СЕ СИФИЛИС Гемагглютинация

СЕ
СИФИЛИС
Гемагглютинация
ТПГА
КОД 36005
200 тестов
Хранить при 2-8° C
Реагенты для диагностики сифилиса.
Использовать только для работы «in vitro» в
клинической лаборатории
ПРИНЦИП МЕТОДА
Антитела, присутствующие в сыворотке человека
против бледной трепонемы (Treponema Pallidum)
вызывают агглютинацию птичьих эритроцитов,
сенсибилизированнх
антигенным
экстрактом
T.pallidum1,2.
СОСТАВ
А Тестовые клетки. 15 mL. Стабилизированная
суспензия птичьих эритроцитов, сенсибилизированная
T. pallidum антигеном, азид натрия 0.95 gL.
В Контрольные клетки. 15 mL. Стабилизированная
суспензия птичьих эритроцитов, азид натрия 0.95 g/L.
С+ Положительный контроль. 1 mL. Иммунная
сыворотка животных, азид натрия 0.95 g/L.
С- Отрицательный контроль. 1 mL. Сыворотка, азид
натрия 0.95 g/L.
D Реагент. 40 мл. Солевой фосфатный буфер, рН 7,2,
экстракт Treponema Pallidum (Reiter), азид натрия 0.95
g/L.
Разведите сыворотку в пропорции 1/20 реагентом D.
После разведения стабильность составляет 1 день при
2-8ºC. Для титрования положительных образцов
сделайте серийные двукратные разведения с реагентом
D, начиная с разведения 1/20.
1.
2.
3.
4.
5.
ПРОЦЕДУРА
Позвольте реагентам прогреться до комнатной
температуры
Налейте в дублях 25 мкл каждого разведенного
образца, Положительного контроля (С+) и
Отрицательного контроля (С-) в разные лунки
микропланшета.
В первые лунки из двух повторов каждого образца
и контроля налейте 75 мкл Сенсибилизированных
клеток (А), а во вторые лунки – по 75 мкл
Контрольных клеток (В)
Смешайте содержимое планшета осторожно
покачивая его из стороны в сторону.
Закройте планшет крышкой и инкубируйте при
комнатной температуре 15-30ºC в течение 1 часа.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
ХРАНЕНИЕ
Хранение при 2-8°C.
Реагенты, Клетки и Контроли стабильны до срока
годности, указанного на этикетке флаконов, при
хранении плотно закрытыми и избежании загрязнения
во время использования.
Показатели загрязнения:
− Клетки: Видимая агглютинация во флаконе
− Реагент и Контроли: Присутствие взвешенных
частиц.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ
А Сенсибилизированные клетки и В контрольные
клетки: Осторожно ресуспендировать флакон с
реагентом до получения гомогенного состояния
(примечание 1).
Реагент и Контроли готовы к использованию.
ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ
U-луночные (круглодонные) микропланшеты.
ОБРАЗЦЫ
Сыворотка или плазма, собранные по стандартной
процедуре. Стабильно 2 дня при 2-8ºC.
Оцените наличие и модель клеточной агглютинации.
Всегда
сравнивайте
результат
с
видом
сенсибилизированных клеток в Контрольных лунках.
Интерпретация и отчет должны следовать следующим
критериям:
Степень агглютинации
Дно
лунки
полностью
покрывает гладкий слой клеток
Гладкий слой клеток покрывает
частично покрывает дно лунки
Гладкий слой клеток окружен
красным кольцом клеток
Гладкий слой клеток окружен
тонким красным кольцом
Выпуклый диск из клеток имеет
в центре четкое небольшое
отверстие
Четкий, компактный диск из
клеток,
иногда
с
очень
маленьким отверстием в центре
Оценка
Результат
Положительно
4+
Положительно
3+
Положительно
2+
Положительно
1+
±
Граничное значение
(сомнительный
результат)
Отрицательно
-
Проведение
Отрицательного
контроля
должно
показывать рисунок полного отсутствия агглютинации
в обеих лунках с тестовыми и контрольными клетками.
Положительный контроль должен показывать четкую
агглютинацию в лунках с тестовыми клетками, но не в
лунках
с
контрольными
клетками.
Любая
агглютинация, наблюдаемая в лунках с контрольными
клетками, указывает на наличие неспецифических
агглютининов. Проба, дающая такой результат, не
может получить интерпертации. Проба с пограничным
значением должна быть тестирована повторно и в
случае, если получается аналогичный результат,
сыворотка должна быть признана не реактивной
(отрицательной).
Положительная сыворотка может быть раститрована.
Для этого сделайте серийные двукратные разведения в
дилюенте, начиная с разведения 1/20, тестируя каждый
раз, как описано в шаге 2 – 4 процедуры (см. рис. 2).
Титр сыворотки определяется ее наибольшим
разведением,
показывающим
положительный
результат.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Положительный С+ и отрицательный С- контроли,
поставляемые в наборе, должны тестироваться
совместно с образцами пациентов для верификации
процедуры.
Положительный контроль С+ показывает ясно
видимую агглютинацию Сенсибилизированных клеток
(А), но не контрольных клеток (В).
Отрицательный контроль С- не вызывает агглютинации
никакой агглютинации клеток.
Любая агглютинация, видимая в контрольных клетках
(В) расценивается как неспецифическая. Образец,
дающий такую реакцию, не может тестироваться на
данном наборе.
Каждая
лаборатория
должна
устанавливать
собственные схемы внутреннего контроля качества и
вносить коррективы в случае, если контроль качества
не укладывается в допустимые пределы.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аналитическая чувствительность эквивалентна
таковой
при
использовании
Референсной
Сыворотки
Всемирной
Организации
Здравоохранения (WHO) для Диагностических
Тестов Трепонемных инфекций, реф №3-1980
(институт Альфреда Фурнье).
− Ложные результаты: Результаты, полученные с
данными реагентами, не показали значимых
отличий от референсных реагентов. Детали
эксперимента предоставляются по запросу.
− Хотя предпочтительно тетстировать сыворотку,
можно
также
использовать
и
плазму,
обработанную ЭДТА в качестве антикоагулянта.
Однако.
Так
как
были
отмечены
ложноположительные результаты на плазме,
необходимо повторить тестирование с сывороткой
для подтверждения результата.
− ТПГА
положительные
результаты
могут
существовать длительное время после окончания
заболевания. Данная методика не должна
использоваться для оценки эффективности
лечения.
−
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Присутствие антител к трепонеме в анализируемых
пробах методом ТПГА является подтверждением
диагностики сифилиса3. Хотя этот тест может давать
ложно положительные результаты в случаях
лекарственной терапии, проказы, инфекционного
мононуклеоза и аутоиммунных заболеваний, частота
ложноположительных результатов значительно ниже
по сравнению с трепонемными тестами4.
Клинический диагноз не должен основываться только
на данных единичного теста, а должен включать в себя
как клинические, так и лабораторные данные.
ПРИМЕЧАНИЯ
1. Храните флаконы в вертикальном положении.
Хранение флаконов в горизонтальном положении
может вызвать возникновение клеточных аггрегатов
1.
2.
3.
4.
БИБЛИОГРАФИЯ
Tomizawa T, Kasamatsu S. Yamaya S. Usefulness of
the Haemagglutination Test Using Treponema
Pallidum Antigen (TPHA) for Serodiagnosis of
Syphilis. Jap J Med Sci Biol 1969; 22: 341-350
Sequeira PJL and Eldridge AE Treponemal
haemagglutination test. Brit J wener dids 1973; 49:
242-248
Larsen SA, Hambie EA, Pettit DE, Perryman MW,
Kraus SJ Specifity, sensitivity and Reproducaebility
Among the Fluorescent Treponemal AntibodyAbsorption Test, the Microhemagglutination Assay for
Treponema pallidum antibodies and the
Hemagglutination trep[onemal Test for Syphilis. J
Clin Microbiol 1981; 14(4): 441-445
Peter CR, Thompson MA and Wilson DL. FalsePositive reactions in Rapid Plasma regain-Card,
Fluorescent treponemal Antibody-Absorbed, and
Hemagglutination treponemal Syphilis Serology Tests.
J Clin Microbiol 1979; 9(3): 369-372.