спермиев

1.
2.
3.
4.
5.
Макроскопическая (санитарная) оценка
свежеполученной спермы
Микроскопическая оценка качества спермы
Определение подвижности, концентрации
спермы
Определение метаболической активности
спермиев по скорости обесцвечивания
метиленовой сини
Выживаемость спермиев вне организма
это
сложная
биологическая
жидкость,
состоящая из двух основных частей: мужских
половых клеток (спермиев) и плазмы (секрет
придаточных желез).
Количество спермы, выделяемой во время
полового акта, называется эякулятом. Объем
эякулята и число спермиев в единице объема
имеют существенные видовые отличия. Так, бык
за садку выделяет 5-10 мл спермы, баран – 0,3-2
мл (до 3 мл у баранов романовской породы). Эти
животные относятся к влагалищному типу
естественного осеменения.
Вид
животно
го
Бык
Жеребец
Объем
эякулята
,
мл
4-10
20-150
Баран
0,3-2
Хряк
100-500
Северны
й олень
петух
0,250,40
0,3-0,4
Концен
трация
сперми
ев,
млн/мл
Количе
ство
сперми
ев,
млрд.
Количе
ство
садок в
неделю
12002000
100-150
2-4
2-4
1-2
2-6
20006000
150-500
2-8
6-12
1-4
2-4
-
-
0,3-0,4
3-4
20003500
Место
введения
эякулята
при
спарива
нии
влагали
ще
Матка
Влагали
ще
матка
Шейка
матки
яйцепро
вод



У животных с маточным типом естественного осеменения объем
эякулята сравнительно большой: у жеребца 20-150, мах 200 мл,
хряка – 150-500, кобеля – 2-40 (в зависимости от породы).
Четко прослеживается обратная зависимость между объемом
эякулята и концентрацией спермиев. Сперма барана и быка
наиболее насыщена спермиями – концентрация составляет
соответственно 0,8-2 млрд и 2-4 млрд в 1 мл. хряк и жеребец
выделяют сперму с более низкой концентрацией – 01,-0,4
млрд/мл; наименее концентрированная сперма у кобеля – 0,060,12 млрд/мл. Соответственно этому доля спермиев по
отношению к общему объему эякулята составляет: у барана – 30
%, быка-10, хряка-3-7, жеребца-3 %, остальная часть
представлена секретами придатков семенников и придаточных
половых желез.
Соотношение секретов эпидидимиса (придатка семенника) и
отдельных придаточных половых желез и их роль в
формировании жидкой части спермы (плазмы) имеет видовую
специфику.
уретральных
луковичных
предстательной
сперми
опровод
ов
Секрет придаточных половых
желез
пузырьковидных
Произ Секрет
водител придат
ь
ка и
ампул
Бык
5
45
6-8
40
2-4
Баран
50
30
-
20
-
Хряк
1
25
50
24
-
Кобель
13
-
75
-
12
Сперма содержит 85-97 % воды и 3-15 % сухих
веществ сухой остаток на 9 % состоит их белков и
липидов. Сперма быка и барана богата сахарами, их
которых преобладает фруктоза. В значительных
количествах
содержатся
лимонная
кислота,
свободные аминокислоты, эрготионин, инозотол,
сорбитол, глицерилфосфорилхолин. В сперме широко
представлены биологически активные вещества:
ферменты
(кислая
и
щелочная
фосфотаза,
гиалуронидаза,глюкозидаза,
амилаза,липазы,
протеазы, оксидазы и др.), антагглютинины,
простагландины, гормоны: андрогены, эстрогены. В
сухом веществе спермы около 1 % золы. Зольная
часть содержит фосфор, кальций, магний, калий,
натрий, хлор, цинк, железо, медь и ряд других
элементов.
Показатели
Цвет
Бык
Молочнобелый или
кремовый
Сливкообразная
0,4
Баран
Кремовый
Хряк
Серо-белый
Жеребец
Серобелый
Сметанообразная
2,0
Водянистая
со сгустками
0,1
Водянистая
со слизью
0,05
8,0
8,0
7,0
5,0
относительная, ч, не ниже
249
240
200
40
абсолютная, не ниже
Количество патологических
спермиев, %
Количество апатогенных
1400
18
1400
14
900
20
450
20
микробов в 1 мл, не более
5000
5000
5000
5000
Коли-титр, не менее
0,1
0,1
0,1
0,3
Консистенция
Концентрация спермиев,
млрд/мл, не менее
Подвижность, баллы, не
менее
Выживаемость спермиев
при 2-5° после
разбавления ГЦЖ средой:
1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМИЕВ
Подвижность спермиев — это способность их к
прямолинейно-поступательному движению (ППД).
