HOMOCYSTEINE КОД 21737 ОБМЕН

HOMOCYSTEINE
КОД 21737 1 x 60 мл + 16.2 мл
ХРАНИТЬ ПРИ 2-8ºC
ГОМОЦИСТЕИН
Реагенты для измерения концентрации гомоцистеина
Только для использования in vitro в клинической лаборатории
ФЕРМЕНТНЫЙ ОБМЕН
ПРИНЦИП МЕТОДА
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Окисленная форма гомоцистеина (ГЦ) восстанавливается в свободный ГЦ с помощью
Рекомендуется использовать Kонтрольную Cыворотку Гомоцистеина уровня I (код. 18058) и II (код.
18059) для подтверждения результатов процедуры измерения. Концентрации гомоцистеина указаны на
этикетке флакона. Уровень гомоцистеина отслеживается по референтному материалу ERM-AD455/IFCC
(IRMM). Отслеживаемость гарантируется только при использовании реагентов BioSystems и
рекомендуемых измерительных процедур.
Компоненты человеческого происхождения были проверены и не содержат антител к ВИЧ и
гепатиту C, а также антигена гепатита B. Однако, с ними следует обращаться осторожно как с
потенциальными источниками заражения.
восстанавливающего агента трис- (2-карбоксиэтил) фосфина (TCEP). ГЦ вступает в реакцию с
субстратным кофактором, S-аденозилметионином (SAM), и в результате катализации реакции
S-метилтрансферазой ГЦ (HMTasa) образуются метионин (Met) и S-аденозилгомоцистеин (SAH). SAH
оценивается с помощью связанных ферментативных реакций и гидролизуется SAH-гидролазой (SAHasa)
до аденозиндезаминазы (Ado) и ГЦ. Синтезированный ГЦ вновь вступает в реакцию с субстратным
кофактором SAM и с S-метилтрансферазой ГЦ до получения SAH, который формирует циклическую
реакцию, усиливающую сигнал обнаружения. Аденозиндезаминаза (ADA) катализирует дезаминирование
аденозина (Ado) на инозин и аммоний. Концентрация ГЦ определяется исходя из скорости снижения
концентрации НАДН, измеряемой при 340 нм, посредством сопряженной реакции глутаматдегидрогеназы
(ГлДГ)1.
TCEP
Hcy-R
Hcy + R
HMTase
Hcy + SAM
SAH + Met
После вскрытия хранить при температуре 2-8ºC. Стабильность сохраняется до истечения срока годности,
указанного на этикетке, при условии хранения в плотно закрытой таре и предотвращения попадания
загрязнений во время использования.
Диапазоны предложенных допустимых значений рассчитаны исходя из предыдущего опыта
межлабораторной изменчивости и приведены только для справки; каждая лаборатория должна
установить свои собственные параметры точности.
SAHase
ADA
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
GLDH
Inosine + NH3
Ado
Detection
NADH
NAD
СОСТАВ
Метрологические характеристики были получены с помощью анализатора BA400. Результаты могут
меняться, если используются другие приборы или ручной анализ.
− Предел обнаружения: 0.26 µмоль/л
− Интервал измерений (приблизительное значение, зависящее от наивысшей величины стандартной
концентрации): 0.26-50.0 µмоль/л. Для больших значений наполовину разбавьте пробу
дистиллированной водой и повторите процедуру измерения.
A. Реагент: 1 x 60.0 мл.
B. Реагент: 1 x 16.2 мл.
− Повторяемость (в пределах одного опыта):
Состав реагентов в реакционной кювете:
S-аденозилметионин (SAM) 0.1 ммоль/л, НАДН > 0.2 ммоль/л, TCEP > 0.5 ммоль/л, 2-оксоглутарат 5.0
ммоль/л, 1-3 глутаматдегидрогеназа 10 кМЕ/л, SAH гидролаза 3.0 кМЕ/л, аденозиндезаминаза 5.0 кМЕ/л,
ГЦ метилтрансфераза 5.0 кМЕ/л.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
Средняя концентрация
KB
n
12.8 µмоль/л
30.9 µмоль/л
2.0 %
1.9 %
20
20
− Воспроизводимость (между опытами):
Хранить при 2-8ºC.
Реактивы сохраняют стабильность до истечения срока годности, указанного на этикетке при условии
герметичности упаковки и отсутствия загрязнения во время использования.
Средняя концентрация
KB
n
12.8 µмоль/л
30.9 µмоль/л
2.4 %
3.6 %
25
25
Признаки негодности:
− Реагенты: Присутствие частиц или мутности, показатель поглощения холостой пробы меньше 0.900
при 340 нм (1-сантиметровая кювета).
− Точность: Результаты, полученные с использованием данного реагента, не показали систематического
расхождения при сопоставлении с референтной процедурой. Подробная информация о
сравнительных экспериментах предоставляется по запросу.
ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ РЕАГЕНТЫ
− Взаимное влияние: Гемолиз (гемоглобин 5 г/л), липемия (триглицериды 10 г/л) и билирубин (40 мл/дл)
не оказывают влияния. Другие препараты и вещества могут создавать интерференции7.
S. Стандарты гомоцистеина 5 x 1 мл (код. 11750). Гомоцистеин человека. Концентрация гомоцистеина
указана на этикетке флакона. Уровень гомоцистеина отслеживается по референтному материалу
ERM-AD455/IFCC (IRMM).
