ЗАНЯТИЕ № 1 ТЕМА: МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ. БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД. ХАРАКТЕРИСТИКА ОСНОВНЫХ ФОРМ БАКТЕРИЙ. МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ. ПРОСТЫЕ И СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ. ОКРАСКА ПО ГРАМУ. ОКРАСКА ПО НЕЙССЕРУ И ЛЕФФЛЕРУ. ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ 1. Предмет и задачи медицинской микробиологии. 2. Микробиологические методы исследований: микроскопический, культуральный, иммунологический, молекулярно-генетический, экспериментальный. 3. Устройство бактериологической лаборатории, режим работы в ней. Правила работы с заразным материалом и культурами микроорганизмов. Правила работы со спиртовками. 4. Бактериоскопический (микроскопический) метод исследования. Задачи, этапы, оценка. 5. Техника приготовления микроскопических препаратов из агаровых и бульонных культур микроорганизмов и окраска их простыми методами. 6. Техника микроскопии. Различные методы микроскопии, их значение в изучении морфологии и ультраструктуры микроорганизмов. Техника световой иммерсионной микроскопии. 7. Характеристика шарообразных, палочковидных и извитых форм истинных бактерий. 8. Принципы и подходы к систематике и номенклатуре микроорганизмов. Геносистематика. Основные таксономические категории, их характеристика. Понятие о виде. Категории в пределах вида. 9. Морфология бактерий. Структура бактерий. Основные структуры прокариотной клетки и их функции. 10. Тинкториальные свойства микробов. Понятие о простых и сложных методах окраски. 11. Техника и механизм окраски по Граму. Грамположительные и грамотрицательные бактерии. 12. КОН-тест. Принцип метода. 13. Методы выявления волютиновых зерен. Окраска по Нейссеру. ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА Ознакомиться с организацией работы кафедры, оснащением и режимом работы бактериологической лаборатории. Приготовить препараты-мазки стафилококка со скошенного агара, зафиксировать, окрасить водноспиртовым раствором метиленового синего. Изучить правила и технику иммерсионной микроскопии. Приготовить мазки из смеси бульонных культур кишечной палочки, антракоида, сарцин, зафиксировать, окрасить водным раствором фуксина. Окрасить по Граму мазки из бульонной культуры стафилококка, агаровой культуры кишечной палочки и их смеси. Постановка и учет результатов КОН-теста с культурами золотистого стафилококка и кишечной палочки. Смесь бульонных культур Staphylococcus aureus Окраска по ______________ Увеличение _____________ (Escherichia coli, Bacillus anthracoides, Sarcina flava) Окраска по ______________ Увеличение _____________ 5►В демонстрационных препаратах изучить морфологию микроорганизмов: Стрептококки в чистой культуре Пневмококки в органах белых мышей Гонококки в гное уретры Вибрионы в чистой культуре Боррелии в мазке крови (указать методы окраски микроскопических препаратов и особенности морфологии микроорганизмов – форму и расположение в препарате) Техника окраски по Граму (указать, в какие цвета окрашиваются бактерии на каждом этапе окрашивания по методу Грама/ раскрасить таблицу) Этап окраски Грамположительные бактерии Грамотрицательные бактерии 1. Окрашивание _________________________ (время экспозиции ______ ) 2. Обработка ____________________________ (время экспозиции ______ ) 3. Обработка ___________________________ (время экспозиции ______ ) 4. Окрашивание __________________________ (время экспозиции ______ ) Основные морфологические группы бактерий (изобразите в виде цветных рисунков в соответствии с окраской по Граму) КОККИ Диплококки Бактерии Вибрионы Стрептококки Бациллы Стафилококки ПАЛОЧКИ Стрептобациллы ИЗВИТЫЕ ФОРМЫ Спириллы Сарцины Клостридии Спирохеты 1►Окраска по Граму мазков из бульонной культуры стафилококка, агаровой культуры кишечной палочки и их смеси. Зарисовка препаратов. Смесь бактерий (Staphylococcus aureus, Escherichia coli) Окраска по ______________ Увеличение _____________ 2►Приготовление мазка из культуры дифтерийной палочки, окраска метиленовым синим по Леффлеру и по Нейссеру. Зарисовка препаратов. Corynebacterium diphtheriae Corynebacterium diphtheriae Окраска по ______________ Увеличение _____________ Окраска по ______________ Увеличение _____________ 3►Постановка и учет результатов КОН-теста с культурами золотистого стафилококка и кишечной