Динамика специфических антител против чумы плотоядных у

УДК 619:616.9
ДИНАМИКА СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ЧУМЫ
ПЛОТОЯДНЫХ У ВАКЦИНИРОВАННЫХ ВЗРОСЛЫХ СОБАК
Сагдиев Д.И.*, Стрельцова Д.А*., Равилов Р.Х.*, Горлик А.О.**,
Герасимов В.В.***
Казанская государственная академия ветеринарной медицины*
Зональный центр кинологической службы МВД РТ**
Республиканский центр профилактики и борьбы со СПИД и ИБ
Минздрава РТ***
Ключевые слова: чума плотоядных, антитела, ифа, тест-система,
собаки.
Key words: plague of carnivores, antibodies, elisa, test system, a dog.
Проблема быстрой и точной диагностики заболеваний мелких
домашних животных является весьма актуальной. Значительный
полиморфизм клинических проявлений при чуме плотоядных и
преобладание в последнее время абортивных, стертых и латентных форм
этой инфекции над клинически выраженными исключают возможность
постановки диагноза только на основании клинической картины, в связи с
этим возрастает роль лабораторных исследований, включающих и
иммунологические методы.
В настоящее время наиболее перспективным методом выявления
специфических антител является иммуноферментный анализ. Метод
отличается высокой специфичностью, превышающую в несколько раз
рутинные методы диагностики инфекционных болезней. Антитела в ИФА
определяются в первые 2-3 дня и отслеживаются в организме на
протяжении 10-12 месяцев после взаимодействия с антигеном. К
преимуществам ИФА относят также: экспрессность, возможность
исследовать антикомплементарные сыворотки, воспроизводимость,
простота постановки реакции и учета ее результатов, стабильность регентов
при хранении, автоматизация некоторых операций и т.д. Эти преференции
позволяют с успехом использовать этот тест и в ветеринарной практике.
Применение иммуноферментного метода ветеринарными специалистами во
многом сдерживается отсутствием в достаточном количестве необходимых
диагностических наборов.
Исходя из вышеизложенного перед нами стояла задача разработать
иммуноферментную тест-систему для индикации антител против вируса
чумы плотоядных в сыворотках крови собак и использовать ее для изучения
динамики специфических антител против чумы плотоядных у
вакцинированных взрослых собак.
95
При конструировании наборов для диагностики инфекционных
заболеваний в ИФА главным моментом является подготовка антигена. Он
должен хорошо адсорбироваться на твердой фазе (полистирол и др.), с
высокой чувствительностью выявлять антитела и не вызывать
ложноположительных реакций. Для этого в первую очередь необходимо
максимально очистить микроорганизмы от питательной среды (бактерии)
или клеточного дебриса (вирусы). В ИФА чаще всего используют антигены,
полученные путем лизиса микроорганизмов. Для разрушения микробных
клеток используют обработку детергентами, ультразвук, автоклавирование
и др.
В своей работе мы использовали антигены, изготовленные путем
лизиса культур вируса чумы плотоядных (штамм ЭПМ).
Материалы и методы исследований. ИФА выполняли по
непрямому методу, на микротитрационных планшетах из полистирола
отечественных, изготовленных на ПО ВНИИ медицинской техники (г.
Москва). В качестве конъюгата использовали белок А, меченный
пероксидазой хрена. В модельных опытах антиген на планшеты наносили в
различных концентрациях от 5 до 15 мг/мл. Исследуемые сыворотки
разводили в соотношении 1:100.
Результаты учитывали визуально по интенсивности окрашивания и
инструментально на фотометрах фирмы Titerter модификации Multiskan при
длине световой волны 492 нм, измеряя оптическую плотность (ОП) цветной
реакции ферментзависимой метки с субстратом. Для каждой пробы
определяли коэффициент специфичности, т.е. отношение ОП в лунках с
исследуемой сывороткой к ОП в лунках с отрицательным контролем.
Результаты подлежали оценке и анализу, если в контроле конъюгата среднее
значение ОП составлял не более 0,100, а в отрицательном контроле – не
превышала 0,150 оптической единицы (о.е.). Пробу считали положительной,
если ОП в лунках с исследуемой сывороткой не менее чем в 2 раза
превышало ОП отрицательного контроля (ОП критическая). ОП
положительного контроля при этом должно быть не ниже 0,8 о.е.
Позитивные сыворотки получали путем иммунизации собак и кошек
возбудителем хламидиоза. Негативные сыворотки подбирали из числа проб
полученных от неиммунных животных.
При изготовлении антигена культуру вируса обрабатывали сначала
1%-ным раствором дезоксихолата натрия в течение 30-40 минут, а затем
ультразвуком в течение 30 секунд. Полученный лизат центрифугировали на
градиенте сахарозы от 5 до 55% (с шагом 5%) в течение 6 часов при
100000g. Антигенные фракции, полученные после центрифугирования,
испытывали в ИФА с положительными и отрицательными контрольными
сыворотками. Анализ полученных результатов свидетельствовал, что
наибольшую активность имела антигенная фракция, извлеченная из 20%-
96
ной ступени сахарозного градиента. Коэффициент ее специфичности при
концентрации белка 6 мг/мл составила 9,8.
Изучение сероконверсии противочумных антител проводилось в
Зональном центре кинологической службы МВД Республики Татарстан.
Для испытания разработанной тест-системы мы провели исследование 23
сывороток крови, полученных от взрослых собак, иммунизированных
противочумной вакциной (Мультикан 8, НАРВАК). Кровь для
исследований брали до иммунизации и затем каждую неделю, т.е. через 1, 2
и 3 недели после введения вакцины.
Результаты
исследований.
В
результате
исследований
установлено, что у животных отмечалась разнообразная реакция на
введение вакцины, которая зависела, в том числе и от начального (до
иммунизации) уровня антител. По этому показателю мы разделили собак на
четыре группы: в первую вошли собаки, которые имели до иммунизации
уровень специфических антител ниже или равный ОП критической, во
вторую – превышающую ОП критическую не более, чем в 2 раза, в третью –
превышающую ОП критическую не более, чем в 3 раза, в четвертую –
превышающую ОП критическую более, чем в 3 раза.
Результаты сероконверсии противочумных антител в сыворотках
крови собак указанных групп были получены данные, которые
представлены на рисунках 1, 3, 5 и 7. Динамика средних значений уровня
специфических антител в сыворотках крови по каждой группе
иммунизированных собак представлена на рисунках 2, 4, 6 и 8.
ОП
3
2,5
2
1,5
1
через 3
недели
0,5
через 2
недели
через 1
неделю
0
1
2
3
4
5
6
до
иммунизации
номера собак
1. Выявление специфических антител против чумы плотоядных в
сыворотках крови вакцинированных собак первой группы.
97
ОП
3
2,5
2
1,5
1
через 3
недели
0,5
через 2
недели
через 1
неделю
0
1
2
3
4
5
6
до
иммунизации
номера собак
2. Выявление специфических антител против чумы плотоядных в
сыворотках крови вакцинированных собак второй группы.
ОП
3
2,5
2
1,5
1
через 3
недели
0,5
через 2
недели
через 1
неделю
0
1
2
3
4
5
6
до
иммунизации
номера собак
3. Выявление специфических антител против чумы плотоядных в
сыворотках крови вакцинированных собак третьей группы.
ОП
3
2,5
2
1,5
1
через 3
недели
0,5
через 2
недели
через 1
неделю
0
1
2
3
4
5
6
до
иммунизаци
и
номера собак
4. Выявление специфических антител против чумы плотоядных в
сыворотках крови вакцинированных собак четвертой группы.
98
ОП
2,5
2
1,5
1
0,5
IV
III
II
0
до иммунизации
через 1 неделю
через 2 недели
через 3 недели
I
номера групп
Срок исследования
5. Динамика специфических антител против чумы плотоядных в
сыворотках крови вакцинированных собак (средние значения ОП по каждой
группе).
Представленные данные свидетельствуют, что собаки первой и
второй групп имели примерно сходную динамику специфических антител
после вакцинации, у животных третьей группы показатели ОП в
иммуноферментном тесте на всем протяжении опыта в 1,5-2 раза
превышала таковую у собак первой и второй групп. Наиболее интересными
оказались результаты исследования динамики специфических антител у
собак в четвертой группе, где до иммунизации был зарегистрирован очень
высокий фоновый уровень антител. В этой группе животных показатели ОП
в ИФА через 3 недели после иммунизации оказались ниже исходных почти
в 2 раза.
Заключение. В результате наши исследований установлено, что у
взрослых собак при вакцинации против чумы плотоядных динамика
специфических антител зависит от исходного (фонового) иммунного
статуса в отношении указанной инфекции.
ДИНАМИКА СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ЧУМЫ
ПЛОТОЯДНЫХ У ВАКЦИНИРОВАННЫХ ВЗРОСЛЫХ СОБАК
Сагдиев Д.И., Стрельцова Д.А., Равилов Р.Х., Горлик А.О.,
Герасимов В.В.
Резюме
У взрослых собак при вакцинации против чумы плотоядных
динамика специфических антител зависит от исходного иммунного статуса
в отношении указанной инфекции.
99
SERUM CONVERSION OF ANTIBODIES AGAINST THE FEBRIS
CATARRHALIS ET NERVOSA CANUM AT IMMUNIZATION OF ADULT DOGS
Sagdiev D.I., Streltsova D.A., Ravilov R.Kh., Gorlik A.O.,
Gerasimov V.V.
Summary
At adult dogs at vaccination against a Febris catarrhalis et nervosa canum
dynamics of specific antibodies depends on the background immune status
concerning the specified infection.
УДК 619:616.981.42:576.807.3
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПАССАЖА И АДЪЮВАНТОВ НА
ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА КУЛЬТУР
ДИССОЦИИРОВАННЫХ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ БРУЦЕЛЛ
Салмакова А.В., Фомин А.М., Сафина Г.М., Косарев М.А.
Федеральный центр токсикологической и радиационной
безопасности животных (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»), г.Казань
Ключевые слова: бруцеллёз, вакцины, пассаж, адъювант,
иммунологическая эффективность.
Key words: brucellosis, vaccines, passage, adjuvant, immunologic
efficacy.
В работе изложены результаты изучения влияния пассажей через
организм морских свинок и ряда адъювантов на повышение
иммунологической эффективности вакцинных штаммов B. abortus и S-, SR-,
RS- и R-формах.
Установлено, что пассажи стабилизируют свойства вакцинных
штаммов бруцелл, а адъюванты – полиоксидоний, фактор некроза
опухолей-бета (ФНО-β), ларифан и тиосульфат натрия – повышают
иммунологическую эффективность живых вакцин из штаммов бруцелл,
особенно находящихся в RS-форме.
Однако ни пассажи, ни введение адъювантов практически не
изменяли иммунологическую активность культуры штамма B. abortus R1096 (R-форма).
Несмотря на достигнутые успехи в борьбе с бруцеллезом в РФ и в
мире, вопрос изыскания новых противобруцеллезных вакцин для крупного
и мелкого рогатого скота, а также совершенствование специальных
100