При тестировании компонентов человеческого происхождения было выявлено отсутствие антител
к ВИЧ и вирусу гепатита С, а также антигенов гепатита В. Тем не менее, обращаться с ними нужно
с осторожностью, как с потенциально инфекционными.
Хранить при температуре 2-8ºC. Стабильность сохраняется до истечения срока годности, указанного на
этикетке, при условии хранения в плотно закрытой таре и предотвращения попадания загрязнений во
время использования.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Реагенты поставляются готовыми к использованию.
Открытые реагенты, хранящиеся в камере анализатора при температуре 2-8ºC, сохраняют стабильность
в течение 2 месяцев.
ОБРАЗЦЫ
Сыворотка или плазма, собранная стандартными методами.
Гомоцистеин сохраняет стабильность 4 дня при комнатной температуре, несколько недель при
температуре 2-8ºC и несколько месяцев при температуре -18ºC2. В качестве антикоагулянтов можно
использовать гепарин или ЭДТА.
НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Гомоцистеин (ГЦ) является аминокислотой, которая синтезируется в качестве промежуточного продукта
метаболизма метионина и играет важную роль в переносе метиловых групп в процессе клеточного
метаболизма. ГЦ циркулирует в плазме в форме свободного ГЦ, окисленного ГЦ и Гц-связанных
дисульфидов с другими тиолами; комбинация всех этих форм называется общим гомоцистеином (оГЦ).
Повышенный уровень этой аминокислоты может вызывать развитие сердечно-сосудистых заболеваний4Повышенное содержание гомоцистеина может провоцировать образование тромбов, что, в свою
очередь, приведет к инсульту или инфаркту.
6.
Существует 4 основных фактора, которые способствуют повышению концентрации ГЦ в плазме8: а)
трансформация ферментов, связанная с метилентетрагидрофолатредуктазой (MTHFR), метионинсинтазой (MS) и цистатионин-бета-синтазой (CBS); б) дефицит фолата, витамина В6 и неусваиваемость
витамина B12; в) системные расстройства, такие как почечная и печеночная недостаточность,
гипотиреоз, злокачественные образования и трансплантация; г) фармакологические и токсические
факторы, такие как чрезмерное потребление кофе и (или) алкоголя, курение, пероральный прием
метионина и некоторых ингибиторов.
Последние исследования выявили, что повышенный уровень ГЦ является основным фактором риска для
развития неврологических и цереброваскулярных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь
Паркинсона, эпилепсия и цереброваскулярные заболевания.
Клиническая диагностика не должна осуществляться на основе результатов лишь одного теста, а должна
включать в себя как клинические, так и лабораторные данные.
Сыворотка и плазма3: 3-15 µмоль/л
БИБЛИОГРАФИЯ
КАЛИБРОВКА
1. Dou C, Xia D, Zhang L, Chen X, Flores P, Datta A, Yuan C. Development of a novel enzymatic cycling assay
for total homocysteine. Clin Chem 2005; 51:1987-89.
Рекомендуется использовать 5 уровней стандарты гомоцистеина (S) (код. 11750).
Холостые пробы по реагенту рекомендуется проводить каждый день, а калибровку как минимум каждые
7 дней после смены набора реагентов или как того требует порядок действий по контролю качества.
ПАРАМЕТРЫ ИСПЫТАНИЯ
2. Guttormsen AB et al. Plasma concentrations of homocysteine and other aminothiol compounds are related
to food intake in healthy human subjects. J Nutr;124:1934-41.
3. Selhub J et al. Serum Total Homocysteine Concentrations in the Third National Health and Nutrition
Examination Survey (1991–1994): Population Reference Ranges and Contribution of Vitamin Status to High
Serum Concentrations. Ann Intern Med 1999; 131:331-39.
Эти реактивы можно использовать в некоторых автоматических анализаторах. За подробной
информацией обращайтесь к вашему торговому представительству.
4. Eikelboom JW, Lonn E, Genest J Jr, Hankey G, Yusuf S. Homocyst(e)ine and cardiovascular disease: a
critical review of the epidemiologic evidence. Ann Intern Med 1999; 131:363-75.
− Длина волны:
− Температура:
− Режим анализа:
6. Nygard O, Nordrehaug JE, Refsum H, Ueland PM, Farstad M, Vollset SE. Plasma homocysteine levels and
mortality in patients with coronary artery disease. N Engl J Med 1997;337:230-6.
340 нм
37ºC
2 балла
Образец/ Калибратор
Дистиллированная вода
Реактив A
5. Scott J, Weir D. Homocysteine and cardiovascular disease. Q J Med 1996; 89:561-3.
Холостой раствор
Образец/ Калибратор
13 µL
240 µL
13 µL
240 µL
7. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 5th ed. AACC Press, 2000.
8. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 2001.
Перемешать и инкубировать 3-5 минут. Затем добавить:
Реактив B
65 µL
65 µL
Смешайте и считайте показатель поглощения через 2.5 минуты и через 5 минут.
M21737r-01
BioSystems S.A. Costa Brava, 30. 08030 Barcelona (Spain)
Quality System certified according to
EN ISO 13485 and EN ISO 9001 standards
10/2014