палочки. Результат КОН-теста ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________ ДЕМОНСТРАЦИИ C.diphtheriae Bordetella Escherichia coli B. anthracis (указать методы окраски микроскопических препаратов и особенности морфологии микроорганизмов – форму и расположение в препарате) ЗАНЯТИЕ № 2 ТЕМА: МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. ЗАЩИТНЫЕ ПРИСПОСОБЛЕНИЯ У МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДЫ ИХ ВЫЯВЛЕНИЯ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ. ПОКОЯЩИЕСЯ ФОРМЫ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ СПИРОХЕТ, АКТИНОМИЦЕТОВ, РИККЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ, L-ФОРМ БАКТЕРИЙ, МИКОПЛАЗМ, ГРИБОВ. ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ 1. Споры, стадии и условия образования спор, биологическое значение. Методы выявления спор и кислотоустойчивых бактерий. Техника окраски по Цилю-Нельсену. 2. Капсулы бактерий, их значение. Способы обнаружения. Техника окраски по Бурри-Гинсу. 3. Определение подвижности. Жгутики, их строение. Изучение подвижности бактерий. Методы исследования микроорганизмов в живом состоянии. Темнопольная и фазово-контрастная микроскопия. 4. Формы бактерий с дефектами клеточной стенки (протопласты, сферопласты, L-формы). 5. Микоплазмы. Классификация. Филогенез. Морфология, структура, химический состав, особенности размножения. Методы выявления. 6. Патогенные спирохеты. Систематическое положение и морфология спирохет. Особенности ультраструктуры и химического состава. Методы исследования. 7. Актиномицеты, морфология, ультраструктура, химический состав. Роль актиномицетов в природе и медицине. Патогенные виды. 8. Классификация, морфология и строение грибов и методы их обнаружения. 9. Таксономия патогенных риккетсий. Морфология, структура, размножение, способы выявления. 10. Хламидии, особенности морфологии и структуры. Цикл развития хламидий. Методы выявления. САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ И ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 1►Приготовление мазка из агаровой культуры спороносных бацилл, окраска по Цилю-Нельсену (или по методу Ожешко), микроскопия и зарисовка. Техника окраски по Цилю-Нельсену (указать, в какие цвета окрашиваются бактерии на каждом этапе окрашивания/ раскрасить таблицу) Этап окраски 1. Обработка __________________________ (время экспозиции _________ ) Также необходимо _____________________ ______________________________________ Окраска спор Окраска кислотоустойчивых бактерий МТ * ← Str * 2 !. Обработка _________________________ Концентрация __________ МТ 3. Окрашивание ________________________ (время экспозиции __________ ) МТ * МТ – Mycobacterium tuberculosis; Str – стрептококк. 2►Микроскопия препаратов микроорганизмов, окрашенных по Цилю-Нельсену. Зарисовка препаратов. Bacillus anthracoides Окраска по ______________ Увеличение _____________ Mycobacterium tuberculosis в мокроте Окраска по ______________ Увеличение _____________ 3►Приготовление мазка из агаровой культуры палочки риносклеромы, окраска по Бурри-Гинсу, микроскопия и зарисовка. Klebsiella rhinoscleromatis Окраска по __________________ Увеличение _________________ 4►Приготовление препарата «раздавленная капля» или «висячая капля» из сенного настоя для изучения подвижности (указать особенности микроскопии препарата) _____________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________ 5► Приготовление мазков из агаровой культуры дрожжеподобных грибов, окраска водным раствором фуксина, микроскопия. 6► Изучение морфологии плесневых грибов. Candida albicans Окраска по ______________ Увеличение _____________ Обозначьте на рисунке: 1- дрожжевая клетка; 2- псевдомицелий. Препарат культуры плесневых грибов Окраска по ______________ Увеличение _____________ Обозначьте на рисунке: 1- конидии (спорангии); 2- стеригмы; 3- конидиеносец (спорангиеносец); 4- мицелий. ► Микроскопия и зарисовка риккетсий Провацека в готовых препаратах, окрашенных по РомановскомуГимзе и Здродовскому. 8► Изучение препаратов боррелий в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. ДЕМОНСТРАЦИИ Rickettsia prowazekii в органах белых мышей Rickettsia prowazekii вакцинный штамм Borrelia recurrrentis в мазке крови (указать методы окраски микроскопических препаратов и особенности морфологии микроорганизмов – форму и расположение в препарате)