«Íîâûå òåõíîëîãèè ìèêðîõèðóðãèè ãëàçà (àêòóàëüíûå âîïðîñû ìîðôîãåíåçà è ðåãåíåðàöèè â îôòàëüìîõèðóðãèè)» Ìóëäàøåâ Ý.Ð., Ãàëèìîâà Â.Ó., Íóðàåâà À.Á. ÔÃÓ «Âñåðîññèéñêèé öåíòð ãëàçíîé è ïëàñòè÷åñêîé õèðóðãèè Ðîñçäðàâà», ã. Óôà ÏÎÊÀÇÀÒÅËÈ ÓÐÎÂÍß ÊÎÍÅ×ÍÛÕ ÑÒÀÁÈËÜÍÛÕ ÌÅÒÀÁÎËÈÒΠÎÊÑÈÄÀ ÀÇÎÒÀ ÏÀÖÈÅÍÒÎÂ Ñ ÁÓËËÅÇÍÎÉ ÊÅÐÀÒÎÏÀÒÈÅÉ Â ðàáîòå ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàòåëåé óðîâíÿ êîíå÷íûõ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà ó áîëüíûõ ñ ýíäîòåëèàëúíî-ýøòåëèàëúíîé äèñòðîôèåé ðîãîâèöû. Ðåêîìåíäóåòñÿ ó÷èòûâàòü ïîêàçàòåëè óðîâíÿ îêñèäà àçîòà â ñëåçíîé æèäêîñòè áîëüíûõ ñ ýíäîòåëèàëüíî-ýøòåëèàëúüíîé äèñòðîôèåé êàê êðèòåðèé âûðàæåííîñòè âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà ðîãîâèöû. Àêòóàëüíîñòü Îäíîé èç âàæíåéøèõ áèîëîãè÷åñêèõ ñèãíàëüíûõ ìîëåêóë ÿâëÿåòñÿ îêñèä àçîòà (NO). Îêñèä àçîòà ÿâëÿåòñÿ ðåãóëÿòîðîì èììóííûõ ðåàêöèé, âîñïàëåíèÿ, ñîñóäèñòîé ïðîíèöàåìîñòè è òîíóñà ñîñóäîâ. Ïðîäóêöèÿ îêñèäà àçîòà îñóùåñòâëÿåòñÿ ôåðìåíòîì èíäóöèáåëüíîé àçîò-ñèíòàçîé (iNOS), ýêñïðåññèðîâàííîé, â îñíîâíîì, â êëåòêàõ ìàêðîôàãàëüíîãî ðÿäà, ïðè÷åì îñíîâíûìè èíäóêòîðàìè iNOS ÿâëÿþòñÿ ïðîòèâîâîñïàëèòåëüíûå öèòîêèíû [1]. Àêòèâàöèÿ NO-ñèíòàçû, èíäóêöèÿ îáðàçîâàíèÿ NO è ïîñëåäóþùèé êàòàáîëèçì NO ñîïðîâîæäàåòñÿ ïîâûøåíèåì ñîäåðæàíèÿ êîíå÷íûõ ìåòàáîëèòîâ NO2, NO3, NOX. Ýïèòåëèàëüíûå è ñòðîìàëüíûå êëåòêè ðîãîâèöû ïðè áóëëåçíîé êåðàòîïàòèè ïðîäóöèðóþò ïîâûøåííîå êîëè÷åñòâî ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ (IL-1α IL – 8) [4] è â òêàíè ïðè ýòîì çàáîëåâàíèè íàáëþäàåòñÿ ïîâûøåííàÿ ýêñïðåññèÿ íåêîòîðûõ ðîñòîâûõ ôàêòîðîâ ìåòàëëîïðîòåèíàç (IGF – 4, BMP – 4) [3], êîòîðûå ÿâëÿþòñÿ èíäóêòîðàìè iNOS.  ýòîé ñâÿçè ïðåäñòàâëÿåòñÿ èíòåðåñíûì îöåíèòü ñîñòîÿíèå ëîêàëüíûõ è ñèñòåìíûõ íèòðîêñèäåðãè÷åñêèõ ïðîöåññîâ ó áîëüíûõ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé. Öåëüþ íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëîñü èçó÷åíèå ïîêàçàòåëåé óðîâíÿ êîíå÷íûõ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà ó ïàöèåíòîâ ñ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé. Ìàòåðèàëû è ìåòîäû Èññëåäîâàíèå óðîâíÿ êîíå÷íûõ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà â ñëåçíîé æèäêîñòè è â ñûâîðîòêå êðîâè ïðîâîäèëîñü ó 35 áîëüíûõ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé èç îñíîâíîé è êîíòðîëüíîé ãðóïï âûáîðî÷íî. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ìåòàáîëèòîâ NO ñëåçíóþ æèäêîñòü â îáúåìå 0,1 0,2 ìë ñîáèðàëè ñ ïîìîùüþ ìåëàíæåðà èç íèæíåãî êîíúþí- êòèâàëüíîãî ñâîäà. Çàáîð êðîâè îñóùåñòâëÿëè èç ëîêòåâîé âåíû. Óðîâåíü ñîäåðæàíèÿ êîíå÷íûõ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ NO (NO2/ NO 3) îïðåäåëÿëè ìåòîäîì Åì÷åíêî Í.À. (1994), àäàïòèðîâàííûì ê ìàëûì îáúåìàì. Ðåçóëüòàòû ó÷èòûâàëèñü ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêè ïðè äëèíå âîëíû 540 íì. Êîíöåíòðàöèþ îêñèäà àçîòà îöåíèâàëè ïî ñîäåðæàíèþ ñòàáèëüíûõ êîíå÷íûõ ìåòàáîëèòîâ NO2/ NO3 è âûðàæàëè â ìêìîëü/ë. Êîíòðîëåì ñëóæèëè òåñò ïðîáû ñëåçíîé æèäêîñòè è ñûâîðîòêè êðîâè çäîðîâûõ ëèö (20 ÷åëîâåê). Íîðìàëüíûå ïîêàçàòåëè îêñèäà àçîòà ñëåçíîé æèäêîñòè, ïî íàøèì äàííûì, ñîñòàâèëè 2,39±0,2 ìêìîëü/ë, â ñûâîðîòêå êðîâè 20,6±2,8 ìêìîëü/ë. Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå Ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ ïîçâîëèëè âûÿâèòü, ÷òî óðîâåíü ñòàáèëüíûõ êîíå÷íûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà â ñëåçíîé æèäêîñòè ó áîëüíûõ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé â 4 ðàçà ïðåâûøàë òàêîâîé ó çäîðîâûõ äîíîðîâ (p<0,001). Óðîâåíü NOX â ñûâîðîòêå êðîâè ó ïàöèåíòîâ ñ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé òàêæå áûë ñóùåñòâåííî ïîâûøåí (p<0,001). Ïî íàøåìó ìíåíèþ, ïîâûøåíèå óðîâíÿ ìåòàáîëèòîâ NO â ñëåçå è ñûâîðîòêå êðîâè ó áîëüíûõ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé îáúÿñíÿåòñÿ ïîâûøåíèåì ñèíòåçà èíäóöèáèëüíîé ôîðìû iNOS, êîòîðàÿ èãðàåò âàæíóþ ðîëü â ðàçâèòèè èììóííîãî âîñïàëåíèÿ.  òàáëèöå ïðåäñòàâëåíû äàííûå, õàðàêòåðèçóþùèå ñîäåðæàíèå êîíå÷íûõ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà (NOÕ) â ñûâîðîòêå êðîâè è ñëåçíîé æèäêîñòè. Èçâåñòíî, ÷òî èçáûòîê NO óâåëè÷èâàåò ïðîíèöàåìîñòü ñîñóäîâ, ñïîñîáñòâóåò îòåêó òêàíåé, îêàçûâàåò ïðÿìîå öèòîòîêñè÷åñêîå äåéñòâèå, òåì ñàìûì îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà NO â ñëåçíîé æèäêîñòè è ñûâîВЕСТНИК ОГУ №78/ДЕКАБРЬ`2007 "# Ðîññèéñêàÿ íàó÷íî-ïðàêòè÷åñêàÿ êîíôåðåíöèÿ ñ ìåæäóíàðîäíûì ó÷àñòèåì Òàáëèöà 1. Óðîâåíü ñòàáèëüíûõ êîíå÷íûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà â ñëåçíîé æèäêîñòè è ñûâîðîòêå êðîâè