Урогенитальные инфекции — методы диагностики

Урогенитальные инфекции —
методы диагностики
Н.Н. Никольская, главный научный консультант ЗАО «ЭКОлаб-Диагностика»,
врач-микробиолог «Дорожной Клинической больницы имени Н. А. Семашко»
И.А. Шепелин, директор по развитию ЗАО «ЭКОлаб-Диагностика»
З
арубежные производители выпускают большое количество тест-систем,
диагностикумов, питательных сред. Но и
российские производители не уступают
иностранным компаниям. ФГУН ГНЦ
ПМБ (п. Оболенск, Московской области),
НПО «Питательные среды» (г. Махачкала) ОАО Биомед им. Мечникова (п.
Петрово-Дальнее) ЗАО НИЦФ (г. СанктПетербург) — локомотивы отечественной промышленности по производству
питательных сред, сывороток, дисков,
биохимических наборов, направленных на
диагностику урогенитальных инфекций. К
другой группе предприятий, работающих
над этой же проблемой в сфере ИФА диагностики относятся ЗАО «ЭКОлаб», ЗАО
«ВЕТОР-БЕСТ», НПО «Диагностический
системы», препараты этих предприятий
направлены на выявление таких опасных
инфекций как ВИЧ, гепатиты, хламидиоз,
микоплазм, уреаплазм.
Для достоверной лабораторной диагностики необходимо выполнение ряда задач:
1. наличие высококвалифицированного
персонала (врачей, биологов, лаборантов,
препараторов);
2. использование качественных установок и
диагностических препаратов;
3. строгое выполнение регламента постановки методик, соблюдение инструкций
к применяемым препаратам.
Лабораторная диагностика урогенитальных инфекций включает ряд методов:
1. Метод бактериоскопический
Метод «старый», но очень необходимый,
с него начинается изучение микробного
агента. В некоторых случаях по этому методу
можно на 50% решить задачу. Бактериоскопический метод диагностики предполагает
изучение мазков в нативном и окрашенном
препарате. Изучают препараты в светооптическом микроскопе, «темном поле», фазовоконтрастном и люминесцентном.
2. Серологический метод
Этот метод широко известен и основан
на реакции антиген-антитело. При воздействии патогенных возбудителей — антигенов в организме вырабатывается антительный ответ в виде иммуноглобулинов
различного класса, IgM, IgA, IgG. При
диагностике урогенитальных инфекций
наиболее часто используют метод иммуноферментного анализа (ИФА). Это объясняется тем, что некоторые микробные
агенты, вызывающие инфекции такие как
ВИЧ, гепатит В и С, сифилис, хламидиоз,
трудно дифференцировать другими методами, и только метод ИФА дает достоверную
информацию в ходе диагностики. Этот
метод получил свое распространение изза простоты исполнения и быстроты хода
анализа, информативный ответ достигается
в течении 2-х часов.
Бактериологические лаборатории широко используют тест-системы отечественного
производства из-за доступности, простоты и
относительно недорогой цены. Отечественным предприятиям гораздо проще наладить
обратную связь с потребителями, поэтому
препараты постоянно совершенствуются.
ЗАО «ЭКОлаб» выпускает тест-системы
для определения суммарных антител к ВИЧ
1, 2, для определения антител к индивидуальным белкам ВИЧ-1, иммуноферментные
тест системы (ИФТС) для выявления антител к антигенам ВИЧ типов 1 и 2 методом
иммунного блоттинга и использованием
рекомбинантных антигенов, ИФТС для
выявления антител класса IgM к вирусу гепатита А, наборы реагентов для выявления
антигенов и антител к гепатиту В, наборы
для выявления к вирусу гепатита С, наборы
для определения антител к сифилису.
Урогенитальные инфекции имеют древние
исторические корни,
Гиппократ и Гален
упоминали их в своих трудах, эпидемия
сифилиса, которая
произошла в Европе в
XV–XVI веках, унесла
множество жизней.
Первые вспышки в России были зафиксированы в конце XVI века,
но были они не столь
значительными.
Урогенитальные
инфекции могут вызывать ряд сложных
заболеваний таких как:
хламидиоз, трихомоноз,
гонорея и др., у женщин
могут вызывать нарушения репродуктивной
функции, поэтому эти
инфекции всегда привлекали специалистов
различного профиля. В
ряду комплекса по изучению и лечению лежит
и диагностика таких инфекций. В своей статье
мы опишем наиболее
часто применяемые в
лабораторной практике методы диагностики
урогенитальных инфекций и препараты,
предназначенные для
их проведения.
3. Культуральный метод
(бактериологический)
Этот метод один из самых традиционных, его называют «золотой стандарт» в
микробиологии. Некоторые бактериальные
Медицинский алфавит. Лаборатория 3 / 2010
35
инфекции (гонорея, трихомонады,
хламидии, микоплазмы и другие оппортунистические инфекции) начинают изучать с мазков и посевов на
питательных средах, которые могут
как лабораторного приготовления
так и промышленного. Вместе с тем
стоит отметить, что культуральная
диагностика сложна тем, что требует
особых условий: аттестованное для
определенного класса опасности
помещение, соответствующее оборудование — автоклавы, термостаты,
средоварки и высококвалифицированных специалистов. Недостатком
также является длительность процесса диагностики и привередливость
микроорганизмов к условиям роста.
Промышленные питательные среды
представлены как отечественными,
так и иностранными компаниями,
и те и другие имеют свои плюсы и
минусы. К плюсам отечественных
предприятий следует отнести их
доступность, цену и количество производителей, выпускающих среды и,
как следствие, постоянно растущее
качество ввиду жесткой конкуренции. К недостаткам — ассортимент
производимых сред. К минусам же
иностранного производителя можно
отнести малую доступность, высокую цену, однако ассортимент
поставляемых сред широк. Так, в
недалеком прошлом появились хромогенные среды, поставляемые на
российский рынок индийской компанией HiMedia Laboratories. Принцип действия таких сред основан
на выявлении высокоспецифичных
ферментов у искомых микроорганизмов. Для обнаружения уникального фермента и, соответственно,
идентификации микроорганизма в
состав среды вводят хромогенный
субстрат — вещество, при расщеплении которого этим ферментом
образуется окрашенные и флуоресцирующие продукты. В результате
проросшие колонии окрашиваются в
определенный цвет или приобретают
способность к флуоресценции при
ультрафиолетовом облучении. Поскольку субстрат вводится в среды
для первичного посева, результат
выделения чистой культуры и ее
идентификация могут быть получены уже в течении первых суток.
36
Достоинство ПЦР, кроме высокой
специфичности и чувствительности,
является возможность определения
широкого спектра микроорганизмов
далеко выходящим за рамки урогенитальных инфекций.
4. Молекулярно биологическая
диагностика
Основана на способности цепей ДНК распознавать друг друга.
Наиболее распространенный метод — полимеразная цепная реакция
(ПЦР). Суть метода состоит в том,
что в исследуемый образец, содержащий инфекционный агент, вносятся
нуклеотидные последовательности
(праймеры), комплеметарные генетическому материалу искомого возбудителя. Такие праймеры способны
взаимодействовать с геномной ДНК
(РНК) инфекционного агента.
Другим известным методом амплификации нуклеиновых кислот
является лигазная цепная реакция
(ЛЦР). В ее основе лежит «сшивание»
олигонуклеидов комплементарных
определений ДНК-мишени. Метод
основан на способности ДНК-лигазы
соединять две пары комплементарных
олигонуклеидов после их гибридизации с последовательностями ДНКмишени in vitro.
Метод ЛЦР в России не очень прижился в виду отсутствия реагентов
российского производства и дороговизны импортного.
Медицинский алфавит. Лаборатория 3 / 2010
5. Фармакологическая
диагностика
Подразумевает изучение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и другим лекарственным
препаратам. Наиболее применяемый ― «Метод дисков». Принцип
состоит в том, что пропитанные
антибиотиками бумажные диски
располагают в зону роста микроорганизмов. По степени задержки
роста определяют чувствительность
к тому или иному препарату. Метод
дисков применяют только на плотных средах, на жидких применяют
метод титрования.
На основании результатов делают
выводы о пригодности того или иного
лекарства к лечению.
Это далеко не весь список методов, в международной практике существую такие методы, как «Электронная микроскопия», метод «Культуры
клеток», однако в отечественной практике они ещё не получили значительного распространения.
Каждый перечисленный метод
хорош сам по себе, однако применение методов в комплексе дает более полную картину. Сложившаяся
тенденция диагностики урогенитальных инфекций по применению
сразу нескольких видов привела к
тому, что заводам-производителям
стало крайне затруднительно поставлять препараты непосредственно в лаборатории, и это привело
к возникновению дистрибьюторов диагностической продукции.
«ЭКОлаб-Диагностика» ― один из
ведущих поставщиков нового поколения — имеет консультантов в
области микробиологии, широкий
ассортимент товаров, предназначенных для диагностики различных
видов инфекций.