Клатратная криоконсервация

реклама
КЛАТРАТНАЯ
КРИОКОНСЕРВАЦИЯ
БИООБЪЕКТОВ
(КЛАТОБИОЗ)
Тельпухов Владимир Иванович
Щербаков Павел Васильевич
Хохлов Алексей Валерьевич
Люндуп Алексей Валерьевич
В задачи
криобиологии
входит разработка
способов
длительного
консервирования
биологических
объектов в
жизнеспособном
состоянии путём
их глубокого
замораживания.
КОНЕЧНАЯ ЦЕЛЬ — АНАБИОЗ ЧЕЛОВЕКА
Четверть
века
назад
нами
была
обнаружена
закономерность, указывающая на существовании в
природе такого, ещё неизвестного науке проявления
жизнеспособности как КЛАТОБИОЗ
Его достоверность подкреплена рядом успешных и
независимых исследований
Уже сегодня в рамках самой криобиологии происходит
формирование совершено нового направления под
общим названием «Клатратная криоконсервация»
Что можно отметить и по заинтересованности в
проведении семинара «Криоконсервация органов и
тканей»,
организованного
Фондом
перспективных
исследований 20.02.14 года
Ещё в 1912 году русский учёныйботаник Максимов Н.А. (1880—
1952) при переохлаждении
биологической ткани
растительной природы открыл
защитное действие глицерина.
Это судьбоносное событие и
положило начало науке, которая
сформировалась в известную
всем нам сегодняшнюю
криобиологию лишь к средине
ХХ века
К настоящему
времени уже
выработалось
понимание того,
что коль речь
заходит вообще о
«криоконсервации»,
то сразу же
подразумевается —
биологические
объекты (клетки,
ткани, органы,
простейшие
организмы)
пребывают именно
в анабиозе
АНАБИОЗ
ШИРОКО-РАСПРОСТРАНЁННОЕ
ПРИРОДНОЕ ЯВЛЕНИЕ
Микроскопические
черви коловратки
легко переходят к
анабиозу
Плоские черви
нематоды впадают
в анабиотическое
состояние
посезонно
Тихоходки способны
пребывать в
состоянии анабиоза
веками
Способностью
впадать в анабиоз
обладают
спорообразующие
бактерии
Анабиоз — это
существование
организмов и их частей в
состоянии временного
обратимого
прекращения
жизнедеятельности в
результате выведения
свободной
(биологически активной)
воды из биохимических
взаимодействий в
клетке.
Так человеческий
организм на 78%
состоит из воды.
Самая большая
насыщенность водой
в тканях головного
мозга, печени,
паренхиматозных
органах.
Даже кости на 20%
состоят из воды, а
зубы на 10%
Необходимым условием
жизнедеятельности
любого организма
является транспорт
воды.
Вода задействована в
перемещении
различных питательных
веществ и продуктов
обмена.
Она проходит сквозь
клеточную мембрану
совершенно свободно
путем осмоса.
Вода составляет
основу организма.
Клетки буквально
«плавают» в водном
растворе
межклеточной
жидкости.
В самой же
клетке вода
находится в
двух формах:
свободной
и связанной.
Вода составляет
до 80% её массы.
Из всей этой
клеточной воды
свободная вода
составляет 95 %
Свободная
вода участвует в
биохимических
реакциях.
В ней растворены
органические и
минеральные вещества.
При высушивании и
замораживании
свободная вода легко
удаляется.
При удалении свободной
воды гибели клетки не
происходит.
Связанной называют воду,
молекулы которой
физически или химически
соединены с другими
веществами.
Она не растворяет
кристаллы, не активизирует
многие биохимические
процессы.
Связанная вода входит в
состав коллоидов клетки и с
трудом высвобождается из
них.
С потерей связанной воды
нарушаются клеточные
структуры, и наступает
гибель клетки.
По сути все
биохимические
процессы в живой
клетке сводятся
к химическим
реакциям в водном
растворе
Снижение содержания
свободной (биологически
активной) воды и есть
физико-химическая основа
перехода к любому из трёх
известных на сегодня видов
анабиоза.
