Набор реагентов для иммуноферментного определения антител класса IgM к вирусу простого герпеса (1+2) типа в сыворотке крови (ИммуноФА-IgM-ВПГ(1+2)) Номер по каталогу ИФ-20-07 Набор ИммуноФА-IgM-ВПГ(1+2) предназначен для качественного определения наличия IgM-антител к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа на стрипованных полистироловых планшетах. Значение ВПГ-инфекции определяется ее распространенностью, многообразием клинических проявлений, тяжестью течения при отсутствии адекватного лечения. ВПГ 1 типа вызывает, в основном, орофациальный герпес, ВПГ 2 типа – генитальный герпес. Герпесвирусная инфекция играет важную роль в неонатологии, вызывая патологию плода в процессе беременности, и, особенно часто, при прохождении плода через родовые пути (до 80% случаев). При первичной инфекции IgM-антитела к ВПГ определяются уже в первую неделю после инфицирования. Рецидивирующий герпес обычно наблюдается на фоне иммуносупрессивных состояний, в том числе и у беременных. Причем, даже наличие IgG-антител оказывает слабое защитное действие. При рецидивирующем герпесе IgM-антитела часто не обнаруживаются. Быстрая и достоверная диагностика ВПГ-инфекции необходима для оценки риска повреждения плода у беременных, назначения адекватной химиотерапии. При выявлении IgM антител к вирусу простого герпеса результаты ИФА обязательно должны дополняться другими методами (например, реакцией непрямой иммунофлуоресценции, ПЦР). Набор комплектуется специальным блокирующим реагентом для снижения влияния ревматоидного фактора, а также специфических IgG-антител на реакцию, и повышения, таким образом, достоверности результатов. Принцип метода – непрямой двухстадийный ИФА Е Е Е S Е Е Е P Иммобилизованный антиген Анализируемый образец Иммобилизованные иммунокомплексы Конъюгат вторичных антител с пероксидазой Иммобилизованные иммунокомплексы с мечеными антителами Субстратная реакция СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА 1. Подготовка исследуемых образцов: по 5 мкл каждого образца смешать с 500 мкл приготовленного буферного блокирующего раствора (разведение 1+100), тщательно перемешать пипетированием, выдержать 30 мин при (20-25 оС). 2. Внесение в лунки планшета: по 0,1 мл положительной, пороговой и отрицательной контрольных и подготовленных образцов исследуемых сывороток и инкубация (30 мин, +37оС). 3. Промывка лунок планшета. 4. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл конъюгата и инкубация (30 мин, +37оС). 5. Промывка лунок планшета. 6. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл субстратного раствора и инкубация (15 мин, +37оС). 7. Внесение в лунки планшета по 0,1 мл стоп-реагента. 8. Измерение оптической плотности (450 нм), интерпретация результатов. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Специфичность набора относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex Virus 1+2 IgM (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%. Чувствительность набора относительно набора SERION ELISA classic Herpes Simplex Virus 1+2 IgM (фирма Virion\Serion GmbH) составляет 100%. Подготовка исследуемых образцов: по 5 мкл каждого образца смешать с 500 мкл приготовленного ББР (см. п. 7.2) (разведение 1+100), тщательно перемешать пипетированием. Выдержите в течение 30 мин при комнатной температуре (20-25оС) или в течение ночи при температуре 2-8оС, тщательно перемешать пипетированием. Оценку результатов анализа проводят при следующих условиях: Значение ОПК+(ср) - не ниже 1,0. Рассчитывается как среднее из показателей оптической плотности в двух лунках (ОПА1 + ОПВ1)/2. Значение ОПК-(ср) - не выше 0,15. Рассчитывается как среднее из показателей оптической плотности в двух лунках (ОПС1 + ОПD1)/2. Значение ОП к пор(ср) - не ниже 0,2. Рассчитывается как среднее из показателей оптической плотности в двух лунках (ОПЕ1 + ОПF1)/2. При несоблюдении этих условий анализ необходимо выполнить заново. Интерпретация результатов анализа. Результат анализа исследуемых образцов следует считать: положительным при ОП выше 1,1х ОПпор (исследуемый образец содержит IgM к ВПГ-1), отрицательным при ОП ниже 0,9х ОПпор (исследуемый образец не содержит IgM к ВПГ-1). Результаты при ОП в диапазоне 0,9хОПпор – 1,1хОПпор являются сомнительными, в этом случае необходимо провести повторное исследование вновь полученных сывороток. При повторении результата рекомендуется получить второй образец через 10-14 дней. Длина волны измерения: 450 нм. Субстрат: 3,3`,5,5`-тетраметилбензидин (ТМБ). Условия инкубации (время, tоС) : - 1-я инкубация 30 мин при +37оС; - 2-я инкубация 30 мин при +37оС; - инкубация с ТМБ 15 мин при +370С. Время проведения анализа: 1 час 20 минут. Объем пробы: 50 мкл. Количество анализируемой сыворотки: 10 мкл (для анализа сыворотка разводится в 101 раз и анализируется 100 мкл разведенной сыворотки). Количество анализов: набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные образцы. Планшеты: стрипованные, разделяющиеся на отдельные лунки. Срок годности набора: 12 месяцев. Все реагенты набора представлены в жидком виде.