«Внедрение инновационных технологий в Центре лабораторной медицины АО «Республиканский диагностический центр» Масс-спектрометрия - высокая точность и качество исследований в микробиологической практике» Л. Евстафьева Правильная идентификация возбудителя Определение чувствительности к антимикробным препаратам Эффективное лечение Микробиологическая служба оказывает существенную помощь лечащему врачу в выборе наилучшей схемы лечения инфекционной патологии Время от первичного посева до получения результата идентификации на автоматических и полуавтоматических анализаторах Время от первичного посева до получения результата идентификации на масс-спектрометре 48-72 часа 24 часа MALDI-TOF масс-спектрометрия Масс-спектрометрия MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption 'lonization) TOF MS (Time of Flight Mass-Spectrometry) метод идентификации молекул путем измерения отношения их массы к заряду в ионизированном состоянии ионизация вещества с помощью матрицы и лазерного излучения. время-пролетная масс-спектрометрия. Масса молекулы оценивается по времени пролета от источника ионизации до детектора. Анализатор VITEK MS приобретен в 2014 г. В настоящее время, это единственный в Казахстане прибор для идентификации микроорганизмов на внутривидовом уровне методом спектрального анализа, используемый в клинической практике. Преимущества метода масс-спектрометрии Высокая производительность 100% специфичность и чувствительность Высокая скорость анализа Определение спектра белков напрямую из бактериальной колонии, взятой с чашки первичного посева материала Увеличение базы данных (755 клинически значимых видов микроорганизмов) Этап 1: подготовка образца Смешивание колонии бактерий со специальной матрицей 1 2 3 4 Кристаллизация лизированного материала с веществомматрицей, переход молекул лизата в газовую фазу и их ионизации. Этап 2: Идентификация Бактериальная клетка Белки Видовое определение Протеом 9476.2 4424.2 Vo y a g e r S p e c # 1 = > A d v B C ( 3 2 , 0 . 5 , 1 . 0 ) = > N F 0 . 7 [ B P = 4 4 2 3 . 9 , 2 1 1 7 ] 100 2117. 3 4861.0 90 80 8823.5 70 5897.8 0 3000 5000 10975.2 10110.8 10493.9 9611.5 9075.2 8903.3 8610.6 7209.8 4026.9 4535.6 3311.8 3491.4 12271.4 8054.3 13000 8383.8 7424.9 6984.6 6533.3 6137.3 3132.3 11000 Масса молекулы 10 Mass (m/ z) 9000 4765.4 4738.6 7000 30 6629.0 40 6786.7 50 6271.2 % I nt ensi t y 60 20 Слайд пом котором м анализа (б газовую ф молекулы взаимодей перенося заряд. Под электриче ионизиров от источни детектору пропорцио массам. Программ прибора о частиц и п информац молекуляр Масс-спек спектрами основании белков пр идентифи Масс-спектрометр Автоматизированная система идентификации C : \ D o k u m e n t e u n d E in s t e lu n g e n \ m . e r h a r d \ E ig e n e D a t e ie n \ A n a g n o s T e c - d c \ Z c h e n a b la g e \ D o k u m e n t B a n n e r . t x t > > S p e c [ B P = 3 5000 7000 11572 11000 11906 10226 10347 9000 10608 10 9654 9330 7863 7092 8450 20 6837 3581 40 7367 50 5931 5015 60 10939 9994 8744 7980 70 0 3000 is 9453 7075 80 30 w 1648.1 90 8074 Целевой слайд < 3775 < 100 % I ntensi ty Шаг 1 Бактерии, плесень, дрожжи, 13000 Mass (m/z) Шаг 4 Загрузка Шаг 2 Добавление 1.0 мкл матричного раствора Шаг 3 Просушивание: 1-2 мин. Шаг 5 Создание спектра ( 2 мин на 1 образец) Результаты исследований На идентификацию одного микроорганизма требуется около 2 -х минут времени 99,9% достоверности результатов Что дало нам приобретение автоматического анализатора VITEK MS: Полная автоматизация стандартных биохимических методов идентификации микроорганизмов Увеличение скорости исследования Стандартизация микробиологических исследований Повышение качества проводимых исследований Расширение спектра выделяемых патогенов Сокращение времени на проведение идентификации и сокращение срока выдачи результата эффективное лечение пациента снижение смертности существенное сокращение сроков госпитализации экономия бюджетных средств. Спасибо за внимание!