СОДЕРЖАНИЕ РАСТВОРИМЫХ ФОРМ АНТИГЕНОВ CD50 И

УДК 616-002.6:576.8.097.3
СОДЕРЖ АНИЕ РАСТВОРИМЫХ ФОРМ
АНТИГЕНОВ CD50 И HLA I КЛАССА
ПРИ СЕРОРЕЗИСТЕНТНЫХ ФОРМАХ СИФИЛИСА
Е.С. Вязьмина, В.В. Новиков, Н.А. Добротина
Нижегородский госуниверсистет
С.И. Новикова, Н.В. Фриго, В.Д. Комарова
Нижегородский научно-исследовательский кожно-венерологический институт
В работе было проведено исследование содержания растворимых форм
мембранных антигенов HLA I класса, ассоциированных с молекулой в 2 микроглобулина, и CD50 в сыворотке крови больных с серорезистентными
формами сифилиса (СР) с помощью твердофазного иммуноферментного
анализа (ИФА). Уровень sHLA-I в сыворотках крови большинства больных
СР оказался существенно сниженным по сравнению не только с группой
доноров (в 5.9 раза), но и с больными другими формами сифилиса. Уровень
sCD50 в сыворотках крови большинства больных СР оказался также значительно сниженным по сравнению с уровнем sCD50 у доноров (в 8.5 раз) и
у больных различными формами сифилиса. Резкое снижение сывороточного уровня антигенов sCD50 и sHLA-I у больных серорезистентным сифилисом свидетельствует о нарушении молекулярных механизмов инициации и
реализации иммунного ответа, в которых принимают участие данные
мембранные белки.
Инфицирование организма бледной трепонемой сопровождается множественными нарушениями функционального состояния иммунной системы. Известно,
что состояние клеточного иммунитета и процессы активации иммуной системы
может отражать уровень растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы (Новиков, 1996). Показано, что некоторые растворимые антигены клеток иммунной системы выполняют роль диагностических и прогностических маркеров. Растворимые формы (s-формы) мембранных антигенов клеток
иммунной системы в настоящее время широко исследуются при многих заболеваниях. В ряде работ проводилось изучение содержания растворимого CD50 антигена (sCD50) и растворимой формы антигенов HLA I класса (sHLA-I). Мембранные формы антигенов играют важную роль в инициации иммунного ответа, а их
растворимые аналоги могут выступать в роли ограничителей активационных процессов. Отмечено повышение уровня sHLA-I и sCD50 антигена в сыворотке крови
больных системной красной волчанкой (Brecsiani et al., 1998; Hagihara et al., 1993,
Pino-Otin et al., 1995). Увеличение уровня sHLA-I выявлено у больных гемморагической лихорадкой с почечным синдромом, при трансплантации органов, при вирусных гепатитах В и С (Piazzola et al., 1998; Птицына и др, 1999, Sakaguchi et al.,
1992).
39
Весьма ограничена информация о роли растворимых антигенов в механизмах
патогенеза широко распространенных бактериальных инфекций. Отсутствуют
данные об их роли в развитии такой социально значимой инфекции, как сифилис.
Не исследовано участие растворимых форм мембранных антигенов в формировании особенностей иммунного ответа хозяина на инфицирование организма бледной трепонемой. Одним из наиболее сложных вопросов остается вопрос о серорезистентности после лечения сифилиса (Овчинников, 1980; Романенко, 1983; Милич, 1984). Серорезистентность (СР) возникает, когда после полноценного специфического лечения не происходит негативации серологических реакций. Еще в
1912 г. Миллиан обращал внимание на явление, получившее название «серологическая резистентность» и рассматривавшееся как результат неудачного лечения.
Поскольку для начала иммунного ответа и его поддержания необходимо присутствие в организме бледной трепонемы, это мнение трудно не признать обоснованным. Вместе с тем СР развивается далеко не у всех больных, а лишь у определенной их части, поэтому можно предположить, что в формировании СР, помимо
антигена, играют роль и другие экзогенные и эндогенные факторы, а также генетически обусловленные особенности иммунологического реагирования таких лиц
(Юцковский, 2000). Современная серологическая диагностика СР направлена на
выявление активности патологического процесса, но не раскрывает конкретную
причину позитивности специфических и неспецифических серологических реакций при отсутствии клинических данных.
Целью настоящей работы явилось проведение количественной оценки сывороточного содержания антигенов sCD50 и sHLA-I при серологической устойчивости после лечения сифилиса.