Оценку на подвижность проводят в раздавленной
капле, для чего на чистое, подогретое предметное стекло
наносят каплю свежеполученной спермы, накрывают ее
покровным
стеклом.
Стекло
помещают
на
электрообогревательный столик, установленный на
предметном столике микроскопа. Визуальную
микроскопическую оценку проводят в затемненном поле
зрения при увеличении в 140 или 280 раз. При этом
определяют не подвижность отдельных спермиев, а
процент спермиев с ППД во всем поле зрения
микроскопа. Результаты оценки выражают в баллах.
Принята 10-балльная оценка, причем каждый балл соответствует 10% спермиев с ППД.
Свежеполученная сперма считается пригодной, если
подвижность не менее 8 баллов для барана и быка, 7
баллов — для хряка и 5 баллов — для жеребца.
Концентрация спермиев определяется в каждом эякуляте.
Для определения концентрации спермиев этим методом цельную
сперму разбавляют в меланжере 3%-ным раствором натрия
хлорида: быка — в 100 раз, барана — в 200 раз, хряка и жеребца —
в 20 раз. Камеру Горяева с притертым покровным стеклом
заряжают разбавленной спермой, кладут на предметный столик
микроскопа, отыскивают сетку и, отрегулировав освещенность
поля зрения, производят подсчет спермиев в пяти больших
квадратах, расположенных по диагонали. Для пересчета на 1 см3
пользуются упрощенными формулами: С=Н/100 (баран); С = Н/200
(бык)
С = Н/1000 (хряк, жеребец),
где С — концентрация спермиев в млрд/мл;
Н — число подсчитанных спермиев в пяти больших квадратах.
Применение фотоэлектроколориметра (ФЭК-56) или
фотодиод КФК-2
позволяет оценить
эякулят по
концентрации спермиев за 1—2 мин. Принцип работы ФЭК
заключается в том, что пучок света от специальной лампы
проходит через светофильтр, затем через кювету с
исследуемой спермой попадает на селеновый фотоэлемент
(ФЭК-56) или фотодиод (КФК-2), преобразующий световую
энергию в электрическую.
Для получения коэффициента-множителя необходимо
провести исследование 15—20 эякулятов. Концентрация
спермиев в каждом эякуляте определяется с помощью
фотоэлектроколориметра и подсчетом в камере Горяева.
Полученные данные суммируют отдельно по каждому
способу, а затем сумму концентрации (С) делят на сумму
оптической плотности (Д):
С/Д = коэффициент-множитель
При определении концентрации спермиев полученные на
ФЭК показатели оптической плотности умножают на
коэффициент-множитель
и
получают
искомую
концентрацию спермиев в млрд/мл.
Проводится ежемесячно, а также при подозрении
на тот или иной патологический процесс в половых
органах.
Для оценки цельную сперму разбавляют 2,9%ным раствором натрия цитрата: барана — в 20—30
раз, быка — в 10—15, хряка — в 2—3 раза. Каплю
разбавленной спермы помещают на край
обезжиренного предметного стекла, делают тонкий
мазок; его высушивают на воздухе, фиксируют 2—3
мин в 96° спирте-ректификате, окрашивают
раствором генцианвиолета. Всего сосчитывают
200—300 спермиев и вычисляют процент
патологических.
Метод основан на том, что в результате метаболических процессов образуется перекись водорода; при
помощи дегидрогеназ водород переносится на метиленовую синь и вызывает ее обесцвечивание (происходит переход в восстановленную форму). Скорость
обесцвечивания зависит от активности дегидрогеназ.
Для правильности показаний этого теста необходимы
следующие условия: определенное число спермиев в
единице объема, постоянство температуры, одинаковый
диаметр капилляров, в которые набирают смесь
спермы с раствором метиленовой сини.
Является одним из объективных показателей оплодотворяющей способности спермиев.
Свежеполученную сперму оцениваемого производителя
разбавляют стандартной средой, после чего отбирают в
чистые сухие флаконы из-под антибиотиков три пробы
разбавленной спермы; после оценки по подвижности их
ставят в холодильник (температура 2— 4°С). В дальнейшем
через каждые 24 ч до полной гибели спермиев пробы спермы
проверяют на подвижность. Результаты последовательной
оценки заносят в бланк. На основании записей определяют
относительную (в часах) и абсолютную выживаемость
спермиев. Относительная выживаемость — промежуток
времени в часах между началом опыта и гибелью всех
спермиев. При вычислении абсолютной выживаемости
интервал времени между последовательными оценками
умножают на промежуточные показатели балльной оценки;
полученные произведения суммируют.