НОВОСТИ КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ КЛЕТОЧНАЯ БИОЛОГИЯ
реклама
6 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ÍÎÂÎÑÒÈ ÊËÅÒÎ×ÍÛÕ ÒÅÕÍÎËÎÃÈÉ ÊËÅÒÎ×ÍÀß ÁÈÎËÎÃÈß Òðàíñïëàíòàöèÿ íåéðîíîâ, ïîëó÷åííûõ èç ðåïðîãðàììèðîâàííûõ ôèáðîáëàñòîâ  ñâÿçè ñ òåì, ÷òî ñòàöèîíàðíûå êëåòî÷íûå ïîïóëÿöèè (íåéðîíû, êàðäèîìèîöèòû) íå èìåþò êàìáèàëüíûõ ðåçåðâîâ äëÿ îñóùåñòâëåíèÿ ïðîöåññîâ ðåïàðàòèâíîé ðåãåíåðàöèè, èññëåäóåòñÿ âîçìîæíîñòü ëå÷åíèÿ ïàöèåíòîâ ñ ïàòîëîãèåé ÖÍÑ èëè ìèîêàðäà ïîñðåäñòâîì êëåòî÷íîé òåðàïèè [1-4]. Ïðè ýòîì îñíîâíàÿ ïðîáëåìà çàêëþ÷àåòñÿ â ïîëó÷åíèè èììóíîñîâìåñòèìûõ êëåòîê, ñïîñîáíûõ ê äèôôåðåíöèðîâêå â ñîîòâåòñòâóþùèõ íàïðàâëåíèÿõ. Ïåðñïåêòèâíûì ðåøåíèåì ÿâëÿåòñÿ èñïîëüçîâàíèå ðåïðîãðàììèðîâàííûõ àóòîãåííûõ êëåòîê, ñõîäíûõ ñ ýìáðèîíàëüíûìè ñòâîëîâûìè êëåòêàìè (ÝÑÊ) [5, 6].  îáùåì âèäå îäíîé èç ìåòîäèê ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ÿâëÿåòñÿ òðàíñäóêöèÿ âèðóñíûõ òðàíñêðèïöèîííûõ ôàêòîðîâ â ãåíîì êëåòêè-ðåöèïèåíòà, àêòèâàöèÿ èõ è ïîñëåäóþùàÿ ñåëåêöèÿ êëåòîê, ýêñïðåññèðóþùèõ îñíîâíûå ãåíû ÝÑÊ, îòâåòñòâåííûå çà ñàìîîáíîâëåíèå è ïëþðèïîòåíòíîñòü Nanog è Oct4.  ìåòîäèêå äëÿ èíäóêöèè ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ îäíèìè èç ïåðâûõ áûëè ïðåäëîæåíû è èñïîëüçóþòñÿ ìíîãèìè èññëåäîâàòåëÿìè ÷åòûðå ôàêòîðà: Oct4, Sox2, c-Myc, Klf4 [5, 7]. Îäíàêî íåêîòîðûå àâòîðû ïðèìåíÿþò ðåòðîâèðóñíûå âåêòîðû ñ èíûì íàáîðîì ãåíîâ, â ÷àñòíîñòè, çàìåíÿÿ îïàñíûé â îíêîãåííîì îòíîøåíèè c-Myc [8] íà Nanog [9]. Âî ìíîãèõ ðàáîòàõ, êàñàþùèõñÿ ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ, àâòîðû â êà÷åñòâå îáîñíîâàíèÿ ñõîäñòâà ÝÑÊ è ïîëó÷åííûõ èíäóöèðîâàííûõ ïëþðèïîòåíòíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê (induced pluripotent stem cells, iPS cells) ïðèìåíÿþò ìåòîäèêè, ïîçâîëÿþùèå äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ êëåòêàì èññëåäóåìîé êóëüòóðû â êàðäèîìèîöèòû è íåéðîíû [6, 9]. Ëîãè÷åñêèì ïðîäîëæåíèåì ýòîãî ýòàïà èññëåäîâàíèÿ ÿâëÿëîñü áû ïðèìåíåíèå ìåòîäèê èíäóêöèè äèôôåðåíöèðîâêè êëåòîê ïî äàííûì íàïðàâëåíèÿì â èíòåðåñàõ ëå÷åíèÿ æèâîòíûõ ñ ìîäåëèðîâàííûìè çàáîëåâàíèÿìè ñåðäöà èëè ÖÍÑ. Óêàçàííîå íàïðàâëåíèå íàøëî îòðàæåíèå â ìàòåðèàëàõ èññëåäîâàíèÿ M. Wernig ñ ñîàâò., îïóáëèêîâàííûìè â æóðíàëå PNAS â 2008 ãîäó. Ïåðâûé ýòàï èññëåäîâàíèÿ çàêëþ÷àëñÿ â ðåïðîãðàììèðîâàíèè ìûøèíûõ ýìáðèîíàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ ïîñðåäñòâîì ðåàêòèâàöèè òðàíñäóöèðîâàííûõ ðåòðîâèðóñíûõ âåêòîðîâ, ñîäåðæàùèõ Oct4, Sox2, c-Myc, Klf4. Êóëüòóðà iPS êëåòîê õàðàêòåðèçîâàëàñü ñïîñîáíîñòüþ ôîðìèðîâàòü øàðîâèäíûå ýìáðèîèäíûå òåëà, à ïðè êóëüòèâèðîâàíèè â ñðåäå áåç ñûâîðîòêè ñ äîáàâëåíèåì FGF2 êëåòêè ïî ìîðôîëîãèè ñîîòâåòñòâîâàëè ïðåäøåñòâåííèêàì íåéðîíîâ è ýêñïðåññèðîâàëè òðàíñêðèïöèîííûå ôàêòîðû, õàðàêòåðíûå äëÿ íåéðàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê íåñòèí, Sox2 è Brn2. ×åðåç íåäåëþ êóëüòèâèðîâàíèÿ áåç FGF2, â êóëüòóðå îïðåäåëÿëèñü βIII-òóáóëèí-ïîçèòèâíûå íåéðîíû, GFAP-ïîëîæèòåëüíûå àñòðîöèòû è O4-ïîçèòèâíûå îëèãîäåíäðîöèòû. Ñ òå÷åíèåì âðåìåíè èíêóáèðîâàíèÿ â êóëüòóðå îïðåäåëÿëàñü âñå áîëåå âûðàæåííàÿ èììóíîãèñòîõèÊëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 ìè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ íà òèðîçèíãèäðîêñèëàçó (tyrosine hydroxylase, TH), ó÷àñòâóþùóþ â áèîñèíòåçå êàòåõîëàìèíîâ, è âåçèêóëÿðíûé òðàíñïîðòåð ìîíîàìèíîâ (vesicular monoamine transporter 2, VMAT2), îòâåòñòâåííûé çà èõ ïåðåìåùåíèå â ñèíàïòè÷åñêèå ïóçûðüêè. Èññëåäîâàòåëè òðàíñôåöèðîâàëè êëåòêè-ïðåäøåñòâåííèöû íåéðîíîâ ëåíòèâèðóñíûìè âåêòîðàìè ñ GFP (green fluorescent protein), ÷òîáû îöåíèòü ìèãðàöèþ êëåòîê â ÖÍÑ ïîñëå âíóòðèóòðîáíîãî ââåäåíèè êóëüòóðû â áîêîâûå æåëóäî÷êè ãîëîâíîãî ìîçãà 13-14-äíåâíûõ ìûøèíûõ ýìáðèîíîâ. Ñïóñòÿ 1-9 íåä. ìå÷åíûå êëåòêè áûëè îáíàðóæåíû â âèäå èíòðàâåíòðèêóëÿðíûõ êëàñòåðîâ, à òàêæå ñóáýïåíäèìàëüíî. Íàèáîëüøåå êîëè÷åñòâî GFP-ïîçèòèâíûõ êëåòîê îïðåäåëÿëîñü â ïðîçðà÷íîé ïåðåãîðîäêå, ïîëîñàòîì òåëå, ãèïîòàëàìóñå è ñðåäíåì ìîçãå, ìåíüøåå â îáîíÿòåëüíûõ ëóêîâèöàõ, êîðå è òàëàìóñå. Èññëåäóåìàÿ ïîïóëÿöèÿ ýêñïðåññèðîâàëà, êàê è â îïûòå in vitro, îñíîâíûå ìàðêåðû íåéðîíîâ (βIII-òóáóëèí, NeuN) è ãëèàëüíûõ êëåòîê (GFAP). Ïðèâèòûå ïðåäøåñòâåííèöû íåðâíûõ êëåòîê äàâàëè íà÷àëî ðàçëè÷íûì ïîäòèïàì íåéðîíîâ: ãëóòàìàòýðãè÷åñêèì, ÒÍ-ïîëîæèòåëüíûì êàòåõîëàìèíýðãè÷åñêèì. Èììóíîôëþîðåñöåíòíûé àíàëèç ìå÷åíûõ êëåòîê âûÿâèë èõ òèïè÷íîå íåéðîíàëüíîå ñòðîåíèå, à ïîñðåäñòâîì êîíôîêàëüíîé ìèêðîñêîïèè àâòîðû ïîêàçàëè íàëè÷èå ìíîãî÷èñëåííûõ äåíäðèòíûõ øèïèêîâ íà íåéðîëåììå èññëåäóåìûõ êëåòîê, à òàêæå íåïîñðåäñòâåííûé êîíòàêò ñ íèìè ñèíàïòîôèçèí-ïîçèòèâíûõ GFP-îòðèöàòåëüíûõ êëåòîê ðåöèïèåíòà. Ýëåêòðîôèçèîëîãè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ñóáâèòàëüíûõ ñðåçîâ ìîçãà, ïîëó÷åííûõ îò æèâîòíûõ, ïåðåíåñøèõ òðàíñïëàíòàöèþ, âûÿâèëî ïðîâåäåíèå ïîòåíöèàëîâ äåéñòâèÿ ìåæäó íàòèâíûìè è òðàíñïëàíòèðîâàííûìè íåéðîíàìè. Ïîòåíöèàë ïîêîÿ äåðèâàòîâ ââåäåííûõ êëåòîê íàõîäèëñÿ â èíòåðâàëå îò -55 ì äî -63 ìÂ, à ïîòåíöèàë äåéñòâèÿ äîñòèãàë 70-82 ìÂ, ÷òî íåñêîëüêî âûøå íîðìàëüíûõ çíà÷åíèé. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î ìîðôî-ôóíêöèîíàëüíîé èíòåãðàöèè òðàíñïëàíòèðîâàííûõ êëåòîê è íåéðîíîâ ðåöèïèåíòà. Èññëåäîâàòåëè ýêñòðàïîëèðîâàëè óñïåøíûå ðåçóëüòàòû íà÷àëüíîãî ýòàïà ðàáîòû â äîêëèíè÷åñêîå èññëåäîâàíèå íà ìûøàõ ñ äåãåíåðàòèâíî-äèñòðîôè÷åñêèì çàáîëåâàíèåì ÖÍÑ áîëåçíüþ Ïàðêèíñîíà. Ñ öåëüþ óñòðàíåíèÿ ïàòîëîãèè âçðîñëûì æèâîòíûì ñ óêàçàííûì çàáîëåâàíèåì, ñìîäåëèðîâàííûì ââåäåíèåì 6-ãèäðîêñèäîôàìèíà â ïîëîñàòîå òåëî, òðàíñïëàíòèðîâàëè êóëüòóðó äèôôåðåíöèðîâàííûõ íåðâíûõ êëåòîê ÷èñëåííîñòüþ 1-3×105 â ñðåäíåãî ìîçãà. Ïîñëå 4 íåä. ýêñïåðèìåíòà áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÒÍ-ïîçèòèâíûå êëåòêè â ãðóïïå îïûòà âûÿâëÿþòñÿ âî âñåì îáúåìå ñðåäíåãî ìîçãà, à â êîíòðîëå æèâîòíûå ñ áîëåçíüþ Ïàðêèíñîíà áåç òðàíñïëàíòàöèîííûõ ìåðîïðèÿòèé ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà ÒÍ íàáëþäàëàñü ëèøü â ÷àñòè ÷åðíîé ñóáñòàíöèè è Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé 7 â äîðñàëüíîì îòäåëå ïîëîñàòîãî òåëà. Êðîìå òîãî, ââåäåííûå íåéðîíû ýêñïðåññèðîâàëè òàêæå En1, VMAT2 è òðàíñïîðòåð äîôàìèíà. Ïðè ñòèìóëÿöèè àìôåòàìèíîì äâèæåíèÿ ìûøåé êîíòðîëüíîé ãðóïïû õàðàêòåðèçîâàëèñü âðàùåíèåì è óêëîíîì â ñòîðîíó, ñîîòâåòñòâóþùóþ ñòîðîíå ñðåäíåãî ìîçãà, â êîòîðîé áûëà íàðóøåíà ôóíêöèÿ äîôàìèíîâûõ íåéðîíîâ ïîñðåäñòâîì èíúåêöèè 6-ãèäðîêñèäîôàìèíà. Ó áîëüøèíñòâà æèâîòíûõ, ïåðåíåñøèõ òðàíñïëàíòàöèþ iPS-ïîëó÷åííûõ íåéðîíîâ, íàáëþäàëîñü âîññòàíîâëåíèå íîðìàëüíîãî õàðàêòåðà äâèæåíèé. Èññëåäîâàòåëè ïîêàçàëè ýêñïðåññèþ Ki-67 ìàðêåðà ïðîëèôåðàöèè â îáëàñòè ââåäåíèÿ êëåòîê, ñâÿçûâàÿ ýòîò ôàêò ñ ïðîëèôåðàöèîííîé àêòèâíîñòüþ òðàíñïëàíòèðîâàííîé êóëüòóðû, à òàêæå âûÿâèëè «òåðàòîìû», èñòî÷íèêîì êîòîðûõ, ïî ìíåíèþ àâòîðîâ, ÿâëÿëèñü íåìíîãî÷èñëåííûå íåäèôôåðåíöèðîâàííûå SSEA1-ïîëîæèòåëüíûå êëåòêè, ñîäåðæàùèåñÿ â êóëüòóðå òðàíñïëàíòèðóåìûõ íåéðîíîâ. Íàèáîëåå âåðîÿòíî, ÷òî ïðèñóòñòâèå íåäèôôåðåíöèðîâàííûõ êëåòîê áûëî ñâÿçàíî ñ íåäîñòàòî÷íîé èíäóêöèåé äèôôåðåíöèðîâêè ÷àñòè iPS êëåòîê ïî ëèíèè íåéðîíîâ. Ñ öåëüþ ïðåäóïðåæäåíèÿ ôîðìèðîâàíèÿ îïóõîëåé, èññëåäîâàòåëè â ïîñëåäóþùåì ïðîâîäèëè ñåëåêöèþ SSEA1-ïîçèòèâíûõ ýëåìåíòîâ èç âûñîêîñïåöèàëèçèðîâàííîé êóëüòóðû ñ ïîìîùüþ ôëóîðåñöåíòíî-àêòèâèðîâàííîãî êëåòî÷íîãî ñîðòèíãà, ÷òî ïðåäîòâðàùàëî îáðàçîâàíèå «òåðàòîì». Òàêèì îáðàçîì, èññëåäîâàòåëè ïðîäåìîíñòðèðîâàëè âîçìîæíîñòü ïðèìåíåíèÿ âûñîêîñïåöèàëèçèðîâàííûõ àóòîãåííûõ êëåòîê, ïîëó÷åííûõ ñ èñïîëüçîâàíèåì ÿâëåíèÿ ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ, â öåëÿõ óñòðàíåíèÿ äåãåíåðàòèâíîäèñòðîôè÷åñêîé ïàòîëîãèè ÖÍÑ.  öåëîì, ýòîò ïîäõîä ÿâëÿåòñÿ ïåðñïåêòèâíûì ïóòåì ðåøåíèÿ ïðîáëåìû ïîèñêà êëåòî÷íîãî ìàòåðèàëà, ïðåäíàçíà÷åííîãî äëÿ òðàíñïëàíòàöèè, ïðè óñëîâèè âîñïðîèçâîäèìîñòè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ðåçóëüòàòîâ. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Freed C.R., Greene P.E., Breeze R.E. et al. Transplantation of embryonic dopamine neurons for severe Parkinsons disease. N. Engl. J. Med. 2001; 344: 71019. 2. Lim J., Byeon Y., Ryu H. Transplantation of canine umbilical cord bloodderived mesenchymal stem cells in experimentally induced spinal cord injured dogs. J. Vet. Sci. 2007; 8(3): 27582. 3. Jawad H., Ali N.N., Lyon A.R. et al. Myocardial tissue engineering: a review. J. Tissue Eng. Regen. Med. 2007; 1(5): 327-42. 4. Wernig M., Zhao J., Pruszak J. Neurons derived from reprogrammed fibroblasts functionally integrate into the fetal brain and improve symptoms of rats with Parkinsons disease. PNAS 2008; 105(15): 585661. 5. Wernig M., Meissner A., Foreman R. et. al. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature 2007; 448(7151): 260-2. 6. Takahashi K., Yamanaka S., Tanabe K. et al. Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors. Cell 2007; 131(5): 861-72. 7. Takahashi K., Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell 2006; 126: 66376. 8. Okita K., Ichisaka T., Yamanaka S. Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells. Nature 2007; 448(7151): 3137. 9. Yu J., Vodyanik M.A., Thomson J.A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science 2007; 318(5858): 1917-20. 10. Hanna J., Wernig M., Markoulaki S. et al. Treatment of sickle cell anemia mouse model with iPS cells generated from autologous skin. Science 2007; 318: 1920-23. Ïîäãîòîâèë È.ß. Áîçî Ïî ìàòåðèàëàì Wernig M., Zhao J., Pruszak J. Neurons derived from reprogrammed fibroblasts functionally integrate into the fetal brain and improve symptoms of rats with Parkinsons disease. PNAS 2008; 105(15): 585661 Îáíîâëåíèå êëåòî÷íîãî ñîñòàâà êîñòíîãî ìîçãà Trp53//p16Ink4a//p19Arf/ ãåìîïîýòè÷åñêèìè êëåòêàìè-ïðåäøåñòâåííèöàìè Ãåìîïîýòè÷åñêèå ñòâîëîâûå êëåòêè (ÃÑÊ) ðåçèäåíòû êîñòíîãî ìîçãà, äàþùèå íà÷àëî ãåìîïîýòè÷åñêèì ìóëüòèïîòåíòíûì êëåòêàì-ïðåäøåñòâåííèöàì [1].  îòëè÷èå îò ÃÑÊ, ìóëüòèïîòåíòíûå êëåòêè-ïðåäøåñòâåííèöû íå îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ ê äëèòåëüíîìó ñàìîîáíîâëåíèþ ïîïóëÿöèè, è ïîñëå îïðåäåëåííîãî ÷èñëà äåëåíèé èõ ïðîëèôåðàöèÿ ïðåêðàùàåòñÿ [2]. Ìîëåêóëÿðíûå ìåõàíèçìû, îòâå÷àþùèå çà ýòîò ïðîöåññ, ÿñíû íå äî êîíöà [3], îäíàêî èçâåñòíà ñèñòåìà èç ÷åòûðåõ ãåíîâ, êîòîðàÿ ðåãóëèðóåò ñàìîîáíîâëåíèå ÃÑÊ è îãðàíè÷èâàåò ïðîëèôåðàöèþ èõ ïðîèçâîäíûõ. Ýòî, ïðåæäå âñåãî, ãåí Bmi-1 [4, 5], íåîáõîäèìûé äëÿ ñàìîîáíîâëåíèÿ ïîïóëÿöèè ÃÑÊ. Bmi-1 ÿâëÿåòñÿ íåãàòèâíûì ðåãóëÿòîðîì äâóõ ãåíîâ-ðåïðåññîðîâ ñàìîîáíîâëåíèÿ Trp53 è Cdkn2a, ïîñëåäíèé èç êîòîðûõ èìååò äâå àëüòåðíàòèâíûå ðàìêè ñ÷èòûâàíèÿ: p16Ink4a, p19Arf è, ñîîòâåòñòâåííî, äâà áåëêîâûõ ïðîäóêòà ñî ñõîäíûìè ôóíêöèÿìè [6]. Ýòè ãåíû ôóíêöèîíèðóþò íå òîëüêî â ÃÑÊ è êëåòêàõ ãåìîïîýòè÷åñêîãî ðÿäà. Íàïðèìåð, äëÿ íåéðîíàëüíûõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö ñ äåôèöèòîì ýêñïðåññèè Bmi-1 áûëî ïîêàçàíî, ÷òî èõ àêòèâíàÿ ïðîëèôåðàöèÿ è ñàìîîáíîâëåíèå ÷àñòè÷íî âîññòàíàâëèâàþòñÿ ïðè èñêóññòâåííîé ñóïðåññèè p16Ink4a/ è p19Arf/ [7]. Èññëåäîâàòåëè èç ãðóïïû O.O. Akala è ñîàâò. ïðåäïîëîæèëè, ÷òî ðàçíûå íàðóøåíèÿ ýêñïðåññèè óêàçàííûõ ãåíîâ ìîãóò áûòü ïðè÷èíîé âîçíèêíîâåíèÿ îíêîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé, ïðè êîòîðûõ íàáëþäàåòñÿ íåîãðàíè÷åííàÿ ïðîëèôåðàöèÿ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö ãåìîïîýòè÷åñêîãî ðÿäà è èõ ïîòîìêîâ. Äëÿ ïðîâåðêè ýòîãî ïðåäïîëîæåíèÿ áûëè ïðîàíàëèçèðîâàíû ýôôåêòû îäíîâðåìåííîé äåëåöèè ëîêóñîâ Trp53, p16Ink4a è p19Arf, à òàêæå äåëåöèé êàæäîãî èç ëîêóñîâ ïî îòäåëüíîñòè íà ñïîñîáíîñòü ÃÑÊ è ìóëüòèïîòåíòíûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö ê îáíîâëåíèþ êîñòíîãî ìîçãà ðåöèïèåíòîâ, ïîäâåðãøèõñÿ ðàäèîàêòèâíîìó èçëó÷åíèþ â ëåòàëüíûõ äîçàõ.  