А это есть «анабиоз в
результате высыхания»,
«анабиоз в результате
глубокого охлаждения»,
«анабиоз в результате
нахождения в среде с
высокой концентрацией
солей и высоким
осмотическим давлением»
Таким образом,
переход к
какому-либо
виду анабиоза
всегда
происходит или
при отнятии воды
из клеток
(высушивание и
осмос), или при
её
иммобилизации
(замораживание)
При анабиозе в
результате
глубокого
охлаждения (подругому — это
«криоанабиоз»),
иммобилизация
свободной воды
происходит только
путём образования
обычного льда (в
виде кристаллов или
в аморфном
стеклообразном
состоянии).
Кристаллизация —
процесс перехода
вещества из
жидкого состояния
в кристаллическое
Кристаллическая
структура обычного
льда (гексагонального):
молекулы воды
соединены в
правильные
шестиугольники
Образование
кристаллов льда
внутри клеток
— самый важный
повреждающий
фактор при
криоконсервации
ВНУТРИКЛЕТОЧНОЕ
КРИСТАЛЛООБРАЗОВАНИЕ
1. ФОРМИРОВАНИЕ
КРИСТАЛЛИЗАЦИИ :
ЦЕНТРОВ
— Оптимальная
температура -40оС
2. РОСТ КРИСТАЛЛОВ :
— Максимальная скорость
роста при -2…-10оС
— Очень малая скорость
роста при -30оС
— Вообще нет роста при
-130оС
Присутствует некое
естественное
природное
рассогласование:
для интенсивного
роста кристаллов
льда необходимы
температуры в
−2…−10 °C,
но наиболее
благоприятная для
этого процесса
температура
формирования
самих центров
кристаллизации
ещё не достигнута
(−40 °С)
Вещества, способные
снизить повреждающее
действие физикохимических факторов
при криоконсервации
— это криопротекторы
КРИОПРОТЕКТОРЫ (~100)
ПРОНИКАЮЩИЕ —
ЭНДОЦЕЛЛЮЛЯРНЫЕ (диметилсульфоксид, глицерин, глюкоза,
…):
НЕПРОНИКАЮЩИЕ —
ЭКЗОЦЕЛЛЮЛЯРНЫЕ
(полиэтиленоксид,
поливинилпирролидон, …) :
— Снижают температуру замерзания
— Образуют водородные связи
с молекулами воды, чем и
препятствуют формированию
кристаллов льда
— Связывают часть свободной воды,
что уменьшает общую дегидратацию
клеток
— Разбавляют образующийся при
кристаллизации «рассол», не давая
белкам денатурироваться
— Стабилизируют структуру
макромолекул клетки за счёт
образования с ними водородных
связей
— Препятствуют росту
кристаллов внеклеточного льда
— Препятствуют осмотическим
перепадам
— Способствуют снижению
концентрации ПРОНИКАЮЩИХ,
а значит и токсичности
последних
— Защищают плазматические
мембраны
ФОРМИРОВАНИЕ КРИСТАЛЛОВ
ЛЬДА БЕЗ КРИОПРОТЕКТОРОВ
Криопротекторы подавляют рост
кристаллов льда в растворе
НЕДОСТАТКИ
КРИОПРОТЕКТОРОВ
— Токсичны: в концентрациях для достижения
сколь-либо явного эффекта ядовиты
— Недостаточно эффективны
— Проблематична их эвакуация
Подбор криопротекторов
проводят эмпирически по
принципу наименьшей
токсичности и
оптимального эффекта
(метод — «пальцем в
небо»)
КРИОКОНСЕРВАЦИЯ
МЕЛКИХ
БИОЛОГИЧЕСКИХ
ОБЪЕКТОВ,
НАХОДЯЩИХСЯ В
КРИОАНАБИОЗЕ —
УЖЕ СЕГОДНЯШНЯЯ
РЕАЛЬНОСТЬ
Наибольшая по
размеру клетка
в человеческом
организме — это
яйцеклетка.
По своему
диаметру
она,
приблизительно,
130 мкм
Самая же
маленькая клетка —
это сперматозоид.