Материалом для исследования служили 49 образцов сыворотки крови от больных с диагнозом серорезистентность после лечения сифилиса. Для определения
растворимой формы дифференцировочного антигена CD50, а также растворимой
формы молекулы HLA I класса, ассоциированной с молекулой в 2 микроглобулина, были разработаны иммуноферментные тест-системы с использованием моноклональных и поликлональных антител (Птицына и др., 2000;
Вязьмина, 2000). В качестве контрольной группы использовали образцы сыворотки крови от здоровых доноров Нижегородской областной станции переливания
крови. Все исследуемые сыворотки крови были предварительно протестированы
на наличие антител класса IgG против белков Tr. рallidum. Определение антител
проводили с использованием рекомбинантных белков — аналогов мембранных
липопротеинов возбудителя сифилиса с молекулярными массами 41, 17, 47 кДа и
синтетического пептида 23–51, соответствующего фрагменту белка 41 кДа (Вязьмина и др., 1999). Все образцы сыворотки крови здоровых доноров не содержали
специфических антител класса IgG к возбудителю сифилиса.
Сравнение усредненного уровня sHLA-I в образцах сыворотки крови здоровых доноров и больных серорезистентными формами сифилиса выявило статистически достоверные различия в содержании данного показателя (табл.). У здоровых доноров уровень sHLA-I составил 998.5±115.5 U/ml, при серорезистентном
сифилисе –295.5±28.8 U/ml, что в 3.3 раза ниже нормальных донорских значений.
Детальный анализ результатов показал, что 87.8% образцов сыворотоки крови
больных серорезистентным сифилисом (n=43) имели пониженные значения уровня sHLA-I. Содержание сывороточного уровня sHLA-I у таких больных составляло 168.0±15.9 U/ml, что в 5.9 раза ниже нормы. Нормальные значения или значения в пределах нижней границы нормы были зарегистрированы у 4 больных
40
(8.2%). Повышенные количества sHLA-I, составляющие, в среднем,
2154.0±100.0 U/ml, содержали только 2 образца сыворотки крови (рис. 1). Следует
отметить, что по данным наших предыдущих исследований, уровень sHLA-I у
больных манифестными формами сифилиса статистически достоверно не отличается от группы здоровых доноров и составляет 759.1±150.0 U/ml (Вязьмина и др.,
2000).
Таблица
Уровень sCD50-антигена и sHLA-I в сыворотке крови
больных серорезистентным сифилисом (U/ml)
Антигены
sHLA-I
sCD50
Здоровые доноры
998.5±115.3
342.8±32.4
Больные
295.5±28.8
157.0±38.1
При определении содержания растворимого CD50 антигена в сыворотке крови
больных серорезистентными формами сифилиса и здоровых доноров также были
обнаружены различия в содержании данного антигена (табл.). У здоровых доноров его концентрация составила 342.8±32.4 U/ml (n=78), у больных серорезистентным сифилисом –157.0±38.1 U/ml, то есть, в сыворотке крови больных содержание sCD50 антигена было в 2.7 раза ниже нормального уровня. Нужно заметить, что по данным предыдущих исследований (Вязьмина и др., 2001) у больных
манифестными формами сифилиса средний уровень sCD50 антигена составил
644.7±86.0 U/ml, что почти вдвое выше нормального уровня и в 4 раза превышает
концентрацию sCD50 антигена в крови больных серорезистентным сифилисом.
4,00%
8,20%
87,80%
Больные СР с пониженным содержанием;
Больные СР с повышенным содержанием;
Больные СР с нормальным содержанием.
Рис. 1. Распределение больных СР по содержанию sHLA-I в сыворотке крови
41
Индивидуальный анализ результатов показал, что большая часть больных с
серологической резистентностью после лечения сифилиса (81.6%, n=40) имела
пониженный уровень sCD50 антигена. Концентрация sCD50 антигена у больных
серорезистентным сифилисом составила 40.2±12.2 U/ml, что в 8.5 раза ниже содержания sCD50 антигена у доноров. Нормальный уровень sCD50 антигена, составляющий 363.2±15.9 U/ml, имели 8.1% больных. Повышенный уровень sCD50
антигена, составляющий 1022.0±150.0 U/ml, имели 10.2% больных (рис. 2).
8,10%
10,20%
81,60%
Больные СР с пониженным содержанием sCD50;
Больные СР с повышенным содержанием sCD50;
Больные СР с нормальным содержанием sCD50.
Рис. 2. Распределение больных СР по содержанию sCD50 в сыворотке крови
На основании полученных результатов, а также результатов наших предыдущих исследований можно заключить, что сывороточное содержание sHLA-I и
sCD50 у больных серорезистентной формой сифилиса резко снижено по сравнению не только со здоровыми донорами, но и с больными другими формами сифилиса (Вязьмина и др., 2001). Об этом свидетельствует низкий средний уровень
этих антигенов и наибольший процент больных с пониженным содержанием исследуемых показателей в сыворотке крови.
Как известно, при сифилисе нет протективного иммунитета. Механизмы этого
явления до сих пор неизвестны. Кроме того, сифилис принадлежит к инфекциям,
хроническое течение которых вступает в несоответствие с иммунным ответом на
антигены возбудителя. Понятия «иммунитет» (т. е. резистентность к инфекции) и
«иммунные сдвиги» при сифилисе не совпадают, а иногда противоречат друг
другу. Кроме антительного ответа, при сифилисе формируется клеточный иммунитет, проявления которого обнаруживаются у больных вторичным, латентным и
третичным сифилисом. Однако молекулярные механизмы, обусловливающие
особенности иммунного ответа при сифилисе, а также при его различных формах,
не ясны.
Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы чаще
всего являются показателями степени активации клеток иммунной системы. С
другой стороны, они выполняют функцию ограничителей иммунного ответа.
42
Тормозя процессы активации, они выступают в роли эндогенных иммуномодуляторов, обеспечивающих физиологически корректное завершение активационных
событий (Новиков, 1996).
Мембранная форма CD50 антигена участвует в инициации иммунного ответа.
Увеличение в биологических жидкостях концентрации растворимой формы CD50
антигена может приводить к блокаде инициации иммунного ответа. Известно
также, что молекулы HLA I класса, презентируя чужеродные антигены, играют
центральную роль в инициации Т-клеточного ответа, а шеддинг этих антигенов с
поверхностных клеточных мембран приводит к угнетению некоторых звеньев
клеточного иммунитета. Резкое снижение сывороточного уровня антигенов
sCD50 и sHLA-I у больных серорезистентным сифилисом свидетельствует о нарушении молекулярных механизмов инициации и реализации иммунного ответа,
в которых принимают участие данные мембранные белки.
ЛИТЕРАТУРА
Вязьмина Е.С. Разработка иммуноферментного метода определения гетеродимера
« в 2 -микроглобулин-HLA-антигены I класса» // Сборник научных трудов молодых ученых
биологического факультета ННГУ им. Н.И.Лобачевского. Н. Новгород, 2000. С. 28.
Вязьмина Е.С., Фриго Н.В., Комарова В.Д. и др. Сравнительное исследование уровня
растворимых форм CD50 и CD95 антигенов в сыворотке крови больных сифилисом // Ферменты микроорганизмов. Казань, 2001. C. 73–74.
Вязьмина Е.С., Птицына Ю.С., Комарова В.Д. и др. Растворимая форма CD50 антигена у больных сифилисом // Тезисы докладов IV Российско-итальянской научной конференции: «Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика». СПб., 2000. C. 57.
Вязьмина Е.С., Пименов В.К., Фриго Н.В. и др. Образование антител к иммунодоминантному эпитопу белка Тр41 при различных формах сифилиса // Естественные факторы
защиты в профилактике и лечении экологических заболеваний. Н. Новгород, 1999. С. 23.
Милич М.В. О серологической устойчивости после лечения больных сифилисом //
Вестник дерматологии и венерологии. 1984. № 4. C. 23–27.
Новиков В.В. Растворимые формы дифференцировочных антигенов гемопоэтических
клеток // Гематология и трансфузиология, 1996. № 6. С. 40–43.
Овчинников Н.В., Васильев Т.В., Сазонова Л.В. К вопросу о серорезистентных формах сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. 1980. № 5. C. 68–71.
Птицына Ю.С., Матвеева Е.М. и др. Разработка и апробация иммуноферментной
тест-системы для определения растворимой формы CD50 антигена (ICAM-3) // Тезисы
докладов международной конференции, посвященной памяти академика РАМН и РАМТН
И.Н. Блохиной. М., 2000. С. 30
Романенко Г.Ф., Вербенко Е.В., Петрова И.Л. К вопросу о серорезистентном сифилисе // Вестник дерматологии и венерологии. 1983. № 6. C. 25–29.
Юцковский А.Д., Тихомирова Н.В., Стефанович А.Я. и др. К проблеме серологической резистентности при сифилитической инфекции // Инфекции, передаваемые половым
путем. 2000. № 1. C. 23–28.
Птицына Ю.С., Матвеева Е.М., Мартынова Т.Г и др. Растворимая форма CD50 антигена в сыворотках крови ВИЧ-инфицированных лиц и больных гепатитами В и С // Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. 2000. № 2. Т. 1. С. 47–47.
Bresciani A., Pirozzi G., Spera M. et al. Increased level of soluble serum HLA class I
antigens in patiens with systemic lupus erythematosus. Correlation with disiase activity // Tissue
Antigens. 1998. V. 5. P. 44–50.
43
Hagihara M., Shimura T., Yamamoto K. et al. Clinical significance of serum soluble HLA
class I antigens in systemic lupus erythematosus // Tokai J Experimental Clinical Medicine. 1993.
V. 18. P. 61–64.
Piazzola G., Tortorella C., Fiore G. et al. Immunoresponsiveness in chronic hepatitis C
patients: correlation between tissue and serum findings // Immunopharmacol Immunotoxicol.
1998. V. 20. P. 337–354.
Pino-Otin M. R., Vinas O., Fiente M. A. // Immunology. 1995. V. 154. P. 3015–3023.
Sakaguchi K., Koide N., Takenami T. et al. Soluble HLA class I antigens in sera of patients
with chronic hepatitis // Gastroenterology. 1992. V. 27. P. 206–211.
44