Валидация биоаналитического метода

TRAINING WORKSHOP ON
PHARMACEUTICAL QUALITY,
GOOD MANUFACTURING
PRACTICE & BIOEQUIVALENCE
Валидация аналитических методов,
используемых в исследованиях
биоэквивалентности
Presented by
John Gordon, Ph.D.
Consultant to WHO
e-mail: john_gordon@hc-sc.gc.ca
Kyiv, 2005-10-06
1
Биоаналитический метод
валидации
Количественные определения
лекарственных средств в
образцах биологических сред,
например в крови или плазме,
играют существенную роль при
оценке и интерпретации данных
биоэквивалентности.
Kyiv, 2005-10-06
2
Валидация биоаналитического
метода
Для получения достоверных
результатов обязательно
использовать аналитические
методы, которые хорошо
описаны и валидированы.
Kyiv, 2005-10-06
3
Разработка/ использование
биоаналитического метода

Стандартный препарат сравнения

Разработка процедуры метода

Принятие валидированного метода
для использования в повседневной
практике
Kyiv, 2005-10-06
4
Сравнительные
(референтные) стандарты

Стандарты калибровки / Образцы
для контроля качества

Удостоверенная референтность
– Известная тождественность
– Известная беспримесность

По возможности следует применять
одни и те же референтные
стандарты
Kyiv, 2005-10-06
5
Разработка метода

Хроматографический анализ
– например, газовая хроматография,
жидкостная хроматография

Лигандообменные методы
– например, изотопное
иммунологическое обследование
(radioimmunoassay — RIA)
Kyiv, 2005-10-06
6
Валидация биоаналитического
метода

Валидация метода должна
включать
–
–
–
–
–
–
Аккуратность
Точность
Чувствительность
Специфичность
Устойчивость
Стабильность
Kyiv, 2005-10-06
7
Валидация биоаналитического
метода
Точность
Степень близости между установленной и
истинной оценками.
Среднее значение критерия приемлемости
(допустимости) составляет  15%
отклонения от истинного значения.
Для LOQ допустимо отклонение 20%.
Kyiv, 2005-10-06
8
Валидация биоаналитического
метода
Точность
Близость результатов повторных
оценок выборки.
Критерий допустимости  15% CV.
Для LOQ допустимо отклонение
20%.
Kyiv, 2005-10-06
9
Валидация биоаналитического
метода
Чувствительность
Предел количественного анализа
(the limit of quantitation — LOQ) —
это минимальная концентрация,
которая может быть измерена с
надлежащей правильностью и
точностью.
Kyiv, 2005-10-06
10
Валидация биоаналитического
метода
Калибровочная кривая

Внедрение достаточного количества
калибровочных стандартов
–
–
–
–

Обычно 6 – 8 стандартов, отличных от нуля
«Чистый» образец
Нулевой образец
Нижний предел количественных колебаний
(Lower Limit of Quantification — LLOQ)
Польза от надлежащей статистики
Kyiv, 2005-10-06
11
Валидация биоаналитического
метода
Специфичность
(селективность)
Способность метода измерить
только то, что предусмотрено для
измерения, в присутствии других
составляющих образца.
Чистый образец биологической
среды следует исследовать на
предмет пересекающихся помех
определения концентрации.
Kyiv, 2005-10-06
12
Валидация биоаналитического
метода
Устойчивость
Определительная эффективность
аналитического процесса, выраженная в
долевом соотношении к известному количеству
анализируемого вещества, достигается с
помощью отбора образцов и последующих
шагов метода. Устойчивость не должна быть
100%-ой, но уровень устойчивости
аналитического метода должен соответствовать
внутреннему стандарту.
Kyiv, 2005-10-06
13
Валидация биоаналитического
метода
Стабильность

Стабильность анализа
биологических сред
– Отбор образцов
– Хранение образцов
– Анализ образцов
Kyiv, 2005-10-06
14
Валидация биоаналитического
метода
Стабильность

Стабильность при замораживании

Краткосрочная стабильность

Долгосрочная стабильность

Стабильность после приготовления

Стабильность растворов при хранении
Kyiv, 2005-10-06
15
Валидация биоаналитического
метода
Точность разбавления

Подтвердить способность образцов к
разбавлению, превышающему верхний
предел количественных колебаний (Upper
Limit of Quantification — ULOQ)

Предел количественного анализа
(LOQ)

Правильность и точность
Kyiv, 2005-10-06
16
Валидация биоаналитического
метода
Дополнительные соображения для
лигандообменных исследований

Перекрестная реактивность

Влияния среды

Взаимосвязи, определяемые
уровнем концентрации
Kyiv, 2005-10-06
17
Анализ клинических
образцов

Однократное определение
калибровочных стандартов

Калибровочная кривая для каждого
раунда анализа

Экстраполяция выше или ниже
калибровочного уровня не
допускается.
Kyiv, 2005-10-06
18
Анализ клинических
образцов
Контроль качества (Quality
control — QC)

Не меньше трех концентраций
– Низкая концентрация
– Средняя концентрация
– Высокая концентрация

Двойные определения

4 из 6 образцов для QC должны быть  15%
номинального значения; два оставшихся не
должны иметь одинаковую концентрацию
Kyiv, 2005-10-06
19
Анализ клинических
образцов
Повторный анализ выборки

Четкие СОПы и критерии
приемлемости

Причины повторного анализа
– Аналитического характера
– Сложная фармакокинетика

Нехватка образцов
Kyiv, 2005-10-06
20
Стандартные операционные
процедуры

Полное письменное описание СОПов
– Контроль и обеспечение качества
– Должны быть охвачены все аспекты, в т.ч.
•
•
•
•
•
•
Ведение учета
Обеспечение безопасности
Цепочка обеспечения выборки
Ремонт выборки
Аналитические инструменты
Процедуры для контроля качества и
верификации результатов
Kyiv, 2005-10-06
21
Полная / Частичная
валидация

Полная валидация
– В ходе разработки метода

Частичная валидация
– Обмен между лабораториями
– Изменения в инструментарии /
программном обеспечении
– Небольшие изменения в процессе
обработки выборки
Kyiv, 2005-10-06
22
Валидация биоаналитического
метода
Полезные ссылки:
FDA Guidance for Industry

Bioanalytical Method Validation (May 2001)
(http://www.fda.gov/cder/guidance/4252fnl.pdf)
Опубликованные стендовые доклады:

Shah, V.P. et al, Pharmaceutical Research:
1992; 9:588-592

Shah, V.P. et al, Pharmaceutical Research:
2000; 17: 1551-1557
Kyiv, 2005-10-06
23