Приблизительная
толщина
сперматозоида —
55 мкм, по ширине
она — 5 мкм, в
длину же достигает
3,5 мкм
Эмбрион мыши в
стадии бластоцита
(0,1 мм)
Эмбрион
морской
звезды на
четвертом
клеточном
этапе при
увеличении
в 60 раз
Эмбрион человека
(0,1 мм)
КОНСЕРВАЦИЯ
ЗАМОРАЖИВАНИЕМ
ОТРАБОТАНА ДЛЯ
ЭРИТРОЦИТОВ, КЛЕТОК
КОСТНОГО МОЗГА,
СПЕРМАТОЗОИДОВ,
РАННИХ
(ПРЕИМПЛАНТАЦИОННЫХ)
ЭМБРИОНОВ, ФРАГМЕНТОВ
ЩИТОВИДНОЙ И
ПОДЖЕЛУДОЧНЫХ ЖЕЛЁЗ
КРИОКОНСЕРВАЦИЯ
КРУПНЫХ
БИОЛОГИЧЕСКИХ
ОБЪЕКТОВ,
ПРЕБЫВАЮЩИХ В
СОСТОЯНИИ
АНАБИОЗА — ПОКА
ЕЩЁ ФАНТАСТИКА
За долгие
десятилетия своего
существования,
криобиология не
оправдала самого
главного от
неё ожидания –
эффективной
криоконсервации
органов
Криоконсервация
хорошо отработана
лишь на объектах,
имеющих радиус не
более 1-го
миллиметра.
Ведь отношение
поверхности и объема
у органов очень далеко
от необходимого для
этого оптимума.
Чем больше орган, тем
меньше соотношение
поверхности и объема.
В КРИОБИОЛОГИИ ВСЁ, ЧТО БОЛЕЕ
1-ГО МИЛЛИМЕТРА ОТНОСИТСЯ К
«КРУПНЫМ» БИОЛОГИЧЕСКИМ
ОБЪЕКТАМ
Таким образом, вне
зависимости
от используемых методов
и скоростей замораживания
невозможно
криоконсервировать,
а затем вернуть к жизни
целый организм человека
А ЕСТЬ ЕЩЁ СВОЯ — «ПЕРСОНАЛЬНАЯ»
ПРОБЛЕМА ПРИ ЗАМОРАЖИВАНИИ
ВЫСШЕГО МЛЕКОПИТАЮЩЕГО
Защитой нервных клеток
от вредных веществ (в том числе
и криопротекторов) служит
гематоэнцефалический барьер
(ГЭБ).
Поэтому при замораживании
всего организма, эти клетки, как
наиболее слабое звено,
разрушатся в первую очередь.
Криопротекторы просто не в
состоянии сюда проникнуть !
ИТАК.
ЗАМОРОЗИТЬ
ОБЪЁМНЫЕ
БИОЛОГИЧЕСКИЕ
ОБЪЕКТЫ ПУТЁМ
ПРОСТОГО
ТЕПЛОСЪЁМА БЕЗ
ПОВРЕЖДЕНИЙ
В НИХ В ПРИНЦИПЕ
НЕВОЗМОЖНО
— НЕ ПОЗВОЛЯЮТ
ЗАКОНЫ ТЕПЛОФИЗИКИ: НИЗКОЕ
ОТНОШЕНИЕ
ПОВЕРХНОСТИ
ОБЪЕКТА К ЕГО
ОБЪЁМУ
НАСТУПАЮЩАЯ
КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ
(«ФРОНТ КРИСТАЛЛИЗАЦИИ»)
РАСПРОСТРАНЯЕТСЯ ОТ
ПЕРЕФЕРИИ К ЦЕНТРУ
НЕРАВНОМЕРНО, ЧТО ВЕДЁТ К
РАСТРЕСКИВАНИЮ РАНЕЕ
ЗАМЁРЖШИХ ПРЕДЫДУЩИХ
СЛОЁВ
ВЕДЬ ИЗВЕСТНО, ЧТО
ПРЕВРАЩАЯСЬ В
ОБЫЧНЫЙ
ГЕКСАГОНАЛЬНЫЙ
ЛЁД, ВОДА
ЗНАЧИТЕЛЬНО
УВЕЛИЧИВАЕТСЯ В
ОБЪЁМЕ
А ПРИ ЗАМЕРЗАНИИ
ДАЖЕ В СТАЛЬНЫХ
ВОДОПРОВОДНЫХ
ТРУБАХ ЛЁД ЛЕГКО
РАЗРЫВАЕТ ИХ
К ТОМУ ЖЕ ХОЛОД НЕ
РАСПРОСТРАНЯЕТСЯ
В ТКАНЯХ МГНОВЕННО
Простой пример
значительной
инерционности процесса
замораживания до
криогенных температур.
