Mycoplasma pneumoniae IgG

Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2005/1125 от 18.08.2005 г.
Mycoplasma pneumoniae IgG
(Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG))
Иммуноферментный тест для определения антител класса IgG к Mycoplasma pneumoniae в сыворотке или
плазме крови
Номер по каталогу:
ЕI 2202-9601 G
Набор рассчитан на 96 определений
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG) предназначен для полуколичественного
количественного определения in vitro IgG-антител человека к микоплазме в сыворотке и плазме крови.
или
ПРИНЦИП МЕТОДА
Набор Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG) основан на методе твердофазного иммуноферментного
анализа (ИФА). Данный набор содержит стрипы, каждый из которых состоит из восьми отламываемых
лунок, покрытых антигенами Mycoplasma pneumoniae. На первой стадии реакции разведенные образцы
пациентов инкубируют в лунках. Если образцы положительные, специфические IgG-антитела (а также IgAи IgM-антитела) будут связываться с антигенами на твердой фазе. Для определения связанных антител
проводится вторая инкубация с использованием меченных ферментом антител к IgG человека
(ферментный конъюгат), которые затем обеспечивают развитие цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Состав набора:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Компонент
Лунки микропланшета
покрытые антигенами: 12 стрипов (8-луночных),
разделяемых на отдельные лунки, в рамке-держателе;
готовы к использованию
Калибратор 1
200 ОЕд/мл (IgG человека), готов к использованию
Калибратор 2
20 ОЕд/мл (IgG человека), готов к использованию
Калибратор 3
2 ОЕд/мл (IgG человека), готов к использованию
Положительный контроль
(IgG, человека), готов к использованию
Отрицательный контроль
(IgG, человека), готов к использованию
Ферментный конъюгат
Антитела кролика к IgG человека, конъюгированные с
пероксидазой хрена; готов к использованию
Буфер для образцов
готов к использованию
Промывочный буфер
10×концентрат
10. Раствор хромогена/субстрата
ТМБ/Н2О2, готов к использованию
11. Стоп-реагент
0,5 М серная кислота, готов к использованию
12. Инструкция по применению
13. Протокол с заданными величинами
Цвет
–
Количество
12 × 8
Обозначение
темнокрасный
красный
1 × 2,0 мл
CAL 1
1 × 2,0 мл
CAL 2
светлокрасный
синий
1 × 2,0 мл
CAL 3
1 × 2,0 мл
POS CONTROL
зеленый
1 × 2,0 мл
NEG CONTROL
зеленый
1 × 12 мл
CONJUGATE
голубой
1 × 100 мл
SAMPLEBUFFER
бесцветный
1 × 100 мл
WASHBUFFER
10×
бесцветный
1 × 12 мл
SUBSTRATE
бесцветный
1 × 12 мл
STOP SOLUTION
–
–
1 буклет
1 протокол
STRIPS
Серия
Температура хранения
Для in vitro диагностики
Невскрытый набор использовать до
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
2
_____________________________________________________________________________________________________
Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не
замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока
годности набора.
Утилизация отходов: Образцы пациентов, калибраторы, контроли и стрипы после инкубации следует
рассматривать как инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Все реагенты
следует утилизировать в соответствии с действующими официальными инструкциями.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Температуру всех реагентов необходимо довести до комнатной (от +18 °С до +25 °С) в
течение 30 минут перед использованием. После первого использования реагенты сохраняют стабильность
в течение указанного срока годности, если они хранятся при температуре от +2 °С до +8 °С и защищены от
микробной контаминации. Прочие сведения о стабильности отдельных реагентов указаны ниже.
Лунки, покрытые антигенами: Готовы к использованию. Вскройте защитную упаковку планшета,
расстегнув имеющуюся на пакете самоуплотняющуюся застежку. Во избежание конденсации влаги внутри
лунок, не вскрывайте пакет до тех пор, пока он не нагреется до комнатной температуры. Отломив
необходимое количество лунок, остальные неиспользованные лунки немедленно вложите вновь в ту же
защитную упаковку и плотно закройте ее на застежку (не вынимайте из упаковки пакетик с
влагопоглотителем).
