñòàôèëîêîêêîâûì àíàòîêñèíîì è, ñëåäîâàòåëüíî, ìîæåò ÿâèòüñÿ îñíîâàíèåì äëÿ îòêëîíåíèÿ äîíîðà, ó êîòîðîãî îïðåäåëÿþòñÿ âûøåïåðå÷èñëåííûå ïàðàìåòðû ñèñòåìû HLA, îò èììóíèçàöèè. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíû, îäíàêî íå íîñÿò îáëèãàòíîãî õàðàêòåðà.  ðÿäå ñëó÷àåâ, ïðè èììóíèçàöèè äîíîðîâ, â ôåíîòèïå êîòîðûõ èäåíòèôèöèðîâàëèñü ìàðêåðû ñèñòåìû HLA, ïðîãíîçèðóþùèå âûñîêèé óðîâåíü èììóííîãî îòâåòà, òèòðû aàíòèñòàôèëîëèçèíîâ íå ïðåâûøàëè 3 ÌÅ. È íàîáîðîò, ýêñïðåññèÿ â îðãàíèçìå ìàðêåðîâ íèçêîãî óðîâíÿ èììóííîãî îòâåòà ñî÷åòàëàñü ñ äîñòàòî÷íî âûñîêèì (âûøå 5 ÌÅ) òèòðîì àíòèòåë, ñèíòåçèðîâàííûõ â îðãàíèçìå â ïðîöåññå èììóíèçàöèè. 26 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... ÇÀÊËÞ×ÅÍÈÅ Ôîðìèðîâàíèå ãðóïï èììóííûõ äîíîðîâ â íàñòîÿùåå âðåìÿ ïðåäóñìàòðèâàåò íàðÿäó ñ îáåñïå÷åíèåì áåçîïàñíîñòè çäîðîâüÿ èììóíèçèðóåìûõ, ïðîãíîçèðîâàíèå ïîòåíöèàëüíîé èììóíîëîãè÷åñêîé ðåàêòèâíîñòè èíäèâèäà ê êîíêðåòíîìó àíòèãåíó. Ñ öåëüþ âûÿâëåíèÿ äîíîðîâ ñ ïðîãíîçèðóåìûì âûñîêèì óðîâíåì èììóííîãî îòâåòà íà ñòàôèëîêîêêîâûé àíàòîêñèí ïðåäëîæåíû îòäåëüíûå ïàðàìåòðû ñèñòåìû àíòèãåíîâ ÃÊÃÑ (àíòèãåíû, ôåíîòèïû, ãàïëîòèïû). Èñïîëüçîâàíèå ðåêîìåíäóåìûõ ìàðêåðîâ îáåñïå÷èâàåò äîñòàòî÷íóþ äëÿ ïðàêòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ òî÷íîñòü ïðîãíîçà. Ïðè ýòîì ñðåäè âàêöèíèðîâàííûõ ïîâûøàåòñÿ ïðîöåíò ëèö ñ âûñîêèì óðîâíåì èììóííîãî îòâåòà, ÷òî ñïîñîáñòâóåò óâåëè÷åíèþ îáúåìîâ çàãîòîâêè ïëàçìû ñïåöèôè÷åñêîé íàïðàâëåííîñòè. Îòáîð äîíîðîâ ñ ó÷åòîì èõ èíäèâèäóàëüíîé èììóíîëîãè÷åñêîé ðåàêòèâíîñòè ñîçäàåò óñëîâèÿ äëÿ ðàöèîíàëüíîãî ðàñïðåäåëåíèÿ îãðàíè÷åííûõ äîíîðñêèõ ðåñóðñîâ, òàê êàê äîíîð, ñëàáî îòâå÷àþùèé íà îäèí àíòèãåí, ìîæåò áûòü àêòèâíûì àíòèòåëîïðîäóöåíòîì ïðè äðóãîì âèäå èììóíèçàöèè. Îòêàç îò èììóíèçàöèè àðåàêòèâíûõ èíäèâèäîâ ïîçâîëÿåò èçáåæàòü íåíóæíûõ ìàòåðèàëüíûõ çàòðàò è ñíèæàåò íåîïðàâäàííûé ðèñê ñåíñèáèëèçàöèè äîíîðîâ, ñâÿçàííûé ñ íàìåðåííîé âàêöèíàöèåé.  îñíîâó îòáîðà äîíîðîâ ïî ïðîãíîçèðóåìîìó óðîâíþ èììóííîãî îòâåòà íà ñòàôèëîêîêêîâûé àíàòîêñèí ïîëîæåíà ïðîöåäóðà HLA-òèïèðîâàíèÿ.  ðàáîòå ïîäðîáíî èçëîæåíû íå òîëüêî ñîâðåìåííûå ïðèíöèïû èäåíòèôèêàöèè HLA-àíòèãåíîâ, íî è îñíîâíûå ïîëîæåíèÿ, îòðàæàþùèå èõ ðîëü â ïîääåðæàíèè ïîñòîÿíñòâà âíóòðåííåé ñðåäû îðãàíèçìà. Îäíîâðåìåííî ïðåäñòàâëåíû äàííûå îá àññîöèàòèâíûõ ñâÿçÿõ îòäåëüíûõ ïàðàìåòðîâ ñèñòåìû HLA ñ ðÿäîì çàáîëåâàíèé, ÷òî íàãëÿäíî èëëþñòðèðóåò âàæíîñòü èçó÷åíèÿ ðàçëè÷íûõ àñïåêòîâ «HLA è áîëåçíè». 27 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ Àíòèãåíû ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè â ïðîãíîçèðîâàíèè èììóííîãî îòâåòà... Ñëåäóåò ïîää÷åðêíóòü, ÷òî âîñïðîèçâåäåíèå ìåòîäà HLA-òèïèðîâàíèÿ âñëåäñòâèå 100%é îáåñïå÷åííîñòè åãî ðåàêòèâàìè îòå÷åñòâåííîãî ïðîèçâîäñòâà, âûïóñêàåìûìè Ðåñïóáëèêàíñêîé ñòàíöèåé ïåðåëèâàíèÿ êðîâè, âîçìîæíî ïðàêòè÷åñêè âî âñåõ ó÷ðåæäåíèÿõ, çàíèìàþùèõñÿ íàïðàâëåííîé èììóíèçàöèåé äîíîðîâ èëè ïðîáëåìîé «HLA è áîëåçíè», à òàêæå ïîäáîðîì ïàð äëÿ òðàíñïëàíòàöèè îðãàíîâ è òêàíåé. 28 Ïåðåéòè ê îãëàâëåíèþ