Охлаждать дверной замок
жидким азотом до −196 °C,
что бы потом расколоть
его одним ударом
молотка, потребуется не
менее 5 минут.
Даже для замораживания
самого обычного цветка
необходимо достаточно
продолжительное время его
пребывания в жидком азоте
Отчасти это связано и с
весьма низкой
теплоёмкостью азота
Низкое отношение
поверхности
замораживаемого органа к
его объёму создаёт
существенные затруднения
для теплопереноса в
процессе охлаждения и
приводит к появлению
высоких температурных
градиентов и ими
обусловленных градиентов
давления по всему объёму
органа
Да и сами жидкие
криопротекторы
неравномерно
распределяются в
объёме крупного
биообъекта
(например, в
органе
млекопитающего)
и потому плохо
защищают от
повреждений
значительную
часть его клеток
НЕСОСТОЯТЕЛЬНОСТЬ
ОБЫЧНЫХ
КРИОПРОТЕКТОРОВ
ДЛЯ ОРГАННОГО
СЛУЧАЯ ВПОЛНЕ
ОЧЕВИДНА
«КРИОКОНСЕРВАЦИЯ ОРГАНОВ
ЯВЛЯЕТСЯ ПРОБЛЕМОЙ, НЕ
РАЗРЕШЁННОЙ НИ В
ТЕОРЕТИЧЕСКОМ, НИ В
ПРАКТИЧЕСКОМ ОТНОШЕНИИ»
[ШУМАКОВ], А «ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ
ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ПРИЧИНАХ И
МЕХАНИЗМАХ КРИОПОВРЕЖДЕНИЯ И КРИОЗАЩИТЫ
ПРЕДСТАВЛЯЮТ СОБОЙ
СОВОКУПНОСТЬ РАЗРОЗНЕННЫХ
КОНЦЕПЦИЙ С ОГРАНИЧЕННОЙ
ОБЛАСТЬЮ ПРИМЕНЕНИЯ»
[БЕЛОУС]
ПУТЬ РАЗРЕШЕНИЯ
ДАННОЙ ПРОБЛЕМЫ
— ОБРАЗОВАНИЕ
КЛАТРАТНЫХ
ГИДРАТОВ
КЛАТРАТЫ — ТИП
ГИДРАТОВ, СОСТОЯЩИХ ИЗ
МОЛЕКУЛ ГАЗОВ,
ЗАКЛЮЧЁННЫХ В ЯЧЕЙКИРЕШЁТКИ ИЗ МОЛЕКУЛ
ВОДЫ
В ПРИРОДЕ
НАИБОЛЕЕ ШИРОКО
РАСПРОСТРАНЁН
ГИДРАТ МЕТАНА.
ОДИН КУБИЧЕСКИЙ
МЕТР ГИДРАТА
СОДЕРЖИТ 164
КУБИЧЕСКИХ МЕТРА
ПРИРОДНОГО ГАЗА
ГАЗОВЫЕ ГИДРАТЫ НЕ
ОТНОСЯТСЯ НИ К
ОДНОМУ ИЗ 11 ТИПОВ
ЛЬДА, ХОТЯ ВНЕШНЕ
ПОХОЖИ
ГИДРАТНЫЕ ПРОБКИ
МОГУТ ПОЛНОСТЬЮ
ПЕРЕКРЫТЬ ПРОТОК
В МАГИСТРАЛЬНЫХ
ТРУБОПРОВОДАХ,
НО СОВЕРШЕННО
БЕЗ ПОСЛЕДСТВИЙ
ДЛЯ САМИХ ТРУБ
Гидрат метана стабилен
при температуре 0 °C и
давлении порядка 25
бар и выше.
Такое давление имеет
место на глубине океана
около 250 м.
При атмосферном
давлении гидрат метана
сохраняет устойчивость
при температуре −80 °C.
ОБРАЗОВАНИЕ ГАЗОВОГО ГИДРАТА В
ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ
ФАЗА 1
ФАЗА 2
НЕБОЛЬШОЙ ЭКСКУРС
В ИСТОРИЮ
Британский естествоиспытатель
Джозеф Пристли (1733 — 1804)
ещё в 1778 году получил
«совершенно необычный лёд»,
как результат взаимодействия
сернистого газа с водой.