êëåòî÷íîì ñîñòàâå êîñòíîãî ìîçãà, ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè, ïå÷åíè è ñåëåçåíêè âñåõ ìóòàíòîâ íå áûëî âûÿâëåíî êàêèõ-ëèáî îòëè÷èé â ñðàâíåíèè ñ èíòàêòíûìè æèâîòíûìè. Òî åñòü äåëåöèè Trp53, p16Ink4a è p19Arf íå âëèÿþò íà äèôôåðåíöèðîâêó ÃÑÊ è íå ïîäàâëÿþò íè îäèí èç ðîñòêîâ Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 8 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ãåìîïîýçà. Îäíàêî ïðè òðàíñïëàíòàöèè êîñòíîãî ìîçãà ìóòàíòíûõ æèâîòíûõ ìûøàì-ðåöèïèåíòàì, ïîäâåðãøèìñÿ ëåòàëüíîé äîçå ðàäèîàêòèâíîãî èçëó÷åíèÿ, áûëè ïîëó÷åíû âåñüìà ëþáîïûòíûå ðåçóëüòàòû.  ñðàâíåíèè ñ êîñòíûì ìîçãîì ìûøåé äèêîãî òèïà, òðàíñïëàíòàöèÿ êîòîðîãî ñëóæèëà â êà÷åñòâå êîíòðîëÿ, âîññòàíîâëåíèå ãåìîïîýçà â ñëó÷àå òðàíñïëàíòàöèè êîñòíîãî ìîçãà Trp53//p16Ink4a// p19Arf/ æèâîòíûõ ïðîèñõîäèëî ïî êðàéíåé ìåðå â 10 ðàç áûñòðåå.  òî æå âðåìÿ âîññòàíîâëåíèå ãåìîïîýçà ïðè òðàíñïëàíòàöèè êîñòíîãî ìîçãà îò æèâîòíûõ, ìóòàíòíûõ ïî îäíîìó èëè äâóì èç ýòèõ ëîêóñîâ èìåëà âåñüìà íåçíà÷èòåëüíûå îòëè÷èÿ îò êîíòðîëÿ, íî òàêæå áûëà íåñêîëüêî âûøå. Èññëåäîâàòåëè çàäàëèñü âîïðîñîì, êàêèå èìåííî êëåòêè êîñòíîãî ìîçãà îòâå÷àþò çà îáíîâëåíèå ïóëà êðîâåòâîðíûõ êëåòîê. Ïîñêîëüêó â êîñòíîì ìîçãå ìóòàíòíûõ (Trp53// p16Ink4a//p19Arf/) æèâîòíûõ íå áûëî îòìå÷åíî ðåçêîãî óâåëè÷åíèÿ ÷èñëà ÃÑÊ, O.O. Akala è ñîàâò. ïðåäïîëîæèëè, ÷òî íåêàÿ ïîïóëÿöèÿ áîëåå äèôôåðåíöèðîâàííûõ êëåòîê ïðèîáðåòàåò ñâîéñòâà ñòâîëîâûõ. ×òîáû ïðîâåðèòü ýòî, ëåòàëüíî îáëó÷åííûì ðåöèïèåíòàì áûëè ïðîâåäåíû îòäåëüíûå òðàíñïëàíòàöèè ëèáî ÃÑÊ (êëåòêè ñ ôåíîòèïîì CD150+/Sca-1+/c-kit+/CD48/Lin), ëèáî ìóëüòèïîòåíòíûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ ïðåäøåñòâåííèêîâ (êëåòêè ñ ôåíîòèïîì CD150/Sca-1+/c-kit+/CD48/Lin) îò ìóòàíòíûõ ïî âñåì òðåì ãåíàì æèâîòíûõ. Èíäèêàòîðîì äîëãîâðåìåííîãî âîññòàíîâëåíèÿ êîñòíîãî ìîçãà ñëóæèëè ïîêàçàòåëè êîëè÷åñòâ ëèìôîöèòîâ, ãðàíóëîöèòîâ è ìîíîöèòîâ [1]. Êàê ÃÑÊ, òàê è Trp53//p16Ink4a//p19Arf/ ìóëüòèïîòåíòíûå ãåìîïîýòè÷åñêèå êëåòêè-ïðåäøåñòâåííèöû îáåñïå÷èâàëè äëèòåëüíîå ôóíêöèîíèðîâàíèå êîñòíîãî ìîçãà îáëó÷åííûõ ðåöèïèåíòîâ, ñîõðàíÿÿñü â èõ îðãàíèçìå äî 12 ìåñ.  ñëó÷àå òðàíñïëàíòàöèè ÃÑÊ è ìóëüòèïîòåíòíûõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö äèêîãî òèïà äëèòåëüíîå âîññòàíîâëåíèå ôóíêöèé êîñòíîãî ìîçãà îñóùåñòâëÿëàñü òîëüêî ÃÑÊ. ×òîáû îïðåäåëèòü ïðè÷èíó, ïî êîòîðîé ïðîèñõîäèëî óâåëè÷åíèå âðåìåíè æèçíè ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö â ñëó÷àå äåëåöèè ïî òðåì ëîêóñàì, áûëî ïðîâåäåíî òðè ñåðèè ýêñïåðèìåíòîâ in vitro, â êîòîðûõ áûëè îïðåäåëåíû Äåïëåöèÿ Ink4a/Arf è Trp53 ñíèìàåò îãðàíè÷åíèÿ, ëèìèòèðóþùèå ñàìîîáíîâëåíèå ó ìóëüòèïîòåíòíûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö (ÌÃÊÏ), íî íå ó ìèåëîèäíûõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö (ÌÊÏ). Bmi1 ýïèãåíåòè÷åñêè ðåïðåññèðóåò Ink4a/Arf è Trp53, ÷òî íåîáõîäèìî äëÿ ñàìîîáíîâëåíèÿ ÃÑÊ. Íåäîñòàòî÷íàÿ àêòèâíîñòü Bmi1 ó ÌÃÊÏ è ÌÊÏ ëèìèòèðóåò ñàìîîáíîâëåíèå äàííûõ ïîïóëÿöèé êëåòîê. Ó êëåòîê ñ òðîéíîé ìóòàöèåé äåïëåöèÿ ëîêóñîâ Ink4a/Arf è Trp53 ñíèìàåò îãðàíè÷åíèÿ íà ñàìîîáíîâëåíèå ó ÌÃÊÏ, íî íå ó ÌÏÊ, ÷òî ñâèäåòåëüñòâóåò î íàëè÷èè äîïîëíèòåëüíûõ ìåõàíèçìîâ, îãðàíè÷èâàþùèõ ñàìîîáíîâëåíèå ÌÏÊ Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé óðîâíè ïðîëèôåðàöèè è êëîíîãåííûé ïîòåíöèàë ìóòàíòíûõ ìóëüòèïîòåíòíûõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö â ñðàâíåíèè ñ ÃÑÊ. Óðîâåíü ïðîëèôåðàöèè ìóòàíòíûõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö è ÃÑÊ íåñóùåñòâåííî îòëè÷àëñÿ îò óðîâíåé ïðîëèôåðàöèè êëåòîê äèêîãî òèïà, â òî âðåìÿ êàê â ñëó÷àå òðîéíîé ìóòàöèè çàìåòíî ñíèæàëîñü ÷èñëî àïîïòîòè÷åñêèõ êëåòîê, ÷òî áûëî ïîêàçàíî îêðàøèâàíèåì àííåêñèíîì-V. Ñïîñîáíîñòü æå ôîðìèðîâàòü ãåìîïîýòè÷åñêèå êîëîíèè ó ìóòàíòíûõ êëåòîê áûëà ñóùåñòâåííî ïîâûøåíà â ñðàâíåíèè ñ êëåòêàìè äèêîãî òèïà. Áûëî äîïîëíèòåëüíî ïîêàçàíî, ÷òî ìóòàíòíûå Sca-1+/c-kit+/CD150/CD48/Lin êëåòêè ñïîñîáíû îòâå÷àòü íà ñòèìóëÿöèþ Flt-3-ëèãàíäîì. Ýòî äîêàçûâàåò, ÷òî â ñâÿçè ñ ìóòàöèåé îíè íå ïðèîáðåòàþò ñâîéñòâ ÃÑÊ, êîòîðûå íå ñïîñîáíû ðåàãèðîâàòü íà Flt-3-ëèãàíä. Ìóòàöèÿ Trp53//p16Ink4a//p19Arf/ íå ïðèâîäèò ê ïðèîáðåòåíèþ äðóãèìè, áîëåå äèôôåðåíöèðîâàííûìè êëåòêàìè ñïîñîáíîñòè ê äëèòåëüíîìó âîññòàíîâëåíèþ êîñòíîãî ìîçãà. Àâòîðû ïîêàçàëè ýòî, òðàíñïëàíòèðóÿ îáëó÷åííûì ðåöèïèåíòàì ìóòàíòíûå êëåòêè-ïðåäøåñòâåííèöû ìèåëîèäíîãî ëèáî ãðàíóëîöèòàðíî-ìàêðîôàãàëüíîãî ðÿäà. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Morrison S.J., Weissman I.L. The long-term repopulating subset of hematopoietic stem cells is deterministic and isolatable by phenotype. Immunity 1994; 1: 661-73. 2. Clarke M.F., Fuller M. Stem cells and cancer: two faces of eve. Cell 2006; 124: 1111-5. 3. Morrison S.J. A genetic determinant that specifically regulates the frequency of hematopoietic stem cells. J. Immunol. 2002; 168: 635-42. 4. Park I., Qian D., Kiel M. et al. Bmi-1 is required for maintenance of adult self-renewing haematopoietic stem cells. Nature 2003; 423: 302-5. 5. Jacobs J.J., Kieboom K., Marino S. et. al. The oncogene and Polycombgroup gene bmi-1 regulates cell proliferation and senescence through the ink4a locus. Nature 1999; 397: 164-8. 6. Molofsky A., Pardal R., Iwashita T. et al. Bmi-1 dependence distinguishes neural stem cell selfrenewal from progenitor proliferation. Nature 2003; 425: 962-7. 7. Molofsky A.V., He S., Bydon M. et. al. Bmi-1 promotes neural stem cell 9 Âîçìîæíî, èåðàðõè÷åñêàÿ ñèñòåìà êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö ðàçíûõ óðîâíåé äèôôåðåíöèðîâêè âîçíèêëà â ýâîëþöèè êàê çàùèòà îò íàêîïëåíèÿ ïðîëèôåðèðóþùèìè ïîïóëÿöèÿìè êëåòîê îíêîãåííûõ ìóòàöèé. Äåéñòâèòåëüíî, óòðàòà ãåíîâ, îòâå÷àþùèõ çà ïîäàâëåíèå ñàìîîáíîâëåíèÿ ïîïóëÿöèè ÃÑÊ, ïðèâîäèëà ê âîññòàíîâëåíèþ ýòîãî ñâîéñòâà ó èõ ïîòîìñòâà. Îäíàêî áîëåå äèôôåðåíöèðîâàííûå êëåòêè ñ òàêîé æå ìóòàöèåé âñå ðàâíî èìåëè îãðàíè÷åííûé ñðîê æèçíè, íå ïðèîáðåòàÿ îíêîãåííîãî ïîòåíöèàëà. Ýòî ñâèäåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî ñóùåñòâóþò äðóãèå ãåíåòè÷åñêèå ïóòè îçëîêà÷åñòâëåíèÿ êàê ãåìîïîýòè÷åñêèõ, òàê è ïðî÷èõ êàìáèàëüíûõ êëåòîê òêàíåé îðãàíèçìà. Ðåçóëüòàòû ýòîé ðàáîòû âåñüìà èíòåðåñíû è îáúÿñíÿþò, ïî êàêîé ïðè÷èíå ïðè ðàçâèòèè íåêîòîðûõ îíêîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé íàðóøàåòñÿ ýêñïðåññèÿ ãåíîâ Trp53 è Cdkn2a [8-11]. Àâòîðû ñ÷èòàþò, ÷òî îíè ìîãóò áûòü èñïîëüçîâàíû â ðàçðàáîòêå ãåííîé òåðàïèè îíêîçàáîëåâàíèé.  òî æå âðåìÿ, òðåáóþòñÿ äàëüíåéøèå èññëåäîâàíèÿ â äàííîì íàïðàâëåíèè, òàê êàê ïîëíàÿ êàðòèíà ãåíåòè÷åñêîãî êîíòðîëÿ ñâîéñòâ ÃÑÊ è èõ ïîòîìñòâà îñòàåòñÿ íåÿñíîé. self-renewal and neural development but not mouse growth and survival by repressing the p16Ink4a and p19Arf senescence pathways. Genes Dev. 2005; 19: 1432-7. 8. Berggren P., Kumar R., Sakano S. et al. Detecting homozygous deletions in the CDKN2A(p16INK4a)/ARF(p14ARF) gene in urinary bladder cancer using real-time quantitative PCR. Clin. Cancer Res. 2003; 9: 235-42. 9. Esteller M., Guo M., Moreno V. et al. Hypermethylation-associated inactivation of p14ARF is independent of p16INK4a methylation and p53 mutational status. Cancer Res. 2000; 60: 129-33. 10. Weber A., Bellmann U., Bootz F. et. al. INK4a-ARF alterations and p53 mutations in primary and consecutive squamous cell carcinoma of the head and neck. Virchows Arch. 2002; 441: 133-42. 11. Burke L., Flieder D., Guinee D. et al. Prognostic implications of molecular and immunohistochemical profiles of the Rb and p53 cell cycle regulatory pathways in primary non-small cell lung carcinoma. Clin. Cancer Res. 2005; 11: 232-41. Ïîäãîòîâèëà À.Ñ. Ãðèãîðÿí Ïî ìàòåðèàëàì: Akala O.O., Park I.-K., Qian D. et al. Long-term haematopoietic reconstitution by Trp53//p16Ink4a//p19Arf/ multipotent progenitors. Nature 2008; 453(7192): 228-32 uPA è uPAR îïîñðåäóþò òðîïèçì ñòâîëîâûõ êëåòîê ê çëîêà÷åñòâåííûì íîâîîáðàçîâàíèÿì Äåòàëèçàöèÿ ìåõàíèçìîâ, êîíòðîëèðóþùèõ ïðîöåññû ìèãðàöèè êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö â îðãàíèçìå, ÿâëÿåòñÿ âàæíîé òåîðåòè÷åñêîé ïðåäïîñûëêîé äëÿ óñïåøíîãî ïðèìåíåíèÿ êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé â ìåäèöèíå. Óñòàíîâëåíî, ÷òî êàê ìóëüòèïîòåíòíûå ìåçåíõèìàëüíûå ñòðîìàëüíûå êëåòêè (ÌÌÑÊ), òàê è ãåìîïîýòè÷åñêèå ñòâîëîâûå êëåòêè (ÃÑÊ) íàõîäÿòñÿ íå â ñòàöèîíàðíîì, à â ïîñòîÿííîì äèíàìè÷åñêîì ñîñòîÿíèè ìèãðèðóþò ìåæäó îñíîâíûì äåïî êîñòíûì ìîçãîì è ïåðèôåðè÷åñêèìè òêàíÿìè [1, 2].  ýòîé ñâÿçè, óïðàâëåíèå ìåõàíèçìàìè õåìîòàêñèñà ñòâîëîâûõ êëåòîê è êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö ìîæåò ÿâëÿòüñÿ ýôôåêòèâíûì ïîäõîäîì äëÿ îïòèìèçàöèè ëå÷åíèÿ ïàöèåíòîâ ñ ðàçëè÷íûìè äåãåíåðàòèâíî-äèñòðîôè÷åñêèìè çàáîëåâàíèÿìè, òðàâìàòè÷åñêèìè ïîâðåæäåíèÿìè è íîâîîáðàçîâàíèÿìè. Ñïîñîáíîñòü ñòâîëîâûõ êëåòîê ê íàïðàâëåííîìó õåìîòàêñèñó â îáëàñòü ëîêàëèçàöèè ïàòîëîãè÷åñêîãî î÷àãà, òàêîãî êàê âîñïàëåíèå èëè íîâîîáðàçîâàíèå, íàçûâàåòñÿ ïàòîòðîïèçìîì è õàðàêòåðíà äëÿ íåéðàëüíûõ [3, 4] è ãåìîïîýòè÷åñêèõ ñòâîëîâûõ êëåòîê [5], ÌÌÑÊ [6], êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö ýíäîòåëèÿ [7]. Åäèíîãî ïðåäñòàâëåíèÿ î áèîëîãè÷åñêîé çíà÷èìîñòè ýòîãî ïðîöåññà íåò, îäíàêî ïîêàçàíî ó÷àñòèå ìèãðèðóþùèõ íåäèôôåðåíöèðîâàííûõ êëåòîê â ïðîöåññàõ ðåãåíåðàöèè [8], àíãèîãåíåçà [7], à òàêæå â ôîðìèðîâàíèè ñòðîìû îïóõîëåé [9].  íàñòîÿùåå âðåìÿ àêòèâíî ïðîâîäÿòñÿ èññëåäîâàíèÿ, íàöåëåííûå íà èäåíòèôèêàöèþ áèîõèìè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ, ðåãóëèðóþùèõ õåìîòàêñèñ ñòâîëîâûõ êëåòîê è êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö. Íàïðèìåð, äëÿ ÃÑÊ óñòàíîâëåíû îñè õåìîòàêñèñà SDF-1/CXCR4, SCF/c-Kit, VEGF/VEGFR, HGF/c-Met, âîâëå÷åííûå â ïðîöåññû ìèãðàöèè ê î÷àãàì âîñïàëåíèÿ. Îñîáûé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿåò òðîïíîñòü ÌÌÑÊ è íåéðàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ê íîâîîáðàçîâàíèÿì.  ÷àñòíîñòè, èñÊëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 10 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ñëåäóåòñÿ èäåÿ àäðåñíîé äîñòàâêè ëåêàðñòâåííûõ âåùåñòâ, «íàãðóæåííûõ» íà êëåòêè-ïðåäøåñòâåííèöû, ê íîâîîáðàçîâàíèÿì (ñì. ðèñ.) [10].  ýòîé ñâÿçè, àêòèâíî âûÿâëÿþòñÿ áèîõèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû, îáóñëàâëèâàþùèå ÿâëåíèå ïàòîòðîïèçìà.  íàñòîÿùèé ìîìåíò óñòàíîâëåíî, ÷òî õåìîàòòðàêòàíòàìè ïðåäøåñòâåííèö êëåòîê íåðâíîé òêàíè ÿâëÿþòñÿ VEGF, SDF-1, SCF, êîòîðûå ïðîäóöèðóþòñÿ îïóõîëåâûìè êëåòêàìè [10-12]. Äàëüíåéøåå ðàçâèòèå ïðåäñòàâëåíèé î ìåõàíèçìàõ ïàòîòðîïèçìà ñòâîëîâûõ êëåòîê ñâÿçàíî ñ ìàòåðèàëàìè èññëåäîâàíèÿ M. Gutova ñ ñîàâò., îïóáëèêîâàííûìè â æóðíàëå Stem Cell (2008).  