После первого вскрытия упаковки плотно упакованные вновь лунки с антигенами можно хранить минимум 4
месяца в сухом месте при температуре от +2 °С до +8 °С.
Калибраторы и контроли: Готовы к использованию. Перед применением тщательно перемешать.
Ферментный конъюгат: Готов к использованию. Перед применением тщательно перемешать.
Буфер для образцов: Готов к использованию.
Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Если образовались кристаллы, их
можно растворить перед разведением буфера, нагревая концентрат до 37 °С и интенсивно взбалтывая.
Необходимое количество концентрата следует отобрать из бутыли чистой пипеткой и растворить
деионизированной или дистиллированной водой (1 часть концентрированного реагента плюс 9 частей
воды).
Например, для проведения анализа на 1 стрипе: к 5 мл концентрата следует добавить 45 мл воды.
Готовый разведенный промывочный буфер стабилен до 1 месяца, если его хранят при температуре от +2
о
С до +8 оС и правильно используют.
Раствор хромогена/субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента
из флакона немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету. Используемый раствор
хромогена/субстрата должен быть бесцветным. Не используйте раствор, если он приобрел голубую окраску.
Стоп-реагент: Готов к использованию.
Предостережение: Используемые в наборе контрольные сыворотки и калибраторы были проверены на
антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2 и вирусу гепатита С, а также на наличие HBsAg методами иммуноферментного
анализа и иммунофлуоресценции, и показали отрицательные результаты. Тем не менее, все используемые
материалы следует считать потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры
предосторожности. Некоторые реагенты содержат токсичный азид натрия. Избегайте его попадания на
кожу.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (с ЭДТА, гепарином или цитратом) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования, можно хранить до 14 дней при
температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение одного рабочего
дня.
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 буфером для образцов. Например: разведите
10 мкл сыворотки в 1,0 мл буфера для образца и тщательно перемешайте на вортексе (пипетки для этого
не подходят).
ПРИМЕЧАНИЕ: Калибраторы и контроли готовы к использованию, и разводить их не надо.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
3
_____________________________________________________________________________________________________
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
Для полуколичественного анализа проводите одновременно с инкубацией положительного и
отрицательного контролей и образцов пациентов инкубацию калибратора 2. Для количественного
анализа проводите одновременно с инкубацией положительного и отрицательного контролей и образцов
пациентов инкубацию калибраторов 1, 2 и 3.
Инкубация с образцом (1 стадия)
Внесите по 100 мкл калибраторов, положительного контроля, отрицательного контроля или разведенных
образцов пациентов в отдельные лунки планшета в соответствии с протоколом. Инкубируйте планшет при
комнатной температуре (от +18 °С до + 25 °С) в течение 30 минут.
Промывка
Ручная: Удалите жидкость из лунок и затем промойте 3 раза, используя каждый раз по 300 мкл рабочего
промывочного буфера на лунку.
Автоматическая: проводите промывку в режиме с переполнением, для чего установите в программе для
соответствующего автоматического вошера, параметр “Overflow” с 3-мя циклами промывки и внесением в
лунки по 450 мкл рабочего промывочного буфера.
При каждом цикле промывки после заполнения лунок буфером оставляйте планшет на 30-60 секунд и
затем опорожняйте. По окончании промывки (ручной или автоматической) тщательно удалите остатки
жидкости из лунок, энергично постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.
Примечание: Остаточная жидкость (больше 10 мкл), обычно остающаяся в лунках после промывки, может
помешать действию субстрата и снизить оптическую плотность (ОП) раствора в лунках. Недостаточно
полное промывание (например, менее 3 раз, или при маленьком объеме добавляемого промывочного
буфера, или при коротком времени выдерживания буфера в лунках) может в результате привести к
завышенным величинам ОП в лунках.
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Внесите в каждую лунку по 100 мкл ферментного конъюгата (меченные пероксидазой антитела к IgG
человека). Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре (от +18 °С до + 25 °С).
Промывка
Удалите жидкость из лунок. Промойте, как описано ранее.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Внесите в каждую лунку по 100 мкл раствора хромогена/субстрата. Инкубируйте планшет в течение 15 минут
при комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С) в защищенном от прямого солнечного света месте.
