по сравнению с группой ВСВ(-) ... пролактина (9 % против 27 %, ...

по сравнению с группой ВСВ(-) ооцитов, прокультивированных без
пролактина (9 % против 27 %, Р<0,01). Прослежена динамика
ядерного созревания ВСВ(-) ооцитов в течение 30 часов. Показана
возможность достижения ооцитами стадии метафазы-II в средах,
кондиционированных клетками гранулезы с добавлением 50 нг/мл
пролактина (71 %). При этом доля ВСВ (-) ооцитов с дегенерацией
хроматина не превышала таковую в группе, где культивировали
ВСВ (+) ооциты (22 % против 24 %). Процент ВСВ(-) ооцитов с
высокой степенью экспансии клеток кумулюса увеличивается по
мере возрастания времени культивирования с 52 % (на 24 часа) до
88 % после 30 часов. Обнаружено, что уровень 8–32 клеточных
эмбрионов с признаками апоптоза хроматина, в группе, где ВСВ(+)
ооциты созревали в присутствии пролактина, на 27,8 % ниже, чем в
группе эмбрионов, полученных из ВСВ(-) ооцитов, созревших без
пролактина (23,2 % против 51 %, Р<0,001)
Е. В. Раменская
Создание системы молекулярно-генетической диагностики
типов папилломавируса, связанных с высоким риском
рака шейки матки
Human Papilloma virus (HPV) принадлежат к роду Papillomavirus,
к семейству Papovaviridae, вызывают развитие папиллом, в частности, генитальных. Human Papilloma virus является ДНК содержащим
вирусом, содержит двунитевую кольцевую ДНК, размер которой
около 8 тыс. пар оснований.
Жизненный цикл вируса папилломы человека неотъемлемо
связан с дифференцировкой клеток: ДНК папилломавируса находится в клетках базального эпителия, а зрелые вирусные частицы
диагностируются только в самых верхних слоях эпителия (в кератиноцитах на стадии терминальной дифференцировки). Вирусная ДНК
в зараженных клетках может персистировать как в эписомальной,
так и в интегрированной формах. Эписомальная форма папилломавируса (кольцевая двунитевая ДНК) способна встраиваться в клеточный геном. Встраивание вируса в ДНК происходит случайным
образом, т. е. локализация встраивания ДНК HPV в клеточную ДНК
не специфична. Чаще всего интегрированная форма ДНК вируса
папилломы человека диагностируется только на поздних стадиях
опухолевой трансформации. В опухолевых клетках чаще всего вирусные частицы не продуцируются.
224
Доброкачественное развитие вируса папилломы человека сопровождается незначительным числом койлоцитов, увеличение
ядер в койлоцитах небольшое, либо отсутствует.
При опухолевом превращении различимо атипичное развитие
клеток, койлоцитоз обычно располагается в верхней трети эпителия,
часто с очаговым его распространением. Установлено, что при высокой степени интеграции генома вируса атипичные клетки при диагностировании
с
помощью
PAP-теста
могут
фактически
отсутствовать.
Интеграция ДНК папилломавируса в геном эпителиальной клетки приводит к нарушению процесса ее дифференцировки и как
следствие к бластной трансформации.
Обычно делятся только клетки базального слоя эпителия, а
вновь образованные эпителиоциты, претерпевая ряд специальных
модификаций (дифференцировка, созревание), трансформируются
в чешуйчатые клетки поверхностных слоёв эпителия.
Клетки способны динамично делиться, что приводит к увеличению роста ткани и возникновению опухолевых образований, не
сходных по своему строению с клетками нормального эпителия,
например бородавки, кондиломы.
В работе использовали четыре типа папилломавируса человека, связанных с высоким риском рака шейки матки 16, 18, 31 и 45, а
также 11 типов вируса папилломы человека, не связанные с онкогенным риском 1, 2, 4, 6, 7, 8, 10, 11, 44, 63, 97.
В ходе исследования изучали расположения рамок считывания
(генов) на геноме папилломавируса.
Для исследования консерватизма папилломавируса использовали программу BLAST Align two (or more) sequence, находящуюся в геномной
базе
NCBI.
В
работе
сравнивали
геномные
последовательности типов папилломавируса высокого риска онкогенности 16, 18, 31 и 45 с геномом неонкогенных типов 1, 2, 4, 6, 7, 8,
10, 11, 44, 63, 97. Сравнение последовательностей было оптимизировано как more dissimilar sequences (discontiguous megablast). В ходе
исследования выяснили, что типы 18, 45, 97 вируса папилломы человека являются родственными, поэтому для них проводили дополнительное сравнение, оптимизированное как highly similar sequences
(megablast). Дизайн праймеров осуществляли с помощью программы
Primer 3, для работы использовали стандартные условия протекания
реакции. Праймеры создавали для индивидуальных участков генома
вируса папилломы человека. Специфичность олигонуклеотидовпраймеров проверяли с помощью программы Primer BLAST, расположенной в геномной базе ncbi. Для ВПЧ 16 и 31 было создано по
семь пар праймеров. Поскольку совпадение генома типов 18, 45 и 97
составила в среднем 97 %, для этих трех типов был создан общий
225
набор праймеров и по паре специфических праймеров для определения типов 18 и 45 вируса папилломы человека по отдельности.
