Раздел 2 409 ɍȾɄ 577.152.3 ɋɄɈɊɈɋɌɂ ɗɅȿɆȿɇɌȺɊɇɕɏ ɋɌȺȾɂɃ ɊȿȺɄɐɂɂ ȽɂȾɊɈɅɂɁȺ ɌɊɂɉɋɂɇɈɆ ȼ ɈȻɊȺɌɇɈɃ ɆɂɄɊɈɗɆɍɅɖɋɂɂ1 Ɂɚɯɚɪɱɟɧɤɨ ɇ.Ʌ., ȿɪɦɚɤɨɜɚ ȿ.Ⱥ., Ɂɭɟɜ ɘ.Ɏ. Ʉɚɡɚɧɫɤɢɣ ɢɧɫɬɢɬɭɬ ɛɢɨɯɢɦɢɢ ɢ ɛɢɨɮɢɡɢɤɢ Ʉɚɡɇɐ ɊȺɇ ȼ ɩɨɫɥɟɞɧɢɟ ɝɨɞɵ ɞɥɹ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ ɮɭɧɤɰɢɨɧɢɪɨɜɚɧɢɹ ɮɟɪɦɟɧɬɨɜ ɜɫɟ ɱɚɳɟ ɢɫɩɨɥɶɡɭɸɬɫɹ ɫɢɫɬɟɦɵ, ɩɨɡɜɨɥɹɸɳɢɟ ɦɨɞɟɥɢɪɨɜɚɬɶ ɩɪɢɪɨɞɧɨɟ ɦɢɤɪɨɨɤɪɭɠɟɧɢɟ ɮɟɪɦɟɧɬɨɜ. ɋɪɟɞɚ, ɜ ɤɨɬɨɪɨɣ ɫɭɳɟɫɬɜɭɸɬ ɮɟɪɦɟɧɬɵ in vivo, ɩɨ ɫɜɨɢɦ ɮɢɡɢɤɨ-ɯɢɦɢɱɟɫɤɢɦ ɫɜɨɣɫɬɜɚɦ (ɩɨɥɹɪɧɨɫɬɶ, ɜɹɡɤɨɫɬɶ, ɞɢɷɥɟɤɬɪɢɱɟɫɤɚɹ ɩɪɨɧɢɰɚɟɦɨɫɬɶ ɢ ɩɪ.) ɫɭɳɟɫɬɜɟɧɧɨ ɨɬɥɢɱɚɟɬɫɹ ɨɬ ɜɨɞɧɵɯ ɪɚɫɬɜɨɪɨɜ. Ɉɞɧɢɦɢ ɢɡ ɱɚɫɬɨ ɢɫɩɨɥɶɡɭɟɦɵɯ ɦɨɞɟɥɶɧɵɯ ɫɢɫɬɟɦ ɹɜɥɹɸɬɫɹ ɞɢɫɩɟɪɫɢɢ ɨɛɪɚɬɧɵɯ ɦɢɰɟɥɥ (ɨɛɪɚɬɧɵɟ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɢ). Ȼɥɚɝɨɞɚɪɹ ɫɩɟɰɢɮɢɱɟɫɤɢɦ ɫɜɨɣɫɬɜɚɦ ɞɢɫɩɟɪɫɧɨɣ ɮɚɡɵ, ɨɛɪɚɬɧɵɟ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɢ ɧɚɢɛɨɥɟɟ ɛɥɢɡɤɨ ɦɨɞɟɥɢɪɭɸɬ ɩɪɢɪɨɞɧɭɸ ɢɦɦɨɛɢɥɢɡɚɰɢɸ ɮɟɪɦɟɧɬɨɜ ɢ ɢɯ ɦɢɤɪɨɨɤɪɭɠɟɧɢɟ. ȼ ɪɹɞɟ ɪɚɛɨɬ ɩɨ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɸ ɤɚɬɚɥɢɬɢɱɟɫɤɨɣ ɚɤɬɢɜɧɨɫɬɢ ɫɟɪɢɧɨɜɵɯ ɩɪɨɬɟɚɡ ɛɵɥɢ ɩɨɥɭɱɟɧɵ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɵɯ ɫɬɚɞɢɣ ɪɟɚɤɰɢɢ ɢɡ ɚɧɚɥɢɡɚ Ⱥɪɪɟɧɢɭɫɨɜɫɤɢɯ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɟɣ ɫɬɚɰɢɨɧɚɪɧɵɯ ɤɢɧɟɬɢɱɟɫɤɢɯ ɤɨɧɫɬɚɧɬ [1]. ȼ ɧɚɲɟɣ ɪɚɛɨɬɟ ɦɵ ɢɫɩɨɥɶɡɨɜɚɥɢ ɞɚɧɧɵɣ ɩɨɞɯɨɞ ɞɥɹ ɨɩɢɫɚɧɢɹ ɦɟɯɚɧɢɡɦɚ ɜɥɢɹɧɢɹ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɨɧɧɨɣ ɫɪɟɞɵ ɧɚ ɚɤɬɢɜɧɨɫɬɶ ɮɟɪɦɟɧɬɚ. ɗɤɫɩɟɪɢɦɟɧɬɚɥɶɧɚɹ ɱɚɫɬɶ ȼ ɪɚɛɨɬɟ ɢɫɩɨɥɶɡɨɜɚɥɢ ɬɪɢɩɫɢɧ ɢɡ ɩɨɞɠɟɥɭɞɨɱɧɨɣ ɠɟɥɟɡɵ ɫɜɢɧɶɢ, ɷɬɢɥɨɜɵɣ ɷɮɢɪ N-D-ɛɟɧɡɨɢɥ-L-ɚɪɝɢɧɢɧɚ (ȻȺɗɗ) (Sigma), ɚɧɢɨɧɧɨɟ ɉȺȼ ɛɢɫ(2-ɷɬɢɥɝɟɤɫɢɥ)ɫɭɥɶɮɨɫɭɤɰɢɧɚɬ ɧɚɬɪɢɹ (ȺɈɌ) (MP Biomedicals), ɨɤɬɚɧ. Ɋɟɚɤɰɢɹ ɩɪɨɜɨɞɢɥɚɫɶ ɜ ɛɭɮɟɪɧɨɦ ɪɚɫɬɜɨɪɟ (0.05 Ɇ ɬɪɢɫ-HCl pH 8.5) ɢ ɜ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɢ (ɦɨɥɹɪɧɨɟ ɨɬɧɨɲɟɧɢɟ ɜɨɞɵ ɤ ɉȺȼ W0=20, ɤɨɧɰɟɧɬɪɚɰɢɹ ȺɈɌ ɋȺɈɌ=0.1 Ɇ). Ʉɨɧɰɟɧɬɪɚɰɢɹ ɫɭɛɫɬɪɚɬɚ ɧɚ ɜɟɫɶ ɨɛɴɟɦ ɦɟɧɹɥɚɫɶ ɨɬ 34*10-6 Ɇ ɞɨ 277*10-6 Ɇ. Ʉɨɧɰɟɧɬɪɚɰɢɹ ɬɪɢɩɫɢɧɚ ɫɨɫɬɚɜɥɹɥɚ 1*10-7 Ɇ. ɇɚɱɚɥɶɧɭɸ ɫɤɨɪɨɫɬɶ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ ȻȺɗɗ ɨɩɪɟɞɟɥɹɥɢ ɫɩɟɤɬɪɨɮɨɬɨɦɟɬɪɢɱɟɫɤɢ (O=253 ɧɦ). ɂɫɩɨɥɶɡɨɜɚɥɢ ɫɩɟɤɬɪɨɮɨɬɨɦɟɬɪ Specord M40 ɫ ɬɟɪɦɨɫɬɚɬɢɪɭɟɦɵɦ ɤɸɜɟɬɧɵɦ ɨɬɞɟɥɟɧɢɟɦ. Ɍɟɦɩɟɪɚɬɭɪɵ ɢɡɦɟɪɟɧɢɣ ɜɚɪɶɢɪɨɜɚɥɢ ɨɬ 15 ɞɨ 45 0ɋ. 1 Ɋɚɛɨɬɚ ɜɵɩɨɥɧɟɧɚ ɩɪɢ ɩɨɞɞɟɪɠɤɟ ɝɪɚɧɬɚ ɊɎɎɂ 05-03-33110ɚ, Ɏɨɧɞɚ ɋɨɞɟɣɫɬɜɢɹ Ɉɬɟɱɟɫɬɜɟɧɧɨɣ ɇɚɭɤɢ, ɝɪɚɧɬɚ ɊɌ 03-3.5-74 410 Структура и динамика молекулярных систем, 2007 г., Выпуск №1 Ɋɟɡɭɥɶɬɚɬɵ ɢ ɨɛɫɭɠɞɟɧɢɟ Ɇɟɯɚɧɢɡɦ ɮɟɪɦɟɧɬɚɬɢɜɧɨɝɨ ɞɟɣɫɬɜɢɹ ɫɟɪɢɧɨɜɵɯ ɩɪɨɬɟɚɡ ɯɚɪɚɤɬɟɪɢɡɭɟɬɫɹ ɱɟɬɵɪɶɦɹ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɵɦɢ ɫɬɚɞɢɹɦɢ ɫ ɫɨɨɬɜɟɬɫɬɜɭɸɳɢɦɢ ɤɨɧɫɬɚɧɬɚɦɢ ɫɤɨɪɨɫɬɟɣ ɩɪɨɰɟɫɫɨɜ ɨɛɪɚɡɨɜɚɧɢɹ ɮɟɪɦɟɧɬ-ɫɭɛɫɬɪɚɬɧɨɝɨ ɤɨɦɩɥɟɤɫɚ k1, ɪɚɫɩɚɞɚ ɤɨɦɩɥɟɤɫɚ k-1, ɩɪɨɰɟɫɫɚ ɚɰɢɥɢɪɨɜɚɧɢɹ ɮɟɪɦɟɧɬɚ k2 ɢ ɟɝɨ ɞɟɚɰɢɥɢɪɨɜɚɧɢɹ k3: k k k 3 1 2 E S ES o EP P o E P 1 2 k 1 Ɂɞɟɫɶ, ɬɪɚɞɢɰɢɨɧɧɨ, ɫɢɦɜɨɥɨɦ E ɨɛɨɡɧɚɱɟɧ ɮɟɪɦɟɧɬ, ɫɢɦɜɨɥɚɦɢ S - ɫɭɛɫɬɪɚɬ, ES - ɮɟɪɦɟɧɬ-ɫɭɛɫɬɪɚɬɧɵɣ ɤɨɦɩɥɟɤɫ, EP - ɚɰɢɥɮɟɪɦɟɧɬɧɵɣ ɤɨɦɩɥɟɤɫ, P1 ɢ P2 ɩɪɨɞɭɤɬɵ ɪɟɚɤɰɢɢ. Ʉɚɬɚɥɢɬɢɱɟɫɤɚɹ ɤɨɧɫɬɚɧɬɚ kcat ɢ ɤɨɧɫɬɚɧɬɚ Ɇɢɯɚɷɥɢɫɚ KM ɨɩɪɟɞɟɥɹɥɢɫɶ ɷɤɫɩɟɪɢɦɟɧɬɚɥɶɧɨ. ȼ ɨɛɳɟɦ ɫɥɭɱɚɟ ɤɨɧɫɬɚɧɬɭ kcat ɢ ɩɚɪɚɦɟɬɪ s = kcat/KM (ɷɮɮɟɤɬɢɜɧɨɫɬɶ ɪɟɚɤɰɢɢ) ɦɨɠɧɨ ɩɪɟɞɫɬɚɜɢɬɶ ɜ ɜɢɞɟ ɮɭɧɤɰɢɣ ɤɨɧɫɬɚɧɬ ɫɤɨɪɨɫɬɟɣ ɢɧɞɢɜɢɞɭɚɥɶɧɵɯ ɫɬɚɞɢɣ ɪɟɚɤɰɢɣ (ɭɪɚɜɧɟɧɢɹ 1 ɢ 2). Ɉɞɧɚɤɨ, ɞɥɹ ɪɟɲɟɧɢɹ ɷɬɢɯ ɭɪɚɜɧɟɧɢɣ ɢ ɩɨɥɭɱɟɧɢɹ ɤɨɧɫɬɚɧɬ ɫɤɨɪɨɫɬɟɣ ɜɫɟɯ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɵɯ ɫɬɚɞɢɣ ɪɟɚɤɰɢɢ ɡɧɚɧɢɟ ɩɚɪɚɦɟɬɪɨɜ s ɢ kcat ɧɟɞɨɫɬɚɬɨɱɧɨ. ɇɟɞɚɜɧɨ [1] ɛɵɥɚ ɩɪɟɞɥɨɠɟɧɚ ɫɯɟɦɚ ɨɩɪɟɞɟɥɟɧɢɹ ɤɨɧɫɬɚɧɬ ɫɤɨɪɨɫɬɟɣ ɢ ɷɧɟɪɝɢɢ ɚɤɬɢɜɚɰɢɢ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɵɯ ɫɬɚɞɢɣ ɪɟɚɤɰɢɢ ɩɨ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɵɦ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɹɦ ɩɚɪɚɦɟɬɪɨɜ kcat ɢ s. kcat kcat K M k k 2 3 (k k ) 2 3 kk 12 (k k ) 1 2 (ɍɪ. 1) (ɍɪ. 2) ȼ ɨɛɳɟɦ ɫɥɭɱɚɟ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɶ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɨɣ ɫɬɚɞɢɢ ɨɬ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɵ ɦɨɠɧɨ ɩɪɟɞɫɬɚɜɢɬɶ ɜ ɜɢɞɟ: E 1 1 , k k 0 exp{ ( )} R T T0 ɝɞɟ E ɢ k0 ɷɧɟɪɝɢɹ ɚɤɬɢɜɚɰɢɢ ɢ ɤɨɧɫɬɚɧɬɚ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɩɪɢ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɟ T0 = 298K, ɚ ɨɫɬɚɥɶɧɵɟ ɫɢɦɜɨɥɵ ɢɦɟɸɬ ɫɜɨɟ ɬɪɚɞɢɰɢɨɧɧɨɟ ɡɧɚɱɟɧɢɟ. ɂɫɫɥɟɞɨɜɚɥɢ ɪɟɚɤɰɢɸ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ ɷɬɢɥɨɜɨɝɨ ɷɮɢɪɚ N-D-ɛɟɧɡɨɢɥL-ɚɪɝɢɧɢɧɚ (ȻȺɗɗ) ɬɪɢɩɫɢɧɨɦ ɜ ɛɭɮɟɪɧɨɦ ɪɚɫɬɜɨɪɟ ɢ ɜ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɢ ɜɨɞɚ/ɦɚɫɥɨ. Ⱥɧɚɥɢɡ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɨɣ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɢ kcat ɢɫɫɥɟɞɭɟɦɨɣ ɪɟɚɤɰɢɢ ɞɥɹ ɛɭɮɟɪɧɨɝɨ ɪɚɫɬɜɨɪɚ ɩɨɡɜɨɥɹɟɬ ɨɩɪɟɞɟɥɢɬɶ ɷɧɟɪɝɢɸ ɚɤɬɢɜɚɰɢɢ ɢ ɤɨɧɫɬɚɧɬɭ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɨɞɧɨɣ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɨɣ ɫɬɚɞɢɢ ɮɟɪɦɟɧɬɚɬɢɜɧɨɣ ɪɟɚɤɰɢɢ. Ⱦɥɹ ɷɮɢɪɧɵɯ ɫɭɛɫɬɪɚɬɨɜ ɷɬɨ ɫɬɚɞɢɹ ɞɟɚɰɢɥɢɪɨɜɚɧɢɹ [2]. Ɍɚɤɢɦ ɨɛɪɚɡɨɦ, kcat ɜ ɧɚɲɟɦ ɷɤɫɩɟɪɢɦɟɧɬɟ ɞɨɥɠɧɚ ɫɨɜɩɚɞɚɬɶ ɫ k3. ɂɡ ɷɤɫɩɟɪɢɦɟɧ- Раздел 2 411 ln kcat, ɫ -1 ɬɚɥɶɧɵɯ ɞɚɧɧɵɯ ɦɵ ɧɟ ɦɨɠɟɦ ɩɨɥɭɱɢɬɶ ɜɫɟ ɱɟɬɵɪɟ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɵɯ ɫɬɚɞɢɣ ɢɫɫɥɟɞɭɟɦɨɣ ɪɟɚɤɰɢɢ. Ɉɞɧɚɤɨ ɚɧɚɥɢɡ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɨɣ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɢ ɩɚɪɚɦɟɬɪɚ ɷɮɮɟɤɬɢɜɧɨɫɬɢ ɪɟɚɤɰɢɢ s ɩɨɡɜɨɥɢɥ ɧɚɦ ɩɨɥɭɱɢɬɶ ɫɨɨɬɧɨɲɟɧɢɟ ɤɨɧɫɬɚɧɬ kx=k-1/k2, ɤɨɬɨɪɨɟ ɯɚ3,0 ɪɚɤɬɟɪɢɡɭɟɬ ɫɨɨɬɧɨɲɟɧɢɟ 2,5 ɫɤɨɪɨɫɬɟɣ ɪɚɫɩɚɞɚ ɮɟɪɦɟɧɬɫɭɛɫɬɪɚɬɧɨɝɨ ɤɨɦɩɥɟɤɫɚ ɜ 2,0 1 ɩɪɹɦɨɦ ɢ ɨɛɪɚɬɧɨɦ ɧɚɩɪɚɜ1,5 ɥɟɧɢɹɯ [1]. 1,0 Ɂɚɜɢɫɢɦɨɫɬɶ kcat ɨɬ 2 0,5 ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɵ ɞɥɹ ɪɟɚɤɰɢɢ ɮɟɪɦɟɧɬɚɬɢɜɧɨɝɨ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ 0,0 3,10 3,15 3,20 3,25 3,30 3,35 3,40 3,45 3,50 ȻȺɗɗ ɜ ɫɢɫɬɟɦɟ ɨɛɪɚɬɧɵɯ 1000/T, K ɦɢɰɟɥɥ ɩɨɞɱɢɧɹɟɬɫɹ ɡɚɤɨɧɭ Ⱥɪɪɟɧɢɭɫɚ ɬɨɥɶɤɨ ɜ ɨɱɟɧɶ Ɋɢɫɭɧɨɤ 1. Ɍɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɚɹ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɶ ɤɚɬɚɥɢɬɢɱɟɫɤɨɣ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ kcat ɞɥɹ ɪɟɚɤɭɡɤɨɦ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɨɦ ɞɢɚɩɚɰɢɢ ɜ ɛɭɮɟɪɧɨɦ ɪɚɫɬɜɨɪɟ (1) ɢ ɦɢɤɪɨɡɨɧɟ, ɱɬɨ ɩɨɡɜɨɥɹɟɬ ɨɩɪɟɞɟɷɦɭɥɶɫɢɢ (2). ɥɢɬɶ ɬɨɥɶɤɨ ɨɞɧɭ ɤɨɧɫɬɚɧɬɭ ɫɤɨɪɨɫɬɢ. ɉɨ ɚɧɚɥɨɝɢɢ ɫ ɛɭɮɟɪɧɵɦ ɪɚɫɬɜɨɪɨɦ ɦɵ ɩɪɟɞɩɨɥɚɝɚɟɦ, ɱɬɨ kcat ɫɨɨɬɜɟɬɫɬɜɭɟɬ k3. ɇɚ ɪɢɫɭɧɤɟ 2 ɩɨɤɚɡɚɧɚ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɚɹ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɶ ɨɬɧɨɲɟɧɢɹ s ɞɥɹ ɪɟɚɤɰɢɢ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ ȻȺɗɗ ɜ ɛɭɮɟɪɧɨɦ ɪɚɫɬɜɨɪɟ ɢ ɜ ɦɢɰɟɥɥɹɪɧɨɣ ɫɢɫɬɟɦɟ ȺɈɌ. Ⱦɥɹ ɪɟɚɤɰɢɢ ɜ ɛɭɮɟɪɟ ɯɚɪɚɤɬɟɪɟɧ ɦɨɧɨɬɨɧɧɵɣ ɪɨɫɬ ɞɚɧɧɨɝɨ ɩɚɪɚɦɟɬɪɚ 14 ɜ ɞɢɚɩɚɡɨɧɟ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪ ɨɬ 0 1 15 ɞɨ 42 ɋ ɫ ɦɚɤɫɢɦɭɦɨɦ 12 0 ɩɪɢ 42 ɋ ɢ ɩɨɫɥɟɞɭɸɳɢɦ ɫɩɚɞɨɦ ɩɪɢ 45 0ɋ. Ȼɨɥɟɟ ɱɟɬ2 10 ɤɨ ɜɵɪɚɠɟɧɧɵɣ ɦɚɤɫɢɦɭɦ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɢ s ɨɬ ɨɛɪɚɬɧɨɣ 8 ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɵ ɧɚɛɥɸɞɚɟɬɫɹ 3,10 3,15 3,20 3,25 3,30 3,35 3,40 3,45 3,50 ɞɥɹ ɪɟɚɤɰɢɢ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ 1000/T, K ȻȺɗɗ ɬɪɢɩɫɢɧɨɦ ɜ ɫɢɫɬɟɦɟ ɨɛɪɚɬɧɵɯ ɦɢɰɟɥɥ. ɗɬɨɬ ɦɚɤɊɢɫɭɧɨɤ 2. Ɍɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɚɹ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɶ ɫɢɦɭɦ ɫɦɟɳɟɧ ɜ ɨɛɥɚɫɬɶ ɛɨɩɚɪɚɦɟɬɪɚ ɷɮɮɟɤɬɢɜɧɨɫɬɢ ɤɚɬɚɥɢɡɚ s ɥɟɟ ɧɢɡɤɢɯ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪ (30 (kcat/KM) ɜ ɛɭɮɟɪɧɨɦ ɪɚɫɬɜɨɪɟ (1) ɢ ɦɢɤɪɨ0 ɋ). Ɇɚɬɟɦɚɬɢɱɟɫɤɚɹ ɨɛɪɚɷɦɭɥɶɫɢɢ (2). -1 ln s, Ɇ ɫ -1 -1 -1 412 Структура и динамика молекулярных систем, 2007 г., Выпуск №1 ɛɨɬɤɚ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɧɵɯ ɡɚɜɢɫɢɦɨɫɬɟɣ kcat ɢ s ɩɨɡɜɨɥɢɥɚ ɨɩɪɟɞɟɥɢɬɶ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ ɫɤɨɪɨɫɬɢ k1, k3 ɢ ɫɨɨɬɧɨɲɟɧɢɟ kx, ɢ ɷɧɟɪɝɢɢ ɚɤɬɢɜɚɰɢɢ ɷɬɢɯ ɩɪɨɰɟɫɫɨɜ. Ɋɟɡɭɥɶɬɚɬɵ ɩɪɟɞɫɬɚɜɥɟɧɵ ɜ ɬɚɛɥɢɰɟ 1. ɋɪɚɜɧɢɬɟɥɶɧɵɣ ɚɧɚɥɢɡ ɞɚɧɧɵɯ, ɩɪɟɞɫɬɚɜɥɟɧɧɵɯ ɜ ɬɚɛɥɢɰɟ 1 ɢ ɧɚ ɪɢɫ. 1 ɢ 2, ɩɨɤɚɡɵɜɚɟɬ, ɱɬɨ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɨɧɧɚɹ ɫɪɟɞɚ ɜɧɨɫɢɬ ɢɡɦɟɧɟɧɢɹ ɜɨ ɜɫɟ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɵɟ ɫɬɚɞɢɢ ɪɟɚɤɰɢɢ, ɩɪɢɱɟɦ ɧɚɢɛɨɥɟɟ ɫɢɥɶɧɨɟ ɜɥɢɹɧɢɟ ɩɪɨɹɜɥɹɟɬɫɹ ɜ ɤɨɧɫɬɚɧɬɟ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɨɛɪɚɡɨɜɚɧɢɹ ɮɟɪɦɟɧɬ-ɫɭɛɫɬɪɚɬɧɨɝɨ ɤɨɦɩɥɟɤɫɚ k1. Ɇɵ ɩɨɥɚɝɚɟɦ, ɱɬɨ ɭɦɟɧɶɲɟɧɢɟ ɩɪɢɦɟɪɧɨ ɧɚ ɩɨɪɹɞɨɤ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ k1 ɜɵɡɜɚɧɨ ɬɟɦ, ɱɬɨ ȻȺɗɗ ɥɨɤɚɥɢɡɭɟɬɫɹ ɩɪɟɢɦɭɳɟɫɬɜɟɧɧɨ ɜ ɜɨɞɧɨɦ ɹɞɪɟ ɨɛɪɚɳɟɧɧɵɯ ɦɢɰɟɥɥ. Ⱦɨɫɬɭɩ ɞɨɩɨɥɧɢɬɟɥɶɧɵɯ ɩɨɪɰɢɣ ɫɭɛɫɬɪɚɬɚ ɤ ɮɟɪɦɟɧɬɭ ɡɚɬɪɭɞɧɟɧ ɢ ɨɩɪɟɞɟɥɹɟɬɫɹ, ɜ ɨɫɧɨɜɧɨɦ, ɩɪɨɰɟɫɫɨɦ ɨɛɦɟɧɚ ɦɢɰɟɥɥ ɫɜɨɢɦ ɫɨɞɟɪɠɢɦɵɦ ɩɪɢ ɢɯ ɫɬɨɥɤɧɨɜɟɧɢɹɯ. Ɍɚɛɥɢɰɚ 1. Ʉɨɧɫɬɚɧɬɵ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɢ ɷɧɟɪɝɢɢ ɚɤɬɢɜɚɰɢɢ ɷɥɟɦɟɧɬɚɪɧɵɯ ɫɬɚɞɢɣ ɪɟɚɤɰɢɢ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ ȻȺɗɗ ɬɪɢɩɫɢɧɨɦ ɜ ɛɭɮɟɪɧɨɦ ɪɚɫɬɜɨɪɟ ɢ ɜ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɢ ɜɨɞɚ/ɦɚɫɥɨ Ȼɭɮɟɪ Ɇɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɹ ɜɨɞɚ/ɦɚɫɥɨ k1 (M-1c-1) 3 105±1 104 2 104±2 103 k3 (c-1) 7.1±0.5 2.5±0.2 kx= k-1/k2 1.5 10-3±5 10-4 0.6 10-1±1 10-2 E1 (ɤɤɚɥ/ɦɨɥɶ) 15.1±1 19.5±1 E3 (ɤɤɚɥ/ɦɨɥɶ) 7.8 ±1.5 21.1 ±1.5 Ex (ɤɤɚɥ/ɦɨɥɶ) 57.1±3 69.1±3.1 ɍɦɟɧɶɲɟɧɢɟ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɞɟɚɰɢɥɢɪɨɜɚɧɢɹ ɢ ɭɜɟɥɢɱɟɧɢɟ ɷɧɟɪɝɢɢ ɚɤɬɢɜɚɰɢɢ ɜɫɟɯ ɩɪɨɰɟɫɫɨɜ ɜ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɢ ɦɨɠɟɬ ɛɵɬɶ ɜɵɡɜɚɧɨ, ɧɚ ɧɚɲ ɜɡɝɥɹɞ, ɢɡɦɟɧɟɧɢɟɦ ɦɢɤɪɨɨɤɪɭɠɟɧɢɟ ɮɟɪɦɟɧɬɚ ɫ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɨɣ. ȼɨɡɪɚɫɬɚɧɢɟ ɭɪɨɜɧɹ ɢɨɧɢɡɚɰɢɢ ɝɨɥɨɜɧɵɯ ɝɪɭɩɩ ȺɈɌ ɩɪɢ ɩɨɜɵɲɟɧɢɢ ɬɟɦɩɟɪɚɬɭɪɵ ɩɪɢɜɨɞɢɬ ɤ ɩɨɜɵɲɟɧɢɸ ɤɨɧɰɟɧɬɪɚɰɢɢ ɫɜɨɛɨɞɧɵɯ ɢɨɧɨɜ ɧɚɬɪɢɹ. Ɉɞɧɨɜɚɥɟɧɬɧɵɟ ɤɚɬɢɨɧɵ ɹɜɥɹɸɬɫɹ ɧɟ ɬɨɥɶɤɨ ɨɛɪɚɬɢɦɵɦɢ ɤɨɧɤɭɪɟɧɬɧɵɦɢ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɚɦɢ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ ɤɚɬɢɨɧɧɵɯ ɫɭɛɫɬɪɚɬɨɜ ɬɪɢɩɫɢɧɨɦ [3], ɧɨ ɢ ɦɨɝɭɬ ɧɚɪɭɲɚɬɶ ɟɝɨ ɬɪɟɬɢɱɧɭɸ ɫɬɪɭɤɬɭɪɭ. Ⱥɧɚɥɢɡ ɡɧɚɱɟɧɢɹ ɤɨɧɫɬɚɧɬɵ kx ɩɨɡɜɨɥɹɟɬ ɫɞɟɥɚɬɶ ɡɚɤɥɸɱɟɧɢɟ ɨ ɫɨɨɬɧɨɲɟɧɢɢ ɫɤɨɪɨɫɬɟɣ k-1 ɢ k2. ɇɟɫɦɨɬɪɹ ɧɚ ɬɨ, ɱɬɨ ɩɪɢ ɩɟɪɟɯɨɞɟ ɨɬ ɜɨɞɧɨɣ ɫɪɟɞɵ ɜ ɦɢɰɟɥɥɹɪɧɭɸ ɡɧɚɱɟɧɢɟ kx ɡɧɚɱɢɬɟɥɶɧɨ ɪɚɫɬɟɬ, ɨɧɨ ɜɫɟ ɟɳɟ ɨɫɬɚɟɬɫɹ ɦɚɥɵɦ ɢ, ɫɨɨɬɜɟɬɫɬɜɟɧɧɨ, k-1<<k2. Ɍɚɤɢɦ ɨɛɪɚɡɨɦ, ɷɮɮɟɤɬɢɜɧɨɫɬɶ ɤɚɬɚɥɢɡɚ, ɯɚɪɚɤɬɟɪɢɡɭɟɦɚɹ kcat/Km, ɜ ɪɟɚɤɰɢɢ ɝɢɞɪɨɥɢɡɚ ȻȺɗɗ ɬɪɢɩɫɢɧɨɦ ɜ ɦɢɤɪɨɷɦɭɥɶɫɢɢ ɧɚ ɨɫɧɨɜɟ ȺɈɌ ɨɩɪɟɞɟɥɹɟɬɫɹ k1. Ʌɢɬɟɪɚɬɭɪɚ 1. Ayala Y.M., Di Cera E. // Protein Science. 2000. V. 9 P. 1589-1593. 2. Kahana L., Shalitin Y. // Isr. J. Chem. 1974. V. 12 P. 573-589. 3. Tougu V., Tiivel T., Talts P., Siksnis V., Poyarkova S., Keavatera T., Aaviksaar A. // Eur. J. Biochem. 1994. V. 222. P. 475-481.