Цитата слайд9 Раніше повідомлялося про рецесивну мутацію птиці, яка має як фенотипову характеристику не повністю сформовані або повністю відсутні хвостові хребці. Кіфоз та сколіоз, що залучають ділянки синсакро-грудо-поперекового відділу хребців, а також поява надлишкових ребер (одно- або двосторонніх; елементарних або повністю сформованих, якщо стрункі) - також інші визначні риси. Ці останні особливості часто асоціювались з безглуздістю (будь то повною чи частковою), але їх також виявляли за наявності нормального скелета хвоста. Розглянутий мутантний ген (r /> 2) відокремився у сім'ях F2 від схрещувань між птахом крипера та білого леггорна, а також між гамбургром Silver Spangled та тим самим запасом білого леггорна, але раніше не зустрічався у сім'ях Leghorn, Creeper або Hamburg. У 1956 р. Ми опублікували звіт про рецесивну летальну мутацію птиці, яка в загальному фенотиповому вираженні варіювала від вкорочення верхньої щелепи (та сліпоти) до мікроцефалії. Слайд 11 Опис мутанта Неправильно сформовані ембріони (малюнок \ 6 / i та B) були життєздатними протягом перших 2 тижнів інкубації; більшість з них померли між 18 і 21 добою, хоча одного з них було знайдено як живого, але не в змозі пробити снаряд на 22 дні. У багатьох із цих ембріонів жовтковий мішок був частково або навіть повністю виведений у порожнину тіла. Вони мали тулуб нормальних розмірів, велику брахіцефальну голову і сильно зменшені кінцівки. Нижня щелепа була короткою, а верхньощелепна пухла, кінчик її вигнутий вниз. Придатки були надзвичайно короткими, і це зменшення було набагато помітнішим у ногах, ніж у крилах. Положення однієї з ніг (або навіть обох) часто було відвернуто від тіла, її спинний аспект скручувався в напрямку голови. Грубі аномалії скелета добре видно на зразках, пофарбованих алізарином (малюнок A та B). Всі довгі кістки, і в меншій мірі карпали і тарзали, значно зменшені в довжину, але досить широкі. Проксимальна головка плечової кістки має грибоподібну форму. Зевгоподій обох пар кінцівок може виявляти скелетні аномальні зв’язки: на малюнку 17 видно, наприклад, що лівий радіус набагато зменшений у розмірі, ніж правий одна і що права малогомілкова кістка майже повністю злита з великогомілковою кісткою. Сам тибіотарсус завжди має різкий вигин в дистальній третині діафізу. Підплесно-плюсневі елементи не зростаються. З причин для подальшого коментування синдром був позначений як наномелія. Під час грубого спостереження було виявлено, що серце наномелевих ембріонів є безумовно гіпертрофованим. Тарзали - це сукупність кісток задньої кінцівки між плесновими кістками нижче і гомілка і малогомілкової кістки вище Карпали – зап’ясток. Дані сегрегації Слайд 14 У 1963 р. Серед тринадцяти самок F2, які були спаровані з наномеліатрансмісуючим F2самцем, вісім продукували ембріони дефектного типу серед своїх нащадків, а п'ять - ні. Смертність ембріонів протягом перших 17 днів інкубації суттєво не відрізнялася між нащадками гетерозиготних та негетерозиготних курей, спарених з тим самим гетерозиготним півнем. За останні п’ять днів інкубації смертність ембріонів подвоїлася у потомствах гетерозиготних птахів, що спаривались між собою. Частота появи наномелевих ембріонів серед усіх запліднених яєць, отриманих від гетерозиготних взаємозв'язків, становила 23,8 відсотка; з усіх ембріонів, які пережили тринадцятий день, 27,4% були наномелями. Жоден із цих відсотків не суттєво відхилявся від 25 відсотків, передбачених припускаючи, що наномелія є результатом рецесивної мутації. У 1964 р. Було проведено п’ять спарювань птахів F3 з числа нащадків батьків-гетерозигот 1963 року. Ці парування складалися з 56 курей та 5 півнів; 33 кури виявились гетерозиготними, тоді як у 23 з них у нащадках не було наномелевих ембріонів. Смертність ембріонів була високою і, імовірно, була спричинена сторонніми механічними факторами; у нащадків батьків-гетерозигот він, як правило, дещо перевищував показник, виявлений для нащадків негетерозиготних матерів, але відмінності були значними лише протягом останнього періоду інкубації. Серед нащадків батьків-гетерозигот 965 тих, хто вижив на тринадцятий день, включав 251 ембріон, тобто 26 відсотків, з типовими симптомами наномелії. Дані 1963 р. Показали, що на початкових стадіях розвитку динамічна смертність наномелевих ембріонів була незначною, якщо взагалі була. Той факт, що в 1964 р. Лише 18,6 відсотка всіх запліднених яєць, вироблених батьками-гетерозиготами, містили наномелечні ембріони (хоча вони були знайдені у 26 відсотків усіх, хто вижив на тринадцятий день) пояснюється надмірною, але, мабуть, недиференціальною ранньою смертністю. На додаток до даних за 1964 р., Наведених у Таблиці I, ембріони, які інкубували протягом 16 днів, були зібрані з тих самих загонів для аналітичної роботи. Від батьків-гетерозигот було отримано 55 наномелечних ембріонів (24,8 відсотка з 222 вижилих на тринадцятий день); було 190 ембріонів від негетерозиготних матерів та батьків-гетерозигот, і жоден з них не мав симптомів наномелії. Таким чином, дані F2 та F3 в цілому дають переконливі докази того, що наномелія є рецесивною ознакою; для гена пропонується символ nm. Крім того, ми знайшли чіткі докази того, що життєздатні нащадки батьків-гетерозигот демонструють очікувану сегрегацію 2: 1 між носіями та неносіями гена. Співвідношення статі наномелевих ембріонів було нормальним. Жодної різниці в плодючості не виявлено у курей, які були гетерозиготними за наномелією, та їх негетерозиготними сибами. Плодючість яєць була нормальною при взаємозв’язках птахів, які були гетерозиготними щодо наномелії. Дані про морфологію Слайд 15 Як вимагає Американський стандарт досконалості, наша птах Кохін поєднувала "короткі, міцні в кістці черешки" з масивним тілом. Але лише у поколінні F2 від схрещувань між Баффом Кохінсом та Білими Легорнами помітні відмінності в довжині цівки спостерігалися серед півнів. Коли на цій підставі для спаровування було обрано шість півників, які здавалися особливо укороченими, усі шість передавали ген наномелії. Курей F2, які були протестовані на наявність або відсутність наномелії серед своїх нащадків, використовували для отримання адекватних метричних даних про довжину кісток. Довжина стегнової, великогомілкової та височно-плеснової кісток лівої ноги була визначена для 39 гетерозиготних та 21 негетерозиготних курей. Вади розвитку скелета Слайд 16 За винятком наномелії під час спарювань батьків-гетерозигот, частота грубих вад розвитку скелета була низькою серед тих, хто вижив на тринадцятому дні інкубації. Те саме стосувалося спарювань між самками-носіями та гетерозиготними півнями того ж стада. Однак в обох типах спарювань було виявлено декілька вад розвитку, що представляють надзвичайний інтерес: 1) сиреноїдний зародок з погано сформованим тазом, задні кінцівки зміщені дорсадно і близько наближені один до одного, обидва тарсометатарси відсутні, але присутній один зачатковий палець ноги на кінчику кожної кінцівки; 2) ембріон, у якого суглоб міжгомілкового і височно-плеснового кісток лівої ноги був досить ненормальним, а четвертий палець на нозі відсутній; 3) ембріон, якому взагалі не вистачало лівого крила, і в якому відсутня як тарсометарсі, так і ноги: 4) наномелічний ембріон, якому повністю бракувало правого крила та обох ніг. Аномалії, що трапляються при спаровуванні птиці ліани, демонстрували цілком подібні особливості, але жодних інших дефектів не спостерігалося. Частота цих вад розвитку серед ембріонів, які пережили тринадцятий день інкубації (за винятком деяких менш незвичних випадків), становила 0,25 відсотка у зв’язку між собою батьків, гетерозиготних щодо наномелії, 0,11 відсотка у потомствах негетерозиготних курей, виведених на гетерозиготних півнях, та 0,19 відсотка в цілому. У наших дослідженнях на птахах-ліанах ми повідомили, що з 30615 запліднених яєць 0,046 відсотків ембріонів мали такі типи дефектів (кількість, що вижила на тринадцятий день, не вказана) Місце мутації слайд 17 Стірпе та ін. (1987) продемонстрували зменшення транскриптів основного білка в наномелевих ембріонах. Саузерн-аналізи не виявили перебудови гена основного білка або поліморфізму довжини фрагмента рестрикції (RFLP) в гені основного білка, пов'язаного з мутацією наномелії. Ці дані свідчать про те, що генетичне ураження, пов’язане з мутацією наномелії, є або незначною зміною гена основного білка, що впливає на біосинтез транскрипту основного білка, або дефектом регуляторного гена, що утворює фактор трансдії, необхідний для належної експресії основного гена білка. Щоб розрізнити ці два альтернативні молекулярні механізми мутації наномелії, були проведені експерименти, щоб продемонструвати генетичну зв'язок або незв'язок основного білкового гена з мутацією наномелії. За допомогою технології денатуруючого градієнтного гельелектрофорезу (DGGE) було виявлено поліморфізм ДНК на 3 'кінці гена основного білка. Поліморфізм визначає два алелі, один алель пов'язаний з нормальним геном основного білка, тоді як інший алель завжди сегрегує з мутацією наномелії. Ці результати дозволяють припустити, що ідентифікований поліморфізм ДНК у гені основного білка генетично пов’язаний із успадкуванням наномелевого фенотипу, а мутація наномелії містить ураження в основному гені білка. Успадкування слайд 18 DGGE-аналіз геномної ДНК наномелії перетравлюється і просівається за допомогою основного білка кДНК клон, ST-1, виявляє наявність трьох електроморф , a, b і c. Електрофоретичний варіант b відокремлюється з мутація наномелії; а та догляд знайдений як у носіїв, так і у неносіїв (Velleman and Clark 1992). Рисунок 1 : Результати типового 20% -80% денатураційного градієнтного гелю. Ця пляма показує a / b, a / a та b / c електрофоретичні моделі. Особи, що демонструють комбінацію b електрофоретичний варіант з a або c електрофоретичні варіанти є гетерозиготними носіями і є фенотиповими нормальний (смуги 1, 3, 4 та 5). Електрофоретичний малюнок являє собою несучу (смуга 2). Протягом курсу цих дослідження, зразок, що складається виключно з b-фрагмент ніколи не відзначався у фенотипово нормальних птахів. Це узгоджується з асоційованим варіантом b із успадкуванням мутації наномелії. Дані про електрофоретичні та нащадкові тести зведені в таблиці 1. Всі перевізники для наномелія, ідентифікована за результатами тестування нащадків, демонструвала або електрофоретичний варіант a / b, або b / c, тоді як у носіїв - a / a або a / c. Ці дані забезпечують додаткову підтримку для висновок, заснований на статистичному аналізі, що b електрофоретичний варіант і локус наномелії пов'язаний між собою.
