Àíòîíîâà Å.È. Омский государственный педагогический университет ÄÈÍÀÌÈÊÀ ÏÎÊÀÇÀÒÅËÅÉ ÊËÅÒÎ×ÍÎÃÎ ÖÈÊËÀ ÃÅÏÀÒÎÖÈÒΠÀÌÔÈÁÈÉ ÂÈÄÀ RANA TERRESTRIS ÈÍÄÓÖÈÐÓÅÌÀß ÒÅÏËÎÂÛÌ ÑÒÐÅÑÑÎÌ ÊÀÊ ÏÐÎßÂËÅÍÈÅ ÏÅÐÂÈ×ÍÎÉ ÊÎÌÏÅÍÑÀÒÎÐÍÎ-ÏÐÈÑÏÎÑÎÁÈÒÅËÜÍÎÉ ÐÅÀÊÖÈÈ ÎÐÃÀÍÈÇÌÀ Ïîñëå âîçäåéñòâèÿ ãèïåðòåðìèè íà îðãàíèçì àìôèáèé âèäà Rana terrestris êîëè÷åñòâåííûå ïîêàçàòåëè ÄÍÊ ãåïàòîöèòîâ îòðàæàþò ïåðâè÷íûå ïðîÿâëåíèÿ êîìïåíñàòîðíî-ïðèñïîñîáèòåëüíîé ðåàêöèè îðãàíèçìà óâåëè÷èâàåòñÿ óðîâåíü êîìïàêòèçàöèè ÄÍÊ, óìåíüøàåòñÿ ïëîùàäü ðàñïðåäåëåíèÿ õðîìàòèíà è ïëîùàäü ÿäåð, ðàçâèâàåòñÿ ìåòàáîëè÷åñêàÿ äåïðåññèÿ çà ñ÷åò ñíèæåíèÿ êîëè÷åñòâà ãåïàòîöèòîâ â S-è G2-Ì-ñòàäèè êëåòî÷íîãî öèêëà, óâåëè÷èâàåòñÿ äîëÿ ïîãèáøèõ ãåïàòîöèòîâ è óâåëè÷èâàåòñÿ àêòèâíîñòü êàñïàçû 3. Ñîîòíîøåíèå ïóòåé ãèáåëè ãåïàòîöèòîâ ñîñòàâëÿåò 0,8 ñ ïðåîáëàäàíèåì ïðîïèäèóìèîäèä-ïîçèòèâíûõ ãåïàòîöèòîâ íàä õåõñò-ïîçèòèâíûìè. Ýêñòðåìàëüíàÿ ýêçîãåííàÿ ãèïåðòåðìèÿ îïðåäåëÿåò ïðîÿâëåíèå êðàéíåãî íàïðÿæåíèÿ ôóíêöèîíàëüíûõ ñèñòåì îðãàíèçìà ñîïðÿæåííîãî ñ èñòîùåíèåì ôóíêöèîíàëüíîãî ïîòåíöèàëà è ìåõàíèçìîâ ñîõðàíåíèÿ ãîìåîñòàçà ïå÷åíè, îòðàæàÿ ñòåïåíü òîëåðàíòíîñòè îðãàíèçìà ê ãèïåðòåðìèè ñîãëàñíî èñõîäíîãî èíäèâèäóàëüíîãî óðîâíÿ óñòîé÷èâîñòè, îáóñëîâëåííîãî ãåíîòèïîì îñîáè [27]. Äèíàìè÷åñêèé áàëàíñ ìåæäó ãèáåëüþ è ïðîëèôåðàöèåé êëåòîê â îðãàíèçìå ñîñòàâëÿåò îñíîâó òêàíåâîãî ãîìåîñòàçà. Ýâîëþöèîííîå äàâëåíèå ñôîðìèðîâàëî íåñêîëüêî ïðîãðàìì êëåòî÷íîé ãèáåëè, êîòîðûå ïî ìåðå óñëîæíåíèÿ è óâåëè÷åíèÿ ïðîäîëæèòåëüíîñòè æèçíè îðãàíèçìîâ îáåñïå÷èâàþò êîíòðîëü çà êëåòî÷íîé ïîïóëÿöèåé â ìíîãîêëåòî÷íîì îðãàíèçìå è ðàçíîîáðàçèå áèîëîãè÷åñêèõ ñîáûòèé, êîòîðûå âêëþ÷àþò ìîðôîãåíåç, òêàíåâûé ãîìåîñòàç è óñòðàíåíèå äåôåêòíûõ êëåòîê [26, 10, 17, 33]. Àíàëèç ñòðóêòóðû èíòåðôàçíîãî õðîìàòèíà, íà ñàìûõ ðàííèõ ýòàïàõ ñòàíîâëåíèÿ êîìïåíñàòîðíî-ïðèñïîñîáèòåëüíûõ ðåàêöèé, ìîæíî ðàññìàòðèâàòü êàê íåñïåöèôè÷åñêîå çâåíî ðåãóëÿöèè êëåòî÷íîé àêòèâíîñòè, êîòîðîå ÷åðåç ñîçäàíèå êîíôîðìàöèîííûõ ñòðóêòóð ÄÍÊ äàåò ïðåäñòàâëåíèå î ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòè ÿäðà è êëåòêè â öåëîì, î ñêîðîñòè ïðîãðàììèðóåìîé êëåòî÷íîé ñìåðòè è êîìïåíñàòîðíî-ïðîëèôåðàòèâíûõ ïðîöåññàõ [13, 16]. Àíàëèç êîëè÷åñòâà ñîäåðæàíèÿ ÄÍÊ è ðàçìåðà ãåíîìà ñ ïîìîùüþ öèòîôîòîìåòðèè âàæåí êàê â áèîëîãè÷åñêîì, òàê è êëèíè÷åñêîì àñïåêòå [34, 21]. Âîïðîñ î òîì, êàê óâåëè÷åíèå ðàçìåðà ãåíîìà (Ñ-öåííîñòü) âëèÿåò íà òå èëè ВЕСТНИК ОГУ №6(88)/июнь`2008 èíûå ôóíêöèè æèâîòíûõ íà êëåòî÷íîì, òêàíåâîì è îðãàíèçìåííîì óðîâíÿõ, â ñâÿçè ñ àäàïòàöèåé ïîëèïëîèäíûõ âèäîâ èëè ïîïóëÿöèé ê îêðóæàþùåé ñðåäå, äàëåê îò ðàçðåøåíèÿ.  ñâÿçè, ñ ÷åì öåëüþ íàøåãî èññëåäîâàíèÿ ÿâèëîñü èçó÷åíèå äèíàìèêè ïîêàçàòåëåé êëåòî÷íîãî öèêëà ãåïàòîöèòîâ Rana terrestris â ñîîòâåòñòâèè ñ ðàçìåðîì ãåíîìà è ñîîòíîøåíèÿ óðîâíåé äåñòðóêòèâíûõ è ðåïàðàòèâíûõ ïðîöåññîâ ïîñëå îäíîêðàòíîé òåïëîâîé íàãðóçêè. Ìàòåðèàëû è ìåòîäû Ýêñïåðèìåíò ïîñòàâëåí íà àìôèáèÿõ âèäà Rana terrestris (îñòðîìîðäûå ëÿãóøêè ïîëîâîçðåëûå ñàìöû 3õ ëåòêè).  