Название праймера
HpV16_E6_1
HpV16_E7_1
HpV16_E4_1
HpV16_unik 3800-4250_1
HpV16_L1_1
HpV16_unik 7081-7381_1
HpV16_unik 7441-7861_1
HpV18_spes_1261-1460
HpV18_(45-97)_E6_111-580
HpV18_(45-97)_E7_591-900
HpV18_(45-97)_E1_921-1260
HpV18_(45-97)_3231-3600
HpV18_(45-97)_3601-3930
HpV18_(45-97)_5300-5540
HpV18_(45-97)_ 7141-7857
HpV_31_E6_11-400
HpV_31_E6-E7_401-700
HpV_31_E1_1201-1500
HpV_31_unik_3781-4200
HpV_31_L1_5101-5540
HpV_31_unik_7261-7561
t отжига
60.04
59.87
59.47
60.46
60.21
60.01
60.45
59.10
59.86
59.96
60.00
58.77
60.08
60.75
59.76
59.57
59.02
59.96
59.96
59.75
59.70
59.99
59.86
60.22
60.28
59.11
61.19
61.19
60.23
60.32
59.72
60.06
59.72
60.10
59.87
57.40
59.93
60.80
59.90
59.98
60.21
59.77
226
последовательность размер
праймера
продукта
ttgcttttcgggatttatgc
204
caggacacagtggcttttga
tttgcaaccagagacaactga
163
gcacaaccgaagcgtagagt
atgcgggtggtcaggtaata
161
tcgctggatagtcgtctgtg
cagcctctgcgtttaggtgt
245
aacgtttgtgtcgcattgtt
tcacatgcagcctcacctac
163
tgtatgcaccaccaaaagga
gctacacccaccacctcatc
218
gcatgacacaatagttacacaagc
gaattcggttgcatgctttt
150
acaatggaatggttggcaag
aaaaaggcggctgtttacaa
170
cgtctacactgctgttgttgc
atgctgcatgccataaatgt
213
gcccagctatgttgtggaat
gcatggacctaaggcaacat
246
aggtcgtctgctgagctttc
ggacgaaaatgcaacagaca 182
tgttttctttgctgcctcct
acatgggacaaaacggctac
190
ccgtgtcgtcactggtactg
gcgaaaacatagcgaccact
178
cattgtcatgtatcccaccaa
gcctgtaccatcgcgttcta
188
gggctgtgggtgatacaatg
aatcctccatcttgctgtgc
208
caattgttgtagcgcacctg
cctacagacgccatgttcaa
197
actccgtgtggtgtgtcgt
tcaaagaccgttgtgtccag
228
gctgtcgggtaattgctcat
gaaacgcagcagatggtaca
213
attgctttgaaatggcctaa
tgggttattgcaacctctcc
235
gcgttttgtagagcgtttgg
taggggcgtctgcaactact
208
ggcccagaaaatatgggaat
cctgctcctcccaatagtca
200
cgcagaactactgcatcagc
HpV_31_unik_7561-7912
HpV_45_spes
60.26
59.60
60.00
60.08
tgccaacattctggcttgta
catgacacaaccttggcagt
aatgtgccttgtggcatgta
gcacagcaaaatggaggatt
249
216
Проведенные в ходе выполнения данной работы исследования
позволили создать систему молекулярно-генетической диагностики
типов папилломавирусов, связанных с высоким риском рака шейки
матки.
В дальнейшем планируется проведение проверки специфичности
праймеров с помощью ПЦР и апробация системы для priming in situ.
Значимость priming in situ при диагностике папилломавируса заключается в способности определения с помощью данного метода
копии вируса, интегрированного в геном клетки, что способно дополнить существующий метод диагностики полимеразной цепной
реакции.
Методика рассчитана для применения в медицинских и университетских лабораториях, имеющих возможность проведения исследований ПЦР и PRINS.
С помощью этой диагностической системы можно получить точные результаты с незначительными затратами времени и средств.
Данная тест-система разработана для массового применения.
Использование тест-системы позволит диагностировать локализацию и способ персистирования папилломавируса типов 16, 18,
31, и 45 на цитологическом образце шейки матки.
В. С. Смирнова
Морозостойкость сортов и гибридов озимой пшеницы
Мягкая пшеница (Triticum aestivum L.) благодаря своей пластичности занимает огромный ареал распространения на всех пяти континентах земного шара и включает 381 разновидность и по
зерновому балансу занимает 29,1 % всего производства зерна в
мире, в СНГ – 42,2 %, а в России около 50 % (Рыбалкин, 1990).
Озимая пшеница – важнейшая продовольственная культура, занимающая значительный удельный вес в структуре зернового клина
России. Увеличение производства зерна и обеспечение полной потребности России в продуктах питания высокого качества является
важнейшей общегосударственной задачей. Озимая пшеница, как
правило, лучше яровых хлебов использует осенне-зимние запасы
влаги, легче переносит в осенне-зимне-весенний период снижение
температуры и способствует устойчивому производству зерна. Сорт,
как средство производства, с экономической и экологической точки
227