Остановка реакции
Добавьте в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента (в той же последовательности и с такой же скоростью,
как вносился раствор хромогена/субстрата).
Измерение
Фотометрическое измерение интенсивности окрашивания раствора в лунках проводят при основной
длине волны 450 нм и при референтной длине волны между 620 нм и 650 нм в течение 30 минут после
добавления стоп-реагента. Перед измерением слегка покачайте планшет, чтобы добиться гомогенного
распределения раствора.
СХЕМА РАЗМЕЩЕНИЯ НА ПЛАНШЕТЕ ОБРАЗЦОВ И КОНТРОЛЕЙ
A
B
C
D
E
F
G
H
1
C2
pos.
neg.
P1
P2
P3
P4
P5
2
P6
P7
P8
P9
P 10
P 11
P 12
P 13
3
P 14
P 15
P 16
P 17
P 18
P 19
P 20
P 21
4
P 22
P 23
P 24
5
6
7
C1
C2
C3
pos.
neg.
P1
P2
P3
8
P4
P5
P6
P7
P8
P9
P 10
P 11
9
P 12
P 13
P 14
P 15
P 16
P 17
P 18
P 19
10
P 20
P 21
P 22
P 23
P 24
11
12
Представленная выше схема представляет собой пример размещения на планшете проб:
- на стрипах 1-4 - для полуколичественного определения IgG-антител в 24 образцах пациентов (от Р1 до Р24);
- на стрипах 7-10 - для количественного определения IgG-антител в 24 образцах пациентов (от Р1 до Р24).
В соответствующие лунки вносят и инкубируют калибраторы (от С1 до С3), положительный контроль (pos.),
отрицательный контроль (neg.), а также образцы пациентов (Р1 – Р24). Достоверность анализа можно
увеличить, размещая и измеряя каждую анализируемую пробу в двух параллельных лунках (дубликатах).
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
4
_____________________________________________________________________________________________________
Лунки можно отламывать от стрипов по одной. Это позволяет привести в соответствие используемое
количество лунок и количество исследуемых образцов и, таким образом, минимизировать расход реагентов.
Положительный и отрицательный контроли выполняют роли внутренних контролей для проверки
правильности процедуры тестирования. Их следует использовать при каждой постановке анализа.
РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Полуколичественный анализ
Результаты можно оценить полуколичественно, рассчитывая отношение ОП в лунке с контрольным
образцом или в лунке с образцом пациента относительно ОП в лунке с калибратором 2. Для расчета этого
отношения используйте следующую формулу:
Отношение (Ratio) =
ОП контрольного образца или образца пациента
ОП калибратора 2
Фирма EUROIMMUN рекомендует следующую интерпретацию результатов:
Отношение (Ratio) < 0,8:
Отношение (Ratio) ≥ 0,8, но < 1,1:
Отношение (Ratio) ≥ 1,1:
Отрицательный
Неопределенный
Положительный
При получении неопределенного результата следует повторить исследование, поставив параллельно
старый образец и новый, взятый с интервалом 7 дней. Одновременное определение двух образцов
позволяет достоверно оценить изменение уровня антител.
Количественный анализ
На графике линейной зависимости откладывают величины ОП, измеренные для 3 калибровочных
сывороток (ось Y) против концентрации антител в этих сыворотках, выраженной в относительных единицах
ОЕд/мл (ось X). По полученным точкам проводят стандартную кривую для определения концентрации
антител в образцах пациентов. Для расчета кривой с помощью компьютера используйте кусочно-линейный
способ (“point-to-point”). Ниже приведен пример типичной калибровочной кривой. Не используйте ее,
пожалуйста, для определения концентрации антител в образцах пациентов.
ОП450
2 –
1,8 –
1,6 –
1,4 –
1,2 –
1 –
0,8 –
0,6 –
0,4 –
0,2 –
0–
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200
ОЕд/мл
Если ОП образца пациента лежит выше величины ОП для калибратора 1 (с концентрацией 200 ОЕд/мл),
результат следует выражать, как “>200 ОЕд/мл”. Такой образец рекомендуется развести 1:400 и
протестировать повторно, а результат (в ОЕд/мл), полученный по калибровочной кривой, умножить на
коэффициент 4.
