лактозы - ДНК

ГенетикаМетаболизма
ЛАКТОЗЫ
Генетика Метаболизма Лактозы
Комплект реагентов для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с нарушениями обмена лактозы, методом ПЦР в режиме реального времени
Лактоза – это молочный сахар, составляющий около 99% всех углеводов любого молока. Под действием
фермента лактазы в желудочно-кишечном тракте лактоза расщепляется на глюкозу и галактозу, после чего
происходит всасывание этих моносахаров. Если нерасщепленной лактозы в кишечнике слишком много (активность расщепляющей лактазы снижена), а молочнокислых бактерий недостаточно, то непереваренная
лактоза провоцирует поступление воды из организма в полость кишечника, в результате чего возникает жидкий стул (диарея), боли, урчание, вздутие живота. Такое состояние называется лактазной недостаточностью
(лактозной непереносимостью, ЛН).
По степени выраженности различают частичную и полную ЛН; по происхождению выделают два основных
вида ЛН:
z Первичная ЛН – подразделяется на врожденную (генетически обусловленную, семейную), транзиторную (встречается у недоношенных детей) и ЛН взрослого типа.
z Вторичная ЛН развивается в результате кишечных инфекций, а также любых заболеваний желудочнокишечного тракта.
Возникновение первичной врожденной мальабсорбции лактозы (алактазии новорожденных) и первичной
врожденной мальабсорбции лактозы с поздним началом (у взрослых) связано с генетически детерминированным нарушением синтеза лактазы.
Первичная (врожденная) лактазная недостаточность, т.е. врожденное нарушение процесса выработки лактазы, встречается довольно редко. Истинная лактазная недостаточность встречается только у 10% населения
Земли. К регионам с высокой степенью пенетрантности гена лактазной недостаточности относятся Северная
Америка, Африка, Юго-Восточная Азия, где частота дефекта фермента достигает 70-100%. В российской популяции частота дефицита лактазы наблюдается примерно в 16%.
ЛН взрослого типа возникает после периода грудного вскармливания (обычно снижение лактазной активности происходит к 3-5 годам, окончательный же лактазный фенотип формируется в широких возрастных пределах: к примеру, у японцев он формируется к 5-6 годам, у финнов – к 20-21 годам). В обоих вариантах первичной лактазной недостаточности биохимический механизм нарушений один и тот же, что указывает на их
наследственную природу. Ребенок может унаследовать изначально низкую активность фермента от своих родителей. Действительно, врожденные нарушения чаще всего встречаются в семьях, где непереносимость молока есть у взрослых, хотя иногда родители даже не догадываются о своей лактазной недостаточности. Они
говорят, что просто не любят молоко или, что в их семьях не принято его пить.
Процесс расщепления молочного сахара связан с активностью фермента лактаза-флоризингидролаза
(лактаза или ß-D галактозидгидролаза). Лактаза-флоризингидролаза кодируется единственным геном, локализованным на 2 хромосоме. Врожденное снижение активности лактазы – гиполактазия – наследуется по
аутосомно-рецессивному механизму.
Доказано, что область гена MCM6 является одним из важных регуляторных элементов гена лактазы. Показана ассоциация с лактозной непереносимостью для полиморфизмов -13910 T>C и -22018 T>C.
Оценка рисков при различных генотипах.
Ген
MCM6
(minichromosome
maintenance
complex
component 6)
Полиморфизм
-13910 T>C
-22018 T>C
ГЕНЕТИКА
Аллель
риска
Оценка риска при различных генотипах (Возможные
проявления полиморфизма)
– 13910C
Гомозиготы СС – не способны к усвоению лактозы
Женщины в постменопаузе – больший риск развития остеопороза, требуется назначение препаратов кальция
Гетерозиготы СТ – вариабельный уровень лактазной активности, у таких людей чаще развивается вторичная лактазная недостаточность
Гомозиготы ТТ – легко усваивают лактозу, хорошо переносят молочные продукты
– 22018С
Гомозиготы СС(GG) – не способны к усвоению лактозы
Гетерозиготы СТ(GA) – лактозная непереносимость встречается редко
Гомозиготы ТТ(AA) – легко усваивают лактозу, хорошо переносят молочные продукты
Лактоза
Компания «ДНК-Технология» разработала комплект реагентов для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с нарушениями обмена лактозы методом ПЦР в режиме реального
времени (Генетика Метаболизма Лактозы), ФСР 2010/08413
Преимущества определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с нарушениями обмена
лактозы, методом ПЦР в режиме реального времени:
z Точность определения генотипа - практически 100 %
z Высокая скорость - время выполнения исследования 1 рабочий день.
z Низкая стоимость анализа
Описание комплекта реагентов:
Определяемые полиморфизмы
Материал для анализа
MCM6: – 13910 T>C (1 пробирка – 960 мкл)
MCM6: – 22018 T>C (1 пробирка – 960 мкл)
Цельная кровь
Технические характеристики и состав комплектов реагентов:
Количество тестов в комплекте
48 тестов
Формат реагентов
Нераскапанный по пробиркам
Полимераза Taq АТ
1 пробирка (48 мкл)
ПЦР-буфер
2 пробирки (по 480 мкл)
Масло минеральное
2 пробирки (по 1,0 мл)
Определяемые полиморфизмы
MCM6: – 13910 T>C (1 пробирка – 960 мкл)
MCM6: – 22018 T>C (1 пробирка – 960 мкл)
Реагенты для выделения ДНК
ПРОБА-РАПИД – ГЕНЕТИКА
ПРОБА-ГС – ГЕНЕТИКА
Дополнительные реагенты
Реагенты для контроля качества ДНК
Материал для анализа
Цельная кровь
Срок годности
6 месяцев
Температура хранения
+2 – +8 °С
-20 °С (для Taq-АТ-полимеразы)
Оборудование, необходимое для проведения анализа:
Комплект реагентов предназначен для
использования в лабораториях, оснащенных детектирующими амплификаторами для ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (приборы серии ДТ).
Приборы серии ДТ оснащены специально разработанным русскоязычным
программным обеспечением, поддерживающим автоматическую обработку данных и выдачу результатов исследования
в удобной для интерпретации форме.
Уникальные технические характеристики приборов позволяют сократить время
амплификации до 1 часа 20 минут, а общее время проведения анализа – до 2 часов 30 мин. Это значительно экономит время исследования и обеспечивает высокую пропускную способность лаборатории.
ГЕНЕТИКА
Лактоза
Образец кривой плавления и протокола анализа полиморфизмов, полученного при работе с прибором серии ДТ:
Анализ полиморфизмов, кривая плавления
*Ручной (Пороговый) метод анализа (B,F)
Threshold_FAM = 100.0 Threshold_HEX = 100.0
Дополнительно:
z Микропробирки (или микропробирки в стрипах) объемом 0,2 мл для ПЦР-анализа, адаптированные для
работы с термоциклером в режиме реального времени
z Штатив и насадка на микроцентрифугу-вортекс для стрипованного пластика
Показания к генетическому тестированию:
z Дифференциальная диагностика лактозной непереносимости и других заболеваний желудочно-кишечного
тракта у взрослых
z Обследование детей младшего возраста в период прекращения грудного вскармливания для предотвращения неожиданных расстройств кишечника, особенно при повышенной чувствительности к нагрузочным
пробам
Рекомендуемые дополнительные исследования:
z Тест толерантности к молоку; элиминационная диета (диета без лактозы в течение двух недель)
z Исследование кала на углеводы, молочную кислоту, рН
z Биохимический анализ микрофлоры кишечника
z Проба Бенедикта, тест всасывания D-ксилозы.
z Водородный дыхательный тест (определение концентрации водорода в выдыхаемом воздухе до и после
нагрузки лактозой)
z Определение характера гликемической кривой после нагрузки лактозой
z Определение активности ферментов щеточной каемки энтероцитов
Практические рекомендации:
z Лечение лактазной недостаточности основано на диетотерапии с ограничением или полным исключением продуктов, содержащих лактозу: молоко, обычные адаптированные и неадаптированные молочные
смеси, ряженка, сметана, молочные каши и пудинги, кефир, ацидофилин.
z После верификации диагноза лактозной непереносимости взрослого типа, препараты лактазы рекомендуется применять всегда, когда в рационе оказываются продукты, богатые лактозой.
z Случается, что люди испытывают симптомы непереносимости лактозы после употребления хлеба или
завтраков быстрого приготовления, т.к. в некоторые продукты лактоза добавляется в качестве подсластителя. Также лактоза может содержаться
в колбасах и сосисках, картофельных чипсах, маргарине и некоторых лекарственных
препаратах.
z «Молочный стол», традиционно назначаемый при ряде заболеваний органов пищеварения, при наличии гиполактазии может существенно ухудшить состояние пациента и
затруднить лечение основного заболевания.
ООО « ДНК-Технология»
z Уменьшение или прекращение потребления
Адрес: Москва, Варшавское шоссе, д. 125 Ж, корп. 6
молока и молочных продуктов приводит к
Тел./факс: (495) 980 4555
тому, что в организм поступает меньшее коmail@dna-technology.ru
личество кальция. Поэтому рекомендовано
www.dna-technology.ru
принимать кальциевые добавки.
ГЕНЕТИКА
Лактоза