22 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé Èçó÷åíèå èììóíîãåííîñòè êëîíèðîâàííûõ òêàíåé, ïîëó÷åííûõ ìåòîäîì ïåðåíîñà ÿäðà ñîìàòè÷åñêîé êëåòêè in vivo Ìåòîä ïåðåíîñà ÿäðà ñîìàòè÷åñêîé êëåòêè (ÏßÑÊ) â ýíóêëåèðîâàííûé îîöèò ÿâëÿåòñÿ óíèêàëüíûì è ñàìûì ïåðñïåêòèâíûì äëÿ ïîëó÷åíèÿ èíäèâèäóàëüíûõ (àóòîãåííûõ) ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê (ÝÑÊ). Êëåòêè è òêàíè, âûäåëåííûå èç èíäèâèäóàëüíûõ ÝÑÊ, ìîãóò áûòü ïðèìåíåíû äëÿ òðàíñïëàíòàöèè ñ öåëüþ ëå÷åíèÿ ïàöèåíòà - äîíîðà ÿäðà áåç ðèñêà îòòîðæåíèÿ.  íåäàâíåì èññëåäîâàíèè Hwang W.S. áûëà ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü âûäåëåíèÿ òàêèõ ëèíèé ÝÑÊ îò áîëüíûõ ëþäåé. Ìåòîäîì èññëåäîâàíèÿ ãåíîòèïà HLA áûëà ïîêàçàíà èììóíîëîãè÷åñêàÿ èäåíòè÷íîñòü ëèíèé [1]. Òåðàïåâòè÷åñêàÿ ýôôåêòèâíîñòü êëîíèðîâàííûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê, âûäåëåííûõ èç áëàñòîöèñò, ïîëó÷åííûõ ÏßÑÊ, áûëà ïîêàçàíà ðÿäîì àâòîðîâ â ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ìîäåëÿõ íàñëåäñòâåííîãî èììóíîäåôèöèòà [2], áîëåçíè Ïàðêèíñîíà [3], èíôàðêòà ìèîêàðäà [4]. Âî âñåõ ýòèõ èññëåäîâàíèÿõ íå áûëî îòìå÷åíî ïðèçíàêîâ îòòîðæåíèÿ êëîíèðîâàííûõ êëåòîê. Âîïðîñ î ñòåïåíè èììóíîãåííîñòè èíäèâèäóàëüíûõ ÝÑÊ èëè èõ äåðèâàòîâ, îáóñëîâëåííîé ïåðåíîñîì àíòèãåíîâ èç ìèòîõîíäðèé ÿéöåêëåòêè, îñòà¸òñÿ íå èçó÷åííûì.  ðàáîòå Semple J.L. áûëî ïîêàçàíî, ÷òî â ìèòîõîíäðèÿõ ÷åëîâåêà ýêñïðåññèðîâàíû ñîáñòâåííûå ãåíû (MHC-III), îòâåòñòâåííûå çà ãèñòîñîâìåñòèìîñòü è ïîòåíöèàëüíî ñïîñîáíûå âûçâàòü ðåàêöèþ îòòîðæåíèÿ [5]. Lanza R. ïîêàçàë, ÷òî ïðè ñîçäàíèè êëîíèðîâàííûõ ýìáðèîíîâ êîðîâ ìåòîäîì ÏßÑÊ íàáëþäàåòñÿ ïåðåíîñ ìèòîõîíäðèàëüíûõ àíòèãåíîâ ÿéöåêëåòêè, êîòîðûé, îäíàêî, íå âûçûâàåò èììóííîé ðåàêöèè ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè òêàíåé, èçîëèðîâàííûõ èç ýòèõ ýìáðèîíîâ, äîíîðó ÿäðà [6]. Èíòåðåñíî, ÷òî ôåíîìåí «ë¸ãêîãî» ïåðåìåùåíèÿ ÄÍÊ ìèòîõîíäðèé èç âçðîñëûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê â äåôåêòíûå ïî ðÿäó ãåíîâ ýòèõ îðãàíåëë áåç ñëèÿíèÿ, áûë íåäàâíî îòêðûò ãðóïïîé Prockop D.J. [7].  íîâîé ðàáîòå, îïóáëèêîâàííîé â Cloning and Stem Cells, ãðóïïà Lanza R. äåìîíñòðèðóåò, ÷òî êëîíèðîâàííûå ãåìîïîýòè÷åñêèå êëåòêè êîðîâ íå èììóíîãåííû è íå âûçûâàþò ðåàêöèè îòòîðæåíèÿ ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè. Ýòî èññëåäîâàíèå åù¸ áëèæå ïîäâîäèò ê ïåðñïåêòèâå ïðèìåíåíèÿ òåõíîëîãèè ÏßÑÊ äëÿ ëå÷åíèÿ ïàöèåíòîâ ñîáñòâåííûìè êëåòêàìè è òêàíÿìè. ßäðà äëÿ ÏßÑÊ âûäåëÿëè èç ôèáðîáëàñòîâ êîæè ñòàðûõ (10-13 ëåò) êîðîâ.  ýêñïåðèìåíòå èñïîëüçîâàëè 3-õ æèâîòíûõ - êîíòðîëüíîìó íå ïðîèçâîäèëè ìèåëîàáëÿöèè (¹1), äâóì äðóãèì âûïîëíÿëè ìèåëîàáëÿöèþ (âûñîêîé äîçîé áóñóëüôàíà - ¹2) è ìèåëîñóïðåññèþ (âäâîå ìåíüøåé äîçîé áóñóëüôàíà - ¹3). Êîðîâå ¹2, ïîñëå ìèåëîàáëÿöèè è ÷åðåç 7 äíåé ïîñòòðàíñïëàíòàöèîííîãî ïåðèîäà âûïîëíèëè âûíóæäåííóþ ýâòàíàçèþ ïî ïðè÷èíå òÿæ¸ëîãî ãåìîððàãè÷åñêîãî ñèíäðîìà, âûçâàííîãî «áóñóëüôàíîâîé» òðîìáîöèòîïåíèåé. Êîðîâå ¹ 1 (êîíòðîëü - áåç èììóíîñóïðåññèè) è ¹3 ïåðåñàæèâàëè 7,7 è 13 ìèëëèîíîâ (ñîîòâåòñòâåííî) ÿäðîñîäåðæàùèõ êëåòîê, âûäåëåííûõ èç ïå÷åíè êëîíèðîâàííûõ ôåòóñîâ 100-120 íåäåëü ãåñòàöèè. Ýíãðàôòèíã è âîññòàíîâëåíèå ãåìîïîýçà îöåíèâàëè â òå÷åíèå 13 (¹1) è 16 (¹3) ìåñÿöåâ îò íà÷àëà ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Hwang W.S., Roh S.I., Lee B.C. et al. Patient-specific embryonic stem cells derived from human SCNT blastocysts. Science 2005; 308: 1777-83. 2. Rideout W.M. 3rd, Hochedlinger K., Kyba M. et al. Correction of a genetic defect by nuclear transplantation and combined cell and gene therapy. Cell 2002; 109; 1: 17-27. 3. Barberi T., Klivenyi P., Calingasan N.Y. et al. Neural subtype specification of fertilization and nuclear transfer embryonic stem cells and application in parkinsonian mice. Nat. Biotechnol. 2003; 21; 10: 1200-07. 4. Lanza R., Moore M.A., Wakayama T. et al. Regeneration of the infracted heart ýêñïåðèìåíòà. Êëîíèðîâàííûå êëåòêè ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè èäåíòèôèöèðîâàëè ìåòîäîì ÏÖÐ, ïî ãåíåòè÷åñêîé ìåòêå, êîòîðàÿ ââîäèëàñü äî ïåðåíîñà ÿäðà. ßäðîñîäåðæàùèå êëåòêè ïå÷åíè êëîíèðîâàííûõ ýìáðèîíîâ ïî÷òè ïîëíîñòüþ áûëè ãåìîïîýòè÷åñêèìè ñ ïðåîáëàäàíèåì ýðèòðîáëàñòè÷åñêîãî ðîñòêà (äî 96%) è ôîðìèðîâàëè â êóëüòóðå êðîâåòâîðíûå êîëîíèè âñåõ òèïîâ. Ýíãðàôòèíã ïåðåñàæåííûõ êëåòîê îêàçàëñÿ ãîðàçäî ëó÷øå ó êîíòðîëüíîé êîðîâû (¹1) è âïåðâûå âûÿâëÿëñÿ â êðîâè ÷åðåç 42 äíÿ ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè. Ìàêñèìàëüíûé óðîâåíü õèìåðèçìà ÷åðåç 12-27 íåäåëü ñîñòàâëÿë 0,5-2% îò ëåéêîöèòîâ, 10-17% îò ìèåëîèäíûõ êëåòîê è 60% îò ïðîãåíèòîðíûõ êëåòîê ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè.  êóëüòóðå ìå÷åíûå êëåòêè îáðàçîâûâàëè ãåìîïîýòè÷åñêèå êîëîíèè. Ïåðåñàæåííûå êëåòêè èäåíòèôèöèðîâàëè òàêæå â êîñòíîì ìîçãå, ëèìôîóçëàõ (êîðîâà ¹1) è ýíäîòåëèè àîðòû (êîðîâà ¹1). Êàê è â èññëåäîâàíèè 2002 ãîäà [6], àâòîðû âíîâü äîêàçàëè ïåðåíîñ ÄÍÊ ìèòîõîíäðèé àëëîãåííîé ÿéöåêëåòêè â êëåòêè êëîíèðîâàííûõ ýìáðèîíîâ - 7 çàìåí íóêëåîòèäîâ è 3-õ àìèíîêèñëîò ó êîðîâû ¹1 è 8/1 (ñîîòâåòñòâåííî) çàìåí ó êîðîâû ¹3. Îäíàêî, çà âñ¸ âðåìÿ íàáëþäåíèÿ íå áûëî âûÿâëåíî íèêàêèõ ïðèçíàêîâ èììóííîé ðåàêöèè íà ìàòåðèàë äîíîðñêèõ ìèòîõîíäðèé, èäåíòèôèöèðîâàííûé