ó áîëüíûõ ñ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé è ó çäîðîâûõ äîíîðîâ. Ãðóïïû n Êîíöåíòðàöèÿ ìåòàáîëèòîâ NOx â ñëåçå, ̱m (ìêìîëü/ë) Êîíöåíòðàöèÿ ìåòàáîëèòîâ NOx â ñûâîðîòêå êðîâè, ̱m (ìêìîëü/ë) Ïàöèåíòû ñ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé 35 10,5±1,5 39,7±3,1 Ãðóïïà çäîðîâûõ äîíîðîâ 20 2,39±0,2 20,6±2,8 ðîòêå êðîâè ìîæåò ÿâëÿòüñÿ ïîêàçàòåëåì àêòèâíîñòè âîñïàëèòåëüíîãî è äèñòðîôè÷åñêîãî ïðîöåññà, ò. å. ñòåïåíè âûðàæåííîñòè áóëëåçíîé êåðàòîïàòèè. Ýòè äàííûå ñîãëàñóþòñÿ ñ ðåçóëüòàòàìè, ïîëó÷åííûìè R.Buddi et al. (2002), êîòîðûå îáíàðóæèëè óâåëè÷åíèå ýêñïðåññèè iNOS è ýíäîòåëèàëüíîé àçîò-ñèíòàçû (eNOS) ïðè êåðàòîêîíóñå, áóëëåçíîé êåðàòîïàòèè è ãåòåðîõðîìíîì öèêëèòå.  òî æå âðåìÿ, ïðè áóëëåçíîé êåðàòîïàòèè, â îòëè÷èå îò êåðàòîêîíóñà, àâòîðû íå îáíàðóæèëè óâåëè÷åíèÿ ñîäåð- æàíèÿ ïåðîêñèíèòðèòà íàèáîëåå òîêñè÷íîãî ïðîäóêòà âçàèìîäåéñòâèÿ àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà è NO. Çàêëþ÷åíèå Òàêèì îáðàçîì, îïðåäåëåíèå óðîâíÿ êîíå÷íûõ ñòàáèëüíûõ ìåòàáîëèòîâ îêñèäà àçîòà ó ïàöèåíòîâ ñ áóëëåçíîé êåðàòîïàòèåé ÿâëÿåòñÿ ïðîãíîñòè÷åñêèì êðèòåðèåì îöåíêè ñòåïåíè âîñïàëåíèÿ ðîãîâèöû äëÿ ïîäáîðà ïàòîãåíåòè÷åñêè îðèåíòèðîâàííîãî ìåòîäà ëå÷åíèÿ. Ñïèñîê èñïîëüçîâàííîé ëèòåðàòóðû: 1. Áîíäàðåíêî, Â.Ì. Àíòèìèêðîáíàÿ àêòèâíîñòü îêèñè àçîòà è åå ðîëü â èíôåêöèîííîì ïðîöåññå / Â.Ì.Áîíäàðåíêî, Í.À. Âèíîãðàäîâ, Â.Â. Ìàëååâ // Êëèíè÷åñêàÿ ìèêðîáèîëîãèÿ è ýïèäåìèîëîãèÿ. 1999. ¹6. Ñ.61-66. 2. Åì÷åíêî, Í.Ë. Óíèâåðñàëüíûé ìåòîä îïðåäåëåíèÿ íèòðàòîâ â áèîñðåäàõ îðãàíèçìà / Í.Ë.åì÷åíêî, Î.È.Öûãàíåíêî, Ò.Â.Êîâàëåâñêàÿ // Êëèí. Ëàá.Äèàãíîñòèêà. 1994. ¹6. Ñ.19-20. 3. Altered expression of growth factors and cytokines in keratoconus, bullosd keratopathy and diabetic human corneas / M. Sadhizadeh, Chwa M., Aoki A., Lin B. et al. // Exp.Eye Res. 2001. Vol.73. P.179 189. 4. Detection of mRNA for the cytokines, interleukin-1 alpha and interleukin-8, in corneas from patients with pseudophakic bullos keratopathy / J. Rosenbaum, S.Planck, Huang X., I. Rich et al. // Invest. Ophtalm. Vis. Sci. 1995. Vol.36. P.2151 2155. 5. Evidence of oxidative stress in human corneal diseases / R.Buddi, B.Lin, S. Atilano, N. Zorapapel et al // J.Histochem.Cytochem. 2002. Vol.50. P.341-351. "$ ВЕСТНИК ОГУ №78/ДЕКАБРЬ`2007