Верхняя граница интервала нормальных значений неинфицированных людей (уровень отсечения, cutoff), рекомендованная фирмой EUROIMMUN, составляет 20 относительных единиц (ОЕд)/мл.
EUROIMMUN рекомендует следующую интерпретацию результатов:
< 16 ОЕд/мл:
Отрицательный
≥ 16, но < 22 ОЕд/мл:
Неопределенный
≥ 22 ОЕд/мл:
Положительный
Для определений, проводящихся в дубликатах, следует использовать в расчетах среднее значение двух
величин. Если эти две величины существенно расходятся между собой, анализ образца следует повторить.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
5
_____________________________________________________________________________________________________
Для установления диагноза всегда, кроме результатов серологических исследований, необходимо
учитывать клинические симптомы пациента.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Калибровка: Так как в настоящее время не существует Международного стандарта (референтной
сыворотки с антителами к Mycoplasma pneumoniae), калибровка выполняется в относительных единицах
(ОЕд).
Для каждой группы тестов, выполненных на наборах определенной серии, величины ОП калибратора и
относительные единицы и/или отношения (Ratio), определенные для положительного и отрицательного
контролей, должны лежать в границах, установленных для наборов этой серии. Протокол с
установленными значениями включается в поставку набора. Обнаружение отклонения контрольных
значений от указанных в спецификации будет свидетельствовать о неправильной постановке анализа; в
этом случае тест следует повторить.
Активность фермента, используемого в составе набора, зависит от температуры, поэтому величины ОП
могут варьировать, если не используется термостат. Чем выше температура воздуха в помещении во
время инкубации с субстратом, тем выше величины ОП. Сходные изменения происходят и со временем
инкубации. Однако таким же воздействиям подвергается и сыворотка калибратора, поэтому при расчете
результатов возможные колебания в основном компенсируются.
Антиген: Антиген, используемый в данном ИФА, представляет собой эфирный экстракт штамма “FN”
Mycoplasma pneumoniae.
Линейность: Линейность теста исследовали, используя серию разведений сыворотки пациента с высокой
концентрацией антител. Тест Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG) линеен в пределах интервала
измерения 2 – 200 ОЕд/мл.
Аналитическая чувствительность: Аналитическая чувствительность – это величина, равная 3SD
образца, не содержащего аналита, и представляет собой наименьший определяемый титр антител.
Аналитическая чувствительность теста Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG) составляет
приблизительно 1 ОЕд/мл.
Перекрестная реактивность: Качество используемых антигенов гарантирует высокие специфичность и
чувствительность. Сыворотки пациентов, инфицированных различными агентами были исследованы с с
помощью теста Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG). Данный иммуноферментный тест не показал
наличия перекрестной реактивности.
Параметр
ВПГ-1
ВЭБ-КА
ЦМВ
ВЗВ
Аденовирус
РСВ
Пул
парагрипп
Грипп А
n
9
12
7
11
12
12
12
11
Mycoplasma
pneumoniae
ELISA (IgG)
0
0
0
0
0
0
0
0
Параметр
Грипп В
Паротит
Корь
Краснуха
Toxoplasma
gondii
Chlamydia pn.
Helicobacter pyl.
n
12
12
12
12
3
6
8
Mycoplasma
pneumoniae
ELISA (IgG)
0
0
0
0
0
0
0
Вещества, мешающие определению: Проведению анализа не мешали образцы с признаками гемолиза,
липемические и иктерические образцы с концентрациями гемоглобина вплоть до 10 мг/мл, триглицеридов –
до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Воспроизводимость: Воспроизводимость теста исследовали, определяя коэффициент вариации (CV)
результатов анализа трех сывороток с концентрациями антител, попадающими на разные участки
калибровочной кривой. Величины CV внутри одного опыта определяли из 20 параллельных измерений
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
6
_____________________________________________________________________________________________________
каждой сыворотки. Величины CV в разных опытах получали, проводя по 4 параллельных измерения каждой
сыворотки в течение 6 различных дней.
Вариабельность внутри одного опыта, n = 20
Сыворотка
Среднее
CV
(ОЕд/мл)
(%)
1
23
4,4
2
38
6,3
3
71
7,1
Вариабельность в разных опытах, n = 4 × 6
Сыворотка
Среднее
CV
(ОЕд/мл)
(%)
1
22
9,2
2
42
7,0
3
71
8,5
Специфичность и чувствительность: Было протестировано тринадцать клинически и серологически
охарактеризованных образцов сывороток (Серолайф, Швейцария) набором Anti-Mycoplasma pneumoniae
ELISA (IgG). Специфичность и чувствительность составила 100%.
Референсный интервал: Уровни антител (IgG) к Mycoplasma pneumoniae анализировали, используя ИФА
набор фирмы EUROIMMUN на панели 300 здоровых доноров крови. При уровне отсечения (cut-off), равном
20 ОЕд/мл, 89,7% доноров крови оказались положительными по IgG-антителам к Mycoplasma pneumoniae.
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Бактерии рода Mycoplasma вместе с пятью другими родами принадлежат классу Молликуты (Mollicutes) –
это мелкие прокариотические организмы, не образующие клеточную стенку. Микоплазмы – наиболее
мелкие функционально независимые самовоспроизводящиеся бактерии, носители самого маленького
генома среди самореплицирующихся прокариот. Это внутри- или внеклеточные паразиты и их
жизнедеятельность тесно связана с метаболизмом клетки- или организма-хозяина. У них нет истинной
жесткой клеточной стенки (из-за недостатка муреина), поэтому они устойчивы к антибиотикам, действие
которых направлено на клеточную стенку.
Наиболее медицински-значимыми видами микоплазм считаются: Mycoplasma hominis – патогенный агент
уретральных инфекций, Mycoplasma fermentans – потенциальный возбудитель внезапно и быстро
развивающихся системных инфекций, и конечно же широко распространенная во всем мире Mycoplasma
pneumoniae – возбудитель инфекций дыхательных путей, на долю которого приходится около 10-15%
случаев пневмоний, включая некоторые особо тяжелые формы и случаи инфекций верхних дыхательных
путей, бронхов и легких.
Люди являются единственным резервуаром для Mycoplasma pneumoniae. Инфекция передается воздушнокапельным путем. Возможны случаи эндемического и иногда эпидемического распространения
возбудителя. Наиболее подвержены заболеваемости дети и молодые люди (приблизительно 40% случаев
заболевания – у детей моложе 5 лет). Заболеваемость среди мужчин выше, чем среди женщин.
По истечению инкубационного периода (10-20 дней), проявляются симптомы, такие как стойкий, не
прекращающийся кашель, высокая температура и головные боли. Также отмечены случаи фарингита и
инфекции среднего уха. Наряду с основными симптомами инфицирования органов дыхательной системы,
распространены также случаи первичной атипичной пневмонии (ПАП), которые составляют около 70%
случаев серологически выявленной Mycoplasma pneumoniae. Из этих случаев у 22% пациентов развивается
тяжелая форма пневмонии, у 3% интерстициальная пневмония и у 75% – затяжной трахеобронхит, которые
поражают преимущественно школьников и взрослых молодого возраста. Обычно заболевают несколько
членов семьи или люди находящихся в близком контакте. Около 10% случаев инфекции Mycoplasma
pneumoniae выявляются у пациентов старше 40 лет. Инфекция развивается за счет цитоадгезии патогена в
трахее, бронхах и бронхиолах. Цитоадгезия опосредована поверхностными липопротеинами (адгезинами),
которые также являются антигенами.
У пациентов принимающих иммуносупрессанты и пациентов с серповидно-клеточной анемией описаны
случаи, когда бактериальная легочная инфекция приводит к развитию синдрома острой дыхательной
недостаточности (ОДН).
Заболевание может сопровождаться такими осложнениями как миокардит или перикардит, а также
нодозная или полиморфная эритемы, реактивный артрит (например, ювенильная спондилоартропатия),
инфекция селезенки, гломерулонефрит, менингит, энцефалит, миелит и полирадикулоневрит. Наряду с
наличием тяжелых форм заболевания и возможностью возникновения реинфекции, часть инфекционных
процессов протекает бессимптомно или проходит в легкой форме, вылечивается спонтанно без терапии
антибиотиками.
В 20% случаев инфекция, вызванная Mycoplasma pneumoniae, протекает бессимптомно. Иногда она может
сопровождаться симптомами отличными от симптомов первичной атипичной пневмонии (ПАП) или общей
инфекции дыхательных путей, а эти заболевания, в свою очередь, могут быть вызваны рядом других
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA (IgG), EUROIMMUN AG
7
_____________________________________________________________________________________________________
патогенов. По этой причине лабораторная диагностика Mycoplasma pneumoniae имеет очень большое
значение.
Не существует какого-либо единого «золотого стандарта» в диагностике Mycoplasma pneumoniae. Часто
основным является прямое определение антигена в бронхиальном секрете, полученном инвазивным
методом (бронхоальвеолярный лаваж). Культивирование патогена проводится только в некоторых
специализированных лабораториях, так как данный метод сложен, трудоемок (6-15 дней) и подвержен
возникновению ошибок. Из литературных источников известно, что измерение уровня антител не
обязательно коррелирует с наличием патогена, которого можно выделить. Очень часто для диагностики
используют реакцию связывания комплемента (РСК). Но в этом методе только 4-кратное увеличение титра
имеет диагностическое значение. РСК все больше критикуют за низкую чувствительность и невозможность
определения классов антител и их дифференциации. Определение патогена (рибосомальной РНК) с
помощью ПЦР в масштабе реального времени (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой)
считается наиболее быстрым и достоверным методом, но может проводиться только в
специализированных лабораториях, оснащенных необходимым оборудованием, так как это метод требует
высокого качества исполнения.
По крайней мере, в половине случаев инфекции в крови определяется холодовый агглютинин, что связано
с олигоклональными антителами к антигену I эритроцитов. Холодовая агглютинация сыворотки процесс не
специфичный, он отмечается у 50-70% пациентов между 7-ым и 10-ым днями с момента появления
симптомов заболевания. РСК и агглютинационный тест не очень целесообразные методы анализа, так как
они не позволяют дифференцировать различные классы иммуноглобулинов.
Высокочувствительные и специфические иммунологические методы диагностики (ИФА и НРИФ) находят
все большее распространение в клинической практике, так как они просты в исполнении и легкодоступны.
Для серодиагностики иммуноглобулинов классов IgA, IgG, IgM можно использовать, например, тест
системы Anti-Mycoplasma pneumoniae ELISA и Anti-Mycoplasma pneumoniae IIFT.
Специфические антитела класса IgM определяются уже через 4 дня после появления первых симптомов
заболевания, IgG антитела несколькими днями позже. Обычно наблюдают непрерывное повышение титра
IgM и особенно IgG антител, так как именно они достоверно подтверждают наличие острой инфекции
вызванной Mycoplasma pneumoniae. Титр IgG антител увеличивается в 3-4 раза к 10 или, во всяком случае,
к 21 дню с момента появления симптомов заболевания. Специфические IgA антитела, которые могут
появиться вместе с IgG антителами, как правило, обнаруживаются у взрослых. У детей же отмечают рост
титра специфических IgM антител. Уровень IgG антител может оставаться неизменным на протяжении
нескольких месяцев. Вообще в настоящее время рекомендуется для достоверной диагностики проводить
анализ не одного, а двух образцов сывороток пациента, взятых с разницей в 2-3 недели. Результат теста
одного образца нельзя считать достоверным. При проведении анализа методом ИФА или НРИФ
сохраняется вероятность перекрестной реактивности с другими видами микоплазм.
Инфекция, вызванная Mycoplasma pneumoniae, является возбудителем или косвенной причиной 10% всех
случаев внебольничной пневмонии (ВП) и синдрома острой дыхательной недостаточности (ОДН), при
которых требуется принудительная вентиляция и терапия антибиотиками. Mycoplasma pneumoniae
чувствительна к макролидам и тетрациклинам.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Anti-Mycoplasma pneumoniae_ELISA_EI_2202-9601G_rus
2/18/2009 11:20:00 AM
Оригинал EI_2202G_A_UK_C04.doc
Version: 18.12.2008 10:54
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru