Вирус краснухи IgG (Anti-Rubella virus IgG ELISA)

Anti-Rubella virus (IgG) ELISA, EUROIMMUN AG
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2009/04988 от 31.08.2009 г.
Вирус краснухи IgG
(Anti-Rubella virus IgG ELISA)
Иммуноферментный набор для определения антител класса IgG к вирусу краснухи в сыворотке или плазме
крови человека.
Номер по каталогу: ЕI 2590-9601 G
Набор рассчитан на 96 определений
ПРИНЦИП МЕТОДА
Набор предназначен для полуколичественного или количественного определения in vitro антител класса
IgG к вирусу краснухи в сыворотке и плазме крови человека. Данный набор содержит стрипы, каждый из
которых состоит из восьми отламываемых лунок, покрытых антигенами вируса краснухи. На первой стадии
реакции разведенные образцы пациентов инкубируют в лунках. Если образцы положительные,
специфические IgG-антитела (а также IgA- и IgM-антитела) будут связываться с антигенами на твердой
фазе. Для определения связанных антител проводится вторая инкубация с использованием меченных
ферментом антител к IgG человека (ферментный конъюгат), которые затем обеспечивают развитие
цветной реакции.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Компонент
1.
Лунки микропланшета
покрытые антигенами: 12 стрипов 8-луночных
(разделяемых на отдельные лунки), в рамкедержателе, готовы к использованию
2.
Калибратор 1
200 МЕ/мл (IgG, человека), готов к использованию
3.
Калибратор 2
50 МЕ/мл (IgG, человека), готов к использованию
4.
Калибратор 3
10 МЕ/мл (IgG, человека), готов к использованию
5.
Калибратор 4
1 МЕ/мл (IgG, человека), готов к использованию
6.
Положительный контроль
(IgG, человека), готов к использованию
7.
Отрицательный контроль
(IgG, человека), готов к использованию
8.
Ферментный конъюгат
Антитела кролика к IgG человека,
конъюгированные с пероксидазой хрена; готовы к
использованию
9.
Буфер для образцов
Готов к использованию
10.
Промывочный буфер
10× концентрат
11.
Раствор хромогена/субстрата
Хромоген – тетраметилбензидин, субстрат –
перекись водорода, готов к использованию
12.
Стоп-реагент
0,5 М серная кислота, готов к использованию
13.
Инструкция по применению
14.
Протокол с заданными величинами
Серия
Для in vitro диагностики
Цвет
–
Количество
12 × 8
Обозначение
темнокрасный
красный
1 × 2,0 мл
CAL 1
1 × 2,0 мл
CAL 2
светлокрасный
розовый
1 × 2,0 мл
CAL 3
1 × 2,0 мл
CAL 4
синий
1 × 2,0 мл
POS CONTROL
зеленый
1 × 2,0 мл
NEG CONTROL
зеленый
1 × 12 мл
CONJUGATE
голубой
1 × 100 мл
SAMPLEBUFFER
бесцветный
1 × 100 мл
WASHBUFFER 10×
бесцветный
1 × 12 мл
SUBSTRATE
бесцветный
1 × 12 мл
STOP SOLUTION
–
–
1 буклет
1 протокол
STRIPS
Температура хранения
Невскрытый набор
использовать до
Хранение и стабильность набора: Набор следует хранить при температуре от +2 °С до +8 °С. Не
замораживать. Невскрытые компоненты набора сохраняют стабильность в течение всего указанного срока
годности набора.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Rubella virus (IgG) ELISA, EUROIMMUN AG
2
_____________________________________________________________________________________________________
Утилизация отходов: Образцы пациентов, калибраторы, контроли и стрипы после инкубации следует
рассматривать как инфицированные отходы и обращаться с ними соответствующим образом. Все реагенты
следует утилизировать в соответствии с действующими официальными инструкциями.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание: Перед использованием все реагенты необходимо прогреть до комнатной температуры (+18
°С - +25 °С) в течение 30 минут. После первого использования реагенты сохраняют стабильность в течение
указанного срока годности при хранении при температуре от +2 °С до +8 °С и защите от микробного
загрязнения, если ниже не оговорены особые условия хранения.
- Лунки, покрытые антигенами: Готовы к использованию. Откройте застежку защитной упаковки
микропланшета. Во избежание конденсации влаги внутри лунок, не вскрывайте упаковку до тех пор, пока
она не нагреется до комнатной температуры. Отломив необходимое количество лунок, неиспользованные
лунки немедленно верните в ту же упаковку и плотно закройте ее на застежку (не вынимайте из упаковки
пакетик с влагопоглотителем).
После вскрытия упаковки неиспользованные лунки с антигенами можно хранить в сухом месте при
температуре от +2 °С до +8 °С как минимум 4 месяца.
- Калибраторы и контроли: Готовы к использованию. Тщательно перемешать перед использованием.
- Ферментный конъюгат: Готов к использованию. Тщательно перемешать перед использованием.
- Буфер для образцов: Готов к использованию.
- Промывочный буфер: Поставляется в виде 10-кратного концентрата. Если образовались кристаллы,
перед разведением буфера их необходимо растворить, нагревая концентрат до 37°С и интенсивно
взбалтывая. Необходимое количество концентрата следует отобрать из флакона чистой пипеткой и
растворить деионизированной или дистиллированной водой (1 часть концентрированного реагента плюс 9
частей воды).
Например, для проведения анализа на 1 стрипе: 5 мл концентрата плюс 45 мл воды.
Готовый к использованию промывочный буфер стабилен в течение 1 месяца при хранении +2 оС - +8 оС и
правильном использовании.
- Раствор хромогена/субстрата: Готов к использованию. После отбора необходимого количества реагента
из флакона немедленно вновь закройте его, так как раствор чувствителен к свету. Во время использования
раствор хромогена/субстрата должен быть бесцветным. Не используйте раствор, если он приобрел
голубую окраску.
- Стоп-реагент: Готов к использованию.
Предостережение: Используемые контрольные сыворотки были проверены на антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и
вирусу гепатита С, а также на наличие HBsAg методами иммуноферментного анализа и иммунофлуоресценции и показали отрицательные результаты. Тем не менее, все используемые материалы
следует считать потенциально опасными и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры
предосторожности. Некоторые реагенты содержат токсичный азид натрия. Избегайте попадания его на
кожу.
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦОВ ПАЦИЕНТОВ
Материал образцов: Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин или цитрат) крови человека.
Стабильность: Образцы пациентов, предназначенные для исследования этим методом, можно хранить до
14 дней при температуре от +2 оС до +8 оС. Разведенные образцы необходимо использовать в течение
одного рабочего дня.
Разведение образцов: Образцы пациентов разводят 1:101 буфером для образцов. Например: разведите
10 мкл сыворотки в 1,0 мл буфера для образцов и тщательно перемешайте на вортексе (пипетки для этого
не подходят).
ПРИМЕЧАНИЕ: Калибраторы и контроли готовы к использованию, их разводить не надо.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
Для полуколичественного анализа одновременно с инкубацией положительного и отрицательного
контролей и образцов пациентов проводите инкубацию калибратора 3. Для количественного анализа
одновременно с инкубацией положительного и отрицательного контролей и образцов пациентов проводите
инкубацию калибраторов 1, 2, 3 и 4.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Rubella virus (IgG) ELISA, EUROIMMUN AG
3
_____________________________________________________________________________________________________
Инкубация с образцом (1 стадия)
Внесите по 100 мкл калибраторов, положительного контроля, отрицательного контроля или разведенных
образцов пациентов в отдельные лунки микропланшета в соответствии со схемой внесения. Инкубируйте
планшет при комнатной температуре (от +18 °С до + 25 °С) в течение 30 минут.
Промывка
Ручная: Удалите жидкость из лунок, затем промойте 3 раза, внося каждый раз по 300 мкл рабочего
промывочного буфера на лунку.
Автоматическая: проводите в режиме с переполнением (установите в программе для соответствующего
автоматического вошера параметр “Overflow”, с 3-мя циклами промывки и внесением в лунки по 450 мкл
рабочего промывочного буфера).
При каждом цикле промывки после заполнения лунок буфером оставляйте планшет на 30-60 секунд, а
затем удаляйте из них жидкость. По окончании промывки (ручной или автоматической) тщательно удалите
остатки жидкости из лунок, энергично постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.
Примечание: Жидкость (> 10 мкл), остающаяся в лунках после промывки, может влиять на субстратную
реакцию и приводить к получению ложно заниженных значений оптической плотности (ОП) раствора в
лунках. Неправильная промывка (например, менее 3 циклов, или маленький объем вносимого
промывочного буфера, или короткое время выдерживания буфера в лунках) может приводить к получению
ложно завышенных значений ОП.
Инкубация с конъюгатом (2 стадия)
Внесите в каждую лунку по 100 мкл ферментного конъюгата (меченные пероксидазой антитела к IgG
человека). Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре (от +18 °С до + 25 °С).
Промывка
Удалите жидкость из лунок. Промойте, как описано выше.
Инкубация с субстратом (3 стадия)
Внесите в каждую лунку по 100 мкл раствора хромогена/субстрата. Инкубируйте планшет в течение 15
минут при комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С) в защищенном от прямого солнечного света месте.
Остановка реакции
Внесите в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента (в той же последовательности и с такой же скоростью, как
вносился раствор хромогена/субстрата).
Измерение
Фотометрическое измерение интенсивности окрашивания раствора в лунках проводят при основной
длине волны 450 нм и при длине волны сравнения между 620 нм и 650 нм в течение 30 минут после
добавления стоп-реагента. Перед измерением слегка покачайте планшет, чтобы добиться гомогенного
распределения раствора.
Автоматизация процесса проведения анализа
Процесс разведение образцов и вся процедура анализа может быть полностью автоматизирована и
выполнена ИФА анализатором. Условия инкубации, запрограммированные в соответствующем
авторизированном фирмой EUROIMMUN программном обеспечении, могут слегка отличаться от описанных
в инструкции к данному набору. Проверка качества совместной работы данного набора EUROIMMUN ELISA
и таких автоматических систем как EUROIMMUN Analyser I и DSX Dynex показала хорошие результаты.
Документы, подтверждающие качество, доступны по запросу.
Возможно использование автоматических открытых систем других производителей, однако проверка
качества совместной работы должна быть выполнена пользователем.
СХЕМА ВНЕСЕНИЯ ОБРАЗЦОВ И КОНТРОЛЕЙ
A
B
C
D
E
F
G
H
1
C3
pos
neg
P1
P2
P3
P4
P5
2
P6
P7
P8
P9
P 10
P 11
P 12
P 13
3
P 14
P 15
P 16
P 17
P 18
P 19
P 20
P 21
4
P 22
P 23
P 24
5
6
7
C1
C2
C3
C4
pos
neg
P1
P2
8
P3
P4
P5
P6
P7
P8
P9
P 10
9
P 11
P 12
P 13
P 14
P 15
P 16
P 17
P 18
10
P 19
P 20
P 21
P 22
P 23
P 24
11
12
Представленная выше схема представляет собой пример внесения проб:
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Rubella virus (IgG) ELISA, EUROIMMUN AG
4
_____________________________________________________________________________________________________
- на стрипах 1-4 - для полуколичественного определения IgG-антител в 24 образцах пациентов (от Р 1 до
Р 24);
- на стрипах 7-10 - для количественного определения IgG-антител в 24 образцах пациентов (от Р 1 до Р
24).
В соответствующие лунки вносят и инкубируют калибраторы (от С1 до С4), положительный контроль (pos.),
отрицательный контроль (neg.), а также образцы пациентов. Для повышения достоверности результатов
каждую анализируемую пробу рекомендуется вносить и анализировать в дублях, используя для каждого
образца по две лунки.
Можно отламывать любое количество лунок. Это позволяет привести в соответствие используемое
количество лунок и количество исследуемых образцов и, таким образом, свести к минимуму расход
реагентов.
Положительный и отрицательный контроли предназначены для внутреннего контроля качества результатов
анализа. Их следует использовать при каждой постановке анализа.
РАСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Полуколичественный анализ:
Результаты можно оценить полуколичественно, рассчитывая соотношение ОП в лунке с контрольным
образцом или в лунке с образцом пациента и ОП в лунке с калибратором 3. Для расчета этого соотношения
используйте следующую формулу:
Отношение (RATIO) =
ОП контрольного образца или образца пациента
ОП калибратора 3
Фирма EUROIMMUN рекомендует следующую интерпретацию результатов:
Отношение (RATIO) < 0,8:
Отношение (RATIO) в интервале от ≥ 0,8 до < 1,1:
Отношение (RATIO) ≥ 1,1:
Отрицательный результат
Пограничный результат
Положительный результат
В случае пограничного результата необходимо взять у пациента дополнительный образец крови через 7
дней и повторить тест в параллели с первым образцом. По результатам теста обоих образцов можно
делать заключение об изменениях концентрации антител.
Количественный анализ
Для определения концентрации антител в исследуемых образцах строится калибровочная кривая методом
«от точки к точке» (point-to-point). По оси Y откладывают значения измеренной оптической плотности
четырех калибраторов, по оси X – соответствующие концентрации антител в МЕ/мл в этих калибраторах.
При компьютерной обработке данных также используется способ построения калибровочной кривой «от
точки к точке». Ниже приведен пример типичной калибровочной кривой. Пожалуйста, не используйте эту
кривую для определения концентрации антител в образцах пациентов.
Если ОП образца пациента лежит выше величины ОП для калибратора 1 (с концентрацией 200 МЕ/мл),
результат следует выражать как “>200 МЕ/мл”. Такой образец рекомендуется развести 1:400 и
протестировать повторно, а результат, полученный по калибровочной кривой (в МЕ/мл), умножить на
коэффициент разведения 4.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Rubella virus (IgG) ELISA, EUROIMMUN AG
5
_____________________________________________________________________________________________________
Верхняя граница интервала нормальных значений неинфицированных людей (уровень отсечения, cutoff), рекомендованная фирмой EUROIMMUN, составляет 10 международных единиц (МЕд)/мл.
EUROIMMUN рекомендует следующую интерпретацию результатов:
< 8 МЕ/мл:
Отрицательный результат
от ≥ 8 до < 11 МЕ/мл: Пограничный результат
≥ 11 МЕ/мл:
Положительный результат
Для определений, проводящихся в дубликатах, следует использовать в расчетах среднее значение двух
величин. Если эти две величины существенно расходятся между собой, анализ образца следует повторить.
При постановке диагноза кроме результатов серологических исследований всегда необходимо учитывать
клинические признаки пациента.
ХАРАКТЕРИСТИКИ ТЕСТА
Калибровка: Калибровку проводят в международных единицах (МЕ), используя международную
стандартную сыворотку NIBSC RUBI-1-94 (Anti-Rubella Serum, 1-ый международный стандарт для
иммуноглобулинов человека к вирусу краснухи, Национальный институт биологических стандартов и
контролей, Хартфордшир, Англия).
Для каждой группы тестов, выполненных на наборах определенной серии, величины ОП калибраторов и
международные единицы, определенные для положительного и отрицательного контролей, должны лежать
в пределах, установленных для наборов этой серии. Протокол с установленными значениями входит в
состав набора. Если обнаружены отклонения контрольных значений от значений, указанных в
спецификации, результаты теста могут быть ошибочными и тест следует повторить.
Активность фермента, входящего в состав набора, зависит от температуры, поэтому, если не используется
термостат, значения ОП могут варьировать. Чем выше температура воздуха в помещении (от +18оС до
+25оС) во время инкубации с субстратом, тем выше значение ОП.
Антигены: Лунки микропланшетов покрыты очищенными антигенами вируса краснухи. Антигены выделены
из лизатов инактивированных клеток Vero, инфицированных вирусом краснухи (штамм HPV-77).
Линейность: Линейность теста исследовали, используя серию разведений сыворотки пациента с высокой
концентрацией антител. Результаты теста Anti-Rubella virus ELISA (IgG) имеют линейный характер в
диапазоне концентраций 5-183 МЕ/мл.
Аналитическая чувствительность: Аналитическая чувствительность – это величина, равная 3SD
образца, не содержащего аналита, и представляет собой наименьший определяемый титр антител.
Граница определения теста Anti- Rubella virus ELISA (IgG) составляет приблизительно 0,3 МЕ/мл.
Перекрестная реактивность: Качество используемого антигена обеспечивает высокую специфичность
ИФА. Данный ИФА тест не показал наличия перекрестной реактивности с сыворотками, содержащими
антитела (IgG) к следующим возбудителям заболеваний: ВПГ-1 (n=3), ВЭБ-КА (n=7), ЦМВ (n=5), вирус
Варицелла-Зостер (n=3), вирус гриппа типа В (n=8), вирус парагриппа типы 1-4 (n=8), респираторносинцитиальный вирус (n=6), аденовирус (n=10).
Вещества, мешающие определению: На результаты анализа не влияло использование гемолитической,
липемической или иктеричной пробы с содержанием гемоглобина до 10 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл
и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Воспроизводимость: Воспроизводимость теста исследовали, определяя коэффициент вариации (CV)
результатов анализа трех сывороток с концентрациями антител, попадающими на разные участки
калибровочной кривой. Величины CV внутри одного опыта определяли при 20 параллельных измерениях
каждой сыворотки. Величины CV в разных опытах получали, проводя по 4 параллельных измерения каждой
сыворотки в течение 6 различных дней.
Вариабельность внутри одного опыта, n = 20
Сыворотка
Среднее
CV
(МЕ/мл)
(%)
1
7
4,6
2
37
3,9
3
147
4,7
Вариабельность в разных опытах, n = 4 × 6
Сыворотка
Среднее
CV
(МЕ/мл)
(%)
1
8
4,5
2
37
5,9
3
162
4,4
Специфичность и чувствительность: Образцы от 150 пациентов (происхождение: Европа) исследовали с
помощью набора Anti- Rubella virus ELISA (IgG) и другого иммуноферментного набора в качестве
референсного. Специфичность и чувствительность составили 100%.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Rubella virus (IgG) ELISA, EUROIMMUN AG
6
_____________________________________________________________________________________________________
Референсный интервал: Уровни IgG-антител к вирусу краснухи анализировали, используя данный ИФА
набор EUROIMMUN, в группе здоровых доноров крови (n=300, происхождение: Германия). При уровне
отсечения (cut-off), равном 10 МЕ/мл, в полном соответствии с известным уровнем иммунитета взрослого
населения 94,3% всех доноров оказалось положительными на IgG- антитела.
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Возбудителем краснухи является широко распространенный во всем мире вирус Rubella. Вирус краснухи
принадлежит к семейству тогавирусов (Togaviridae), но выделен отдельно в род Rubivirus, имеет белково жировую оболочку, внутри которой содержится геном, содержащий одноцепочечную молекулу РНК. Этот
вирус был впервые выделен в 1962 году Паркманом, Уэллером и Невой. Существует два генотипа вируса,
которые в свою очередь подразделяются на подгенотипы. В западном полушарии распространен генотип I
вируса краснухи (RGI), тогда как в Азии – генотип II (RGII).
Заболевание передается воздушно-капельным путем. Больные краснухой считаются заразными уже на 2-3
неделе инкубационного периода. Типичными симптомами заболевания считаются головные боли,
характерное увеличение лимфатических узлов (генерализованный лимфаденит), особенно в области шеи
(заднешейные и затылочные лимфатические узлы) и типичная пятнисто-папулезная сыпь, сохраняющаяся,
как правило, в течение 3 дней. Элементы сыпи представляют собой пятна бледно - розового или красного
цвета, круглые с ровными краями, не склонные к слиянию, распространяющиеся от лица к телу и
конечностям. Наиболее частыми осложнениями являются артриты – воспаления суставов
(преимущественно пальцев, рук, локтевого и голеностопного суставов), которые у взрослых могут длиться
до трех недель, особенно у женщин. Характерными осложнениями также считаются миокардиты, невриты,
отиты, бронхиты и очень редко краснушный энцефалит с хорошим прогнозом. Чаще всего краснухой
болеют дети в возрасте от 5 до 14 лет, после выздоровления формируется пожизненный иммунитет.
Предположительно заболеваемость среди взрослого населения Центральной Европы составляет 80-90%,
на Ближнем Востоке, в странах Аравийского полуострова и в США – около 91-93%. Это означает, что 1020% женщин детородного периода не имеют иммунитета к краснухе.
Трансплацентарная передача вируса краснухи, особенно в первом триместре ведет к возникновению
тяжелых врожденных аномалий. Тяжелые формы краснушной эмбриопатии встречаются в 80% случаев. В
первую очередь это наиболее распространенная триада Грега (впервые описана в 1941 году
австралийским офтальмологом Норманном Грегом): поражения сердца, глаз и слухового аппарата, такие
как врожденный порок сердца – около 48% случаев, ретинопатия – около 39%, катаракта/миопия – около
29%, глаукома – около 3%, глухота – около 67% всех случаев. Также встречаются и другие аномалии:
задержка мышечного и умственного развития (частично совместно с микроцефалией) – около 45%,
неонатальная пурпура с гепатоспленомегалией и сахарный диабет – около 23%, иногда поражения
настолько велики, что приводят к гибели плода (включая, самопроизвольные аборты) – около 16% случаев.
Во многих странах острая форма краснухи рассматривается как медицинское показание для прерывания
беременности.
При выявлении инфицирования вирусом краснухи, в дополнение к анамнезу и клиническим исследованиям,
очень важно провести качественные лабораторно-диагностические исследования. При серологическом
исследовании иммунного статуса беременных женщин с подозрением на краснушную эмбриопатию, эти
исследования носят обязательный характер. Дифференциация между острой формой и инфекцией
перенесенной в прошлом – одна из наиболее сложных проблем, с которой сталкивается серология.
Антитела (в основном IgG) к структурным белкам вируса краснухи появляются, как правило, на второйтретий день с момента появления сыпи. Анитела к полноразмерному, исходному вирусу появляются в
период времени от 3 месяцев до 1 года. Определение авидности специфических IgG антител способствует
выявлению острой формы вирусной инфекции, особенно у IgM-отрицательных пациентов с недавней
инфекцией и тех, у кого обнаруживают персистирующие IgM антитела. ИФА тест на авидность антител в
основном рекомендуется благодаря его доказанной высокой информативности и достоверности.
Прямое определение вируса краснухи методом ПЦР (полимеразной цепной реакции), например в крови
эмбриона, проводится лишь в специальных лабораториях.
