ЛИПОПРОТЕИДЫ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ Назначение. Для количественного определения in vitro концентрации ЛПНП-холестерина в сыворотке или плазме. Кат. No. CH 2656 R1 Энзим-реактив 1 6 х 78 мл R2. Энзим-реактив 2 3 х 52 мл Кат. No. CH 2657 R1 Энзим-реактив 1 6 х 30 мл R2. Энзим-реактив 2 3 х 20 мл Кат. No. CH 3841 R1 Энзим-реактив 1 3 х 51 мл R2. Энзим-реактив 2 3 х 20 мл Кат. No. CH 9702 R1 Энзим-реактив 1 6 х 20 мл R2. Энзим-реактив 2 2 х 20 мл Принцип метода. Анализ состоит из двух отдельных групп реакций: 1. В результате взаимодействия исследуемого образца с полианионными и амфотерными детергентами, входящими в состав Реагента 1, происходит связывание ЛПНП, что делает их недоступными для взаимодействия с холестеролэстеразой. Остальные фракции липо-протеинов (хиломикроны, ЛПОНП и ЛПВП) подвергаются ферментативной деградации с участием холестеролэстеразы, холестеролоксидазы и каталазы с образованием бесцветных продуктов реакции. Сложный эфир Холестеринэстераза холестерина -------------------------→ Холестерин + жирная кислота Холестериноксидаза Холестерин + О2 ---------------------- → Холестенон + Н2О2 Каталаза 2 Н2О2 --------------------→ 2 Н2О + О2 2. При добавлении в реакционную смесь R2 происходит ингибирование каталазы азидом натрия, содержащимся в энзим-реактиве 2, и разрушение комплекса ДетергентыЛПНП, что делает холестерин-ЛПНП доступным для взаимодействия с холестеролэстеразой Сложный эфир холестерина Холестерин эстераза Холестерин + жирная кислота Холестерин оксидаза Холестерин + O2 Холестенон + H2O2 Пероксидаза 2H2O2 + 4-AA* + TOOS* Хинон-пигмент + 4H2O *Ключ: 4 - AA = 4 - Аминоантипирин TOOS = N-Этил-N-(2-гидрокси-3-сульфопропил)-3метиланилин Интенсивность полученной в ходе реакции хинонеминовой окраски прямо пропорциональна концентрации холестерина в пробе, если измерения проводятся при 600 нм. Сбор и подготовка проб. Сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА плазма. Проба стабильна 6 дней при температуре хранения +2..+8°C. CH 2656, 2657, 3841, 9702 Набор предназначен только для диагностики in vitro. Не пипетируйте ртом. Соблюдайте обычные при лабораторных процедурах меры предосторожности. Стабильность и приготовление реактива. R1. Энзим-реактив 1 Содержимое флакона готово к использованию. Реактив стабилен до окончания срока годности при температуре хранения +2..+8°C в защищенном от света месте. Вскрытый реактив стабилен на борту анализатора 28 дней при температуре приблизительно +10°C. R2. Энзим-реактив 2 Содержимое флакона готово к использованию. Реактив стабилен до окончания срока годности при температуре хранения +2..+8°C в защищенном от света месте. Вскрытый реактив стабилен на борту анализатора 28 дней при температуре приблизительно +10°C. Калибровка и контроль качества. Выполнение калибровки рекомендуется проводить с использованием RANDOX калибровочной сыворотки LDL/HDL (CH 2673). Для проведения ежедневного контроля качества рекомендуется использовать RANDOX липидный контроль уровень 1 (LE 2661), уровень 2 (LE 2662) и уровень 3 (LE 2663). Искажение результатов. Перечисленные ниже вещества не влияют на результаты данного анализа при их содержании в пробе вплоть до указанных концентраций: билирубин 425 мкмоль/л, интралипид 0,6%, триглицериды 2,9 ммоль/л, гемоглобин 10 г/л. Значения нормы. Оптимальный уровень < 2,59 ммоль/л Выше оптимального уровня 2,59 – 3,35 ммоль/л Пограничный уровень 3,36 – 4,12 ммоль/л Высокий уровень 4,13 – 4,89 ммоль/л Очень высокий уровень > 4,9 ммоль/л Линейность. Метод линеен до концентрации ЛПНП в сыворотке и плазме 22.2 ммоль/л (860 мг/дл). Чувствительность. Минимально выявляемая концентрация ЛПНП в пробе, определяемая с приемлемым уровнем воспроизводимости составляет 0,16 ммоль/л. Расчет ЛПВП. Исходя их уровня общего холестерина, триглицеридов и ЛПНП можно рассчитать ЛПВП по формуле: Состав реактивов. ЛПВП = Холестерин – ЛПНП – ТГ/2,2 R1 Энзим-реактив 1 Pipes буфер 50 ммоль/л, рН 7,0 Пиперазин-1,4-bis(2-этансульфоновая кислота) N-Этил-N-(2-гидрокси3-сульфопропил)-3-метиланилин 2,0 ммоль/л Холестеринэстераза ≥600 Ед/л Холестериноксидаза ≥500 Ед/л Каталаза ≥600 КЕд/л R2 Энзим-реактив 2 Pipes буфер 50 ммоль/л, рН 7,0 Пиперазин-1,4-bis(2-этансульфоновая кислота) 4-аминоантипирин 4 ммоль/л Пероксидаза ≥4 КЕд/л Азид натрия 0,05 % В программе биохимического анализатора Сапфир400 можно задать расчетную методику для вычисления уровня ЛПВП . Меры предосторожности