HLA-типирование образцов крови потенциальных доноров

БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
Кафедра молекулярной биологии
Аннотация к дипломной работе
ТАЛОЧКИНА
Екатерина Владимировна
HLA-типирование образцов крови потенциальных доноров
костного мозга молекулярно-биологическими методами
Научный руководитель:
кандидат
биологических
наук,
доцент А.М. Ходосовская
Минск, 2014
РЕФЕРАТ
Дипломная работа 63 с., 24 рис., 3 табл., 29 источников.
ГЛАВНЫЙ
КОМПЛЕКС
ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ,
НLАТИПИРОВАНИЕ, ТРАНСПЛАНТАЦИЯ КОСТНОГО МОЗГА, SEQUENCE
SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDES (SSO), SEQUENCE SPECIFIC PRIMERS
(SSP).
Объект исследования: венозная кровь здоровых доноров.
Цель: идентификация аллелей различных генов HLA-системы в
образцах крови потенциальных доноров костного мозга.
Методы исследования:
выделение ДНК из крови доноров,
полимеразная цепная реакция (ПЦР) ДНК из крови доноров со
специфическими праймерами, гибридизация ДНК с олигонуклеотидными
зондами.
С помощью метода SSO установлены следующие HLA-типы в
образцах крови десяти доноров: образец №1: A*01, 02; B*07, 18; DRB1*01,
11; образец №2: A*11, 66; B*18, 27; DRB1*01, 12; образец №3: A*11, 33;
B*18, 38; DRB1*03, 16; образец №4: A*25, 29; B*38, 44; DRB1*15, 16;
образец №5: A*02, 25; B*37, 40; DRB1*07, 15; образец №6: A*01, 24; B*39,
49; DRB1*01, 12; образец №7: A*19, 29; B*08, 40; DRB1*04, 04; образец №8:
A*09, 32; B*18, 35; DRB1*04, 04; образец №9: A*09, 11; B*35, 35; DRB1*13,
15; образец №10: A*01, 02; B*07, 15; DRB1*04, 15.
При проведении типирования образцов пяти доноров методом SSP,
были установлены следующие HLA-типы: образец 96057680: A*02:01,
*23:01; B*07:05, *44:02; C*05:01, *15:05; DRB1*04:07, *07:01; образец
96057785: A*02:01, *24:02; B*07:02, *44:05; C*02:02, *07:02; DRB1*01:01,
*11:01; образец К1: A*01:01, *24:02; B*07:02, *08:01; C*07:01, *07:02;
DRB1*03:01, *15:01; образец К2: A*02:05, *24:02; B*15:01, *51:01; C*03:03,
*15:02; DRB1*04:01, *15:01; образец К3: A*02:01, *03:01; B*07:02, *44:02;
C*05:01, *07:02; DRB1*04:01, *15:01.
Результаты, полученные в ходе исследований, были включены в
Республиканский регистр доноров костного мозга и гемопоэтических
стволовых клеток — электронную базу данных с информацией о генотипе
каждого потенциального донора.
РЭФЕРАТ
Дыпломная работа 63 с., 24 мал., 3 табл., 29 крыніц.
ГАЛОЎНЫ
КОМПЛЕКС
ГІСТАСУМЯШЧАЛЬНАСЦІ,
НLАТЫПIРАВАННЕ, ТРАНСПЛАНТАЦЫЯ КАСЦЯНОГА МОЗГУ, SEQUENCE
SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDES (SSO), SEQUENCE SPECIFIC PRIMERS
(SSP).
Аб'ект даследавання: вянозная кроў здаровых донараў.
Мэта: ідэнтыфікацыя алеляў розных генаў HLA-сістэмы ва ўзорах
крыві патэнцыйных донараў касцянога мозгу.
Метады даследавання: вылучэнне ДНК з крыві донараў, палімеразная
ланцуговая рэакцыя (ПЛР) ДНК з крыві донараў са спецыфічнымі
праймерамі, гібрыдызацыя ДНК з алігануклеатыднымі зондамі.