Советский учёный-химик
Никитин Борис
Александрович (1906—
1952) в 1936 году
приступил к изучению
гидратов инертных газов.
Основатель токсикологии в
СССР Лазарев Николай
Васильевич (1895—1974)
впервые предсказал
наркотические свойства
криптона и ксенона, показал,
что при небольших давлениях в
среде инертных газов
задерживаются скисание
молока и гниение мяса.
Лауреат Нобелевской премии
по химии Полинг Лайнус Карл
(1901 – 1994) взял за основу
многообещающие русские
исследования и разработал в
1961 году свою Новую
молекулярную теорию
наркоза. Он предположил,
что образующиеся при
нормальной температуре в
водной среде организма так
называемые
«микрокристаллогидраты»
инертных газов тормозят
биоэлектрическую активность
и клеточный метаболизм.
Американский химик Миллер
Стэнли Ллойд (1930 — 2007),
сотрудник известного
Калифорнийского университета,
обнаружил в Антарктиде
огромные залежи необычного
льда. Он сам же назвал этот
минерал – «клатратный лёд».
В 1970-е годы выдающийся
микробиолог Абызов Сабит
Салахутдинович с
соавторами провели
микробиологические
исследования кернов льда,
взятых с различных глубингоризонтов Антарктиды,
пользуясь специальным
стерильным бурением
девственного ледяного
панциря. Результатом
данной работы явилось
научное открытие «Явление
сверхдлительного анабиоза
у микроорганизмов».
Ещё во времена работы в
академической группе академика
Кованова В.В. мы обратили внимание
на парадоксальную жизнеспособность
микроорганизмов, пролежавших во
льдах Антарктиды до одного миллиона
лет, что и сопоставили с фактами
существования здесь же огромных
залежей «клатратного льда». Так
родилось предположение, что условия
низких температур и повышенных
давлений, при которых появляются
устойчивые клатратные соединения (в
том числе и в самих микроорганизмах),
вообще характерны для сохранения
биологических объектов в
жизнеспособном состоянии. И не
только во льдах Антарктики, но и во
всех других ледовых зонах Земли.
Именно эти качества присущи
клатратному анабиозу ,
обнаруженному нами ранее
Бактериям, попавшим
в древний лёд Земли миллионы лет назад, по всей видимости,
помогли остаться в живых газы атмосферы, образовавшие в
клетках клатраты
ПРИКЛАДНЫЕ АСПЕКТЫ
КЛАТРАТНОГО АНАБИОЗА
Суть неизвестной ранее науке закономерности,
экспериментально обнаруженной и теоретически
обоснованной нашим коллективом в том, что :
«биологические
объекты,
насыщенные
способными к гидратобразованию постоянными
и
непостоянными
составными
частями
атмосферного воздуха, в условиях низких
температур и повышенного давления остаются
в жизнеспособном состоянии»
То есть, переходят к некоему анабиозу !
Это неизвестное ранее
проявление жизнеспособности
и получило в авторской
интерпретации собственное имя
— «Клатратный анабиоз»
Клатратный анабиоз (от clathratus —
загороженный и от anabiosis — оживление) или
сокр. клатобиоз — существование организмов и
их частей в состоянии временного
обратимого прекращения жизнедеятельности в
результате выведения свободной (биологически
активной) воды из биохимических
взаимодействий в клетке — путём образования
клатратов
ИТАК. ПО СУТИ, БЫЛ ОБНАРУЖЕН
СОВЕРШЕННО НОВЫЙ ВИД АНАБИОЗА
Вот как это было…
В своё время Академик
Шумаков Валерий Иванович
(1931 — 2008) изучал в
эксперименте консервацию
тканей и органов в условиях
пониженных температур
(около-нулевые
положительные температуры)
и гипербарии инертными
газами, основанную на
эффекте Полинга.
Даже после 8-ми дней
консервации почки данным
методом не обнаруживаются
явно-выраженные
гистохимические и
гистоморфологические
изменения
ПРЕДДВЕРИЕ КЛАТРАТНОГО
АНАБИОЗА
— Эксперименты с глубокой
о
гипотермией (до 0 С)
Самая первая лабораторная крио-барокамера для мелких животных (крысы).