â êëîíèðîâàííûõ êëåòêàõ. Òàêèì îáðàçîì, ãðóïïà Lanza R. åù¸ ðàç ïîäòâåðäèëà âîçìîæíîñòü òðàíñïëàíòàöèè êëîíèðîâàííûõ êëåòîê, ïîëó÷åííûõ ìåòîäîì ÏßÑÊ áåç ïðèçíàêîâ îòòîðæåíèÿ è èììóííûõ ðåàêöèé. Äëÿ èçó÷åíèÿ ýíãðàôòèíãà êëîíèðîâàííûõ êëåòîê àâòîðû âïåðâûå èñïîëüçîâàëè ìîäåëü ìèåëîñóïðåññèè (-àáëÿöèè) è ïîêàçàëè ïðèæèâëåíèå è ýêñïàíñèþ ãåìîïîýòè÷åñêèõ ïðîãåíèòîðîâ in vivo. Èíòåðåñíî, ÷òî ó êîíòðîëüíîé êîðîâû íàáëþäàëèñü çíà÷èòåëüíî ëó÷øèå ïîêàçàòåëè ýíãðàôòèíãà ïî ñðàâíåíèþ ñ æèâîòíûìè, ó êîòîðûõ áûë ïîäàâëåí ãåìîïîýç. Ñ îäíîé ñòîðîíû, ýòî ìîæåò óêàçûâàòü íà «ë¸ãêèé» ýíãðàôòèíã êëîíèðîâàííûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê áåç ñîçäàíèÿ äîïîëíèòåëüíûõ óñëîâèé, à ñ äðóãîé ñòîðîíû - î ñîâåðøåííîñòè ìîäåëè (òðóäíîñòè ïîäáîðà àäåêâàòíîé äîçû áóñóëüôàíà ïðèâåëè ê ñìåðòè êîðîâû ¹2), ñîçäàííîé àâòîðàìè. Îäíàêî ñëåäóåò ó÷èòûâàòü âîçðàñò êîðîâ (10-13 ëåò) è èíâîëþöèîííûå èçìåíåíèÿ êðàñíîãî êîñòíîãî ìîçãà (çàìåùåíèå æèðîâîé òêàíüþ) â äëèííûõ òðóá÷àòûõ êîñòÿõ. Êðîìå òîãî, èññëåäîâàòåëè óêàçûâàþò íà áîëåå íèçêóþ ýôôåêòèâíîñòü ãåíåòè÷åñêîãî ìàðêèðîâàíèÿ ÿäðà êîðîâû ¹3, è, ñîîòâåòñòâåííî, ñëàáûé ñèãíàë è ìåíüøóþ ÷óâñòâèòåëüíîñòü ÏÖÐ ïðè äåòåêöèè êëîíèðîâàííûõ êëåòîê. Õîòÿ ïî ðåçóëüòàòàì ðàáîòû íåëüçÿ ãîâîðèòü î ëå÷åáíîì ïîòåíöèàëå ìåòîäà, äîêàçàííûé àâòîðàìè ýíãðàôòèíã è «èììóíîëîãè÷åñêàÿ áåçîïàñíîñòü» êëîíèðîâàííûõ êëåòîê ïîçâîëÿåò ñäåëàòü êà÷åñòâåííî íîâûé øàã â èçó÷åíèè òåðàïåâòè÷åñêîé ýôôåêòèâíîñòè ÏßÑÊ ó ÷åëîâåêà. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ó÷àñòèè äâóõ êîìïàíèé, ïðåäñòàâëÿþùèõ ñîâðåìåííûé «stem cells è animal cloning business» - Advanced Cell Technology (Worcester, USA) è Cyagra (Elizabethtown, USA). with stem cells derived by nuclear transplantation. Circ. Res. 2004; 94; 6: 820-7. 5. Semple J.I., Ribas G., Hillyard G. et al. A novel gene encoding a coiled-coil mitochondrial protein located at the telomeric end of the human MHC Class III region. Gene 2003; 314: 41-54. 6. Lanza R.P., Chung H.Y., Yoo J.J. et al. Generation of histocompatible tissues using nuclear transplantation. Nat. Biotechnol. 2002; 20; 7: 689-96. 7. Olson S.D., Spees J.L., Whitney M.J., Prockop D.J. Mitochondral DNA (mtDNA) can transfer from adult stem cells (hMSCs) to rescue cells with depleted mtDNA incapable of respiration. 3rd Annual Meeting of the International Society for Stem Cell Research. June 23-25, 2005, San Francisco, USA. Book îf abstracts, abst. # 457. Ïîäãîòîâèë À.Â. Áåðñåíåâ ïî ìàòåðèàëàì Cloning and Stem Cells 2005; 7: 95-106. Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è èíæåíåðèÿ ¹ 2, 2005