З дапамогай метаду SSO ўстаноўлены наступныя HLA-тыпы ва ўзорах
крыві дзесяці донараў: аб'ект № 1: A*01, 02; B*07, 18; DRB1*01, 11; аб'ект №
2: A*11, 66; B*18, 27; DRB1*01, 12; аб'ект № 3: A*11, 33; B*18, 38; DRB1*
03, 16; аб'ект № 4: A*25, 29; B*38, 44; DRB1*15, 16; аб'ект № 5: A*02, 25; B*
37, 40; DRB1*07, 15; аб'ект № 6: A*01, 24; B*39, 49; DRB1*01, 12; аб'ект № 7:
A*19, 29; B*08, 40; DRB1*04, 04; аб'ект № 8: A*09, 32; B*18, 35; DRB1*04,
04; аб'ект № 9: A*09, 11; B*35, 35; DRB1*13, 15; аб'ект № 10: A*01, 02; B*
07, 15; DRB1*04, 15.
Пры правядзенні тыпіравання ўзораў пяці донараў метадам SSP, былі
ўстаноўлены наступныя HLA-тыпы: аб'ект 96057680: A*02:01, *23:01; B*
07:05, *44:02; C*05:01, *15:05; DRB1*04:07, *07:01; аб'ект 96057785: A*
02:01, *24:02; B*07:02, *44:05; C*02:02, *07:02; DRB1*01:01, *11:01; аб'ект
К1: A*01:01, *24:02; B*07:02, *08:01; C*07:01, *07:02; DRB1*03:01, *15:01;
аб'ект К2: A*02:05, *24:02; B*15:01, *51:01; C*03:03, *15:02; DRB1*04:01, *
15:01; аб'ект К3: A*02:01, 03:01; B *07:02, *44:02; C*05:01, *07:02; DRB1*
04:01, *15:01.
Вынікі, атрыманыя ў ходзе даследаванняў, былі ўключаны ў
Рэспубліканскі рэгістр донараў касцянога мозгу і гемапаэтычных ствалавых
клетак – электронную базу дадзеных з інфармацыяй аб генатыпе кожнага
патэнцыйнага донара.
ABSTRACT
Degree work 63 pages, 24 pictures, 3 tables, 29 sources.
MAJOR COMPLEX OF HISTOCOMPATIBILITY, HLA-TYPING,
MARROW’S
TRANSPLANTATION,
SEQUENCE
SPECIFIC
OLIGONUCLEOTIDES (SSO), SEQUENCE SPECIFIC PRIMERS (SSP).
Object of study (research): deoxygenated blood of healthy donors.
Aim: identification of alleles of different genes of HLA-system in blood
samples of marrow’s potential donors.
Methods of study (research): DNA extraction from blood of donors,
polymerase chain reaction (PCR) DNA from donors’ blood with specific primers,
DNA hybridization with oligonucleotide probes.
Using the method of SSO (sequence specific oligonucleotides), the
following HLA-types in the blood samples of ten donors are determined: sample
number 1: A* 01, 02; B*07, 18; DRB1*01, 11; sample number 2: A*11, 66; B*18,
27; DRB1*01, 12; sample number 3: A*11, 33; B*18, 38; DRB1*03, 16; sample
number 4: A*25, 29; B*38, 44; DRB1*15, 16; sample number 5: A*02, 25; B*37,
40; DRB1*07, 15; sample number 6: A*01, 24; B*39, 49; DRB1*01, 12; sample
number 7: A*19, 29; B *08, 40; DRB1*04, 04; sample number 8: A*09, 32; B*18,
35; DRB1*04, 04; sample number 9: A*09, 11; B*35, 35; DRB1*13, 15; sample
number 10: A*01, 02 ; B*07, 15; DRB1*04, 15.
During the typing of the samples of five donors by SSP, the following HLAtypes were determined: 96057680 sample: A*02:01, *23:01; B*07:05, *44:02; C *
05:01, *15:05; DRB1*04:07, *07:01; sample 96057785: A*02:01, *24:02;
B*07:02, *44:05; C*02:02, *07:02; DRB1*01:01, *11:01; sample K1: A*01:01,
*24:02; B * 07:02, *08:01; C *07:01, *07:02; DRB1*03:01, *15:01; sample K2:
A*02:05, *24:02; B*15:01, *51:01; C *03:03, *15:02; DRB1*04:01, *15:01;
sample K3: A*02:01, *03:01; B*07:02, *44:02; C*05:01, *07:02; DRB1*04:01,
*15:01.
The results, obtained during the studies, were included in the National
register of donors of marrow and hematopoietic stem cells – an electronic database
with information about the genotype of each potential donor.