êàæäîé ãðóïïå 15 æèâîòíûõ ñîñòàâèëè êîíòðîëüíóþ ãðóïïó è 15 æèâîòíûõ ïîäâåðãëèñü ãèïåðòåðìèè. Ó÷èòûâàÿ ëèòåðàòóðíûå äàííûå î ñåçîííîé, ñóòî÷íîé è ôèçèîëîãè÷åñêîé ðèòìèêå, âñå ýêñïåðèìåíòû ïðîâåäåíû â âåñåííå-ëåòíèé ïåðèîä íà ãîëîäíûõ æèâîòíûõ ñ 9 äî 12 ÷àñîâ äíÿ. Îñòðîãî ïåðåãðåâàíèÿ äîñòèãàëè ïóòåì ïðåáûâàíèÿ æèâîòíûõ â òå÷åíèå 20-30 ìèíóò â ïðèíóäèòåëüíîì ñòàòè÷íîì òåðìîðåæèìå (32°Ñ) â óñëîâèÿõ ñâîáîäíîãî ïëàâàíèÿ â òåðìîãðàäèåíòíîì ëîòêå ñ äîïîëíèòåëüíîé àýðàöèåé [4]. Äî è ïîñëå ýêñïåðèìåíòà ó æèâîòíûõ èíäèâèäóàëüíî îïðåäåëÿëè ìàññó òåëà íà ýëåêòðîííûõ âåñàõ «WA33» è ðåêòàëüíóþ òåìïåðàòóðó ýëåêòðîòåðìîìåòðîì «ÒÝÏ 16». Òåìïåðàòóðíîå âîçäåéñòâèå ïðèìåíÿåìûå â ýêñïåðèìåíòå ìîäåëèðîâàëî òåïëîâîé øîê ñðåäíåé òÿæåñòè [32, 23, 9]. Ìàòåðèàë äëÿ ãèñòîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèé âñåãäà çàáèðàëñÿ èç îäíèõ è òåõ æå äîëåé ïå÷åíè ÷åðåç ÷àñ ïîñëå âîçäåéñòâèÿ. Ìàçêè ïå÷åíè îêðàøèâàëè ïî Антонова Е.И. Ôåëüãåíó â ìîäèôèêàöèè G. Olson, â ðåàêòèâå Øèôôà. Íà ïðåïàðàòàõ îïðåäåëÿëè ñîñòîÿíèå îáîèõ ôðàêöèé õðîìàòèíà èíòåãðàëüíóþ ïëîòíîñòü äåêîíäåíñèðîâàííîãî, êîíäåíñèðîâàííîãî õðîìàòèíà è îáùóþ èíòåãðàëüíàÿ ïëîòíîñòü õðîìàòèíà (ó.å.); ïëîùàäü ðàñïðåäåëåíèÿ õðîìàòèíà è ïëîùàäü ÿäðà (ìêì2); ñðåäíþþ îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü è ïëîòíîñòü îáåèõ ôîðì õðîìàòèíà (ó.å.). Èçìåðåíèÿ ïàðàìåòðîâ ÄÍÊ ïðîâîäèëèñü íà ñêàíèðóþùåì ìèêðîñêîïå-ôîòîìåòðå «Ëþìàì ÏÌ-11».  êàæäîé ãðóïïå ó êàæäîãî æèâîòíîãî êîëè÷åñòâî ÄÍÊ áûëî èçìåðåíî â 200 ÿäðàõ. Âî âñåõ ñëó÷àÿõ èññëåäîâàëè òîëüêî îäíîÿäåðíûå ãåïàòîöèòû [3]. Òåñò «æèâîå è ìåðòâîå» (life and dead assay) [22] ïðîâîäèëè ïóòåì ïðèæèçíåííîãî îêðàøèâàíèÿ ãåïàòîöèòîâ ÿäåðíûìè êðàñèòåëÿìè Hoechst 33342 (Sigma, ÑØÀ; ðàñòâîð â êîíöåíòðàöèè 20 ìêã/ìë íà ñðåäå ÌÇ â òå÷åíèå 15 ìèí) [15] è éîäèñòûì ïðîïèäèåì (Sigma, ÑØÀ; ðàñòâîð â êîíöåíòðàöèè 20 ìêã/ìë íà ñðåäå ÌÇ â òå÷åíèå 25 ìèí) ÷òî ïîçâîëÿåò ðàçäåëèòü ãåïàòîöèòû íà ãðóïïû, îñíîâûâàÿñü íà òàêèõ êðèòåðèÿõ, êàê ñîñòîÿíèå ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû è ÿäðà. Äëÿ ýòîãî îäèí ãðàìì òêàíè ãîìîãåíèçèðîâàëè, êëåòêè îòìûâàëè 5 ìèí ïðè 1500 îá/ìèí ñ ïîìîùüþ PBS ñ äîáàâëåíèåì 1% áû÷üåãî ñûâîðîòî÷íîãî àëüáóìèíà (BSA) äëÿ óñòðàíåíèÿ íåñïåöèôè÷åñêîãî ñâÿçûâàíèÿ, â ìèêðîïðîáèðêè ñ êëåòêàìè äîáàâëÿëè êðàñèòåëü Hoechst 33342 è/èëè éîäèñòûé ïðîïèäèé. Êëåòêè öåíòðèôóãèðîâàëè, îòáðàñûâàëè íàäîñàäî÷íóþ æèäêîñòü è 2 ðàçà îòìûâàëè ðàñòâîðîì PBS ñ äîáàâëåíèåì 1% BSA. Äàëåå ðåñóñïåíçèðîâàëè â ðàñòâîðå ãëèöåðèíà ñ 4% ïàðàôîðìàëüäåãèäîì â ñîîòíîøåíèè 1:1 â îáùåì îáúåìå 8 ìêë. Ôèêñèðîâàííûå òàêèì îáðàçîì êëåòêè íàíîñèëè íà ïðåäìåòíîå ñòåêëî, íàêðûâàëè ïîêðîâíûì ñòåêëîì è çàïàèâàëè æèäêèì ïàðàôèíîì. Ãåïàòîöèòû, ó êîòîðûõ ÿäðà îêðàøåíû Hoechst 33342, ñ÷èòàþò æèçíåñïîñîáíûìè, åñëè èõ ÿäðà íå ôðàãìåíòèðîâàíû, èëè àïîïòîçíûìè, åñëè õðîìàòèí êîíäåíñèðîâàí è(èëè) ÿäðà ôðàãìåíòèðîâàíû. ßäðà, îêðàøåííûå éîäèñòûì ïðîïèäèåì óêàçûâàþò íà íàðóøåíèå öåëîñòíîñòè ïëàçìàòè÷åñêèõ ìåìáðàí ãåïàòîöèòîâ [29]. Äëÿ ýòîãî èñïîëüçîâàëñÿ ôëóîðåñöåíòíûé ìèêðîñêîï Axioscope (Zeiss) ñ ïðèìåíå- Динамика показателей клеточного цикла... íèåì áëîêà ôèëüòðîâ «Ãîëóáàÿ» ïðè äëèíå âîëíû ? 500-550 è 600-700. Ïðîâîäèëñÿ ïîäñ÷åò ôðàãìåíòèðîâàííûõ ÿäåð â ðàñ÷åòå íà 300 êëåòîê â 5 ïîëÿõ çðåíèÿ. Áèîõèìè÷åñêîå îïðåäåëåíèå òåðìèíàëüíîé ñòàäèè àïîïòîçà ïðîâîäèëè, èñïîëüçóÿ êîììåð÷åñêèé íàáîð «Caspase-3 Assay Kit» ôèðìû «Sigma» íà ñïåêòðîôîòîìåòðå Platr Reader Star-30 KENSTAR â ìêì/ìã áåëêà ïî èíñòðóêöèè ïðîèçâîäèòåëÿ. Ñòàòèñòè÷åñêóþ îáðàáîòêó ïîëó÷åííîãî ìàòåðèàëà îñóùåñòâëÿëè ñ ïîìîùüþ ïàêåòà ïðèêëàäíûõ ïðîãðàìì STATISTICA-5 Ð?0,05 [6]. Ðàçëè÷èÿ ìåæäó íåçàâèñèìûìè âûáîðêàìè îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ êðèòåðèÿ Mann-Whitney òåñò, ìíîãîôàêòîðíîãî äèñïåðñíîãî àíàëèçà MANOV, ïî êðèòåðèþ Ñòüþäåíòà (t), Âèëêîêñîíà (U), ? 2 Ïèðñîíà. Ñîáñòâåííûå äàííûå Îïòèêî-ñòðóêòóðíûé àíàëèç õðîìàòèíà ÿäåð ãåïàòîöèòîâ ïîçâîëèë âûÿâèòü ñîñòîÿíèå õðîìàòèíà ó èíòàêòíûõ è ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ. Òàê â êîíòðîëå äèôôóçíûé õðîìàòèí Rana terrestris èìååò áoëüøóþ èíòåãðàëüíóþ îïòè÷åñêóþ ïëîòíîñòü (69,4%), â îòëè÷èå îò êîíäåíñèðîâàííîãî (30,6%) 2,5±0,05 è 1,12±0,04 ó.å. ñîîòâåòñòâåííî. Ñðåäíÿÿ îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü (óðîâåíü êîìïàêòèçàöèè) âûøå ó ãåòåðîõðîìàòèíà 0,08±0,001 è 0,16±0,0025 ó.å. ñîîòâåòñòâåííî. Ïëîùàäü ðàñïðåäåëåíèÿ ýóõðîìàòèíà â ÿäðàõ ãåïàòîöèòîâ çíà÷èòåëüíî ïðåâûøàåò ïëîùàäü ðàñïðåäåëåíèÿ ãåòåðîõðîìàòèíà (33,0±0,76 è 8,19±0,35 ìêì2 ñîîòâåòñòâåííî). Íà îñíîâàíèè ÷àñòîò èíòåãðàëüíîé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ÿäåð ïîïóëÿöèÿ ãåïàòîöèòîâ ïî ñòàäèÿì êëåòî÷íîãî öèêëà ðàñïðåäåëåíà ñëåäóþùèì îáðàçîì 2,25% ãåïàòîöèòîâ ÿâëÿþòñÿ ãèïîäèïëîèäíûìè, 87,8% íàõîäÿòñÿ â G0-G1 ñòàäèè, 1,75% â G2-M è â S ñòàäèè 7,5% ãåïàòîöèòîâ èíòàêòíîé ïå÷åíè Rana terrestris (ðèñ. 1, 2). Ïðîñòðàíñòâåííî-òîïîãðàôè÷åñêè õðîìàòèí ïðåäñòàâëåí ìåëêîçåðíèñòûìè ôðàêöèÿìè ñ ðàâíîìåðíûì ðàñïðåäåëåíèåì ïî îáúåìó ÿäðà. Âñòðå÷àþòñÿ êðóïíûå çîíû êîíäåíñàöèè õðîìàòèíà, êîòîðûå ìîãóò èìåòü ðàçëè÷íóþ ëîêàëèçàöèþ (ðèñ. 3). Ïîñëå ïåðåãðåâàíèÿ îòìå÷àåòñÿ ñâåðõêîìïàêòèçàöèÿ õðîìàòèíà, ÷òî ïðîÿâëÿåòñÿ â óìåíüøåíèè ïåðèìåòðà, êîýôôèöèåíòà îêðóãëîñòè, ïëîùàäè ðàñïðåäåëåíèÿ è èíòåãВЕСТНИК ОГУ №6(88)/июнь`2008 ! Естественные науки îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè è ÷àñòîòíîìó àíàëèçó âûÿâëåíî 100 90 (ðèñ. 4, 5) óâåëè÷åíèå êîëè÷å80 ñòâà ãèïîäèïëîèäíûõ ãåïàòî70 öèòîâ 2,75%, óâåëè÷èâàåòñÿ 60 êîëè÷åñòâî ãåïàòîöèòîâ â G050 40 G1 ñòàäèè êëåòî÷íîãî öèêëà, 30 óìåíüøàåòñÿ êîëè÷åñòâî â S 20 ñòàäèè 3,75%, óãíåòàåòñÿ ìè10 Expected 0 òîòè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ãåïàNormal 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 9,5 òîöèòîâ ïîêàçàòåëè êîòîðîé Upper Boundaries (x <= boundary) ñîñòàâëÿþò 1,25% (ðèñ. 4, 5). Ðèñóíîê 1. Àìôèáèè Rana terrestris. Êîíòðîëü. Ãèñòîãðàììà ðàñïðåäåëåíèÿ ïîïóëÿöèè ãåïàòîöèòîâ ïî êëåòî÷íîìó öèêëó. TI Òàêèì îáðàçîì, èíäåêñ ïðîèíòåãðàëüíàÿ îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü õðîìàòèíà ëèôåðàöèè ñíèæàåòñÿ äî 5 â ñðàâíåíèè ñ êîíòðîëåì, êîãTI vs. T_SR äà îí ñîñòàâëÿë 9,3. Óâåëè÷åT_SR = ,07484 + ,00532 * TI Correlation: r = ,22717 íèå ÷èñëà ãèïîäèïëîèäíûõ 0,24 ãåïàòîöèòîâ ñîïðîâîæäàåòñÿ 0,20 óâåëè÷åíèåì íà 66,6% â ñðàâíåíèè ñ êîíòðîëåì àêòèâíîñ0,16 òè êàñïàçû 3 â öèòîçîëüíîé 0,12 ôðàêöèè ãåïàòîöèòîâ Rana 0,08 terrestris (0,4±0,02 è 2,0±0,02* ìêì/ìã áåëêà ñîîòâåòñòâåí0,04 íî). Àíàëèç òåñòà «life and dead Regression 0,00 95% confid. assay» âûÿâèë, ÷òî íàðÿäó ñ ãå0 2 4 6 8 10 TI ïàòîöèòàìè â ñîñòîÿíèè Ðèñóíîê 2. Àìôèáèè Rana terrestris. Êîíòðîëü. Äâóìåðíîå ðàñïðåäåëåíèå àïîïòîçà õåõñò-ïîçèòèâíûå, ÿäåð ãåïàòîöèòîâ ïî TI èíòåãðàëüíîé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ÄÍÊ ïðèñóòñòâóþò è ïðîïèäèóìèè T_RS ñðåäíåé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ÄÍÊ. Ìíîãîôàêòîðíûé äèñïåðñíûé àíàëèç MANOV. îäèä-ïîçèòèâíûå, êîòîðûå ïðîÿâëÿþò íåêðîòè÷åñêèé ôåðàëüíîé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ýóõðîìàòèíà. íîòèï (ðèñ. 7). Ïðè÷åì äîëÿ ïðîïèäèóìèîÒàê óâåëè÷åíèå èíòåãðàëüíîé îïòè÷åñêîé äèä-ïîçèòèâíûõ ãåïàòîöèòîâ ñîñòàâëÿåò ïëîòíîñòè ãåòåðîõðîìàòèíà â ñðàâíåíèè ñ 55%, à õåõñò-ïîçèòèâíûõ 45%, â ñîîòíîøåêîíòðîëåì ïðîèñõîäèò íà 19,7% (1,12±0,04 è íèè 0,8, Îáùàÿ äîëÿ ïîãèáøèõ ãåïàòîöèòîâ 1,67±0,04* ó.å. ñîîòâåòñòâåííî). Íà 20,0% ïîñëå ïåðåãðåâàíèÿ ñîñòàâèëà 30,8%, â ðàñóâåëè÷èâàåòñÿ ñðåäíÿÿ îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü ÷åòå íà 100 ãåïàòîöèòîâ. Ïîñëå òåïëîâîé íàýóõðîìàòèíà (0,08±0,001 è 0,12±0,001* ó.å. ãðóçêè áîëüøàÿ ÷àñòü õðîìàòèíà ÿäåð àìôèñîîòâåòñòâåííî), â ñâÿçè, ñ ÷åì íà 28,8% áèé ìîðôîëîãè÷åñêè ïðåäñòàâëåíà êðóïíîóìåíüøàåòñÿ ïëîùàäü åãî ðàñïðåäåëåíèÿ çåðíèñòûìè ôðàãìåíòàìè ãåòåðîõðîìàòèíà (33,0±0,76 è 18,2±0,33* ìêì2 ñîîòâåòñòâåííî). ñ ðàçëè÷íîé ëîêàëèçàöèåé â îáúåìå ÿäðà, à Äîïîëíèòåëüíàÿ êîìïàêòèçàöèÿ, êîòîðóþ òàê æå ïðèñóòñòâóþò ÿäðà â ñîñòîÿíèè ïèêïðîÿâëÿåò ýóõðîìàòèí, îïðåäåëÿåò ðåçêîå íîçà (ðèñ. 6). óìåíüøåíèå îáùåé ïëîùàäè ÿäåð ãåïàòîöèÎáñóæäåíèå ðåçóëüòàòîâ. Ðàçìåð ãåíîìà è òîâ íà 22,2% (41,4±0,83 è 26,7±0,35* ìêì2 åãî ìîðôîìåòðè÷åñêèå ïàðàìåòðû, âîâëå÷åíû â ðåãóëèðîâàíèå ìåòàáîëèçìà êëåòêè. Âíóòðèñîîòâåòñòâåííî). À îáùàÿ êîìïàêòèçàöèÿ, ïî ÿäåðíûå êîìïëåêñû ïîäâåðãàþòñÿ ïîñòîÿííîé ðåçóëüòàòàì ñðåäíåé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè, ñáîðêå è äåìîíòàæó, îáåñïå÷èâàÿ àäåêâàòíîå îáåèõ ôðàêöèé õðîìàòèíà ñîñòàâèëà 14,2% ðåàãèðîâàíèå ãåíîìà íà äåéñòâèå ýêîëîãè÷åñ(0,24±0,03 è 0,32±0,02* ó.å. ñîîòâåòñòâåííî). êèõ ôàêòîðîâ, ïðèâîäÿ ê ôîðìèðîâàíèþ ñòðóêÏîñëå ïåðåãðåâàíèÿ ñîãëàñíî èíòåãðàëüíîé TI T_SR No of obs 110 " ВЕСТНИК ОГУ №6(88)/июнь`2008 Антонова Е.И. Динамика показателей клеточного цикла... T_SR No of obs òóðíûõ ïåðåõîäîâ, êîòîðûå êîððåëèðóþò ñ äèíàìè÷åñêèìè ïðîöåññàìè ÿäåðíîé àêòèâíîñòè [12]. Ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî ÿäåðíûå îáúåìû ãåíåòè÷åñêè äåòåðìèíèðîâàíû, ïðåæäå âñåãî, êîëè÷åñòâîì ÄÍÊ, ñòåïåíüþ óïàêîâêè ÄÍÊ èëè äåêîìïàêòèçàöèåé. Ðåãóëÿöèÿ êîìïàêòèçàöèè ÄÍÊ â ïðåäåëàõ õðîìàòèíà îñóùåñòâëÿåòñÿ ôàêòîðàìè òðàíñêðèïöèè, à ñàì ìåõàíèçì ýâîëþöèîííî çàêîíñåðâèðîâàí [28, 11, 14]. Ñîãëàñíî ãèïîòåçå Øàðñêîãî î ñòðàòåãèè ýêîíîìíîãî ìåòàáîëèçìà, óâåëè÷åíèå ðàçìåðà ãåíîìà ó àìôèáèé, â òîì ÷èñëå ÷åðåç ïðîöåññ ïîëèïëîèäèçàöèè, ïðèâîäèò ê ïîíèæåíèþ ñêîðîñòè ìåòàáîëèçìà íà êëåòî÷íîì è îðãàíèçìåííîì óðîâíÿõ. Áîëüøèå ãåíîìû ïîääåðæèâàþò áîÐèñóíîê 3. Àìôèáèè Rana terrestris. Êîíòðîëü. Îêðàñêà ïî Ôåëüãåíó. Óâåëè÷åíèå 10õ90. ëåå ðàçíîîáðàçíûå ìåòàáîëè÷åñêèå ïóòè è ìîðÃåòåðîãåííîñòü òîïîãðàôèè õðîìàòèíà ãåïàòîöèòîâ ôîëîãè÷åñêèå ñòðóêòóðû, íåæåëè ìàëåíüêèå, ÷òî îáåñïå÷èâàåò àìôèáèÿì TI îäèíàêîâî óñïåøíîå ñóùå130 ñòâîâàíèå êàê â âîäíîé, òàê 120 è â âîçäóøíîé ñðåäå îáèòà110 100 íèÿ. Ñëåäîâàòåëüíî, ê óâåëè90 ÷åíèþ ðàçìåðà ãåíîìà ïðè80 âîäèò åñòåñòâåííûé îòáîð â 70 60 áîãàòûõ èíôîðìàöèåé îêðó50 æàþùèõ ñðåäàõ, à ïðîãðåñ40 30 ñèâíî íàêîïëåííàÿ èíôîð20 ìàöèÿ çàêðåïëÿåòñÿ íàñëåä10 ñòâåííî, îáåñïå÷èâàÿ àäàïòàExpected 0 Normal 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 öèþ ê âîäíî-âîçäóøíîé ñðåUpper Boundaries (x <= boundary) äå îáèòàíèÿ. Âûÿâëåííûé Ðèñóíîê 4. Àìôèáèè Rana terrestris. Ïåðåãðåâàíèå. áîëåå âûñîêèé óðîâåíü êîì- Ãèñòîãðàììà ðàñïðåäåëåíèÿ ïîïóëÿöèè ãåïàòîöèòîâ ïî êëåòî÷íîìó öèêëó. TI èíòåãðàëüíàÿ îïòè÷åñêàÿ ïëîòíîñòü õðîìàòèíà ïàêòèçàöèè ãåòåðîõðîìàòèíà ó àìôèáèé, êîòîðûé íà TI vs. T_SR 33,4% ïðåâûøàåò óðîâåíü T_SR = ,07753 + ,01816 * TI êîìïàêòèçàöèè ýóõðîìàòèCorrelation: r = ,41960 íà, ïî âñåé âèäèìîñòè, îáóñ0,32 ëîâëåí òåì, ÷òî íàëè÷èå «èç0,28 áûòî÷íîñòè» ÄÍÊ ýóêàðèîò, 0,24 ïî êðàéíåé ìåðå, ÷àñòè÷íî, 0,20 îïðåäåëÿåòñÿ ïîòðåáíîñòÿìè 0,16 â êîìïàêòèçàöèè ñàìîé ñåáÿ [35]. Èçâåñòíî, ÷òî ñóùåñòâó0,12 åò çàâèñèìîñòü ìåæäó ðàçìå0,08 ðîì ãåíîìà è óñòîé÷èâîñòüþ Regression 0,04 95% confid. ðÿäà âèäîâ çåìíîâîäíûõ ê 1,5 2,5 3,5 4,5 5,5 6,5 7,5 8,5 TI ãèïåðòåðìèè è ãèïîêñèè. Ðèñóíîê 5. Àìôèáèè Rana terrestris. Ïåðåãðåâàíèå. Äâóìåðíîå Ïîëèïëîèäèÿ àññîöèèðîâàðàñïðåäåëåíèå ÿäåð ãåïàòîöèòîâ ïî TI èíòåãðàëüíîé îïòè÷åñêîé íà ñ îêñèäàòèâíûì ñòðåññîì ïëîòíîñòè ÄÍÊ è T_RS ñðåäíåé îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ÄÍÊ. Ìíîãîôàêòîðíûé äèñïåðñíûé àíàëèç MANOV è ýíåðãåòè÷åñêèì ãîëîäàíèВЕСТНИК ОГУ №6(88)/июнь`2008 # Естественные науки åì è ÿâëÿåòñÿ ýâîëþöèîííî ñôîðìèðîâàííûì ìåõàíèçìîì çàùèòû êëåòîê îò ïîâðåæäåíèÿ.  ñâÿçè, ñ ÷åì âûÿâëåííîå íàìè ñíèæåíèå êîëè÷åñòâà ãåïàòîöèòîâ â S-ñòàäèè êëåòî÷íîãî öèêëà ïîñëå âîçäåéñòâèÿ ãèïåðòåðìèè íîñèò àäàïòèâíûõ õàðàêòåð è ñîãëàñóåòñÿ ñ ñèñòåìîé òåðìîðåãóëÿöèè àìôèáèé è ýêîëîãè÷åñêîé ñïåöèàëèçàöèåé. Ò.ê. òåìïåðàòóðû, íèæå 50°Ñ, ÿâ- Ðèñóíîê 6. Àìôèáèè Rana terrestris. Ïåðåãðåâàíèå. Îêðàñêà ïî Ôåëüãåíó. Óâåëè÷åíèå 10õ90. Ïèêíîç. Ðàçâèòèå êîìïàêòèçàöèè õðîìàòèíà Ðèñóíîê 7. Àìôèáèè Rana terrestris. Ïåðåãðåâàíèå. Îêðàñêà (À, Â) Õ¸õñò 33342 (àïîïòè÷åñêèé ôåíîòèï), ïèêíîç è ôðàãìåíòàöèÿ ÿäðà ïðè àïîïòîçå, àïîïòîçíûå òåëà. (Ñ) ïðîïèäèóì éîäèä (íåêðîòè÷åñêèé ôåíîòèï). Óâåëè÷åíèå îê10õîá40 $ ВЕСТНИК ОГУ №6(88)/июнь`2008 ëÿþòñÿ ïåðìåññèâíûìè òî ÄÍÊ-ïîâðåæäàþùåå äåéñòâèå îïîñðåäóåòñÿ ðàçâèâàþùåéñÿ òêàíåâîé ãèïîêñèåé, óâåëè÷åíèåì ïðîäóêöèè ÀÔÊ, íóêëåàçàìè, ôåðìåíòàìè ëèçîñîì, ìåìáðàíà êîòîðûõ ïðè ïîâûøåííîé òåìïåðàòóðå ìîæåò ñòàòü ïðîíèöàåìîé, à òàê æå êñåíîáèîòèêàìè, êîòîðûå âûçûâàþò ñäâèã ðàâíîâåñèÿ â ñèñòåìå ïðîîêñèäàíòû/àíòèîêñèäàíòû, ñ äàëüíåéøèì ðàçâèòèåì îêñèäàòèâíîãî ñòðåññà [1]. Âûÿâëåííîå íàìè óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè êàñïàçû 3, àêòèâíîñòü êîòîðîé ñòàëà ïî÷òè ñèíîíèìîì êëåòî÷íîé ãèáåëè, îòðàæàåò ïðîöåññ óâåëè÷åíèÿ ãèáåëè ãåïàòîöèòîâ. Åå ñóáñòðàòàìè ÿâëÿþòñÿ áåëêè öèòîñêåëåòà, ôåðìåíòû ðåïàðàöèè ÄÍÊ, ðåãóëÿòîðû êëåòî÷íîãî öèêëà ÿäðà, ïðîòåèíêèíàçû, ñïåöèôè÷åñêèé èíãèáèòîð CAD, êîòîðûé âûçûâàåò êîíäåíñàöèþ è ôðàãìåíòàöèþ õðîìàòèíà êëåòêè [24, 19]. Áëåááèíã íå ïðîèñõîäèò â êëåòêàõ, â êîòîðûõ íå óâåëè÷èâàåòñÿ àêòèâíîñòü êàñïàçû 3. Ïðîêàñïàçà-3 îáíàðóæèâàåòñÿ êàê â ìåæìåìáðàííîì îáúåìå ìèòîõîíäðèé, òàê è â öèòîïëàçìå. Åå âûõîä èç íàáóõøèõ ìèòîõîíäðèé â ðåçóëüòàòå îïîñðåäîâàí ïîâðåæäåíèåì ìåìáðàí, óâåëè÷åíèåì ïðîíèöàåìîñòè âíóòðåííåé ìåìáðàíû ìèòîõîíäðèé âñëåäñòâèå àêòèâàöèè ÏÎË, èñòîùåíèåì âîññòàíîâëåííîãî ãëóòàòèîíà, îáðàçîâàíèåì àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà, ðàçîáùåíèåì îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ, óâåëè÷åíèåì ñîäåðæàíèÿ èîíîâ Ca2+ â öèòîïëàçìå [5]. Òåïëîâîé øîê ñòàáèëèçèðóåò ïðèñîåäèíåíèå ê ìàòðèêñó 5'-êîíöà MAR ïîñëåäîâàòåëüíîñòè ÄÍÊ â òðàíñêðèïöèîííî-àêòèâíîì ó÷àñòêå ãåíîâ, âñëåäñòâèå ÷åãî àêòèâíàÿ ÷àñòü ãåíîìà ïîëó÷àåò äîïîëíèòåëüíóþ êîìïàêòèçàöèþ ïîñëå ãèïåðòåðìèè, ïðèîáðåòàÿ ÷åðòû êîëëàïñèðîâàííîãî õðîìàòèíà. Ïîäàâëåíèå ðåïëèêàöèè è òðàíñêðèïöèè, èíèöèèðóþòñÿ èçìåíåíèÿ àññîöèàöèè ÄÍÊ ñ ÿäåðíûì ìàòðèêñîì â òðàíñêðèïöèîííîàêòèâíûõ ãåíàõ, íàðóøàþòñÿ òåðìîäèíàìè÷åñêèå ñâîéñòâà ÄÍÊ ïîä äåéñòâèåì ãèïåðòåðìèè, îïðåäåëÿÿ ðàçâèòèå ìåòàáîëè÷åñêîé äåïðåññèè â óñëîâèÿõ òåìïåðàòóðíîãî ñòðåññà, êîòîðàÿ íîñèò çàùèòíûé õàðàêòåð è îáåñïå÷èâàåò âûæèâàåìîñòü ãåïàòîöèòîâ â ðàííåé ïåðèîä êîìïåíñàöèè ïîñëå âîçäåéñòâèÿ ãèïåðòåðìèè. Ò.ê. îïðåäåëÿåò ñíèæåíèå ïðîäóêöèþ ÀÔÊ è ìèíèìèçèðóåò ïîâðåæäàþùåå èõ äåéñòâèå íà áåëêè, ÄÍÊ [20].  ñâÿçè, ñ ÷åì ïîñëå âîçäåéñòâèÿ Антонова Е.И. ãèïåðòåðìèè âûÿâëåí ðèñóíîê õðîìàòèíà, êîòîðûé îòðàæàåò óìåíüøåíèå ìåëêîçåðíèñòîñòè ñòðóêòóðû õðîìàòèíà è óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà êðóïíûõ ôðàãìåíòîâ õðîìàòèíà. Äîïîëíèòåëüíàÿ ãåòåðîõðîìàòèçàöèè îïðåäåëÿåò ñíèæåíèè â ãåïàòîöèòàõ Rana terrestris ïðîëèôåðàòèâíûõ è ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, è óâåëè÷åíèå äîëè ãèïîäèïëîèäíûõ ãåïàòîöèòîâ. Óâåëè÷åíèå, êîòîðûõ â ñâîþ î÷åðåäü ÿâëÿåòñÿ ïóñêîâûì ìåõàíèçìîì äëÿ àêòèâàöèè ìåæòêàíåâûõ ñòðîìàëüíî-ïàðåíõèìàòîçíûõ èíäóêöèé â ïå÷åíè, êîòîðûå èíèöèèðóþò ïðîöåññ ðåãåíåðàöèè ïàðåíõèìû [2, 31]. Òàêèì îáðàçîì, ýôôåêòû òåìïåðàòóðû ìîãóò ðàññìàòðèâàòüñÿ êàê ïðèìåðû òåïëîâîé ôåíîòèïè÷åñêîé ïëàñòè÷íîñòè, êîíòðîëèðóåìûå ãåíîòèïîì [7, 8, 18]. Îñîáåííîñòè â êîëè÷åñòâåííîì è ïðîñòðàíñòâåííî-òîïîãðàôè÷åñêèõ ïîêàçàòåëÿõ ÄÍÊ îïðåäåëÿþò ôîðìèðîâàíèå àäàïòèâíûõ ìîäèôèêàöèé ìåòàáîëè÷åñêîãî ôóíêöèîíèðîâàíèÿ Динамика показателей клеточного цикла... ãåïàòîöèòîâ Rana terrestris, êîòîðûå ïðîÿâëÿþòñÿ â ðàçâèòèè êîìïåíñàòîðíî-ïðèñïîñîáèòåëüíîé ìåòàáîëè÷åñêîé äåïðåññèè óìåíüøåíèå êîëè÷åñòâà ãåïàòîöèòîâ â S-è G2-Ì-ñòàäèè êëåòî÷íîãî öèêëà, êàê çàùèòíûõ ìåõàíèçìîâ îò ïîâðåæäàþùåãî äåéñòâèÿ ðàçâèâàþùèõñÿ äåñòðóêòèâíûõ áèîõèìè÷åñêèõ ïðîöåññîâ, èíäóöèðóåìûå ãèïåðòåðìèåé. Óâåëè÷åíèå æå äîëè ïîãèáøèõ ãåïàòîöèòîâ õàðàêòåðèçóåòñÿ ïðåâûøåíèåì äîëè ãåïàòîöèòîâ ñ íåêðîòè÷åñêèì ôåíîòèïîì íàä êîëè÷åñòâîì ïîãèáøèõ, ãåïàòîöèòîâ êîòîðûå, ïðîÿâëÿþò àïîïòè÷åñêóþ ìîðôîëîãèþ, íà ôîíå óâåëè÷åíèÿ àêòèâíîñòè êàñïàçû 3. Íî óâåëè÷åíèå ÷èñëà ïîãèáøèõ ãåïàòîöèòîâ ñëåäóåò ðàññìàòðèâàòü ñ ïîçèöèè äàëüíåéøåãî çàïóñêà êàñêàäà ñòðîìàëüíî-ïàðåíõèìàòîçíûõ êîììóíèêàöèé â ïå÷åíè, êîòîðûå îáåñïå÷èâàþò ìåõàíèçìû âûæèâàíèÿ è ðåïàðàöèè ãåïàòîöèòîâ Rana terrestris â óñëîâèÿõ ãèïåðòåðìèè [30, 2, 25]. Ñïèñîê èñïîëüçîâàííîé ëèòåðàòóðû: 1. Ãàíóñîâà Ã.Â. Èçó÷åíî âëèÿíèå CoCl2 íà àêòèâíîñòü NADP-çàâèñèìûõ äåãèäðîãåíàç è ñîäåðæàíèå ìèêðîñîìàëüíûõ öèòîõðîìîâ Ð-450 è b5 â ïå÷åíè êðûñ ðàçíîãî âîçðàñòà // ³ñíèê Õàðê³âñüêîãî íàö³îíàëüíîãî óí³âåðñèòåòó ³ìåí³ Â.Í.Êàðàç³íà Ñåð³ÿ: á³îëîã³ÿ. 2005. 1-2. ¹709. 2005ð. 2. Êèÿñîâ À. Ï., Ãóìåðîâà À. À. Êëåòêè Èòî â îíîãåíåçå è ðåãåíåðàöèè ïå÷åíè. Öèòîëîãèÿ. 2002. 44 (4): 342-349. 3. Êîçèíåö Ã.È., Ïîãîðåëîâ Â.Ì., Øìàðîâ Ä.À., Áîåâ Ñ.Ô., Ñàçîíîâ Â.Â. Êëåòêè êðîâè. Ñîâðåìåííûå òåõíîëîãèè èõ àíàëèçà. Ì.: Òðèàäà-Ôàðì, 2002.-171ñ. 4. Êîíñòàíòèíîâ À.Ñ., Â.Â. Çäàíîâè÷, Â.ß. Ïóøêàðü Ýíåðãîáþäæåò êàðïà Cyprinus Carpio è çîëîòîé ðûáêè Carassius Auratus â îïòèìàëüíûõ ñòàöèîíàðíûõ è ïåðåìåííûõ òåðìîðåæèìàõ // Âåñòí. Ìîñê. Óí-òà. Ñåð. 16. Áèîëîãèÿ. 2005. ¹ 1. Ñ. 39-44. 5. Ïðîñêóðÿêîâ Ñ.ß. Íåêðîç àêòèâíàÿ ôîðìà ïðîãðàììèðóåìîé êëåòî÷íîé ãèáåëè // Áèîõèìèÿ. 2002. Ò.67. Âûï 4. Ñ. 468-487. 6. Ðåáðîâ Î.Þ. Ñòàòèñòè÷åñêèé àíàëèç ìåäèöèíñêèõ äàííûõ. Ïðèìåíåíèå ïàêåòà ïðèêëàäíûõ ïðîãðàìì STATISTICA. Ì.: ÌåäèàÑôåðà. 2002. 305c. 7. Angilletta M. J., Wilson R. S., Navas C. A., James R. S. Tradeoffs and the evolution of thermal reaction norms. Trends Ecol. Evol. 2003.18:234-240. 8. Calboli F. C., Gilchrist G. W., Partridge L. Different cell size and cell number contribution in two newly established and one ancient body size cline of Drosophila subobscura. Evolution. 2003. 57:566-573. 9. Chang Y.-M., Hou P.-C. L. Thermal Acclimation of Metabolic Rate May Be Seasonally Dependent in the Subtropical Anuran Latouches Frog (Rana latouchii, Boulenger). Physiological and Biochemical Zoology. 2005. 78(6):947-955. 10. Danial N. N., Korsmeyer S.J. Cell death: critical control points. Cell. 2004. 116:205219. 11. Dion M. F., Altschuler S. J., Wu L. F., Rando, O. J. Genomic characterization reveals a simple histone H4 acetylation code. Proc. Natl. Acad. Sci. 2005. 102, 5501-5506. 12. Dundr M., Misteli T. Functional architecture in the cell nucleus. Biochem. J. 2001. 356, 297-310. 13. Felsenfeld, G., Groudine, M. Controlling the double helix. Nature. 2003. 421: 448-453. 14. Frith M. C., Ponjavic J., Fredman D., Kai1 C., Kawai1 J., Carninci P., Hayshizaki Y., Sandelin A. Evolutionary turnover of mammalian transcription start sites Genome Research. 2006. 16:713-722. 15. Harada J. N., Bower K. E., Orth A. P., Callaway S., Nelson C. G., Laris C., Hogenesch J. B., Vogt P. K., Chanda S. K. Identification of novel mammalian growth regulatory factors by genome-scale quantitative image analysis. Genome Research. 2005. 15:1136-1144. 16. Hase J., Stein S., Vincent S., Molloy K.R., Kreth G., Cremer C., Bult C.J., OBrien T.P. Folding and organization of a contiguous chromosome region according to the gene distribution pattern in primary genomic sequence. JCB. 2006. V.174. N.1. 27-38. 17. James E. R., Green, D. R. Manipulation of apoptosis in the hostparasite interaction. Trends Parasitol. 2004. 20,280 -287. 18. Kingsolver J. G., Izem R., Ragland G. J. Plasticity of Size and Growth in Fluctuating Thermal Environments: Comparing Reaction Norms and Performance Curves. Integrative and Comparative Biology. 2004. 44(6):450-460. 19. Kivinen K, Kallajoki M, Taimen P. Caspase-3 is required in the apoptotic disintegration of the nuclear matrix Exp Cell Res. 2005. 15;311(1):62-73. 20. Koehler R. T., Peyret N. Thermodynamic properties of DNA sequences: characteristic values for the human genome Bioinformatics. 2005. 21(16):3333-3339. ВЕСТНИК ОГУ №6(88)/июнь`2008 % Естественные науки 21. Krishan A, Dandekar P, Nathan N, Hamelik R, Miller C, Shaw J. DNA index, genome size, and electronic nuclear volume of vertebrates from the Miami Metro Zoo Cytometry. 2005. 65(1):26-34. 22. Liu C.-C., Chien C.-H., Lin M.-T. Glucocorticoids reduce interleukin-1? concentration and result in neuroprotective effects in rat heatstroke, J. Physiol. 2000. 527. pp. 333343. 23. McKechnie A.E., Wolf B.O. Partitioning of evaporative water loss in white-winged doves: plasticity in response to shortterm thermal acclimation. Exp Biol. 2004. 207(Pt 2):203-10. 24. McLaughlin B. et al. Caspase 3 activation is essential for neuroprotection in preconditioning. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2003. 100, 715-720. 25. Milosevic N, Maier P. Lead stimulates intercellular signalling between hepatocytes and Kupffer cells. Eur J Pharmacol. 2000. 11;401(3):317-28. 26. Mizushima N. Methods to supervise autophagy Int J Biochem Alveole Biol. 2004; 36 (12):2491-502. 27. OBrien, T. P., Bult C. J., Cremer C., Grunze M., Knowles B. B., Langowski J., McNally J., Pederson T., Politz J. C., Pombo A., Schmahl G., Spatz J. P., van Driel R. Genome function and nuclear architecture: from gene expression to nanoscience. Genome Res. 2003. 13:1029-1041. 28. Ono T., Fang Y., Spector D. L., Hirano T. Spatial and temporal regulation of condensins I and II in mitotic chromosome assembly in human cells. Mol. Biol. Cell. 2004. 15: 32963308. 29. Patel T., Gores G. Apoptosis and hepatobiliary disease. Hepatology. 1995. Vol. 21. P. 1725-1741. 30. Prosser C. C., Yen R. D., Wu J. Molecular therapy for hepatic injury and fibrosis: where are we? World J Gastroenterol. 2006. 28;12(4):509-15. 31. Schlaf G., Schmitz M., Heine I., Demberg T., Schieferdecker H. L., Gotze O. Upregulation of fibronectin but not of entactin, collagen IV and smooth muscle actin by anaphylatoxin C5a in rat hepatic stellate cells. Histol Histopathol. 2004. 19 (4): 1165-1174. 32. Somero G.N. Thermal Physiology and Vertical Zonation of Intertidal Animals. Optima, Limits, and Costs of Living Integrative and Comparative Biology. 2002. 42(4):780-789. 33. Tsujimoto Y, Shimizu S. Other mean{method} to die: autophagic has programmed mors of an alveole Mors of the Alveole Differs. 2005; 12 Suppl 2:1528-34. 34. Vinogradov A.E. Paradox of the dimension of a genome and a problem of superfluous DNA. A cytology 1999. 41: 5-13. 35. Vinogradov A.E., A spiral of DNA: importance of to be the rich collector of DUST. Nucleic acids Res. 2003. 31: 1838-1844. Ñòàòüÿ ðåêîìåíäîâàíà ê ïóáëèêàöèè 21.12.07 & ВЕСТНИК ОГУ №6(88)/июнь`2008