ОБРАТИМАЯ ГЛУБОКАЯ
ГИПОТЕРМИЯ ЦЕЛОСТНОГО
ОРГАНИЗМА КРЫС
[Обратимая глубокая гипотермия
целостного организма крыс / П.В.
Щербаков, В.И. Тельпухов, А.В. Хохлов
А.В.// Бюллетень экспериментальной
биологии и медицины. – 1989. – Т. 107.
– № 5. – С. 543-545.]
ВЫБОР СКОРОСТИ
СОГРЕВАНИЯ ОРГАНИЗМА
ПОСЛЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ
ГЛУБОКОЙ ГИПОТЕРМИИ
[Выбор скорости согревания организма после
экспериментальной глубокой гипотермии /
Щербаков П.В., Тельпухов В.И., Хохлов А.В. //
Экспериментальное и клиническое обоснование
методов криомедицины: Сб. науч. тр. / Редкол.:
Сандомирский Б.П. (отв. ред.) и др. / – Харьков;
Институт проблем криобиологии и криомедицины
АН УССР, 1988. – С. 160-164.]
Выбор скорости согревания
организма
Клатратный анабиоз:
эксперименты на целостном организме
Клатратный анабиоз:
эксперименты на изолированных
органах
На основе обнаруженной
закономерности создано
оригинальное изобретение,
защищённое патентом:
«Способ криоконсервации
органов и тканей in situ»
КЛАТРАТНАЯ КРИОКОНСЕРВАЦИЯ
ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ
ОБОСНОВАНИЕ
КЛАТРАТНОГО АНАБИОЗА
(в первом приближении)
Надёжность и
продолжительность
оригинальной
криоконсервации
теоретически
объясняется
появлением по всему
объёму биологического
объекта микрокристаллогидратов
атмосферных газов.
Имеет место быть
гибридная
кристаллизация
Так продукт
замораживания может
быть значительно более
легко заморожен в
присутствии некоего
инициатора
образования центров
кристаллизации льда
(«зародышевых
кристалликов»).
То есть, даже при более
высокой температуре,
чем при спонтанном
замораживании
Зародышевые кристаллики
инициируют кристаллизацию
Микроструктуры
газогидратов — это и
есть зародышевые
кристаллики,
инициирующие
масштабную
кристаллизацию
свободной воды,
причём сразу по
всему объёму клетки
А известно, как только во
внутриклеточной
жидкости образуются
многочисленные центры
кристаллизации, она
мгновенно переходит
в твердое состояние
Для получения при 0оС
зародышевых
кристалликов в виде
гидрата ксенона
достаточно приложить
1,5 атм, гидрата
криптона — 14,5 атм,
гидрата аргона — 105
атм. Но для
кристаллогидратов
ксенона при -3,4оС,
криптона при -27,8оС,
аргона при -42,8оС
давление диссоциации
соответствует
нормальному
атмосферному давлению
ВЗГЛЯД
НА ПЕРСПЕКТИВУ
Всё «искусственно-задействованное», что по шкале
линейных размеров ниже величины 100 нм —
относится к нанотехнологиям.
Понятно, что и в нашем случае, синтетические
процессы, развивающиеся в клетке, не просто
напрямую зависят от воздействия внешних
физических факторов (от температуры и давления),
а ими можно ещё и манипулировать со стороны,
варьируя этими двумя параметрами (управлять).
При этом непосредственные объекты управления
своими ничтожными размерами вполне
вписываются в приведённое строгое ограничение.
То есть — самые настоящие нанотехнологии !
Например, по клатратному принципу можно провести
полезную и перспективную трансформацию, старой
КРИОНИКИ — уже в НАНОКРИОНИКУ
Или же попытаться осуществить
криоконсервацию живого организма
Барокамера БКИ-192 — вполне готовый узел для изготовления уже большой
клатратной установки: аналог будущей лабораторной крио-барокамеры для
крупных млекопитающих.
КЛАТРАТНЫЙ АНАБИОЗ КАК
СПОСОБ ПУТЕШЕСТВИЯ ВО
ВРЕМЕНИ И ПРОСТРАНСТВЕ
Возможный вариант клатратной
установки для человека
Вариант системы спасения на
антарктической станции или на
подводной лодке
Клатратный анабиоз открывает и
космические горизонты
Возможный вариант компоновки
на космическом корабле
МАРС ЖДЁТ
Скачать