ðàáîòå ïîêàçàíà ðîëü óðîêèíàçíîãî àêòèâàòîðà ïëàçìèíîãåíà (urokinase plasminogen activator, uPA) è åãî ðåöåïòîðà êàê èíäóêòîðîâ ìèãðàöèè ôåòàëüíûõ ìåçåíõèìíûõ è èììîðòàëèçèðîâàííûõ íåéðàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê. Ðåöåïòîð uPA (CD 87) ÷åðåç G-áåëîê ñâÿçàí ñ âèòðîíåêòèíîì; âçàèìîäåéñòâóåò ñ èíòåãðèíàìè, ÷òî îáóñëîâëèâàåò åãî ó÷àñòèå â ïðîöåññàõ õîóìèíãà, àäãåçèè, ïðîëèôåðàöèè è àïîïòîçà [13]. Íà ïåðâîì ýòàïå èññëåäîâàòåëè ìåòîäîì ïðîòî÷íîé öèòîìåòðèè îïðåäåëèëè óðîâåíü ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà uPA â ðàçíûõ îïóõîëÿõ. Ê ïåðâîé ãðóïïå îòíåñëè àãðåññèâíûå íîâîîáðàçîâàíèÿ, ó 20% êëåòîê êîòîðûõ íàáëþäàëàñü ïîëîæèòåëüíàÿ ðåàêöèÿ íà CD87 (ìóëüòèôîðìíàÿ ãëèîáëàñòîìà, íåéðîáëàñòîìà, êàðöèíîìà ìîëî÷íîé æåëåçû, ïðîñòàòû, êðóïíîêëåòî÷íûé ðàê ëåãêîãî), êî âòîðîé îïóõîëè ñ íèçêèì óðîâíåì ýêñïðåññèè ðåöåïòîðà uPA îêîëî 5 % (êàðöèíîìà òîëñòîé êèøêè, ìåòàñòàòè÷åñêàÿ íåéðîáëàñòîìà, ìåëêîêëåòî÷íûé ðàê ëåãêîãî). In vitro îöåíèâàëè ìèãðàöèþ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö ñ ïîìîùüþ äâóõêàìåðíîé êóëüòóðàëüíîé ñèñòåìû. Êîíäèöèîíèðîâàííàÿ ñðåäà, â êîòîðîé ðàíåå èíêóáèðîâàëèñü îïóõîëåâûå êëåòêè, ñåêðåòèðóþùèå uPA è ðàñòâîðèìóþ ôðàêöèþ åãî ðåöåïòîðà, äîáàâëÿëàñü â íèæíþþ êàìåðó, à èññëåäóåìûå êëåòêè âûñåâàëèñü íà ïîðèñòóþ ïåðåãîðîäêó, ðàçäåëÿâøóþ îòäåëû ñèñòåìû. Íàèáîëüøåå êîëè÷åñòâî ñòâîëîâûõ êëåòîê ïåðåìåñòèëîñü â íèæíþþ êàìåðó â ýêñïåðèìåíòå ñî ñðåäîé îò ëèíèé ìàëèãíèçèðîâàííûõ êëåòîê, âûñîêî ýêñïðåññèðóþùèõ CD87. Èíòåðåñíî, ÷òî áîëüøîå êîëè÷åñòâî êëåòîê, îòðåàãèðîâàâøèõ íà ïðèñóòñòâèå õåìîàòòðàêòàíòà, îïðåäåëÿëîñü ñðåäè ïîïóëÿöèè íåéðàëüíûõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö. Äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ îñíîâíîé ðîëè uPA è åãî ðåöåïòîðà â õîóìèíãå àâòîðû îïðåäåëÿëè ñîäåðæàíèå èññëåäóåìûõ õåìîàòòðàêòàíòîâ â êóëüòóðàëüíîé ñðåäå. Áûëî âûÿâëåíî Àäðåñíîå âîçäåéñòâèå ïðîòèâîîïóõîëåâîãî ëåêàðñòâåííîãî ïðåïàðàòà, îáóñëîâëåííîå õåìîòàêñèñîì ãåíåòè÷åñêè ìîäèôèöèðîâàííûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê, ýêñïðåññèðóþùèõ ôåðìåíò, êîòîðûé ó÷àñòâóåò â ìåòàáîëèçìå ëåêàðñòâåííîãî âåùåñòâà Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ïðàêòè÷åñêè ïîëíîå ñîîòâåòñòâèå âåëè÷èíû êîíöåíòðàöèè uPA è åãî ðåöåïòîðà â ñðåäå ñ óðîâíåì ýêñïðåññèè CD87 îïóõîëåâûìè êëåòêàìè. Èñêëþ÷åíèå ñîñòàâëÿëà ëèíèÿ êëåòîê íåéðîáëàñòîìû, âûñîêî ýêñïðåññèðóþùàÿ ðåöåïòîð uPA, íî â ñðåäå êîòîðîé íàáëþäàëîñü íèçêîå ñîäåðæàíèå ñîîòâåòñòâóþùèõ õåìîêèíîâ. Îäíàêî áûëî âûÿâëåíî çíà÷èòåëüíîå ñîäåðæàíèå HGF è MCP-1, ðàíåå ïðèçíàííûõ õåìîàòòðàêòàíòàìè ñòâîëîâûõ êëåòîê [14, 15]. Âî âòîðîé ÷àñòè èññëåäîâàíèÿ àâòîðû ñòðåìèëèñü ïîäòâåðäèòü îïðåäåëÿþùóþ ðîëü uPA è åãî ðåöåïòîðà â ìîáèëèçàöèè ñòâîëîâûõ êëåòîê è êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö. Ñ ýòîé öåëüþ îíè òðàíñôåöèðîâàëè êëåòêè ìåòàñòàòè÷åñêîé íåéðîáëàñòîìû (íèçêèé óðîâåíü ýêñïðåññèè CD87) âèðóñíûìè âåêòîðàìè, ñîäåðæàùèìè ãåíû, îòâåòñòâåííûå çà ñèíòåç uPA è åãî ðåöåïòîðà. Ýòî ïðèâåëî ê ñâåðõýêñïðåññèè õåìîêèíîâ, ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Ozaki Y., Nishimura M., Sekiya K. Comprehensive analysis of chemotactic factors for bone marrow mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev. 2007; 16(1): 119-29. 2. Wright D.E., Wagers A.J., Gulati A.P. Physiological Migration of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells. Science 2001; 294(5548): 1933-6. 3. Gutova M., Najbauer J., Frank R. uPA and uPAR Mediate Human Stem Cell Tropism to Malignant Solid Tumors. Stem Cells 2008; 26(6): 1406-13 4. Fodde R. Stem Cells and Metastatic Cancer: Fatal Attraction? PLoS Med. 2006; 3(12): 482. 5. Selleri C., Montuori N., Ricci P. et al. Involvement of the urokinase-type plasminogen activator receptor in hematopoietic stem cell mobilization. Blood 2005; 105(5): 2198-205. 6. Nakamizo A., Marini F., Amano T. Human Bone MarrowDerived Mesenchymal Stem Cells in the Treatment of Gliomas. Cancer Res. 2005; 65(8): 3307-18. 7. Moore X.L., Lu J., Sun L. et al. Endothelial progenitor cells «homing» specificity to brain tumors. Gene Ther. 2004; 11(10): 811-8. 8. Goldman S. Stem and progenitor cell-based therapy of the human central nervous system. Nat. Biotechnol. 2005; 23(7): 862-71. 11 ïîäòâåðæäåííîé ñ ïîìîùüþ ÏÖÐ ñ îáðàòíîé òðàíñêðèïöèåé, è ê òðåõ- è äâóõêðàòíîìó óñèëåíèþ ìèãðàöèè íåéðàëüíûõ è ìóëüòèïîòåíòíûõ ìåçåíõèìàëüíûõ ñòðîìàëüíûõ êëåòîê ñîîòâåòñòâåííî. Òàêèì îáðàçîì, áûëà âûÿâëåíà åùå îäíà ëèãàíä-ðåöåïòîðíàÿ îñü, îòâåòñòâåííàÿ çà òðîïíîñòü ñòâîëîâûõ êëåòîê ê îïóõîëÿì uPA/uPAR. Ýêñïðåññèÿ CD87 òàêæå õàðàêòåðíà äëÿ ãðàíóëîöèòîâ, ìîíîöèòîâ, NK-êëåòîê, ÃÑÊ êîòîðûå âìåñòå ñ êëåòêàìè-ïðåäøåñòâåííèöàìè ìèãðèðóþò â îáëàñòü ëîêàëèçàöèè íîâîîáðàçîâàíèé. Ñ ó÷åòîì ñõîäíîé ðîëè îïèñàííûõ â áîëåå ðàííèõ ðàáîòàõ õåìîàòòðàêòàíòîâ (VEGF, SDF-1, SCF, HGF, MCP-1) ìîæíî çàêëþ÷èòü, ÷òî íåò åäèíîãî ìåõàíèçìà, îáóñëîâëèâàþùåãî ïàòîòðîïèçì ê îïóõîëÿì. Ïî âñåé âèäèìîñòè, ïðîöåññ êîíòðîëèðóåòñÿ ìíîæåñòâîì ôàêòîðîâ. 9. Studeny M., Marini F.C., Dembinski J.L. Mesenchymal stem cells: potential precursors for tumor stroma and targeted-delivery vehicles for anticancer agents. Journal of the National Cancer Institute 2004; 96(21): 1593-603. 10. Aboody K.S., Najbauer J., Schmidt N.O. Targeting of melanoma brain metastases using engineered neural stem/progenitor cells. Neur. Oncol. 2006; 8(2): 119-26. 11. Imitola J., Raddassi K., Park K.I. et al. Directed migration of neural stem cells to sites of CNS injury by the stromal cell-derived factor 1alpha/CXC chemokine receptor 4 pathway. PNAS 2004; 101(52): 18117-22. 12. Schmidt N.O., Przylecki W., Yang W. et al. Brain tumor tropism of transplanted human neural stem cells is induced by vascular endothelial growth factor. Neoplasia 2005; 7(6): 623-9. 13. Alfano D., Franco P., Vocca I. et al. The urokinase plasminogen activator and its receptor: role in cell growth and apoptosis. Thromb. Haemost. 2005; 93(2): 205-11. 14. Palumbo R., Bianchi M.E. High mobility group box 1 protein, a cue for stem cell recruitment. Biochem. Pharmacol. 2004; 68(6): 1165-70. 15. Widera D., Holtkamp W., Entschladen F. et al. MCP-1 induces migration of adult neural stem cells. Eur. J. Cell Biol. 2004; 83(8): 381-7. Ïîäãîòîâèë È.ß. Áîçî Ïî ìàòåðèàëàì: Gutova M., Najbauer J., Frank R. uPA and uPAR mediate human stem cell tropism to malignant solid tumors. Stem Cells 2008; 26(6): 1406-13 Èçìåíåíèÿ â êëàññè÷åñêîé ìîäåëè ãåìîïîýçà îáíàðóæåí ìèåëîèäíûé ïîòåíöèàë ðàííèõ ïðåäøåñòâåííèö Ò-êëåòîê Íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî äèôôåðåíöèðîâêà T-ëèìôîöèòîâ ñ÷èòàåòñÿ õîðîøî èçó÷åííîé, îòíîñèòåëüíî ýòîãî ïðîöåññà â ëèòåðàòóðå îñòàåòñÿ íåìàëî ïðîòèâîðå÷èé. Ò-ëèìôîöèòû äèôôåðåíöèðóþòñÿ â òèìóñå èç ETP-êëåòîê (îò earliest thymic progenitors), êîòîðûå òàêæå íàçûâàþò DN1-êëåòêè (îò double-negative cell), ìèãðèðóþùèõ â òèìóñ èç êðàñíîãî êîñòíîãî ìîçãà (ÊÊÌ). Äèôôåðåíöèðîâî÷íûé ïîòåíöèàë ETP-êëåòîê äî íàñòîÿùåãî âðåìåíè íå áûë èçâåñòåí. Áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ETP-êëåòêè îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â Ò-ëèìôîöèòû è NK-êëåòêè, à èõ îòäåëüíûå ñóáïîïóëÿöèè òàêæå ìîãóò äàâàòü Â-ëèìôîöèòû [1]. Îäíàêî îêîí÷àòåëüíîãî îòâåòà íà âîïðîñ, îáëàäàþò ëè ðàííèå ïðåäøåñòâåííèöû Ò-êëåòîê ìèåëîèäíûì ïîòåíöèàëîì, è â êàêîé î÷åðåäíîñòè óòðà÷èâàþòñÿ ñïîñîáíîñòè ðàííèõ êëåòîêïðåäøåñòâåííèö äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â ðàçëè÷íûå òèïû êëåòîê, äî íàñòîÿùåãî âðåìåíè ïîëó÷åíî íå áûëî. Ðàçâèòèå Ò-êëåòîê â òèìóñå âåñüìà ñëîæíûé ïðîöåññ, âêëþ÷àþùèé â ñåáÿ ïî êðàéíåé ìåðå øåñòü ýòàïîâ, êîòîðûå õàðàêòåðèçóþòñÿ ñìåíîé ñïåêòðà ýêñïðåññèðóåìûõ êëåòêàìè ïîâåðõíîñòíûõ ìàðêåðîâ [2]. ETP/DN1-êëåòêè äèôôåðåíöèðóþòñÿ â DN2 è DN3-êëåòêè, êîòîðûå èìåþò åùå áîëåå îãðàíè÷åííûé äèôôåðåíöèðîâî÷íûé ïîòåíöèàë. Çàòåì îáðàçóþòñÿ CD4+/CD8+ êëåòêè (double-positive cells), è îíè â ñâîþ î÷åðåäü äàþò íà÷àëî CD4+ ëèáî CD8+ Ò-ëèìôîöèòàì. Âñå ýòè ñòàäèè íàõîäÿòñÿ â æåñòêîé çàâèñèìîñòè îò ìèêðîîêðóæåíèÿ â òèìóñå [1]. Íà êàêîé èç íèõ ïðåäøåñòâåííèêè çðåëûõ Ò-ëèìôîöèòîâ òåðÿþò ñïîñîáíîñòü äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â äðóãèå òèïû èììóííûõ êëåòîê? Èçâåñòíî, ÷òî ïðè áëîêèðîâàíèè êëþ÷åâîãî ðåãóëÿòîðà Ò-êëåòîê Notch1 â ETP-êëåòêàõ òèìóñà ìûøåé âîçðàñòàåò ïðîöåíò äèôôåðåíöèðóþùèõñÿ èç íèõ Â-ëèìôîöèòîâ, íî íå ìèåëîèäíûõ êëåòîê. Áûëî òàêæå ïîêàçàíî, ÷òî ðàííèå Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 12 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ïðåäøåñòâåííèêè Ò-êëåòîê ñïîñîáíû äàâàòü íà÷àëî ìàêðîôàãàì è äåíäðèòíûì êëåòêàì [3, 4]. Îäíàêî âñå ïîäîáíûå ýêñïåðèìåíòû íå áûëè ïðîâåäåíû â óñëîâèÿõ, ïîçâîëÿþùèõ ðàííèì ïðåäøåñòâåííèöàì äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ êàê â ìèåëîèäíîì, òàê è â ëèìôîèäíîì íàïðàâëåíèÿõ, ïîýòîìó òðóäíî ñêàçàòü, íàñêîëüêî èõ ðåçóëüòàòû îòðàæàþò ñèòóàöèþ in vivo. Èññëåäîâàòåëÿìè èç äâóõ íåçàâèñèìûõ íàó÷íûõ ãðóïï: H. Wada c ñîàâò. è J.J. Bell, A. Bhandoola áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïîäàâëÿþùåå áîëüøèíñòâî ðàííèõ ïðåäøåñòâåííèêîâ Ò-ëèìôîöèòîâ, ïðèõîäÿùèõ ñ êðîâîòîêîì â òèìóñ èç ÊÊÌ, ñïîñîáíî äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ êàê â Ò-êëåòêè, òàê è â êëåòêè ìèåëîèäíîãî ðÿäà. Ýòî îòêðûòèå íå ñîãëàñóåòñÿ ñ ñîâðåìåííîé ìîäåëüþ ãåìîïîýçà, â êîòîðîé ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî Ò-êëåòêè ÿâëÿþòñÿ ïîòîìêàìè êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö, îáëàäàþùèõ èñêëþ÷èòåëüíî ëèìôîèäíûì ïîòåíöèàëîì (5). Îíî òàêæå îòâåðãàåò ïîñòóëàò î òîì, ÷òî â ïðîöåññå ãåìîïîýçà â êàêîé-òî ìîìåíò ïðîèñõîäèò æåñòêîå ðàçäåëåíèå ëèìôîèäíîãî è ìèåëîèäíîãî íàïðàâëåíèé äèôôåðåíöèðîâêè (ñì. ðèñ.). Ïðèáåãíóâ ê êëîíàëüíîìó ìåòîäó èññëåäîâàíèÿ àâòîðû îáíàðóæèëè, ÷òî ETP/DN1-êëåòêè, à òàêæå DN2-êëåòêè íå îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â Â-ëèìôîöèòû, íî ïðè ýòîì ìíîãèå èç íèõ îáëàäàþò îäíîâðåìåííî Ò-êëåòî÷íûì è ìèåëîèäíûì ïîòåíöèàëîì, êîòîðûé îíè óòðà÷èâàþò ëèøü íà ñòàäèè DN3. Êëàññè÷åñêàÿ äèõîòîìè÷åñêàÿ è ìèåëîèäíàÿ ìîäåëè ãåìîïîýçà Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 J.J. Bell è A. Bhandoola ïîêàçàëè, ÷òî ïðè êóëüòèâèðîâàíèè ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê-ïðåäøåñòâåííèö, âûäåëåííûõ èç òèìóñà ìûøåé, íà êëåòêàõ OP9, êîòîðûå ïðè òðàíñôåêöèè èõ Notch-ëèãàíäîì delta-like4 (OP9-DL4) ïîääåðæèâàþò Ò-êëåòî÷íóþ äèôôåðåíöèðîâêó, ETP- è DN1-êëåòêè äèôôåðåíöèðóþòñÿ â ñëåäóþùèõ íàïðàâëåíèÿõ: - ïðè êóëüòèâèðîâàíèè íà ñòðîìå OP9-DL4 îíè äàþò íà÷àëî êëåòêàì, ýêñïðåññèðóþùèõ ìàðêåðû Ò-êëåòîê CD25 è Thy-1; - ïðè êóëüòèâèðîâàíèè íà îáû÷íîé ñòðîìå OP9 íà òðåòüè ñóòêè ýòè êëåòêè ýêñïðåññèðîâàëè ìàðêåð ìèåëîèäíîãî ðÿäà Mac-1. Ïðè ýòîì äàæå ïðè äëèòåëüíîì êóëüòèâèðîâàíèè èç ETPêëåòîê íå áûëî ïîëó÷åíî ïðåäøåñòâåííèö Â-êëåòîê.  êîëîíèÿõ ìèåëîèäíûõ êëåòîê îáíàðóæèâàëèñü ïðåèìóùåñòâåííî ìàêðîôàãè, à òàêæå ãðàíóëîöèòû è äåíäðèòíûå êëåòêè. Ãðóïïå H. Wada et al. óäàëîñü òàêæå ïîëó÷èòü NK-êëåòêè. Ïðè òðàíñïëàíòàöèè ETP/DN1-êëåòîê ìûøàì ñ äåôèöèòîì Ò-ëèìôîöèòîâ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî îêîëî òðåòè ìàêðîôàãîâ â èõ îðãàíèçìå äèôôåðåíöèðîâàëèñü èç òðàíñïëàíòèðîâàííûõ êëåòîê.  äîïîëíåíèå ê ýòîìó ñëåäóåò ñêàçàòü, ÷òî â ìèåëîèäíûõ êëåòêàõ, ïîëó÷åííûõ èç òèìóñà, áûëà îòìå÷åíà ðåêîìáèíàöèÿ ãåíîâ (V-J è VD-J ðåêîìáèíàöèÿ, îñóùåñòâëÿåìàÿ ñ ïîìîùüþ ôåðìåíòà RAG-ðåêîìáèíàçû), êîäèðóþùèõ Ò-êëåòî÷íûé Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ðåöåïòîð (TcR), ÷òî ÿâëÿåòñÿ õàðàêòåðèñòèêîé ETP/DN1êëåòîê. Îñòàåòñÿ îòêðûòûì âîïðîñ î ðåãóëÿöèè äèôôåðåíöèðîâêè ETP/DN1-êëåòîê â ëèìôîèäíîì è ìèåëîèäíîì íàïðàâëåíèÿõ. Äâå ðàáîòû, îäíîâðåìåííî îïóáëèêîâàííûå â æóðíàëå Nature, ïðàêòè÷åñêè ðàçðóøàþò ñòðîéíóþ ñõåìó ãåìîïîýçà, â êîòîðîé ïðîèñõîäèò äèõîòîìè÷åñêîå ðàçäåëåíèå ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Bhandoola A., von Boehmer H., Petrie H.T., Zuniga-Pflucker J.C. Commitment and developmental potential of extrathymic and intrathymic T cell precursors: plenty to choose from. Immunity 2007; 26: 678-89. 2. Taghon T.N., David E.S., Zuniga-Pflucker J.C., Rothenberg E.V. Delayed, asynchronous, and reversible T-lineage specification induced by Notch/Delta signaling. Genes Dev. 2005; 19: 965-78. 3. Ceredig R., Bosco N., Rolink A.G. The B lineage potential of thymus settling 13 ëèìôîèäíîãî è ìèåëîèäíîãî íàïðàâëåíèé äèôôåðåíöèðîâêè.  òî æå âðåìÿ ýòè ýêñïåðèìåíòû â äåéñòâèòåëüíîñòè ñòàâÿò áîëüøå âîïðîñîâ, íåæåëè äàþò îòâåòîâ, è òðåáóþòñÿ äàëüíåéøèå èññëåäîâàíèÿ, ÷òîáû âûÿñíèòü ïîëíóþ êàðòèíó ãåìîïîýçà ìëåêîïèòàþùèõ â íîðìå, ÷òî ïîìîæåò òàêæå îáúÿñíèòü ìåõàíèçìû ðàçâèòèÿ îíêîãåìàòîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé ÷åëîâåêà. progenitors is critically dependent on mouse age. Eur. J. Immunol. 2007; 37: 830-7. 4. Laiosa C.V., Stadtfeld M., Xie H. et. al. Reprogramming of committed T cell progenitors to macrophages and dendritic cells by C/EBPa and PU.1 transcription factors. Immunity 2006; 25: 731-44. 5. Kondo M., Scherer D.C., King A.G. et. al. Lymphocyte development from hematopoietic stem cells. Curr. Opin. Genet. Dev. 2001; 11: 520-6. Ïîäãîòîâèëà À.Ñ. Ãðèãîðÿí Ïî ìàòåðèàëàì: Wada H., Masuda K., Satoh R. et al. Adult T-cell progenitors retain myeloid potential. Nature 2008; 452: 768-73. Bell J.J., Bhandoola A. The earliest thymic progenitors for T cells possess myeloid lineage potential. Nature 2008; 452: 764-68 «Õðîíè÷åñêîå âîñïàëåíèå» êàê èíäóêòîð ñëèÿíèÿ ïðîãåíèòîðíûõ êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà è íåéðîíîâ Ïóðêèíüå Ó÷àñòèå ãåìîïîýòè÷åñêèõ ñòâîëîâûõ (ÃÑÊ) è ìóëüòèïîòåíòíûõ ìåçåíõèìàëüíûõ ñòðîìàëüíûõ êëåòîê (ÌÌÑÊ) â ïðîöåññàõ ðåïàðàòèâíîé ðåãåíåðàöèè çàêëþ÷àåòñÿ êàê â àêòèâàöèè ïðîëèôåðàöèè, äèôôåðåíöèðîâêå, òàê è â ñòèìóëÿöèè ðåïàðàòèâíîãî ïîòåíöèàëà äðóãèõ ïðîãåíèòîðíûõ êëåòîê [1]. Îäíàêî ýòè ìåõàíèçìû íå èñ÷åðïûâàþò âåñü êîìïëåêñ ýôôåêòîâ, ïðîÿâëÿåìûõ ìàëîäèôôåðåíöèðîâàííûìè êëåòêàìè ïðè ðàçëè÷íûõ ïàòîëîãè÷åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ. Îäíèì èç íàèìåíåå èçó÷åííûõ ÿâëÿåòñÿ ñëèÿíèå (fusion) ñ ðàçëè÷íûìè êëåòêàìè îðãàíèçìà, ôóíêöèîíàëüíîå çíà÷åíèå êîòîðîãî äî íàñòîÿùåãî âðåìåíè íå óñòàíîâëåíî. Ñëèÿíèå ñ âûñîêîñïåöèàëèçèðîâàííûìè êëåòêàìè (ñèìïëàñòàìè ñêåëåòíîé ìûøå÷íîé òêàíè [2], ãåïàòîöèòàìè [3], ãðóøåâèäíûìè íåéðîíàìè ìîçæå÷êà [4]) óìåñòíî áûëî áû ñâÿçàòü ñ îáåñïå÷åíèåì è ïîääåðæàíèåì èõ óñòîé÷èâîñòè â óñëîâèÿõ ðàçâèòèÿ êàêîé-ëèáî ïàòîëîãèè. Îäíàêî ïîêàçàíà íèçêàÿ ÷àñòîòà äàííîãî ïðîöåññà êàê ïðè ôèçèîëîãè÷åñêèõ óñëîâèÿõ, òàê è ïðè ïîâðåæäåíèè òêàíåé [5]. Êðîìå òîãî, îïóáëèêîâàíû ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå î ñëèÿíèè ÃÑÊ ñ êàìáèàëüíûìè êëåòêàìè êèøå÷íîãî ýïèòåëèÿ ìûøåé, à òàêæå ñ îïóõîëåâûìè êëåòêàìè [6].  ïåðâîì ñëó÷àå ïðåäïîëàãàåòñÿ îïòèìèçèðóþùåå âëèÿíèå íà âîññòàíîâëåíèå ñëèçèñòîé ÆÊÒ ïîñëå îáëó÷åíèÿ â ëåòàëüíûõ äîçàõ, à âî âòîðîì îòðèöàòåëüíàÿ ðîëü, ñâÿçàííàÿ ñ ïîâûøåíèåì ìåòàñòàòè÷åñêîãî ïîòåíöèàëà [7]. Èç-çà ìàëîé èçó÷åííîñòè ôåíîìåíà êëåòî÷íîãî ñëèÿíèÿ, îñóùåñòâëÿåìîãî, ïðåæäå âñåãî, ÃÑÊ, àêòèâíî ïðîâîäÿòñÿ èññëåäîâàíèÿ, íàïðàâëåííûå íà óñòàíîâëåíèå óñëîâèé, ìåõàíèçìîâ è ôàêòîðîâ, ðåãóëèðóþùèõ ýòî ïðîöåññ, ÷òî â ïåðñïåêòèâå ïîìîæåò îïðåäåëèòü åãî áèîëîãè÷åñêîå çíà÷åíèå â öåëîì.  ÷àñòíîñòè, â æóðíàëå Nature Cell biology â îïóáëèêîâàíû ìàòåðèàëû èññëåäîâàíèÿ C.B. Johansson ñ ñîàâò., â êîòîðûõ îöåíèâàëîñü ñëèÿíèå íåäèôôåðåíöèðîâàííûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà ñ íåéðîíàìè Ïóðêèíüå êðóïíûìè ãðóøåâèäíûìè êëåòêàìè, ëîêàëèçóþùèìèñÿ â ãàíãëèîíàðíîì ñëîå êîðû ìîçæå÷êà. Íà ïåðâîì ýòàïå èññëåäîâàòåëè òðàíñïëàíòèðîâàëè ëåòàëüíî îáëó÷¸ííûì ìûøàì ïîïóëÿöèþ ÃÑÊ èëè ìîíîíóêëåàðíóþ ôðàêöèþ êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà, ïîëó÷åííûå îò òðàíñãåííûõ æèâîòíûõ, âñå êëåòêè êîòîðûõ ýêñïðåññèðîâàëè GFP (green fluorescent protein). Ó æèâîòíûõ, â êðîâè êîòîðûõ íà ìîìåíò âûâåäåíèÿ èç ýêñïåðèìåíòà íàáëþäàëîñü îêîëî 40% ìå÷åíûõ ôîðìåííûõ ýëåìåíòîâ, îïðåäåëÿëèñü GFP-ïîëîæèòåëüíûå íåéðîíû Ïóðêèíüå. Ïðè ýòîì â ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ òîëüêî ÃÑÊ èõ ÷èñëåííîñòü áûëà âäâîå íèæå. Ýòè äàííûå ïîçâîëèëè àâòîðàì ïîñòóëèðîâàòü, ÷òî íåäèôôåðåíöèðîâàííûå êëåòêè êðîâè è èõ äåðèâàòû ñïîñîáíû ôîðìèðîâàòü ñ ãðóøåâèäíûìè íåéðîíàìè ìîçæå÷êà «ãåòåðîêàðèîíû». Îäíàêî äâóõêðàòíîå ïðåâàëèðîâàíèå êîëè÷åñòâà ìå÷åíûõ íåðâíûõ êëåòîê ïðè òðàíñïëàíòàöèè öåëüíîé ôðàêöèè êîñòíîãî ìîçãà, à òàêæå îòñóòñòâèå ãðóïïû ìûøåé, êîòîðûì áû îñóùåñòâëÿëîñü âíóòðèâåííîå ââåäåíèå òîëüêî ÌÌÑÊ, íå ïîçâîëÿåò îòâåðãàòü âåðîÿòíîñòü è èõ âîâëå÷åíèÿ â ïðîöåññû ñëèÿíèÿ. Òåì áîëåå ÷òî òàêàÿ ñïîñîáíîñòü óæå áûëà ïîêàçàíà äëÿ ñòâîëîâûõ ìåõàíîöèòîâ è íåéðîíîâ Ïóðêèíüå [8]. Ïðè îñóùåñòâëåíèè ìèåëîàáëÿöèè â ïðåäòðàíñïëàíòàöèîííîì ïåðèîäå ïóòåì îáëó÷åíèÿ â ëåòàëüíûõ äîçàõ èìååò ìåñòî ïîâûøåíèå ïðîíèöàåìîñòè ãåìàòîýíöåôàëè÷åñêîãî áàðüåðà, ñîïðîâîæäàþùååñÿ òðàíçèòîðíîé ëåéêîöèòàðíîé èíôèëüòðàöèåé âîêðóã öåðåáðàëüíûõ ñîñóäîâ. Ýòè èçìåíåíèÿ, ïî âñåé âèäèìîñòè, ñïîñîáñòâóþò ýêñòðàâàçàöèè ââåä¸ííûõ êëåòîê â ÖÍÑ ñ ïîñëåäóþùèì ñëèÿíèåì ñ íåéðîíàìè Ïóðêèíüå. ×òîáû íèâåëèðîâàòü âëèÿíèå ìèåëîàáëÿöèè, Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 14 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé èññëåäîâàòåëè èñïîëüçîâàëè ïàðàáèîíòíûå ïàðû ìûøåé. Êàæäàÿ ïàðà âêëþ÷àëà òðàíñãåííîå æèâîòíîå, êëåòêè êîòîðîãî íåñëè ãåí GFP, è «äèêèé òèï», êðîâåíîñíûå ñèñòåìû êîòîðûõ áûëè àíàñòîìîçèðîâàíû.  ðåçóëüòàòå, íåñêîëüêî äåñÿòêîâ ìå÷åíûõ GFP «ãåòåðîêàðèîíîâ», ýêñïðåññèðóþùèõ êàëüáèíäèí, ìàðêåð íåéðîíîâ Ïóðêèíüå, îïðåäåëÿëîñü ó ìûøåé äèêîãî òèïà. Âàæíî, ÷òî ÷åðåç 20 íåä. ïîñëå ðàçäåëåíèÿ æèâîòíûõ, êîãäà õèìåðèçì êëåòîê ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ñíèçèëñÿ ñ 50% äî 6-10%, GFP-ïîëîæèòåëüíûå íåðâíûå êëåòêè âñå åùå îïðåäåëÿëèñü â ìîçæå÷êå, ÷òî ïîçâîëÿåò ñóäèòü îá èõ äîëãîñðî÷íîé, à íå âðåìåííîé æèçíåñïîñîáíîñòè. Èíòåðåñíî, ÷òî àâòîðû íå óäåëèëè âíèìàíèÿ âîïðîñó î ïðåîäîëåíèè òðàíñïëàíòèðîâàííûìè êëåòêàìè ãåìàòîýíöåôàëè÷åñêîãî áàðüåðà ïðè óñëîâèè ñîõðàíåíèÿ åãî íîðìàëüíîé ïðîíèöàåìîñòè. Ñëó÷àéíûì îêàçàëîñü óñòàíîâëåíèå êîððåëÿöèè ìåæäó ÷àñòîòîé îáðàçîâàíèÿ «ãåòåðîêàðèîíîâ» â ÖÍÑ è íàëè÷èåì «õðîíè÷åñêîãî âîñïàëåíèÿ», íàáëþäàâøåãîñÿ ó íåêîòîðûõ æèâîòíûõ ñ èäèîïàòè÷åñêèì ÿçâåííûì äåðìàòèòîì íåèçâåñòíîé ýòèîëîãèè. Ïîä «õðîíè÷åñêèì âîñïàëåíèåì» ïîíèìàþò êîìïåíñàòîðíóþ çàùèòíóþ ñîñóäèñòî-ñòðîìàëüíóþ ðåàêöèþ îðãàíèçìà, äëèòåëüíîñòü òå÷åíèÿ êîòîðîé îïðåäåëÿåòñÿ ëèáî íàðóøåíèÿìè ñî ñòîðîíû èììóííîé ñèñòåìû (íåäîñòàòî÷íîñòü ôàãîöèòàðíîé àêòèâíîñòè ëåéêîöèòîâ), ëèáî íèçêîé àíòèãåííîñòüþ ïàòîãåíà èëè ïðîäîëæàþùèìñÿ åãî ïîñòóïëåíèåì â êðîâü [9]. Ïðè ýòîì ó ìûøåé ñ èíôèöèðîâàííûìè ïîâðåæäåíèÿìè êîæíûõ ïîêðîâîâ âûÿâëÿëîñü íà ïîðÿäîê áîëüøåå êîëè÷åñòâî ìå÷åííûõ GFP íåéðîíîâ Ïóðêèíüå, ÷èñëåííîñòü êîòîðûõ ê 58 íåä. ñîñòàâëÿëà îêîëî 600 íà ìîçæå÷îê. Îäíàêî ó ïàðàáèîíòîâ êàê ñ äåðìàòèòîì, òàê è áåç íåãî îïðåäåëÿëîñü ñõîäíîå êîëè÷åñòâî êëåòîê ìèêðîãëèè, ïîçèòèâíûõ íà ìàðêåð, ÷òî óêàçûâàåò íà îòñóòñòâèå èçìåíåíèé ïðîíèöàåìîñòè ãåìàòîýíöåôàëè÷åñêîãî áàðüåðà. Ïîõîæèå ðåçóëüòàòû íàáëþäàëèñü ó æèâîòíûõ ñ äåðìàòèòîì ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè êîñòíîãî ìîçãà. Åùå áîëåå çíà÷èòåëüíàÿ ñâÿçü ìåæäó îáðàçîâàíèåì «ãåòåðîêàðèîíîâ» è âîñïàëåíèåì áûëà ïðîäåìîíñòðèðîâàíà íà æèâîòíûõ ñ ýêñïåðèìåíòàëüíûì àóòîèììóííûì ýíöåôàëèòîì, õàðàêòåðèçóþùèìñÿ ñíèæåíèåì ÷èñëåííîñòè îëèãîäåíäðîöèòîâ è íåéðîíîâ Ïóðêèíüå.  ýòîì ñëó÷àå, êîëè÷åñòâî GFP-ïîëîæèòåëüíûõ ãåòåðîêàðèîíîâ ñîñòàâëÿëî íåñêîëüêî òûñÿ÷. Âàæíî, ÷òî èíäóöèðîâàííîå ââåäåíèåì ïðîñòàãëàíäèíîâ ïîâûøåíèå ïðîíèöàåìîñòè ãåìàòîýíöåôàëè÷åñêîãî áàðüåðà, ñîïðîâîæäàþùååñÿ âûðàæåííîé ïåðèâàçàëüíîé èíôèëüòðàöèåé íåðâíîé òêàíè ìå÷åíûìè ìàêðîôàãàìè è êëåòêàìè ìèêðîãëèè, íå ïðèâîäèëî ê óâåëè÷åíèþ ÷èñëåííîñòè GFP-ïîëîæèòåëüíûõ íåéðîíîâ Ïóðêèíüå, ÷òî ïîä÷åðêèâàåò íåñïîñîáíîñòü äèôôåðåíöèðîâàííûõ ïðîèçâîäíûõ ÃÑÊ ê ñëèÿíèþ ñ íåéðîíàìè. Èññëåäîâàòåëè âûïîëíèëè òðàíñïëàíòàöèþ êîñòíîãî ìîçãà òðàíñãåííûõ êðûñ, êëåòêè êîòîðûõ ýêñïðåññèðîâàëè GFP, â îðãàíèçì ìûøåé, ÷òîáû ñôîðìèðîâàòü õèìåðíûå ãåòåðîêàðèîíû èç ãðóøåâèäíûõ íåéðîíîâ ìîçæå÷êà äëÿ îïðåäåëåíèÿ ïðîöåññîâ, ïðîèñõîäÿùèõ ñ ãåíåòè÷åñêèì ìàòåðèàëîì ïîñëå ñëèÿíèÿ êëåòîê. Ìåòîäîì ÏÖÐ ñ îáðàòíîé òðàíñêðèïöèåé áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ãåòåðîêàðèîíû ýêñïðåññèðóþò íåéðîí-ñïåöèôè÷íûå òðàíñêðèïöèîííûå ôàêòîðû êðûñ (Pcp2, Calb1, Kcnc1, Gsbs), à ïðîäóêöèÿ ãåìîïîýòè÷åñêèõ (CD45, CD11b, F4/80 è Iba1) íå îïðåäåëÿëàñü. Ýòè äàííûå ïîçâîëÿþò ñóäèòü î ñâîåîáðàçíîì ðåïðîãðàììèðîâàíèè ÿäåð òðàíñïëàíòèðîâàííûõ êëåòîê, ïîäâåðãøèõñÿ ñëèÿíèþ, â ñòîðîíó àêòèâàöèè íåéðîíàëüíûõ ìàðêåðîâ è ñóïðåññèè ãåìîïîýòè÷åñêèõ. Íóæíî îòìåòèòü, ÷òî â ãîëîâíîì ìîçãå ñëèÿíèå ÃÑÊ óñòàíîâëåíî òîëüêî ñ íåéðîíàìè Ïóðêèíüå [4, 10]. Îäíàêî â ðàáîòå íå îöåíèâàëèñü ìåõàíèçìû, îïðåäåëÿþùèå íàïðàâëåííóþ ìèãðàöèþ êëåòîê èìåííî ê íåéðîíàì Ïóðêèíüå è ïðåîäîëåíèå ÃÝÁ. Èçâåñòíî, ÷òî õîóìèíã ÃÑÊ ê îáëàñòè âîñïàëåíèÿ êîíòðîëèðóåòñÿ ðÿäîì áèîõèìè÷åñêèõ îñåé, òàêèõ êàê SDF-1/CXCR4, SCF/c-Kit, VEGF/VEGFR, HGF/c-Met. Ïðè ýòîì ïîêàçàíà ýêñïðåññèÿ ãðóøåâèäíûìè íåéðîíàìè ìîçæå÷êà c-Kit è åãî ëèãàíäà [11], ÷òî ìîæåò ñëóæèòü îäíèì èç ìåõàíèçìîâ, ðåãóëèðóþùèõ íàïðàâëåííóþ ìèãðàöèþ ãåìîïîýòèêîâ ê íåéðîíàì Ïóðêèíüå. Òàêèì îáðàçîì, ñîâðåìåííûå äàííûå ïîêàçûâàþò, ÷òî ñëèÿíèå ïðîãåíèòîðíûõ êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà ñ ãðóøåâèäíûìè êëåòêàìè ìîçæå÷êà èíòåíñèôèöèðóåòñÿ ïðè ïàòîëîãèÿõ, â îñíîâå êîòîðûõ ëåæàò ïðîöåññû âîñïàëåíèÿ. Äî íàñòîÿùåãî âðåìåíè îñòàþòñÿ íåÿñíûìè ìåõàíèçìû, êîíòðîëèðóþùèå ìèãðàöèþ êëåòîê, ïðåäøåñòâóþùóþ ñëèÿíèþ, à áèîëîãè÷åñêîå çíà÷åíèå íîñèò ëèøü ãèïîòåòè÷åñêèé õàðàêòåð. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Ãîëîëîáîâ Â.Ã., Äååâ Ð.Â. Ñòâîëîâûå ñòðîìàëüíûå êëåòêè è îñòåîáëàñòè÷åñêèé êëåòî÷íûé äèôôåðîí. Ìîðôîëîãèÿ 2003; 123(1): 9-19. 2. Sherwood R.I., Christensen J.L., Weissman I.L. et al. Determinants of skeletal muscle contributions from circulating cells, bone marrow cells, and hematopoietic stem cells. Stem Cells 2004; 22(7): 1292-304. 3. Vassilopoulos G., Wang P. R., Russell D. W. Transplanted bone marrow regenerates liver by cell fusion. Nature 2003; 422: 901904. 4. Johansson C.B., Youssef S., Koleckar K. Extensive fusion of haematopoietic cells with Purkinje neurons in response to chronic inflammation. Nature cell biology 2008; 10(5): 575-83. 5. LaBarge M.A., Blau H.M. Biological progression from adult bone marrow to mononucleate muscle stem cell to multinucleate muscle fiber in response to injury. Cell 2002; 111: 589601. 6. Rizvi A.Z., Swain J.R., Davies P.S. Bone marrow-derived cells fuse with normal and transformed intestinal stem cells. PNÀS 2006; 103: 6321-25. 7. Pawelek J.M, Chakraborty A.K. Fusion of tumour cells with bone marrowderived cells: a unifying explanation for metastasis. Nat. Rev. Cancer 2008; 8(5): 377-86. 8. Bae J., Han H.S., Youn D. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells promote neuronal networks with functional synaptic transmission after transplantation into mice with neurodegeneration. Stem Cells 2007; 25(5): 1307-16. 9. Ïîâçóí Ñ.À. Îáùàÿ ïàòîëîãè÷åñêàÿ àíàòîìèÿ. Ó÷åáíîå ïîñîáèå äëÿ ìåäèöèíñêèõ âóçîâ. ÑÏá.; ÑÎÒÈÑ, 2006: 336. 10. Weimann J.M., Johansson C.B., Trejo A. et al. Stable reprogrammed heterokaryons form spontaneously in Purkinje neurons after bone marrow transplant. Nature Cell Biol. 2003; 5: 959-66. 11. Manova K., Bachvarova R.F., Huang E.J. Ñ-kit receptor and ligand expression in postnatal development of the mouse cerebellum suggests a function for c-kit in inhibitory interneurons. J. Neurosci. 1992; 12(12): 4663-76. Ïîäãîòîâèë È.ß. Áîçî Ïî ìàòåðèàëàì: Johansson C.B., Youssef S., Koleckar K. Extensive fusion of haematopoietic cells with Purkinje neurons in response to chronic inflammation. Nature cell biology 2008; 10(5): 575-83 Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé 15 Îáíàðóæåí ñïåöèôè÷åñêèé áëîêàòîð ïðîöåññèíãà ìèêðî-ÐÍÊ, ó÷àñòâóþùèõ â ïðîöåññàõ äèôôåðåíöèðîâêè êëåòîê Ìèêðî-ÐÍÊ ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé êîðîòêèå íåêîäèðóþùèå ÐÍÊ, îñíîâíîé ôóíêöèåé êîòîðûõ ÿâëÿåòñÿ ïîñòòðàíñêðèïöèîííàÿ ðåïðåññèÿ ýêñïðåññèè ãåíîâ. Ìèêðî-ÐÍÊ îáðàçóþòñÿ ïðè ïðîöåññèíãå èõ ïðåäøåñòâåííèêîâ - ïðè-ìèêðîÐÍÊ (pri-micro-RNAs), èëè ïåðâè÷íûõ ìèêðî-ÐÍÊ. Ïðîöåññèíã ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ çàêëþ÷àåòñÿ â ïîñëåäîâàòåëüíîì îòùåïëåíèè îò íèõ îïðåäåëåííûõ íóêëåîòèäíûõ ïîñëåäîâàòåëüíîñòåé, â ðåçóëüòàòå êîòîðîãî îáðàçóþòñÿ ñíà÷àëà ïðå-ìèêðî-ÐÍÊ (pre-micro-RNAs), à çàòåì ôóíêöèîíàëüíûå òðàíñêðèïòû. Êîìïëåêñ ôåðìåíòîâ, îñóùåñòâëÿþùèõ ïðîöåññèíã (òàê íàçûâàåìûé «ìèêðîïðîöåññîð») ñîñòîèò èç êîìïîíåíòà ðèáîíóêëåàçû III (áåëêà Drosna), ñâÿçûâàþùåãî äâóíèòåâóþ ÐÍÊ áåëêà DGCR8 [1, 2] è ýíçèìàòè÷åñêèõ êîìïëåêñîâ Dicer [3, 4]. Ïîñòòðàíñêðèïöèîííûé êîíòðîëü ýêñïðåññèè ìèêðîÐÍÊ âûñîêî ñïåöèôè÷åí (5) è íåîáõîäèì äëÿ ðåãóëÿöèè äèôôåðåíöèðîâêè êëåòîê [6, 7].  ýìáðèîíàëüíûõ òêàíÿõ ïðîöåññèíã ìíîãèõ ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ áëîêèðóåòñÿ, àêòèâèðóÿñü òîëüêî âî âðåìÿ êîììèòèðîâàíèÿ êëåòîê ê äèôôåðåíöèðîâêå. Èçâåñòíî, ÷òî â ÝÑÊ ÷åëîâåêà è ìûøè, à òàêæå â êëåòêàõ íåêîòîðûõ çëîêà÷åñòâåííûõ îïóõîëåé ïîâûøåíà êîíöåíòðàöèÿ ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ, îäíàêî îòñóòñòâóþò ñîîòâåòñòâóþùèå ôóíêöèîíàëüíûå ìèêðî-ÐÍÊ. Ýòî ïîçâîëÿåò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî â ïðîöåññå ñîçðåâàíèÿ ìèêðî-ÐÍÊ ñóùåñòâóåò íåêèé áëîê, ìåõàíèçì êîòîðîãî äî ñåãîäíÿøíåãî äíÿ îñòàâàëñÿ íåèçâåñòíûì. Äëÿ ÝÑÊ ìëåêîïèòàþùèõ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî â íèõ ïîâûøåíî êîëè÷åñòâî ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ èç ñåìåéñòâà let-7 è, ñîîòâåòñòâåííî, êîìïîíåíòîâ ìèêðî-  äèôôåðåíöèðîâàííûõ êëåòêàõ (ñïðàâà) let-7 ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ ïîäâåðãàåòñÿ ïðîöåññèíãó, â ðåçóëüòàòå ÷åãî ïðîèñõîäèò îáðàçîâàíèå çðåëîé ìèêðî-ÐÍÊ Let-7, êîòîðàÿ íà ïîñòòðàíñêðèïöèîííîì óðîâíå èíãèáèðóåò ýêñïðåññèþ ãåíîâ-ìèøåíåé.  íåäèôôåðåíöèðîâàííûõ ýìáðèîíàëüíûõ êëåòêàõ (ñëåâà) Lin28 ñâÿçûâàåò ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ Let-7 è ïðåïÿòñòâóåò åå ïðîöåññèíãó Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 16 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ïðîöåññîðà, áëîêèðóþùèõ ðàñùåïëåíèå ýòèõ ïðè-ìèêðîÐÍÊ [8]. Íàó÷íàÿ ãðóïïà S.R. Viswanathan et al. ïîêàçàëà, ÷òî ïðèìèêðî-ÐÍÊ let-7g (pri-let-7g) ïðèñóòñòâóåò â áîëüøèõ êîëè÷åñòâàõ â ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòêàõ è ïðîöåññèðóåòñÿ òîëüêî â õîäå äèôôåðåíöèðîâêè (íà äåñÿòûå ñóòêè ïîñëå íà÷àëà äèôôåðåíöèðîâêè äëÿ ìûøèíûõ ÝÑÊ). Òàêæå óäàëîñü îáúÿñíèòü ìåõàíèçì áëîêà ïðîöåññèíãà pri-let-7g. Íà ïåðâîì ýòàïå èññëåäîâàòåëè ñðàâíèëè, êàê ëèçàòû êëåòîê ðàçëè÷íûõ òèïîâ âëèÿþò íà îïîñðåäîâàííîå ìèêðîïðîöåññîðîì ðàñùåïëåíèå pri-let-7g in vitro. Ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ ñíà÷àëà èíêóáèðîâàëè ñ êëåòî÷íûì ëèçàòîì, à çàòåì ïîäâåðãàëè ðàñùåïëåíèþ âûñîêîî÷èùåííûì êîìïëåêñîì ôåðìåíòîâ ìèêðîïðîöåññîðà. Âûÿñíèëîñü, ÷òî ëèçàòû êëåòîê ýìáðèîíàëüíîé êàðöèíîìû ëèíèè P19 ïîëíîñòüþ èíãèáèðóþò ïðîöåññèíã ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ, â òî âðåìÿ êàê ëèçàòû äèôôåðåíöèðîâàííûõ ýìáðèîíàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ ìûøè íèêàê íå âëèÿþò íà ðàñùåïëåíèå ïðè-ìèêðî-ÐÍÊ. Áûëî ïðåäïîëîæåíî, ÷òî ñóùåñòâóåò íåêèé ñïåöèôè÷åñêèé èíãèáèòîð ïðîöåññèíãà, ïðèñóòñòâóþùèé èñêëþ÷èòåëüíî â íåäèôôåðåíöèðîâàííûõ êëåòêàõ. Ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîôîðåçà óäàëîñü âûÿâèòü ïðèñóòñòâèå â ýòèõ êëåòêàõ êîìïëåêñà áåëêîâ, ñâÿçûâàþùèõ pri-let-7g. Áîëüøèíñòâî ýòèõ áåëêîâ áûëè ðàíåå èäåíòèôèöèðîâàíû êàê êîìïîíåíòû êîìïëåêñà Drosna [2]. Îäíèì èç íèõ îêàçàëñÿ âûñîêî êîíñåðâàòèâíûé ÐÍÊ-ñâÿçûâàþùèé áåëîê Lin28. Ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ìóòàöèè ÐÍÊ-ñâÿçûâàþùåãî äîìåíà Lin28 ïðèâîäÿò ê íàðóøåíèÿì ýìáðèîíàëüíîãî ðàçâèòèÿ íåêîòîðûõ îðãàíèçìîâ [9], à òàêæå, ÷òî ãåí ýòîãî áåëêà àêòèâíî ýêñïðåññèðóåòñÿ â ÝÑÊ ìûøè è ÷åëîâåêà è ÷òî åãî ýêñïðåññèÿ ïîäàâëÿåòñÿ ïðè äèôôåðåíöèðîâêå ýòèõ êëåòîê [10]. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Denli A.M., Tops B.B.J., Plasterk R.H.A., Ketting R.F., Hannon G.J. Processing of primary microRNAs by the Microprocessor complex. Nature 2004; 432: 231-5. 2. Gregory R.I., Yan K.P., Amuthan G. et al. The Microprocessor complex mediates the genesis of microRNAs. Nature 2004; 432: 235-40. 3. Chendrimada T.P., Gregory R.I., Kumaraswamy E. et al. TRBP recruits the Dicer complex to Ago2 for microRNA processing and gene silencing. Nature 2005; 436: 740-4. 4. Chendrimada T.P., Finn K.J., Ji X. et al. MicroRNA silencing through RISC recruitment of eIF6. Nature 2007; 447(7146): 823-8. 5. Obernosterer G., Leuschner P.J.F., Alenius M., Martinez J. Posttranscriptional regulation of microRNA expression. RNA 2006; 12: 1161-7. S.R. Viswanathan è ñîàâò. ïîäòâåðäèëè äàííûå ïî äèíàìèêå ýêñïðåññèè Lin28 ïðè äèôôåðåíöèðîâêå ÝÑÊ â ñîñòàâå ýìáðèîèäíûõ òåëåö, à òàêæå ïðîäåìîíñòðèðîâàëè, ÷òî ñíèæåíèå êîíöåíòðàöèè ýòîãî áåëêà ïðåäøåñòâóåò ïîäàâëåíèþ ýêñïðåññèè òàêèõ ôàêòîðîâ ïëþðèïîòåíòíîñòè, êàê Nanog è Oct4. Òàêæå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî Lin28 ñïåöèôè÷åñêè áëîêèðóåò ïðîöåññèíã ìèêðî-ÐÍÊ let-7g è íå âëèÿåò íà ïðîöåññèíã äðóãèõ ìèêðî-ÐÍÊ. Ïðè âíåñåíèè â êëåòêè ñ äåôèöèòîì ýêñïðåññèè Lin28 íåñêîëüêèõ ðàçëè÷íûõ ïðèìèêðî-ÐÍÊ âñå îíè ïðåòåðïåâàëè ïðîöåññèíã, îáðàçóÿ ôóíêöèîíàëüíûå òðàíñêðèïòû. Òåì íå ìåíåå, ýêòîïè÷åñêàÿ ýêñïðåññèÿ Lin28 ïðèâîäèëà ê ïîäàâëåíèþ ïðîöåññèíãà íå òîëüêî ïðè-let-7g, íî è ïðè-let-7g - ýòî ïîçâîëÿåò çàêëþ÷èòü, ÷òî åãî ñïåöèôè÷íîñòü ìîæåò â äåéñòâèòåëüíîñòè áûòü íå àáñîëþòíîé. Ãîìîëîã Lin28 - áåëîê Lin28B - àêòèâíî ïðîäóöèðóåòñÿ â çëîêà÷åñòâåííûõ êëåòêàõ ïåðâè÷íûõ îïóõîëåé ó ÷åëîâåêà, íàïðèìåð, â êëåòêàõ ãåïàòîöåëëþëÿðíîé êàðöèíîìû [8]. Ïî ýòîé ïðè÷èíå ðåçóëüòàòû äàííîé ðàáîòû âåñüìà èíòåðåñíû ñ òî÷êè çðåíèÿ òåðàïèè çëîêà÷åñòâåííûõ çàáîëåâàíèé. ßñíî, ÷òî ìóòàöèè ðàçëè÷íûõ êîìïîíåíòîâ ìèêðîïðîöåññîðíîãî êîìïëåêñà ìîãóò ïðèâîäèòü ê íàðóøåíèÿì ïðîöåññîâ ðàçâèòèÿ, à òàêæå áûòü ïðè÷èíîé çëîêà÷åñòâåííîé òðàíñôîðìàöèè êëåòîê âçðîñëîãî îðãàíèçìà. Çíàíèå ìåõàíèçìîâ àêòèâàöèè è ðåïðåññèè ïðîöåññèíãà ìèêðî-ÐÍÊ, îò êîòîðûõ çàâèñÿò, â ñâîþ î÷åðåäü, àêòèâàöèÿ è èíãèáèðîâàíèå ýêñïðåññèè ñàìûõ ðàçëè÷íûõ ãåíîâ, ó÷àñòâóþùèõ â äèôôåðåíöèðîâêå è ïðîëèôåðàöèè êëåòîê, íåîáõîäèìî äëÿ óñïåøíîãî ïîèñêà òåðàïèè çàáîëåâàíèé, ñâÿçàííûõ ñ íàðóøåíèÿìè ýòèõ ïðîöåññîâ. 6. Mineno J., Okamoto S., Ando T. et al. The expression profile of microRNAs in mouse embryos. Nucleic Acids Res. 2006; 34: 1765-71. 7. Wulczyn F.G., Smirnova L., Rybak A. et al. Post-transcriptional regulation of the let-7 microRNA during neural cell specification. FASEB J. 2007; 21: 415-26. 8. Thomson J.M., Newman M., Parker J.S. et al. Extensive post-transcriptional regulation of microRNAs and its implications for cancer. Genes Dev. 2006; 20: 2202-7. 9. Moss E.G., Lee R.C., Ambros V. The cold shock domain protein LIN-28 controls developmental timing in C. elegans and is regulated by the lin-4 RNA. Cell 1997; 88: 637-46. 10. Polesskaya A., Cuvellier S., Naguibneva I. et al. Lin-28 binds IGF-2 mRNA and participates in skeletal myogenesis by increasing translation efficiency. Genes Dev. 2007; 21: 1125-38. Ïîäãîòîâèëà À.Ñ. Ãðèãîðÿí Ïî ìàòåðèàëàì: Viswanathan S.R., Daley G.Q., Gregory R.I. Selective Blockade of MicroRNA Processing by Lin28. Science 2008; 320: 96-100 Óñïåøíàÿ èíäóêöèÿ ïëþðèïîòåíòíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê èç íåéðàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê ñ ïîìîùüþ äâóõ ôàêòîðîâ  áîëüøèíñòâå íàó÷íûõ èññëåäîâàíèé äëÿ ïîëó÷åíèÿ èíäóöèðîâàííûõ ïëþðèïîòåíòíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê (induced pluripotent stem cells, iPS cells), íåçàâèñèìî îò èñïîëüçóþùåéñÿ èñõîäíîé êëåòî÷íîé ïîïóëÿöèè (ôåòàëüíûå èëè âçðîñëûå êîæíûå ôèáðîáëàñòû, ñèíîâèîöèòû è äð.), ïðèìåíÿåòñÿ ñòàíäàðòíûé íàáîð ôàêòîðîâ, âêëþ÷àþùèé Oct4, Sox2, c-Myc, Klf4, Nanog, Lin28, âûñîêèé óðîâåíü ýêñïðåññèè êîòîðûõ õàðàêòåðåí äëÿ ÝÑÊ [1, 2]. Àâòîðû îòäàþò Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 ïðåäïî÷òåíèå ðàçíûì èíäóêòîðàì ñ ó÷åòîì èõ ôóíêöèîíàëüíîé çíà÷èìîñòè, íî ïðèåìëåìûå ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû äîñòèãàþòñÿ ëèøü ñ ïðèìåíåíèåì êâàðòåòà ôàêòîðîâ. Ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå óñòàíîâëåííûé íåãàòèâíûé ýôôåêò ðåàêòèâàöèè c-Myc â âèäå èíäóêöèè àïîïòîçà [4] è îïóõîëåâîé òðàíñôîðìàöèè iPS êëåòîê [5], öåëåñîîáðàçíà ðàçðàáîòêà ïðîòîêîëîâ ñ óìåíüøåíèåì êîëè÷åñòâà ôàêòîðîâ, íåîáõîäèìûõ äëÿ ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ.  ïåðñïåêòèâå, ýòî ïîçâîëèëî Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé áû ïîâûñèòü áåçîïàñíîñòü ïðèìåíåíèÿ êóëüòóð iPS êëåòîê, ÷òî êðàéíå íåîáõîäèìî äëÿ ïðîâåäåíèÿ êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé. Òåîðåòè÷åñêè, ñîêðàùåíèå êîëè÷åñòâà ýêçîãåííûõ èíäóêòîðîâ ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ âîçìîæíî ïðè äîñòàòî÷íîé ýíäîãåííîé ýêñïðåññèè íåêîòîðûõ èç íèõ. Òàê, íàïðèìåð, íåéðàëüíûå ñòâîëîâûå êëåòêè (ÍÑÊ) õàðàêòåðèçóþòñÿ âûñîêèì óðîâíåì ýêñïðåññèè Sox2 (â äâà ðàçà âûøå ïî ñðàâíåíèþ ñ ÝÑÊ) [6, 7], êîòîðûé, ðåãóëèðóÿ àêòèâíîñòü ãåíîâ, îòâåòñòâåííûõ çà ïðîëèôåðàöèþ è äèôôåðåíöèðîâêó, ïîääåðæèâàåò ìóëüòèïîòåíòíûé ñòàòóñ êëåòîê [8]. Êðîìå òîãî, J.B. Kim ñ ñîàâò. ïîêàçàëè ïðàêòè÷åñêè ðàâíîå ñîäåðæàíèå áåëêà, êîäèðóþùåãîñÿ ãåíîì c-Myc, â ÍÑÊ è ÝÑÊ, à òàêæå ýêñïðåññèþ Klf4, óðîâåíü êîòîðîé â âîñåìü ðàç íèæå ïî ñðàâíåíèþ ñ ÝÑÊ. Ðóêîâîäñòâóÿñü ýòèìè äàííûìè, J.B. Kim ñ ñîàâò. ïðåäïðèíÿëè èññëåäîâàíèå, â êîòîðîì âûïîëíÿëè ðåïðîãðàììèðîâàíèå íåéðàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê (ÍÑÊ) ñ èñïîëüçîâàíèåì âñåãî äâóõ ôàêòîðîâ. Íà ïåðâîì ýòàïå ýêñïåðèìåíòà èññëåäîâàòåëè óñòàíîâèëè âîçìîæíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ÍÑÊ ïîñðåäñòâîì òðàíñôåêöèè ðåòðîâèðóñíûìè âåêòîðàìè, ñîäåðæàùèìè ÷åòûðå ôàêòîðà: Oct4, Sox2, c-Myc, Klf4. Ñîîòâåòñòâèå ïîëó÷åííûõ iPS êëåòîê è ÝÑÊ äîêàçàëè ïî ñòàíäàðòíîìó ïëàíó, ïðåäóñìàòðèâàþùåìó èçó÷åíèå ìîðôîëîãèè, èììóíîôåíîòèïà, ãåíåòè÷åñêèõ õàðàêòåðèñòèê, íàëè÷èÿ òåðàòîì ïðè ïîäêîæíîì ââåäåíèè. Çàòåì àâòîðû ñ öåëüþ ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ââîäèëè â ÍÑÊ ðàçëè÷íûå êîìáèíàöèè òðåõ èç ÷åòûðåõ óêàçàííûõ ôàêòîðîâ. Ïðè ýòîì â êàæäîì ñëó÷àå îäíèì èç èíäóêòîðîâ ÿâëÿëñÿ Oct4, à äâà äðóãèõ ìåíÿëèñü. Ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû íàáëþäàëèñü ïðè èñïîëüçîâàíèè ëþáîãî âàðèàíòà, îäíàêî ðàçëè÷èÿ çàêëþ÷àëèñü â ñðîêå ôîðìèðîâàíèÿ êîëîíèé iPS êëåòîê. Òàê, ïðè òðàíñôåöèðîâàíèè ÍÑÊ êîìïëåêñîì Oct4 - Klf4 - ñ-Myc ðåïðîãðàììèðîâàíèå çàâåðøàëîñü ê êîíöó ïåðâîé íåäåëè, ïðè èñïîëüçîâàíèè âåêòîðà Oct4 - Klf4 - Sox2 - çà 2-3 íåä., à â ñëó÷àå Oct4 - c-Myc - Sox2 ïîëó÷åíèå êóëüòóðû iPS êëåòîê îñóùåñòâëÿëîñü â òå÷åíèå áîëåå äëèòåëüíîãî âðåìåíè. Óêàçàííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î âîçìîæíîñòè ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ÍÑÊ âñåãî òðåìÿ èíäóêòîðàìè â îòñóòñòâèè ëþáîãî èç ýêñïðåññèðóþùèõñÿ ýíäîãåííî (c-Myc, Sox2, Klf4), ïðè÷åì âðåìÿ ïîëó÷åíèÿ êîëîíèé iPS êëåòîê îáðàòíî ïðîïîðöèîíàëüíî ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Takahashi K., Yamanaka S., Tanabe K. et al. Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors. Cell 2007; 131 (5): 861-72. 2. Yu J., Vodyanik M.A., Thomson J.A. Induced Pluripotent Stem Cell Lines Derived from Human Somatic Cells. Science 2007; 318 (5858): 1917-20. 3. Wernig M., Meissner A., Foreman R. et. al. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature 2007; 448 (7151): 260-2. 4. Sumi T., Tsuneyoshi N., Nakatsuji N. et al. Apoptosis and differentiation of human embryonic stem cells induced by sustained activation of c-Myc. Oncogene 17 ýíäîãåííîìó óðîâíþ ýêñïðåññèè ôàêòîðà, îòñóòñòâóþùåãî â ðåòðîâèðóñíîì âåêòîðå.  äàëüíåéøåì, èññëåäîâàòåëè îöåíèâàëè ýôôåêòèâíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ÍÑÊ ðàçëè÷íûìè êîìáèíàöèÿìè èç äâóõ èíäóêòîðîâ. Îêàçàëîñü, ÷òî ê ôîðìèðîâàíèþ êîëîíèé iPS êëåòîê ïðèâîäÿò ëèøü äâà âàðèàíòà: íàèáîëåå áûñòðî - Oct4 - Klf4, à íà îäíó-äâå íåäåëè ìåäëåííåå Oct4 - c-Myc. Çàòåì, àâòîðû ñðàâíèâàëè ñâîéñòâà êëåòî÷íûõ êóëüòóð, ïîëó÷åííûõ ïðè èñïîëüçîâàíèè Oct4 - Klf4 è êâàðòåòà ôàêòîðîâ ìåæäó ñîáîé, à òàêæå ñ ÝÑÊ. Óñòàíîâèëè, ÷òî ìîðôîëîãè÷åñêè èäåíòè÷íûå êîëîíèè ðàçëè÷íûõ êëåòî÷íûõ ïîïóëÿöèé õàðàêòåðèçóþòñÿ ñõîäíûì óðîâíåì ýêñïðåññèè ãåíîâ-ìàðêåðîâ ÝÑÊ (Oct4, Nanog, Sox2, Fgf4, Eras, Cfc1, Zfp42, Utf1, Dppa5a), à òàêæå áûëè ïîçèòèâíû ïî SSEA-1. Êðîìå òîãî, ìåòîäîì ÏÖÐ ñ îáðàòíîé òðàíñêðèïöèåé áûëî ïîêàçàíî, ÷òî iPS êëåòêè, ïîëó÷åííûå ïðè èñïîëüçîâàíèè äâóõ èíäóêòîðîâ, è ÝÑÊ õàðàêòåðèçóþòñÿ îäèíàêîâûìè óðîâíÿìè ýêñïðåññèè ýíäîãåííûõ Oct4, Sox2, c-Myc è Klf4 ñ òûñÿ÷åêðàòíûì ïîíèæåíèåì àêòèâíîñòè ðåòðîâèðóñíûõ ôàêòîðîâ ÷åðåç 30 äíåé ïîñëå òðàíñôåêöèè. Ïëþðèïîòåíòíîñòü ñðàâíèâàåìûõ êóëüòóð iPS êëåòîê áûëà ïîäòâåðæäåíà ôîðìèðîâàíèåì ýìáðèîèäíûõ òåëåö, äèôôåðåíöèðîâêîé â êàðäèîìèîöèòû, îáðàçîâàíèåì ïîäêîæíûõ òåðàòîì, êëåòêè êîòîðûõ ýêñïðåññèðîâàëè ìàðêåðû ýêòîäåðìàëüíîé (Tuj1), ýíäîäåðìàëüíîé (AFP) è ìåçîäåðìàëüíîé (Flk1) ïðèíàäëåæíîñòè. Èíúåêöèÿ iPS êëåòîê, ïîëó÷åííûõ ïðè ðåïðîãðàììèðîâàíèè äâóìÿ ôàêòîðàìè, â äèïëîèäíûå è òåòðàïëîèäíûå áëàñòîöèñòû ïðèâîäèëà ê ôîðìèðîâàíèþ õèìåð, êîòîðûå â ïåðâîì ñëó÷àå áûëè æèçíåñïîñîáíû. Ïðè ýòîì êëåòêè, ÿâëÿþùèåñÿ ïðîèçâîäíûìè ðàçíûõ çàðîäûøåâûõ ëèñòêîâ, íåñëè ìàðêåð (GFP), ÷òî óêàçûâàåò íà èõ ïðîèñõîæäåíèå îò ââåäåííîé êóëüòóðû êëåòîê, ãåíîì êîòîðûõ ñîäåðæèò ðåòðîâèðóñíûé âåêòîð, ìàðêèðîâàííûé GFP. Òàêèì îáðàçîì, ïîêàçàíà âîçìîæíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ñîìàòè÷åñêèõ êëåòîê (ÍÑÊ) âñåãî äâóìÿ ôàêòîðàìè çà ñ÷åò ýíäîãåííîé ýêñïðåññèè îñòàëüíûõ. Îñîáåííî âàæíî, ÷òî ïîëîæèòåëüíûå ðåçóëüòàòû äîñòèãàþòñÿ è áåç ïðèìåíåíèÿ ðåòðîâèðóñíûõ âåêòîðîâ, ñîäåðæàùèõ c-Myc, êîòîðûé âíîñèò ñóùåñòâåííûé âêëàä â îïàñíîñòü îïóõîëåâîé òðàíñôîðìàöèè iPS êëåòîê. 2007; 26 (38): 5564-76. 5. Okita K., Ichisaka T., Yamanaka S. Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells. Nature 2007; 448 (7151): 313-7. 6. Episkopou V. SOX2 functions in adult neural stem cells. Trends Neurosci. 2005; 28: 219-21. 7. Kim J. B., Zaehres H., Wu G. Pluripotent stem cells induced from adult neural stem cells by reprogramming with two factors. Nature 2008; 7204: 646-50. 8. Avilion A.A., Nicolis S.K., Pevny L.H. et al. Multipotent cell lineages in early mouse development depend on SOX2 function. Genes Dev. 2003; 17:126-40. Ïîäãîòîâèë È.ß. Áîçî Ïî ìàòåðèàëàì: Kim J. B., Zaehres H., Wu G. Pluripotent stem cells induced from adult neural stem cells by reprogramming with two factors. Nature 2008; (7204): 646-50 Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 18 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé Âëèÿíèå íåñïåöèôè÷åñêèõ èíãèáèòîðîâ ÄÍÊ-ìåòèëòðàíñôåðàçû è ãèñòîíîâîé äåàöåòèëàçû íà ýôôåêòèâíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ýìáðèîíàëüíûõ ôèáðîáëàñòîâ ìûøåé Ñòâîëîâûå êëåòêè, ñïåöèôè÷íûå äëÿ îïðåäåëåííîãî èíäèâèäóóìà (iPS-êëåòêè) ìîãóò áûòü ñîçäàíû ïóòåì ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ñîìàòè÷åñêèõ êëåòîê. Íå òàê äàâíî ïåðåäîâûå èññëåäîâàíèÿ ÿïîíñêèõ è àìåðèêàíñêèõ ó÷åíûõ ïîêàçàëè, ÷òî ýêòîïè÷åñêàÿ ýêñïðåññèÿ ëèøü ÷åòûðåõ ôàêòîðîâ òðàíñêðèïöèè Oct4, Klf4, Sox2 è c-Myc ðåïðîãðàììèðóåò ìûøèíûå ýìáðèîíàëüíûå ôèáðîáëàñòû (ÌÝÔ) â ÝÑÊ-ïîäîáíûå êëåòêè [1, 2]. Àíàëîãè÷íûå ýêñïåðèìåíòû îêàçàëèñü óñïåøíûìè è ñ ÷åëîâå÷åñêèìè êëåòêàìè [3, 4], ÷òî ïîçâîëÿåò ïðåäïîëîæèòü óíèâåðñàëüíîñòü ìåõàíèçìîâ ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ êëåòîê. Îäíàêî, ðåïðîãðàììèðîâàíèå ñ ïðèìåíåíèåì ðåòðîâèðóñîâ îêàçàëîñü ìåäëåííûì è ìàëîýôôåêòèâíûì ïðîöåññîì. Êðîìå òîãî, ãåíåòè÷åñêàÿ òðàíñôîðìàöèÿ ñ ïîìîùüþ ýêçîãåííûõ ãåíîâ, â îñîáåííîñòè, îíêîãåíîâ, òàêèõ êàê c-Myc è Klf4 è èñïîëüçîâàíèå ðåòðîâèðóñíîé ñèñòåìû äîñòàâêè çíà÷èòåëüíî îñëîæíÿþò áóäóùåå òåðàïåâòè÷åñêîå ïðèìåíåíèå ýòîãî ìåòîäà. Ïîýòîìó íåîáõîäèìà ðàçðàáîòêà íîâûõ ïðîòîêîëîâ ïîëó÷åíèÿ èíäèâèäóàëüíûõ ëèíèé ðåïðîãðàììèðîâàííûõ êëåòîê, äîñòàòî÷íî ýôôåêòèâíûõ è ïîòåíöèàëüíî ïîäõîäÿùèõ äëÿ èñïîëüçîâàíèÿ â êëèíèêå. Ïðåäûäóùèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî èíãèáèòîð ãèñòîíîâîé äåàöåòèëàçû (histone deacetylase, HDAC) è äåìåòèëèðîâàíèå ÄÍÊ îêàçûâàþò ïîëîæèòåëüíîå âëèÿíèå íà ýôôåêòèâíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ ïðè ïåðåíîñå ÿäðà ñîìàòè÷åñêîé êëåòêè [5]. Ýòîò ôàêò íàòîëêíóë íåêîòîðûõ èññëåäîâàòåëåé íà ìûñëü î òîì, ÷òî íåñïåöèôè÷åñêèå ýïèãåíåòè÷åñêèå ðåãóëÿòîðû ìîãóò óâåëè÷èòü ýôôåêòèâíîñòü ïîëó÷åíèÿ iPS-êëåòîê. Ãðóïïà ïîä ðóêîâîäñòâîì D. Melton îïóáëèêîâàëà ðàáîòó, ðåçóëüòàòû êîòîðîé ñâèäåòåëüñòâóþò î òîì, ÷òî èíãèáèòîðû ÄÍÊ-ìåòèëòðàíñôåðàçû è ãèñòîíîâîé äåàöåòèëàçû ïîâûøàþò ýôôåêòèâíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ â äåñÿòêè è ñîòíè ðàç íà ïðèìåðå òðàíñãåííûõ Oct4-GFP ÌÝÔ. Èñïîëüçóÿ òðàíñãåí Oct4-GFP èññëåäîâàòåëè ïðîâåðèëè êàê âûáðàííûå íåáîëüøèå ìîëåêóëû âëèÿþò íà ìîäèôèêàöèþ õðîìàòèíà è ðåïðîãðàììèðîâàíèå. Ýêòîïè÷åñêàÿ ýêñïðåññèÿ ÷åòûðåõ ôàêòîðîâ òðàíñêðèïöèè (Oct4, Sox2, Klf4 è c-Myc) â òðàíñãåííûõ ÌÝÔ Oct4-GFP èíäóöèðîâàëà ýêñïðåññèþ GFP ó 0,03±0,02% êëåòîê (íà 7 ñóò. ïîñëå ââåäåíèÿ âåêòîðîâ). Ïðîöåíò GFP+ êëåòîê îñòàâàëñÿ îäèíàêîâûì âïëîòü äî 13 ñóò. Èíêóáàöèÿ òðàíñôåöèðîâàííûõ ÌÝÔ ñ 5-àçàöèòèäèíîì, èíãèáèòîðîì ÄÍÊ-ìåòèëòðàíñôåðàçû, óâåëè÷èâàëî êîëè÷åñòâî GFP+ êëåòîê ïðèìåðíî â 10 ðàç (äî 0,50±0,06%). Ïðè ýòîì äåéñòâèå ýòîãî àãåíòà áûëî äîçîçàâèñèìûì. Äåêñàìåòàçîí, ñèíòåòè÷åñêèé ãëþêîêîðòèêîèä, óâåëè÷èâàë âîçäåéñòâèå 5-àçàöèòèäèíà â 2,6 ðàçà (ïðè èñïîëüçîâàíèè â ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Okita K., Ichisaka T., Yamanaka S. Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells. Nature 2007; 448: 313-317. 2. Maherali N., Sridharan R., Xie W. et al. Directly reprogrammed fibroblasts show global epigenetic remodeling and widespread tissue contribution. Cell Stem Cell 2007; 1: 55-70. Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 ñî÷åòàíèè). Ïðè ýòîì òîëüêî äåêñàìåòàçîí íå îêàçûâàë òàêîãî âîçäåéñòâèÿ. Òðè èçâåñòíûõ èíãèáèòîðà HDAC, ñóáåðîèëàíèëèä ãèäðîêñàìîâîé êèñëîòû (SAHA), òðèõîñòàòèí A (TSA) è âàëüïðîåâàÿ êèñëîòà (VPA) òàêæå çíà÷èòåëüíî óâåëè÷èâàëè ýôôåêòèâíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ. Ïðè ýòîì äåéñòâèå VPA áûëî íàèáîëüøèì. Òàê âîçäåéñòâèå íà ÌÝÔ VPA â òå÷åíèå 1 íåä. ïîçâîëèëî äîáèòüñÿ ïîëó÷åíèÿ 11,8±2,2% GFP+ êëåòîê, ÷òî â 4100 ðàç ïðåâûøàåò êîíòðîëüíûå ïîêàçàòåëè. Âåùåñòâî òàêæå ïðîÿâëÿåò äîçîçàâèñèìûé ýôôåêò. Âîçìîæíî, ÷òî òàêàÿ çíà÷èòåëüíàÿ ðàçíèöà â ýôôåêòèâíîñòè èññëåäîâàííûõ ïðåïàðàòîâ îáúÿñíÿåòñÿ òåì, ÷òî âñå îíè (êðîìå VPA) ÿâëÿþòñÿ òîêñè÷íûìè óæå â íåáîëüøèõ êîíöåíòðàöèÿõ. Ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ðåïðîãðàììèðîâàíèå âîçìîæíî è ïðè ïðèìåíåíèè âñåãî òðåõ ôàêòîðîâ (Oct4, Sox2 è Klf4) áåç c-Myc [6]. Îäíàêî, ýôôåêòèâíîñòü òàêîãî ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ êðàéíå íèçêà, à êîëîíèè iPS êëåòîê ïîÿâëÿþòñÿ ïîçäíî. Ëèøü îäíà êîëîíèÿ iPS êëåòîê ôîðìèðóåòñÿ èç ñòà òûñÿ÷ òðàíñôåöèðîâàííûõ ôèáðîáëàñòîâ êîæè ÷åëîâåêà (ýôôåêòèâíîñòü 0,001%) [6]. Ïîýòîìó èññëåäîâàòåëè òàêæå ïðîàíàëèçèðîâàëè ñïîñîáíîñòü êëåòîê, ïîäâåðãíóòûõ âîçäåéñòâèþ 5-àçàöèòèäèíà è VPA, ê ôîðìèðîâàíèþ êîëîíèé iPS êëåòîê ïðè òðàíñôåêöèè òðåìÿ ôàêòîðàìè. Oct4-GFP ÌÝÔ áûëè èíôèöèðîâàíû Oct4, Sox2 è Klf4, à çàòåì ïîäâåðãíóòû âîçäåéñòâèþ 5-àçàöèòèäèíà è VPA â òå÷åíèå îäíîé íåäåëè. ×åðåç 10 ñóò. FACS-àíàëèç çàôèêñèðîâàë óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà GFP+ êëåòîê â 3 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ òðåòüèìè ñóò. ïîñëå òðàíñôåêöèè. Âîçäåéñòâèå VPA óâåëè÷èâàëî ýôôåêòèâíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ â 50 ðàç. Ýòî ïîçâîëèëî îòîáðàòü êîëîíèè iPS êëåòîê óæå ÷åðåç 2 íåä. ïîñëå òðàíñôåêöèè. Ïîëó÷åííûå êëåòêè èìåëè òèïè÷íóþ äëÿ ÝÑÊ ìîðôîëîãèþ, ïîçèòèâíî îêðàøèâàëèñü íà ùåëî÷íóþ ôîñôàòàçó è ýêñïðåññèðîâàëè ìàðêåðû ïëþðèïîòåíòíîñòè. Èññëåäîâàíèå ïàòòåðíà ãåííîé ýêñïðåññèè òàêèõ êëåòîê ïîêàçàëî, ÷òî ïîëó÷åííûå iPSêëåòêè çíà÷èòåëüíî îòëè÷àþòñÿ îò ÌÝÔ è áîëüøå âñåãî íàïîìèíàþò ìûøèíûå ÝÑÊ. Âîçäåéñòâèå VPA íà íåòðàíñôåöèðîâàííûå ôèáðîáëàñòû íå âûçûâàåò óâåëè÷åíèÿ GFP+ êëåòîê, ñëåäîâàòåëüíî îäíî ëèøü âîçäåéñòâèå VPA íå ñïîñîáíî âûçâàòü ðåïðîãðàììèðîâàíèå èëè äðóãèå ãåíåòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ. Áîëåå äåòàëüíûé àíàëèç ãåííîé ýêñïðåññèè ïîêàçàë, ÷òî äåéñòâèå VPA âûçûâàåò àêòèâàöèþ ÝÑÊ-ñïåöèôè÷åñêèõ ãåíîâ è èíãèáèðîâàíèå ýêñïðåññèè ãåíîâ ÌÝÔ. Òàêèì îáðàçîì, â èññëåäîâàíèè áûëî ïîêàçàíî, ÷òî íåñïåöèôè÷åñêèå õèìè÷åñêèå àãåíòû, âûçûâàþùèå ýïèãåíåòè÷åñêèå èçìåíåíèÿ, ïîëîæèòåëüíî âëèÿþò íà ýôôåêòèâíîñòü ðåïðîãðàììèðîâàíèÿ è ìîãóò çàìåíèòü îäèí èëè áîëåå ôàêòîðîâ òðàíñêðèïöèè. 3. Takahashi K., Tanabe K., Ohnuki M. et al. Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors. Cell 2007; 131: 861-872. 4. Park I.H., Zhao R., West J.A. et al. Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors. Nature 2008; 451: 141-146. 5. Blelloch R., Wang Z., Meissner A. et al. Reprogramming efficiency following somatic cell nuclear transfer is influenced by the differentiation and Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé methylation state of the donor nucleus. Stem Cells 2006; 24; 2007-13. 6. Nakagawa M., Yoyanagi M., Tanabe K. et al. Generation of induced 19 pluripotent stem cells without Myc from mouse and human fibroblasts. Nat. Biotechnol. 2008; 26: 101-106. Ïîäãîòîâèëà Â.Ñ. Ìåëèõîâà Ïî ìàòåðèàëàì: Huangfu D., Maehr R., Guo W. et al. Induction of pluripotent stem cells by defined factors is greatly improved by small-molecule compounds. Nature Biotechnology 2008; 26: 795-7 Ýíäîòåëèàëüíûå êëåòêè-ïðåäøåñòâåííèöû êîñòíîãî ìîçãà íå ó÷àñòâóþò â ïðîöåññàõ îïóõîëåâîãî àíãèîãåíåçà è íå ÿâëÿþòñÿ íåîáõîäèìûìè äëÿ ðîñòà çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé Ôîðìèðîâàíèå êðîâåíîñíûõ ñîñóäîâ â ïåðâè÷íûõ èëè âòîðè÷íûõ (ìåòàñòàçàõ) íîâîîáðàçîâàíèÿõ ÿâëÿåòñÿ êëþ÷åâûì óñëîâèåì îïóõîëåâîé ïðîãðåññèè. Ïðåæäå âñåãî ýòî ñâÿçàíî ñ îáåñïå÷åíèåì îïóõîëåâûõ êëåòîê íåîáõîäèìûìè äëÿ æèçíåäåÿòåëüíîñòè âåùåñòâàìè, ïîñòóïëåíèå êîòîðûõ èç îêðóæàþùèõ îïóõîëü íîðìàëüíûõ òêàíåé âåñüìà îãðàíè÷åíî. Äåéñòâèòåëüíî, áåññîñóäèñòûå íîâîîáðàçîâàíèÿ, îáíàðóæèâàåìûå êàê ó ÷åëîâåêà, òàê è ó æèâîòíûõ, êàê ïðàâèëî, íå ïðåâûøàþò 1-2 ìì â äèàìåòðå è èõ äàëüíåéøèé ðîñò àññîöèèðóåòñÿ ñ èíäóêöèåé àíãèîãåíåçà («àíãèîãåííîå ïåðåêëþ÷åíèå») [1].  ìíîãî÷èñëåííûõ èññëåäîâàíèÿõ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî îïóõîëåâûå êëåòêè ìîãóò ñåêðåòèðîâàòü çíà÷èòåëüíûå êîëè÷åñòâà ñòèìóëèðóþùèõ àíãèîãåíåç ôàêòîðîâ ðîñòà, íàèáîëüøåå çíà÷åíèå èç êîòîðûõ èìååò ñîñóäèñòûé ýíäîòåëèàëüíûé ôàêòîð ðîñòà (vascular endolelial grows factor, VEGF) [2]. Ñåêðåöèÿ ýòèõ ôàêòîðîâ çëîêà÷åñòâåííûìè êëåòêàìè ìîæåò îáåñïå÷èâàòü ðîñò ñîñóäîâ â îïóõîëè ïóòåì îòâåòâëåíèÿ èç ñîñóäîâ îêðóæàþùèõ íîðìàëüíûõ òêàíåé. Êðîìå òîãî, ëîêàëüíîå è/èëè ñèñòåìíîå ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè VEGF ìîæåò îáóñëîâëèâàòü ìèãðàöèþ â îáëàñòü îïóõîëåâîãî ðîñòà öèðêóëèðóþùèõ ïðåäøåñòâåííèêîâ ýíäîòåëèîöèòîâ (endothelial progenitor cells, EPCs) è ôîðìèðîâàíèå ñîñóäîâ de novo âíóòðè îïóõîëè [1]. Êàêîé èç ýòèõ ìåõàíèçìîâ ÿâëÿåòñÿ âåäóùèì? Ïî êðàéíåé ìåðå, ïðè èñïîëüçîâàíèè íåêîòîðûõ âèäîâ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ìîäåëåé çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé ó ìûøåé áûëà ïîêàçàíà êëþ÷åâàÿ ðîëü EPCs â èíèöèàöèè «àíãèîãåííîãî ïåðåêëþ÷åíèÿ» [3-5]. Ýòè ïèëîòíûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ ïîñëóæèëè ïîâîäîì äëÿ ïîÿâëåíèÿ ìíîãî÷èñëåííûõ èäåé î ðàçðàáîòêå íîâûõ ìåòîäîâ ëå÷åíèÿ çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé ïóòåì ôàðìàêîëîãè÷åñêîãî ïîäàâëåíèÿ ôèçèîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé EPCs è/èëè âûõîäà EPCs èç êîñòíîãî ìîçãà [2]. Îäíàêî, ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ P. Salven è ñîàâò. èç àêàäåìèè áèîëîãèè ðàêà (Ôèíëÿíäèÿ), ïîñâÿùåííîãî èçó÷åíèþ ìèãðàöèè VEGF-2R+ EPCs è èõ ðîëè â àíãèîãåíåçå, ïîçâîëÿþò óñîìíèòüñÿ â ñóùåñòâîâàíèè êàêîé-ëèáî ðîëè EPCs â îïóõîëåâîì àíãèîãåíåçå ó âçðîñëûõ æèâîòíûõ. Ïóòåì òðàíñïëàíòàöèè êëåòîê êîñòíîãî ìîçãà îò òðàíñãåííûõ ìûøåé ëåòàëüíî îáëó÷åííûì íîðìàëüíûì ðåöèïèåíòàì àâòîðû ñîçäàëè òðè ãðóïïû õèìåðíûõ ìûøåé.  ïåðâîé è âòîðîé ãðóïïàõ êëåòêè êîñòíîãî ìîçãà ýêñïðåññèðîâàëè ôëþîðîõðîì-ñîäåðæàùèå áåëêè GFP èëè DsRed.T3.  òðåòüåé ãðóïïå õèìåðíûõ ìûøåé â EPCs êîñòíîãî ìîçãà ýêñïðåññèðîâàëñÿ ãåí β-ãàëàêòîçèäàçû LacZ, íàõîäÿùèéñÿ ïîä êîíòðîëåì ñïåöèôè÷íûõ äëÿ EPCs ïðîìîòîðîâ (VEGF-R2 èëè Tie-1). Ïîñëå âîññòàíîâëåíèÿ êðîâåòâîðåíèÿ ó õèìåðíûõ ìûøåé èíäóöèðîâàëñÿ àíãèîãåíåç ïóòåì ïîäêîæíîé èíúåêöèè àäåíîâèðóñíûõ âåêòîðîâ ñ ãåíîì VEGF èëè ïóòåì èìïëàíòàöèè ìàòðèãåëÿ ñ VEGF. Îïóõîëåâûé àíãèîãåíåç èçó÷àëñÿ ïðè ïîäêîæíîé èíúåêöèè ñèíãåííûõ êëåòîê ìåëàíîìû Â16 èëè ïðè èñïîëüçîâàíèè â êà÷åñòâå ðåöèïèåíòîâ êîñòíîãî ìîçãà ìûøåé ëèíèè, õàðàêòåðèçóþùåéñÿ âûñîêîé ÷àñòîòîé ñïîíòàííîãî âîçíèêíîâåíèÿ àäåíîì (APCmin ìûøè). ×òîáû èñêëþ÷èòü âåðîÿòíûå àðòåôàêòû, ñâÿçàííûå ñ îáëó÷åíèåì è òðàíñïëàíòàöèåé êîñòíîãî ìîçãà, àâòîðû òàêæå èññëåäîâàëè îïóõîëåâûé àíãèîãåíåç ó ìûøåé-ïàðàáèîíòîâ, êîòîðûå áûëè ïîëó÷åíû ïóòåì íàëîæåíèÿ ïåðåêðåñòíûõ ñîñóäèñòûõ àíàñòîìîçîâ ìåæäó òðàíñãåííûìè GFP+ è ìîëîäûìè APCmin ìûøàìè. Ïðîâîäèìûå èññëåäîâàíèÿ (â òîì ÷èñëå êîíôîêàëüíîå ñêàíèðîâàíèå è ïîñòðîåíèå 3D îðòîãîíàëüíûõ ïðîåêöèé, à òàêæå ïåðôóçèîííîå îêðàøèâàíèå ëåêòèíîì), öåëüþ êîòîðûõ ÿâëÿëîñü âûÿâëåíèå ìå÷åíûõ êëåòîê â ìåñòàõ ââåäåíèÿ àäåíîâèðóñîâ, â ìàòðèãåëå èëè îïóõîëÿõ, ïðîâîäèëîñü íà 14 ñóò. ïîñëå èíúåêöèé, òðàíñïëàíòàöèé êëåòîê ìåëàíîìû, êîñòíîãî ìîçãà èëè íàëîæåíèÿ àíàñòîìîçîâ. Êðîìå òîãî, âî âñåõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ñåðèÿõ îòäåëüíûå èññëåäîâàíèÿ âûïîëíÿëèñü íà ñðîêè îò 7 ñóò. äî 6 ìåñ. Ìîáèëèçàöèÿ EPCs èç êîñòíîãî ìîçãà îöåíèâàëàñü ìåòîäîì ïðîòî÷íîé öèòîôëþîðîìåòðèè. Íè â îäíîé èç ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ñåðèé íå áûëî îáíàðóæåíî óâåëè÷åíèÿ êîíöåíòðàöèè VEGF-R2+ EPCs â êðîâè, äàæå íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî ïåðèîä ìàêñèìàëüíî áûñòðîãî ðîñòà ìåëàíîìû B16 (ïðèìåðíî íà 14 ñóò.) ñîïðîâîæäàëñÿ ïîâûøåíèåì îáùåãî êîëè÷åñòâà êëåòîê ãåìîïîýòè÷åñêîãî ðÿäà â êðîâè. Èññëåäîâàíèå òêàíåé, â êîòîðûå èíúåöèðîâàëñÿ àäåíîâèðóñ, ìàòðèãåëÿ è îïóõîëåé ïîêàçàëî âî âñåõ ñëó÷àÿõ íàëè÷èå âûðàæåííîãî àíãèîãåíåçà, ïðè÷åì íîðìàëüíûå è îïóõîëåâûå òêàíè, ìàòðèãåëü áûëè ñèëüíî èíôèëüòðèðîâàíû êëåòêàìè ãåìîïîýòè÷åñêîãî ðÿäà, èìåþùèõ êîñòíîìîçãîâîå ïðîèñõîæäåíèå. Òåì íå ìåíåå, äåòàëüíûé àíàëèç ïîêàçàë, ÷òî âñå ìå÷åíûå êëåòêè èìåëè ñòðîìàëüíóþ èëè ïåðèâàñêóëÿðíóþ ëîêàëèçàöèþ. Íè â îäíîì ñëó÷àå ñðåäè êëåòîê, âûñòèëàþùèõ ñîñóäû, íå áûëî îáíàðóæåíî êîëîêàëèçàöèè ìàðêåðà, ñâèäåòåëüñòâóþùåãî î êîñòíîìîçãîâîì ïðîèñõîæäåíèè êëåòêè, è ìàðêåðîâ EPCs (VEGF-R2) èëè çðåëûõ êëåòîê ýíäîòåëèÿ (CD105, vWF è CD31).  ñâîþ î÷åðåäü, ïðè Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 20 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ïåðôóçèîííîì îêðàøèâàíèè ëåêòèíîì íå áûëî âûÿâëåíî ìå÷åíûõ ýíäîòåëèîöèòîâ, ñâÿçûâàþùèõ ëåêòèí. Òàêèì îáðàçîì, íåñìîòðÿ íà èñïîëüçîâàíèå ìåòîäîâ èññëåäîâàíèÿ ñ âûñîêîé ðàçðåøàþùåé ñïîñîáíîñòüþ, íå áûëà ïîäòâåðæäåíà ñêîëüêî-íèáóäü çàìåòíàÿ ðîëü VEGF-R2+ EPCs â öåëîì ðÿäå ýêñïåðèìåíòàëüíûõ ìîäåëåé àíãèîãåíåçà, è, ÷òî îñîáåííî âàæíî, â îïóõîëåâîì àíãèîãåíåçå. Àâòîðû çàêëþ÷àþò, ÷òî ïî àíàëîãèè ñ òðàíñäèôôåðåíöèðîâêîé ÃÑÊ, äèôôåðåíöèðîâêà â êëåòêè ýíäîòåëèÿ íå ÿâëÿåòñÿ òèïè÷íîé ôóíêöèåé íîðìàëüíûõ EPCs êîñòíîãî ìîçãà è ÿâëÿåòñÿ î÷åíü ðåäêèì ñîáûòèåì, åñëè âîîáùå ïðîèñõîäèò. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû íàïðÿìóþ ïðîòèâîðå÷àò äàííûì ïðåäûäóùèõ èññëåäîâàíèé, â êîòîðûõ áûëà îáíàðóæåíà êëþ÷åâàÿ ðîëü VEGFR2+ EPCs â îïóõîëåâîì àíãèîãåíåçå [3-5], à òàêæå â àíãèîãåíåçå, èíäóöèðîâàííîì èíúåêöèåé àäåíîâèðóñîâ ñ ãåíîì VEGF [6] èëè èìïëàíòàöèåé ìàòðèãåëÿ ñ VEGF [4]. Îäíàêî, ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ó íàñòîÿùåé ðàáîòû åñòü íåñêîëüêî îòëè÷èòåëüíûõ ïðåèìóùåñòâ. Âî-ïåðâûõ, â êàæäîé ýêñïåðèìåíòàëüíîé ñåðèè àíàëèçèðîâàëîñü áîëüøîå êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ (íå ìåíåå 40). Âî-âòîðûõ, âî âñåõ ñëó÷àÿõ â êà÷åñòâå ñðàâíåíèÿ èñïîëüçîâàëèñü êàê îòðèöàòåëüíûå, òàê è ïîëîæèòåëüíûå êîíòðîëè. Â-òðåòüèõ, àâòîðû èñïîëüçîâàëè ðàçíûå ìåòêè (GFP, DsRed.T3 èëè ãàëàêòîçèäàçó), âûáîð êîòîðûõ íå ïîâëèÿë íà êîíå÷íûå ðåçóëüòàòû. Ýòî èìååò ïðèíöèïèàëüíîå çíà÷åíèå, òàê êàê ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî, íàïðèìåð, GFP ìîæåò îêàçûâàòü çíà÷èòåëüíîå âëèÿíèå íà ýêñïðåññèþ íåêîòîðûõ ãåíîâ EPCs è, òàêèì îáðàçîì, íàðóøàòü èõ ôóíêöèþ [7]. Â-÷åòâåðòûõ, èñïîëüçîâàëèñü ðàçíûå ýêñïåðèìåíòàëüíûå ìîäåëè êàê ñ îáëó÷åíèåì, òàê è áåç. Â-ïÿòûõ, àâòîðû íå èñïîëüçîâàëè ýêñïåðèìåíòàëüíóþ ñèñòåìó ñ ïîäàâëåíèåì àêòèâíîñòè ôàêòîðà òðàíñêðèïöèè Id1 â êëåòêàõ êîñòíîãî ìîçãà, íà îñíîâå êîòîðîé áûëà ïîëó÷åíà îñíîâíàÿ ìàññà ðåçóëüòàòîâ î êëþ÷åâîé ðîëè EPCs â îïóõîëåâîì àíãèîãåíåçå [3, 4]. Ñëàáûì ìåñòîì ýòèõ ðàáîò ÿâëÿåòñÿ íåäîîöåíêà ðîëè êëåòîê ãåìîïîýòè÷åñêîãî ðÿäà, êîòîðûå òàêæå ýêñïðåññèðóþò Id1 [8]. Êðîìå òîãî, îïðåäåëåííûé âåñ èññëåäîâàíèþ ïðèäàåò ó÷àñòèå â êà÷åñòâå ñîàâòîðà äèðåêòîðà èíñòèòóòà áèîëîãèè ñòâîëîâûõ êëåòîê è ðåãåíåðàòèâíîé ìåäèöèíû Ñòýíôîðäñêîãî óíèâåðñèòåòà ïðîôåññîðà I.Weissman. Ñõåìà ïîëó÷åíèÿ õèìåðíûõ ìûøåé, èñïîëüçîâàííûõ â ýêñïåðèìåíòå. Ïîñëå îáëó÷åíèÿ ìûøàì äèêîãî òèïà òðàíñïëàíòèðîâàëèñü êëåòêè êîñòíîãî ìîçãà îò òðàíñãåííûõ ìûøåé.  çàâèñèìîñòè îò âûáðàííîãî ïðîìîòîðà (ïðîìîòîðû ãåíîâ β-àêòèíà, VEGF-R2 èëè Tie-1) ó õèìåð ìàðêåðû ýêñïðåññèðîâàëèñü âî âñåõ êëåòêàõ êîñòíîãî ìîçãà èëè òîëüêî â EPCs Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Bergers G., Benjamin L. Tumorigenesis and the angiogenic switch. Nat. Rev. Cancer 2003; 3: 401-10. 2. Ellis L., Hicklin D. VEGF-targeted therapy: mechanisms of anti-tumour activity. Nat. Rev. Cancer 2008; 8: 579-91. 3. Gao D., Nolan D., Mellick A. et al. Endothelial progenitor cells control the angiogenic switch in mouse lung metastasis. Science 2008; 319: 195-8. 4. Lyden D., Hattori K., Dias S. et al. Impaired recruitment of bone-marrowderived endothelial and hematopoietic precursor cells blocks tumor angiogenesis and growth. Nat. Med. 2001; 7: 1194201. 21 5. Nolan D., Ciarrocchi A., Mellick A. et al. Bone marrow-derived endothelial progenitor cells are a major determinant of nascent tumor neovascularization. Genes Dev. 2007; 21: 154658. 6. Hattori K., Dias S., Heissig B. et al. Vascular endothelial growth factor and angiopoietin-1 stimulate postnatal hematopoiesis by recruitment of vasculogenic and hematopoietic stem cells. J. Exp. Med. 2001; 193: 100514. 7. Zhang F., Hackett N., Lam G. et al. Green fluorescent protein selectively induces HSP70-mediated up-regulation of COX-2 expression in endothelial cells. Blood 2003; 102: 211521. 8. Perry S., Zhao Y., Nie L. et al. Id1, but not Id3, directs long-term repopulating hematopoietic stem-cell maintenance. Blood 2007; 110 (7): 2351-60. Ïîäãîòîâèëè: Â.Ñ. Ñåðãååâ, È.Ë. Ïëàêñà Ïî ìàòåðèàëàì: Purhonen S., Palm J., Rossi D. et al. Bone marrow-derived circulating endothelial precursors do not contribute to vascular endothelium and are not needed for tumor growth. PNAS 2008; 150: 66205 ÊËÈÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Ìóëüòèïîòåíòíûå ìåçåíõèìàëüíûå ñòðîìàëüíûå êëåòêè â òåðàïèè îñòðîé ÐÒÏÕ, ðåçèñòåíòíîé ê ãëþêîêîðòèêîèäàì: ðåçóëüòàòû II ôàçû êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé Òðàíñïëàíòàöèÿ àëëîãåííûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ ñòâîëîâûõ êëåòîê (ÃÑÊ) îáùåïðèíÿòûé ìåòîä òåðàïèè ìíîãèõ ãåìàòîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé [1, 2]. Îäíèì èç íàèáîëåå òÿæåëûõ îñëîæíåíèé äàííîãî ìåòîäà ÿâëÿåòñÿ «ðåàêöèÿ òðàíñïëàíòàò ïðîòèâ õîçÿèíà» (ÐÒÏÕ). ÐÒÏÕ îáóñëîâëåíà èììóííîé àòàêîé òêàíåé ðåöèïèåíòà ëèìôîöèòàìè äîíîðà. Äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ ÐÒÏÕ îáû÷íî ïðèìåíÿþòñÿ ãëþêîêîðòèêîèäû, ðåçóëüòàòèâíîñòü òàêîé òåðàïèè ñîñòàâëÿåò 30-50%.  îñòàëüíûõ æå ñëó÷àÿõ íàáëþäàåòñÿ îñòðàÿ ðåçèñòåíòíàÿ ê ãëþêîêîðòèêîèäàì ÐÒÏÕ ñ íåáëàãîïðèÿòíûì ïðîãíîçîì [1, 3, 4]. Ìóëüòèïîòåíòíûå ìåçåíõèìàëüíûå ñòðîìàëüíûå êëåòêè (ÌÌÑÊ) êîñòíîãî ìîçãà ñïîñîáíû äèôôåðåíöèðîâàòüñÿ â ðàçëè÷íûå êëåòêè ìåçåíõèìíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ, ïðåèìóùåñòâåííî â îñòåîöèòû, õîíäðîöèòû è àäèïîöèòû [5]. ÌÌÑÊ íåîáõîäèìû äëÿ ïîääåðæàíèÿ ïðîëèôåðàöèè è äèôôåðåíöèðîâêè ÃÑÊ â êîñòíîì ìîçãå [6]. Åñòåñòâåííîå âçàèìîäåéñòâèå ýòèõ äâóõ ïîïóëÿöèé íàâåëî íà èäåþ î òîì, ÷òî êîòðàíñïëàíòàöèÿ ÃÑÊ è ÌÌÑÊ äîëæíà áûòü ïî ìíîãèì ïàðàìåòðàì áîëåå ýôôåêòèâíà, ÷åì òðàíñïëàíòàöèÿ òîëüêî ÃÑÊ.  ýêñïåðèìåíòàõ íà æèâîòíûõ áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ïðè êîòðàíñïëàíòàöèè ÃÑÊ è ÌÌÑÊ ïðèæèâàåìîñòü òðàíñïëàíòàòà ñóùåñòâåííî ïîâûøàåòñÿ, íå ïðîèñõîäèò ðåàêöèè îòòîðæåíèÿ òðàíñïëàíòàòà èëè îíà ìåíåå âûðàæåíà [6].  ýêñïåðèìåíòàõ ïî cîêóëüòèâèðîâàíèþ ÌÌÑÊ ñ àëëîãåííûìè ëèìôîöèòàìè in vitro áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÌÌÑÊ íå èíäóöèðóþò èõ ïðîëèôåðàöèþ, ñåêðåöèþ IFN-γ è ïðîäóêöèþ ïðîâîñïàëèòåëüíûõ öèòîêèíîâ [7, 8]. Èììóíîìîäóëèðóþùèå ñâîéñòâà ÌÌÑÊ áûëè ïðîäåìîíñòðèðîâàíû â ýêñïåðèìåíòàõ in vivo: ïîêàçàíî, ÷òî âíóòðèâåííûå èíúåêöèè HLA-íåñîâìåñòèìûõ ÌÌÑÊ óâåëè÷èâàþò âðåìÿ æèçíè àëëîãåííûõ êîæíûõ òðàíñïëàíòàòîâ [9].  òî æå âðåìÿ, â íåäàâíåì ïèëîòíîì êëèíè÷åñêîì èññëåäîâàíèè êîòðàíñïëàíòàöèè ÌÌÑÊ è ÃÑÊ, ïðîâåäåííîì ãðóïïîé H. Ning áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ÌÌÑÊ ñíèæàþò ðèñê ðàçâèòèÿ è îñòðîòó ÐÒÏÕ, íî, âîçìîæíî, çà ñ÷åò ñâîèõ èììóíîìîäóëèðóþùèõ/èììóíîñóïðåññèâíûõ ñâîéñòâ ìîãóò ïîâûøàòü âåðîÿòíîñòü ðåöèäèâà îñíîâíîãî çàáîëåâàíèÿ [10].  æóðíàëå Lancet áûëà îïóáëèêîâàíà ðàáîòà ãðóïïû èññëåäîâàòåëåé ïîä ðóêîâîäñòâîì K. Le Blanc ïîñâÿùåííàÿ ðåçóëüòàòàì II ôàçû ìóëüòèöåíòðîâûõ êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé, â êîòîðûõ òðàíñïëàíòàöèÿ àëëîãåííûõ ÌÌÑÊ áûëà ïðîâåäåíà 55 ïàöèåíòàì ñ òÿæåëîé ðåçèñòåíòíîé ê ãëþêîêîðòèêîèäàì ÐÒÏÕ, ðàçâèâøåéñÿ ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè ÃÑÊ (48 ïàöèåíòîâ) ëèáî àëëîãåííûõ ëèìôîöèòîâ (7 ïàöèåíòîâ). Ó áîëüøèíñòâà ïàöèåíòîâ íàáëþäàëàñü ÐÒÏÕ III è IV ñòàäèè ñ âîâëå÷åíèåì â ïàòîëîãè÷åñêèé ïðîöåññ äâóõ èëè òðåõ îðãàíîâ. Ó 45 ïàöèåíòîâ îïåðàöèè âûïîëíåíû ïî ïîâîäó îíêîãåìàòîëîãè÷åñêèõ, à ó 10 íåçëîêà÷åñòâåííûõ ãåìàòîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé. Âñå ïàöèåíòû ïðîõîäèëè ñòàíäàðòíûå êóðñû òåðàïèè.  êà÷åñòâå ïðîôèëàêòèêè ÐÒÏÕ ïðèìåíÿëñÿ öèêëîñïîðèí â êîìáèíàöèè ñ ìåòîòðåêñàòîì ëèáî ìèêîôåíîëàò ñ ìîôåòèëîì. Ïÿòè ïàöèåíòàì, ïîëó÷èâøèì òðàíñïëàíòàöèè ÃÑÊ ïóïîâèííîé êðîâè, öèêëîñïîðèí íàçíà÷àëñÿ â êîìáèíàöèè ñ ïðåäíèçîëîíîì. Íè îäèí èç ïàöèåíòîâ èç èññëåäóåìîé ãðóïïû íå ðåàãèðîâàë íà èììóíîñóïðåññèâíóþ òåðàïèþ â òå÷åíèå ñåìè èëè áîëåå äíåé. Ïîëíûì êëèíè÷åñêèì îòâåòîì íà òåðàïèþ ÌÌÑÊ ñ÷èòàëîñü ïîëíîå èñ÷åçíîâåíèå ñèìïòîìîâ ÐÒÏÕ, ÷àñòè÷íûì îòâåòîì óëó÷øåíèå ñîñòîÿíèÿ ïàöèåíòà ïî êðàéíåé ìåðå íà îäíó ñòåïåíü ÐÒÏÕ, ñòàáèëüíûì ñ÷èòàëîñü ñîñòîÿíèå áåç èçìåíåíèé, à ïðîãðåññèåé óõóäøåíèå ñîñòîÿíèÿ ïàöèåíòà è äàëüíåéøåå ïðîãðåññèðîâàíèå ÐÒÏÕ. ÌÌÑÊ äëÿ êëåòî÷íîé òåðàïèè áûëè ïîëó÷åíû îò HLA-ñîâìåñòèìûõ, ãàïëîèäåíòè÷íûõ ëèáî HLA-íåñîâìåñòèìûõ äîíîðîâ. Ôåíîòèï ÌÌÑÊ îïðåäåëÿëñÿ êàê CD73 +/CD90 +/CD105 +/ CD34/CD45/CD14/CD3. Êîëè÷åñòâî òðàíñïëàíòèðóåìûõ êëåòîê âàðüèðîâàëî îò 0,6 äî 9×106 êëåòîê íà êã âåñà ïàöèåíòà. Äëÿ òðàíñïëàíòàöèè èñïîëüçîâàëèñü êëåòêè 2, 3 è 4 ïàññàæåé. Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 22 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé Èç 55 ïàöèåíòîâ ó 39 íàáëþäàëñÿ ïîëîæèòåëüíûé îòâåò íà òåðàïèþ ÌÌÑÊ, ó áîëüøèíñòâà îñòàëüíûõ íàáëþäàëàñü ïðîãðåññèÿ çàáîëåâàíèÿ. Âûæèâàåìîñòü â ãðóïïå ïàöèåíòîâ ñ ïîëíûì êëèíè÷åñêèì îòâåòîì íà òåðàïèþ áûëà çíà÷èòåëüíî âûøå, ÷åì â ãðóïïå ñ ÷àñòè÷íûì èëè íåãàòèâíûì îòâåòîì íà òåðàïèþ (13% ñìåðòíîñòè â ñðàâíåíèè ñ 60% ñìåðòíîñòè â òå÷åíèå ïåðâûõ 100 ñóò. ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè ÌÌÑÊ, è 37% ñìåðòíîñòè è 72% ñìåðòíîñòè ñîîòâåòñòâåííî â òå÷åíèå 1 ãîäà ïîñëå òðàíñïëàíòàöèè ÌÌÑÊ). Íå áûëî îòìå÷åíî íèêàêèõ òîêñè÷åñêèõ è äðóãèõ ïîáî÷íûõ ýôôåêòîâ òðàíñïëàíòàöèè ÌÌÑÊ. Ñòåïåíü ðåàêöèè íà òåðàïèþ íå ðàçëè÷àëàñü â ãðóïïàõ ïàöèåíòîâ ñ III è IV ñòåïåíÿìè ÐÒÏÕ.  òî æå âðåìÿ, òðåáóåòñÿ áîëåå ìàñøòàáíîå èññëåäîâàíèå, ÷òîáû ïîäòâåðäèòü ëèáî îïðîâåðãíóòü ïðåäâàðèòåëüíûé âûâîä àâòîðîâ î íåçàâèñèìîñòè îòâåòà íà êëåòî÷íóþ òåðàïèþ îò ñòåïåíè ÐÒÏÕ ó ïàöèåíòîâ. Ñðåäè ïàöèåíòîâ èññëåäóåìîé ãðóïïû áûëî 25 äåòåé è 30 âçðîñëûõ, ïî ðåçóëüòàòàì äàííîãî èññëåäîâàíèÿ, îòâåò íà òåðàïèþ ÌÌÑÊ òàêæå íå çàâèñèò îò âîçðàñòà ðåöèïèåíòà, îäíàêî äëÿ ñòàòèñòè÷åñêîãî ïîäòâåðæäåíèÿ ëèáî îïðîâåðæåíèÿ äàííîãî òåçèñà òðåáóåòñÿ ïî êðàéíåé ìåðå 80 ïàöèåíòîâ (ïî 40 ïàöèåíòîâ â êàæäîé ãðóïïå). Ðàáîòà K. Le Blanc è ñîàâò. áûëà íàïðàâëåíà íà îöåíêó áåçîïàñíîñòè è ýôôåêòèâíîñòè ïðèìåíåíèÿ òðàíñïëàíòàöèé ÌÌÑÊ ïðè ðåôðàêòåðíîé îñòðîé ÐÒÏÕ. Àâòîðû íå ñòàâèëè ïåðåä ñîáîé çàäà÷ó îöåíèòü çàâèñèìîñòü ýôôåêòèâíîñòè òåðàïèè îò êîëè÷åñòâà òðàíñïëàíòèðóåìûõ êëåòîê, îäíàêî îòìåòèëè, ÷òî, ñ îäíîé ñòîðîíû, êëèíè÷åñêè âûðàæåííûé ðåçóëüòàò íàáëþäàëñÿ ïðè òðàíñïëàíòàöèè îò 0,8×106 êëåòîê íà êã âåñà ïàöèåíòà, â òî âðåìÿ êàê «äîçà» 9×106 êëåòîê íà êã âåñà ïàöèåíòà áûëà íåýôôåêòèâíà. Òàêæå áûëî îòìå÷åíî, ÷òî ó îäíîãî èç ïàöèåíòîâ íå íàáëþäàëîñü óëó÷øåíèÿ ñîñòîÿíèÿ â îòâåò íà ïåðâè÷íóþ èíúåêöèþ ÌÌÑÊ â êîëè÷åñòâå 0,6×106 êëåòîê íà êã, îäíàêî â îòâåò íà âòîðè÷íóþ èíúåêöèþ ýòèõ êëåòîê â êîëè÷åñòâå 2,0×106 êëåòîê íà êã âåñà ïðîèçîøëî ÷àñòè÷íîå èñ÷åçíîâåíèå ñèìïòîìîâ ÐÒÏÕ.  òî æå âðåìÿ ó 12 ïàöèåíòîâ íå íàáëþäàëîñü íèêàêèõ èçìåíåíèé òå÷åíèÿ ÐÒÏÕ íåñìîòðÿ íà ïîâòîðíûå òðàíñôóçèè ÌÌÑÊ. Ïðè÷åì â ñëó÷àå, êîãäà íåñêîëüêèì ðåöèïèåíòàì áûëè òðàíñïëàíòèðîâàíû ÌÌÑÊ îò îäíîãî äîíîðà, îòìå÷àëàñü ðàçëè÷íàÿ ðåàêöèÿ ðåöèïèåíòîâ íà êëåòêè îäíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ. Òàêèì îáðàçîì, îòâåò íà òåðàïèþ â öåëîì ìîæíî íàçâàòü ïðåäñêàçóåìûì, íî â òî æå âðåìÿ âåñüìà èíäèâèäóàëüíûì. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Blume K.G., Forman S.J., Appelbaum F.R., eds. Thomas hematopoietic cell transplantation. Oxford: Blackwell Publishing; 2004. 2. Goldman J.M., Baughan A.S., McCarthy D.M. Marrow transplantation for patients in the chronic phase of chronic granulocytic leukaemia. Lancet 1982; 2: 623-5. 3. Storb R., Thomas E.D. Graft-versus-host disease in dog and man: the Seattle experience. Immunol. Rev. 1985; 88: 215-38. 4. Deeg H.J. How I treat refractory acute GVHD. Blood 2007; 109: 4119-26. 5. Friedenstein A.J., Petrakova K.V., Kurolesova A.I., Frolova G.P. Heterotopic of bone marrow: analysis of precursor cells for osteogenic and hematopoietic tissues. Transplantation 1968; 6: 230-47. 6. Noort W.A., Kruisselbrink A.B., int Anker P.S. Mesenchymal stem cells promote engraftment of human umbilical cord blood-derived CD34(+) cells in NOD/SCID mice. Exp. Hematol. 2002; 30: 870-8. 7. Klyushnenkova E., Mosca J.D., Zernetkina V. T cell responses to allogeneic human mesenchymal stem cells: immunogenicity, tolerance, and suppression. J. Biomed. Sci. 2005; 12: 47-57. 8. Le Blanc K., Tammik L., Sundberg B., Haynesworth S.E., Ringdén O. Mesenchymal stem cells inhibit and stimulate mixed lymphocyte cultures and mitogenic responses independently of the major histocompatibility complex. Scand. J. Immunol. 2003; 57: 11-20. 9. Bartholomew A., Sturgeon C., Siatskas M. Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo. Exp. Hematol. 2002; 30: 42-8. 10. Ning H., Yang F., Jiang M. et al. The correlation between cotransplantation of mesenchymal stem cells and higher recurrence rate in hematologic malignancy patients: outcome of a pilot clinical study. Leukemia 2008; 22: 593-9. Ïîäãîòîâèëà À.Ñ. Ãðèãîðÿí Ïî ìàòåðèàëàì: Le Blanc K., Frassoni F., Ball L. et al. Mesenchymal stem cells for treatment of steroid-resistant, severe, acute graft-versus-host disease: a phase II study. Lancet 2008; 371: 1579-86 Ïðèìåíåíèå ãåìîïîýòè÷åñêèõ êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè äëÿ ëå÷åíèÿ ñàõàðíîãî äèàáåòà I òèïà Ñàõàðíûé äèàáåò ýòî çàáîëåâàíèå, õàðàêòåðèçóþùååñÿ õðîíè÷åñêîé ãèïåðãëèêåìèåé, ðàçâèâàþùåéñÿ ïîä âëèÿíèåì íàñëåäñòâåííûõ è ýêçîãåííûõ ôàêòîðîâ [1]. Ñîãëàñíî ñîâðåìåííîé êëàññèôèêàöèè, ïî ìåõàíèçìó ïàòîãåíåçà âûäåëÿþò èíñóëèíçàâèñèìûé (I òèïà), íåèíñóëèíçàâèâèìûé (II òèïà) è ñìåøàííûé ñàõàðíûé äèàáåò [1]. Äîëÿ èíñóëèíçàâèñèìîãî ñàõàðíîãî äèàáåòà â îáùåé ñòðóêòóðå çàáîëåâàíèÿ ñîñòàâëÿåò îêîëî 10%, ïðè ýòîì ÷àùå ñòðàäàþò äåòè [2]. Ïóñêîâûì ìåõàíèçìîì äëÿ ðåàëèçàöèè ãåíåòè÷åñêîé ïðåäðàñïîëîæåííîñòè ÿâëÿåòñÿ âîçäåéñòâèå íà ïàðåíõèìó ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû áèîëîãè÷åñêèõ (âèðóñíàÿ èíôåêöèÿ), õèìè÷åñêèõ èëè ôèçè÷åñêèõ ôàêòîðîâ. Âàæíóþ ðîëü èãðàåò íàðóøåíèå ôóíêöèé èììóííîé ñèñòåìû â âèäå ðàññòðîéñòâà ïðîòèâîâèðóñíîé çàùèòû, ïðèâîäÿùèå ê ðàçâèòèþ âèðóñíîé èíôåêöèè, ïîâðåæäàþùåé ýíäîêðèíîöèòû ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû, èëè â âèäå ñíèæåíèÿ àêòèâíîñòè CD4+CD25+ ðåãóëÿòîðíûõ Ò-ëèìôîöèòîâ, à òàêæå Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 Â-ëèìôîöèòîâ, ìàêðîôàãîâ, äåíäðèòíûõ êëåòîê, ÷òî ÿâëÿåòñÿ îñíîâîé àóòîèììóííîãî ìåõàíèçìà çàáîëåâàíèÿ [5]. Òàêòèêà ëå÷åíèÿ ïàöèåíòîâ ñ ñàõàðíûì äèàáåòîì I òèïà áàçèðóåòñÿ íà ïðèìåíåíèè ïðåïàðàòîâ æèâîòíîãî è ÷åëîâå÷åñêîãî èíñóëèíà â ñî÷åòàíèè ñ ðåãóëÿðíûì ìîíèòîðèðîâàíèåì óðîâíÿ ãëþêîçû â êðîâè. Äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ àóòîèììóííîãî ïîâðåæäåíèÿ ïàðåíõèìû ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû èñïîëüçóåòñÿ èììóííîñóïðåññèâíàÿ òåðàïèÿ, êîòîðàÿ íåèçáåæíî ïðèâîäèò ê àêòèâèçàöèè îïïîðòóíèñòè÷åñêèõ èíôåêöèé è äðóãèì îñëîæíåíèÿì. Òàê êàê âûçäîðîâëåíèå ïàöèåíòîâ â íàñòîÿùåå âðåìÿ íåâîçìîæíî, òî êàñêàä ìåòàáîëè÷åñêèõ íàðóøåíèé, ñâÿçàííûõ ñ íåäîñòàòî÷íîé ñåêðåöèåé èíñóëèíà, ñî âðåìåíåì ïðèâîäèò ê ðàçâèòèþ ìèêðî- è ìàêðîàíãèîïàòèé, ðàññòðîéñòâ ñî ñòîðîíû íåðâíîé ñèñòåìû è äðóãèì îñëîæíåíèÿì. Èç-çà íåóäîâëåòâîðèòåëüíûõ ðåçóëüòàòîâ ñîâðåìåííûõ ìåòîäîâ ëå÷åíèÿ áîëüíûõ ñàõàðíûì äèàáåòîì, à òàêæå Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé âûñîêîé ÷èñëåííîñòè çàáîëåâøèõ (171 ìëí ÷åëîâåê íà ìîìåíò 2000 ã. [6]), àêòèâíî âåäåòñÿ ïîèñê íîâûõ íàïðàâëåíèé ýòèîòðîïíîé è ïàòîãåíåòè÷åñêîé òåðàïèè.  ÷àñòíîñòè, äëÿ óñòðàíåíèÿ íàðóøåíèé, ñâÿçàííûõ ñ óòðàòîé èíñóëèíñèíòåçèðóþùèõ êëåòîê ïðè ñàõàðíîì äèàáåòå I òèïà, ïðåäëîæåíà òðàíñïëàíòàöèÿ β-êëåòîê îñòðîâêîâ Ëàíãåðãàíñà, à òàêæå öåëîé ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû êàê îòäåëüíî [7], òàê è îäíîâðåìåííî ñ ïî÷êàìè ïðè ðàçâèâøåéñÿ íåôðîïàòèè [8]. Ðàññìàòðèâàåòñÿ òàêæå âîçìîæíîñòü èñïîëüçîâàíèÿ ìåçåíõèìíûõ ìóëüòèïîòåíòíûõ ñòðîìàëüíûõ êëåòîê (ÌÌÑÊ) è ýìáðèîíàëüíûõ ñòâîëîâûõ êëåòîê äëÿ âîññòàíîâëåíèÿ ïîïóëÿöèè ýíäîêðèííûõ êëåòîê ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû [9]. Íåñìîòðÿ íà ðÿä ïîëîæèòåëüíûõ ìîìåíòîâ, ýòè ïîäõîäû íå ïîçâîëÿþò îòêàçàòüñÿ îò ïîäàâëåíèÿ èììóíèòåòà èç-çà ðèñêà ðàçâèòèÿ ðåàêöèè îòòîðæåíèÿ äîíîðñêîé òêàíè è/èëè ïðîäîëæàþùåãîñÿ àóòîèììóííîãî ïðîöåññà [7]. Ïðèíöèïèàëüíî èíûì íàïðàâëåíèåì ÿâëÿåòñÿ êîððåêöèÿ ôóíêöèîíàëüíûõ íàðóøåíèé èììóííîé ñèñòåìû äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ äàëüíåéøåé äåñòðóêöèè β-êëåòîê îñòðîâêîâ Ëàíãåðãàíñà. Ñ ýòîé öåëüþ ïðåäëàãàåòñÿ èñïîëüçîâàòü òðàíñïëàíòàöèþ àóòîãåííûõ ãåìîïîýòè÷åñêèõ ñòâîëîâûõ êëåòîê (ÃÑÊ), íàöåëåííóþ íà óâåëè÷åíèå ïóëà ðåãóëÿòîðíûõ Ò-ëèìôîöèòîâ, à òàêæå íà ñóïðåññèþ Ò-ýôôåêòîðîâ [10]. Èììóíîìîäóëèðóþùåå äåéñòâèå ïðè ñàõàðíîì äèàáåòå I òèïà ïîêàçàíî òàêæå äëÿ ÌÌÑÊ [11]. 23  ðàìêàõ ýòîãî íàïðàâëåíèÿ M.J. Haller ñ ñîàâò. (2008) ïðåäïðèíÿëè êëèíè÷åñêîå èññëåäîâàíèå, â õîäå êîòîðîãî îöåíèâàëè ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ ïóïîâèííîé êðîâè äëÿ ëå÷åíèÿ ïàöèåíòîâ ñ ñàõàðíûì äèàáåòîì I òèïà. Ñ 2005 ã. îñóùåñòâëÿëñÿ ïîäáîð ïîäõîäÿùèõ áîëüíûõ ñ ñîõðàíåííîé ïóïîâèííîé êðîâüþ.  ðåçóëüòàòå íà ñåãîäíÿøíèé äåíü â èññëåäîâàíèè ïðèíÿëè ó÷àñòèå 15 äåòåé â âîçðàñòå îò 3,5 äî 7 ëåò, êàæäîìó èç êîòîðûõ äâàæäû ñ èíòåðâàëîì â 6 ÷àñîâ âíóòðèâåííî òðàíñôóçèðîâàëè êëåòêè ïóïîâèííîé êðîâè â îáúåìå îêîëî 100 ìë.  íàñòîÿùèé ìîìåíò ïðîäîëæàåòñÿ ïîèñê äîïîëíèòåëüíûõ ïàöèåíòîâ äëÿ ó÷àñòèÿ â èññëåäîâàíèè. Îò ïðåäòðàíñïëàíòàöèîííûõ ìåðîïðèÿòèé, íàïðàâëåííûõ íà ëèêâèäàöèþ àóòîðåàêòèâíûõ êëîíîâ Ò-ëèìôîöèòîâ, àâòîðû îòêàçàëèñü âî èçáåæàíèå òÿæåëûõ îñëîæíåíèé (ðàññòðîéñòâà ñî ñòîðîíû äûõàòåëüíîé, íåðâíîé ñèñòåì, ïå÷åíè, ýíäîêðèííûå íàðóøåíèÿ, èíôåêöèîííûå çàáîëåâàíèÿ). Íà âûáîðå ýòîé ìåòîäèêè èññëåäîâàòåëè îñòàíîâèëèñü, íåñìîòðÿ íà ïðèâåäåííûé èìè æå ïðèìåð óñïåøíîé òðàíñïëàíòàöèè ÃÑÊ â ãðóïïå ïàöèåíòîâ ñ ñàõàðíûì äèàáåòîì I òèïà ñ ïðèìåíåíèåì íåìèåëîàáëÿòèâíûõ ïðîòîêîëîâ [10]. Âîçìîæíî, îòêàç îò ïðåäòðàíñïëàíòàöèîííûõ ìåðîïðèÿòèé ñâÿçàí òàêæå ñ ó÷àñòèåì äåòåé â êëèíè÷åñêîì èññëåäîâàíèè, ïåðåãîâîðû ñ ðîäèòåëÿìè êîòîðûõ è òàê íîñèëè ñëîæíûé õàðàêòåð, à îïàñíîñòü èñïîëüçîâàíèÿ õèìèîòåðàïèè èëè îáëó÷åíèÿ ìîãëè è âîâñå îñòàâèòü èññëåäîâàòåëåé áåç þíûõ èñïûòóåìûõ. Ñõåìà ïàòîãåíåçà ñàõàðíîãî äèàáåòà 1 òèïà Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008 24 Íîâîñòè êëåòî÷íûõ òåõíîëîãèé Ðåçóëüòàòû îöåíèâàëè êàæäûå òðè ìåñÿöà ïåðâîãî è 6 ìåñÿöåâ âòîðîãî ãîäà ïóòåì ïðîâåäåíèÿ ãëþêîçî-òîëåðàíòíîãî òåñòà, îïðåäåëåíèÿ óðîâíÿ ãëèêèðîâàííîé ôðàêöèè ãåìîãëîáèíà â êðîâè (ÍbÀ1ñ, íîðìà 4,8-7,8%), Ñ-ïåïòèäà è íåîáõîäèìîãî êîëè÷åñòâà èíñóëèíà â ÅÄ íà êã â ñóòêè. Êðîìå òîãî, îöåíèâàëè êîëè÷åñòâî ôóíêöèîíàëüíî àêòèâíûõ ðåãóëÿòîðíûõ Ò-ëèìôîöèòîâ ìåòîäîì ïðîòî÷íîé öèòîìåòðèè íà CD3, CD4, CD8, CD25. Êîíòðîëåì ñëóæèëè âåëè÷èíû èññëåäóåìûõ ïàðàìåòðîâ äî ââåäåíèÿ ïóïîâèííîé êðîâè, à òàêæå ðåçóëüòàòû ãðóïïû ïàöèåíòîâ, íå ïîäâåðãíóòûõ òðàíñïëàíòàöèîííûì ìåðîïðèÿòèÿì. ËÈÒÅÐÀÒÓÐÀ: 1. Alberti K.G., Zimmet P.Z. Definition, diagnosis and classification of diabetes mellitus and its complications. Part 1: diagnosis and classification of diabetes mellitus provisional report of a WHO consultation. Diabet Med. 1998; 15: 539-53. 2. Rother K.I. Diabetes treatment-bridging the divide. N. Engl. J. Med. 2007; 356 (15): 1499-501. 3. Amos A.F., McCarty D.J., Zimmet P. The rising global burden of diabetes and its complications: estimates and projections to the year 2010. Diabet Med. 1997; 14 (5): 57-85. 4. Daneman D. Type 1 diabetes. Lancet 2006; 367 (9513): 847-58. 5. Kukreja A., Cost G., Marker J. et al. Multiple immuno-regulatory defects in type-1 diabetes. J. Clin. Invest. 2002; 109: 131-40. 6. Wild S., Roglic G., Green A. et al. Global prevalence of diabetes: estimates for the year 2000 and projections for 2030. Diabetes Care 2004; 27 (10): 2568-9. Ïðåäâàðèòåëüíûå ðåçóëüòàòû áûëè îãëàøåíû íà íàó÷íîé ñåññèè Àìåðèêàíñêîé Äèàáåòè÷åñêîé Àññîöèàöèè (American Diabetes Association Scientific Sessions) â ×èêàãî â èþíå 2007 ã. ïî äàííûì, ïîëó÷åííûì îò 8 ïàöèåíòîâ ïîñëå 6 ìåñ. èññëåäîâàíèÿ.  öåëîì, íà ñåãîäíÿøíèé äåíü àâòîðû îòìå÷àþò, ÷òî ó äåòåé, êîòîðûì âûïîëíÿëîñü ââåäåíèå êëåòîê ïóïîâèííîé êðîâè, âåëè÷èíû îöåíèâàåìûõ ïàðàìåòðîâ ëó÷øå, ÷åì â êîíòðîëå. Îäíàêî èññëåäîâàòåëè íå ïðèâîäÿò ñòàòèñòè÷åñêèõ âûêëàäîê è âîçäåðæèâàþòñÿ îò ñêîðîïàëèòåëüíûõ çàêëþ÷åíèé äî îêîí÷àíèÿ êëèíè÷åñêèõ èñïûòàíèé, î çàïëàíèðîâàííûõ ñðîêàõ îêîí÷àíèÿ êîòîðûõ ïîêà íå ñîîáùàþò. 7. Vinik A.I., Fishwick D.T., Pittenger G. Advances in diabetes for the millennium: toward a cure for diabetes. MedGenMed : Medscape general medicine 2004; 6 (3): 12. 8. Stratta R.J., Alloway R.R. Pancreas transplantation for diabetes mellitus: a guide to recipient selection and optimum immunosuppression. BioDrugs 1998; 10 (5): 347-57. 9. Jones P.M., Courtney M.L., Burns C.J. et al. Cell-based treatments for diabetes. Drug Discov Today 2008. Epub ahead of print. 10. Voltarelli J.C., Couri C.E., Stracieri A.B. et al. Autologous nonmyeloablative hematopoietic stem cell transplantation in newly diagnosed type 1 diabetes mellitus. JAMA 2007; 297: 1568-76. 11. Abdi R., Fiorina P., Adra C.N. et al. Immunomodulation by mesenchymal stem cells: a potential therapeutic strategy for type 1 diabetes. Diabetes 2008; 57 (7): 1759-67. 12. Haller M.J., Viener H., Wasserfall C. et al. Autologous umbilical cord blood infusion for type 1 diabetes. Experimental Hematology 2008; 36: 710-15. Ïîäãîòîâèë È.ß. Áîçî Ïî ìàòåðèàëàì Haller M.J., Viener H., Wasserfall C. et al. Autologous umbilical cord blood infusion for type 1 diabetes. Exp. Hematol. 2008; 36: 710-15 Êëåòî÷íàÿ òðàíñïëàíòîëîãèÿ è òêàíåâàÿ èíæåíåðèÿ Òîì III, ¹ 3, 2008