Реакция ингибирования гемагглютинации (HIT test, HAH test, HAI test) проводится на ранних стадиях
беременности для определения иммунного статуса женщины. Для выявления недавней инфекции проводят
анализ двух образцов крови: первый отбирают при появлении симптомов заболевания, второй – спустя 2-3
недели после первого. Если инфекция свежая, титр антител увеличится в 2-4 раза. В случае получения
пограничных или отрицательных результатов, антитела к вирусу краснухи дополнительно определяют ИФА
методом. Необходимо отметить, что высокий титр антител в реакции ингибирования гемагглютинации при
отсутствии симптомов заболевания свидетельствует об иммунитете к вирусу краснухи, в то время как
низкий титр рассматривается в качестве индикатора несостоятельности иммунитета и возможной
реинфекции в случае повторного контакта с вирусом. Такая интерпретация результатов недостаточно
надежна, поскольку любой титр антител в HIT тесте может свидетельствовать о свежей краснушной
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Rubella virus (IgG) ELISA, EUROIMMUN AG
7
_____________________________________________________________________________________________________
инфекции (нет дифференцирования антител класса IgG от IgM), а высокий титр состоять только из антител
класса IgM.
В качестве альтернативы для оценки иммунитета можно использовать наборы Anti-Rubella virus IgG ELISA и
Anti-Rubella virus IIFT. Увеличение титра антител в течение 10 дней или выявление IgM антител
свидетельствует об острой форме инфекции. Необходимо также принимать во внимание, что IgM антитела
к вирусу краснухи могут обнаруживаться в крови и спустя месяцы после инфекции.
Определение авидности специфических IgG антител, например при помощи наборов Anti-Rubella virus
ELISA (IgG, авидность) или Anti-Rubella virus IIFT (IgG, авидность), позволяет получить более достоверную
информацию о периоде инфекционного процесса. Выявление высокоавидных антител исключает
возможность протекания острого инфекционного процесса в последние 4-6 недель. В наборе Anti-Rubella
Glycoprotein ELISA в качестве целевых антигенов используются гликопротеины вируса краснухи
(структурные белки вируса). Имеющиеся в положительных образцах специфичные антитела классов IgM
(IgA, IgG) связываются с соответствующими антигенами, таким образом вирус краснухи может быть
выявлен уже через 2-3 дня после появления сыпи.
Для выявления случаев энцефалита, вызванного вирусом краснухи, определяют специфические антитела к
вирусу в спинномозговой жидкости (СМЖ). Для проведения этого терапевтически значимого теста
используют набор Anti-Rubella virus ELISA (IgG, в СМЖ), специально разработанный для диагностики
антител в СМЖ. В случае вызванного вирусом краснухи энцефалита в СМЖ обнаруживаются агентспецифические антитела класса IgG. Величина интратекальной продукции специфичных к патогену антител
определяется по относительному коэффициенту СМЖ/сыворотка CSQотн. (синоним: индекс специфичности
антител). Эта величина равна частному от деления доли антител к патогену обнаруженному в СМЖ (в
суммарной фракции IgG СМЖ) на долю антител к патогену обнаруженному в сыворотке крови (в суммарной
фракции IgG сыворотки).
При помощи набора Anti-Rubella virus Westernblot выявляются антитела класса IgG к компонентам вируса
краснухи и уточняются неоднозначные IgM результаты. Для подтверждения результатов теста
дополнительно проводится определение авидности. Специфические по своей конформации IgG антитела к
антигену Е2 вируса краснухи появляются не ранее, чем через 3 месяца после вакцинации или
выздоровления. Таким образом если проявилась полоса Е2 антигена, то наличие острой инфекции за
последние 3 месяца расценивается как маловероятное.
Для профилактики краснушной инфекции во всем мире используют различные схемы вакцинаций. Так как
активная иммунизация против краснухи хорошо переносится, для защиты всех детей до наступления
половой зрелости используют двухстадийную вакцинацию.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Anti-Rubella Virus_IgG_ELISA_EI_2590-9601G_rus
1/25/2010 2:03:00 PM
Оригинал EI_2590G_A_UK_C03.doc – 04.03.2009
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru