ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ НАУКИ УДК 615.322:547.972+543.544 П.В. АФАНАСЬЕВА Самарский государственный медицинский университет Кафедра фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии АКТУАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ КОМПЛЕКСНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КАЛЕНДУЛЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ Научный руководитель – А.В. Куркина Аннотация: проведено исследование по микроскопическому и фитохимическому изучению цветков и корней ноготков. Были выявлены диагностические признаки корней календулы лекарственной. Cодержание каротиноидов в цветках составило от 6,55 до 8,39 мг%. Ключевые слова: календула лекарственная, Calendula officinalis L., сорт «Кальта», лекарственные растения, лекарственное растительное сырьё, цветки, корни, листья, сапонины, флавоноиды, каротиноиды. Summary: Microscopic and phytochemical researches of flowers and roots were held. Diagnostic signs of pot marigold’s roots were defined. The content of carotenoids in flowers is from 6.55 to 8.39 mg%. Keywords: pot marigold, Calendula officinalis L., variety «Calta», medicinal plants, herbal materials, flowers, roots, leaves, saponins, flavonoids, carotenoids. Календула лекарственная (Calendula officinalis L.) – однолетнее травянистое растение1, являющееся одним из самых популярных в медицине. Широкий спектр фармакологического действия цветков календулы (противовоспалительное, регенерирующее, антимикробное) обусловлен содержанием различных классов биологически активных соединений, таких как: каротиноиды, флавоноиды (гликозиды кемпферола, кверцетина и изорамнетина). Необходимо также отметить роль сапонинов как веществ, определяющих отхаркивающее действие препаратов данного растения. В настоящее время цветки календулы широко изучаются в рамках фармакогностических исследований2. Ранее были разработаны методики качественного и количественного анализа сырья «Ноготков цветки» на определение содержания флавоноидов3. Качественный анализ для цветков календулы лекарственной рекомендуется осуществлять с использованием метода ТСХ-анализа и раствора ГСО рутина 1 Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). – Изд. 2-ое, перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. – 1239 с. 2 Шарова О.В., Куркин В.А. Флавоноиды цветков календулы лекарственной // Химия растительного сырья. 2007. – Т. 1. – С. 65–68. 3 Шарова О. В., Куркин В. А. Фитохимическое исследование сырья «Ноготков цветки» // Материалы V Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы». Минск. 2007. – С. 345–347. 152 в сочетании с химическими реакциями. При этом в сырье обнаруживается доминирующий флавоноид нарциссин по величине Rs относительно ГСО рутина. Методика количественного анализа предполагает определение суммы флавоноидов в цветках календулы в пересчете на рутин с использованием 70% спирта этилового в качестве экстрагента и дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 412 нм. Были проведены исследования по разработке инновационных препаратов на основе цветков календулы (жидкий экстракт, настойка), обладающих более выраженной антимикробной активностью по сравнению с соответствующими аналогами. При этом ученые осуществили оптимизацию состава и способа получения лекарственных средств «Календулы настойка» (1:5), «Календулы жидкий экстракт» (1:2) с использованием в обоих случаях 70% спирта этилового4. В последнее время большое внимание уделяется изучению анатомо-морфологических признаков цветков календулы лекарственной, так как данное сырье широко используются для производства фармакопейных лекарственных сборов. В рамках изучения грудного сбора № 4 (цветки ромашки, цветки календулы, трава фиалки, листья мяты, побеги багульника, корни солодки) и 4 Шарова О.В. Фитохимическое исследование по стандартизации и созданию лекарственных средств на основе календулы лекарственной: Автореф. дис. канд. фармац. наук. – Самара, 2007. – 24 с. Научно-информационный межвузовский журнал ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ НАУКИ желчегонного сбора № 3 (листья мяты, трава тысячелистника, цветки ромашки, цветки ноготков, цветки пижмы) описаны внешние и микроскопические признаки цветков календулы для порошка и измельченного сбора5. Рассмотрены обрывки язычкового цветка в виде порошка (хроматопласты, морщинистость кутикулы, простые и головчатые волоски), обрывки трубчатых цветков (головчатые и простые волоски, друзы в мезофилле), а также обрывки пыльника и пыльца6. Важно подчеркнуть, что календула широко культивируется в Российской Федерации, причем, Самарская область является регионом, где сосредоточена самая крупная сырьевая база календулы лекарственной (СГПУ «Сергиевский», ЗАО «Самаралектравы» и ООО «Кентавр»). Однако по-прежнему остается актуальной проблема рационального использования сырьевых ресурсов. Огромное количество фитомассы (листья, семена, корни – до 90% от общей массы растения) не находит медицинского применения. В то же время зарубежом в качестве фармакопейного сырья используются не только цветки, но и соцветия календулы7. Кроме того, в Немецкую гомеопатическую фармакопею включена вся надземная часть ноготков в период цветения8. Также литературный обзор показал интерес ряда отечественных и зарубежных ученых к изучению корней растения в связи с содержащимися в них тритерпеновыми сапонинами, обуславливающими отхаркивающие свойства9, 10, 11. Вышеуказанные факты указывают на целесообразность глубокого изучения всех органов календулы как важнейшего источника эффективных лекарственных препаратов. Очевидная перспективность внедрения травы и корней календулы лекарственной в медицинскую и фармацевтическую практику влечет за собой необходимость разработки фармакопейной статьи (ФС) на данные виды сырья. Создание нормативного документа предполагает проведение всесторонних комплексных исследований растения. 5 Самылина И.А., Ермакова В.А., Бобкова И.В., Аносова О.Г.. Фармакогнозия. Атлас: учебное пособие: в 3-х томах. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – Т. 3. – 488 с. 6 Самылина И.А., Аносова О.Г.. Фармакогнозия. Атлас: учебное пособие: в 2-х томах. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. – Т. 2. – 384 с. 7 Киселева Т.Л., Смирнова Ю.А. Лекарственные растения в мировой медицинской практике: государственное регулирование номенклатуры и качества. – М.: Изд-во профессиональной ассоциации натуротерапевтов, 2009. – 295 с. 8 German Homoeopathic Pharmacopoeia (GHP). – Deutscher Apotheker Verlag. – Stuttgart, Germany. – 1993. – P. 155–156. 9 Вечерко Л.П., Зинкевич Э.П., Коган М.Л. 3-О-Р-Оглюкуронопиранозид олеаноловой кислоты из корней Calendula officinalis L. // Химия природных соединений. 1973. – № 4. – С. 560–561. 10 Вечерко Л.П., Зинкевиич Э.П., Коган М.Л. Строение календулозида из корней Calendula officinalis L. // Химия природных соединений. 1973. – № 4. – С. 561–562. 11 Ruszkowski D., Szakiel A., Janiszowska W. Metabolism of [3-3H] oleanolic acid in Calendula officinalis L. roots. Acta physiological plantarum. 2003. – Vol. 25. – № 4. – P. 311–317. В связи с этим, целью настоящих исследований являлось изучение анатомо-морфологических особенностей сырья календулы лекарственной (сорт «Кальта»), а также проведение исследований по определению содержания каротиноидов в указанном сорте цветков календулы. Материалы и методы исследования: объектом исследования служили корни и цветки календулы лекарственной сорт «Кальта», собранные на фармакопейном участке Ботанического сада (г. Самара). Пробоподготовку образцов корней для анатомо-морфологического исследования, приготовление микропрепаратов и их окрашивание проводили по общей фармакопейной методике ГФ СССР XI издания на «Корни, корневища, клубни, луковицы, клубнелуковицы»12. Для обнаружения диагностических признаков в тканях корней календулы использовали гистохимическую реакцию с раствором сернокислого анилина на лигнифицированные оболочки. Исследования срезов корней осуществляли с помощью цифровых микроскопов марки Motic (DM 111; DM-39C-N9GO-A). Для количественного анализа цветков электронные спектры на регистрирующем спектрофотометре «Specord 40» (Analytik Jena). Результаты исследования и их обсуждение. В связи с тем обстоятельством, что комплексное исследование предполагает фармакогностическое изучение различных видов сырья нами были рассмотрены и цветки, и корни растения. Исследование образцов корней ноготков позволило подтвердить, что анатомически корни календулы лекарственной имеют вторичное строение. Обнаружено, что подземные органы растения неоднородны по размерам: диаметру и поперечному сечению. Сравнительное исследование анатомо-гистологического строения поперечных срезов корней различного диаметра (0,5-15 мм) позволило выявить следующие особенности. Коровая часть слабовыраженная, в процессе развития корня ткани центрального цилиндра практически не изменяется. Флоэма имеет низкую степень армированности. В качестве диагностических признаков следует отметить инулиновые кристаллические включения, особенности расположения проводящих элементов флоэмы, а также пигментированный слой клеток на периферии коровой части с темно-бурым пигментом фенольной природы. Паренхима радиальных лучей склерифицирована, что доказывается окрашиванием сернокислым анилином. С целью количественной оценки содержания суммы каротиноидов в цветках календулы нами разработана методика, в основу которой положена прямая спектро12 Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье/ МЗ СССР. 11-е изд. Доп. М: Медицина, 1989. – С. 356–357. Аспирантский вестник Поволжья № 5–6, 2014 153 ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ НАУКИ В качестве раствора сравнения используют гексан. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца бихромата калия, используя в качестве раствора сравнения дистиллированную воду. Содержание суммы каротиноидов в сырье (в мг%) в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле: , Рис. 1. Электронный спектр. Гексановое извлечение из цветков календулы фотомерия при аналитической длине волны 450 нм. Методики количественного определения суммы каротиноидов в сырье «Ноготков цветки». Около 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья (пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, приливают 40 мл гексана и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу с содержимым оставляют на экстракцию в течение 2 ч при постоянном перемешивании (комнатная температура). После проведения 2-х часовой экстракции перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр с красной полосой в колбу вместимостью 50 мл. Содержимое колбы тщательно перемешивают (испытуемый раствор). Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре при длине волны 450 нм. 154 D – оптическая плотность испытуемого раствора; D0 – оптическая плотность раствора стандартного образца бихромата калия; 0,00208 – количество β-каротина в растворе, соответствующее по концентрации 1 мл раствора стандартного образца бихромата калия, мл; m – навеска сырья, г; V – объем извлечения, мл; W – потеря в массе при высушивании, %. Приготовление раствора стандартного образца бихромата калия. 0,3600 г (точная навеска) бихромата калия по ГОСТ 4220-75 х.ч. растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки. Раствор такой концентрации соответствует раствору, содержащему 0,00208 мг β-каротина в 1 мл. Определено, что содержание суммы каротиноидов варьируется от 6,55 мг% до 8,39 мг%. Заключение. По результатам проведенных исследований было проведено микроскопическое и фитохимическое изучение цветков и корней ноготков. При этом содержание каротиноидов составило от 6,55 до 8,39 мг%. Научно-информационный межвузовский журнал