Çóðî÷êà À.Â.*, Ãîðîäå÷íûé Ï.Ï.*, Ãðèöåíêî Â.À.**, Ãðèöåíêî ß.Â.**, Äóêàðäò Â.Â.*, Êóçüìèíà Å.Å.* *ÃÎÓ ÂÏÎ «×åëÿáèíñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ ìåäèöèíñêàÿ àêàäåìèÿ» Ðîñçäðàâà, ã. ×åëÿáèíñê **Èíñòèòóò êëåòî÷íîãî è âíóòðèêëåòî÷íîãî ñèìáèîçà ÓðÎ ÐÀÍ, ã. Îðåíáóðã ÓÑÒÎÉ×ÈÂÎÑÒÜ Ê ÊÀÒÈÎÍÍÎÌÓ ÁÅËÊÓ ËÅÉÊÎÖÈÒΠ«ÈÍÒÅÐÖÈÄÓ» ÊÎÏÐÎÈÇÎËßÒΠSTAPHYLOCOCCUS AUREUS È ÈÕ ÂËÈßÍÈÅ ÍÀ ÕÅÌÎÒÀÊÑÈÑ ÏÎËÈÌÎÐÔÍÎßÄÅÐÍÛÕ ËÅÉÊÎÖÈÒÎÂ Ó ËÈÖ ÑÎ ÑÒÀÔÈËÎÊÎÊÊ-ÀÑÑÎÖÈÈÐÎÂÀÍÍÛÌ ÄÈÑÁÀÊÒÅÐÈÎÇÎÌ ÊÈØÅ×ÍÈÊÀ Ôåêàëüíûå øòàììû Staphylococcus aureus îò ëþäåé ñ äèñáàêòåðèîçîì êèøå÷íèêà ïðîÿâëÿþò îòíîñèòåëüíî íèçêèé óðîâåíü óñòîé÷èâîñòè ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó».  ñðàâíåíèè ñ òåñò-øòàììîì S. aureus «Cowan 209» êîïðîèçîëÿòû S. aureus âûçûâàþò áîëåå âûðàæåííóþ àêòèâàöèþ ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ ïàöèåíòîâ, îò êîòîðûõ îíè ïîëó÷åíû. Êëþ÷åâûå ñëîâà: Staphylococcus aureus, äèñáàêòåðèîç êèøå÷íèêà, êàòèîííûå áåëêè ëåéêîöèòîâ, óñòîé÷èâîñòü, ïîëèìîðôíîÿäåðíûå ëåéêîöèòû, õåìîòàêñèñ Ââåäåíèå Íàðóøåíèÿ ìèêðîáèîöåíîçà êèøå÷íèêà ñ íàêîïëåíèåì â íåì çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ íåðåäêî âûçûâàþò ó ïàöèåíòîâ äëèòåëüíî òåêóùèé âîñïàëèòåëüíûé ïðîöåññ, êîòîðûé ñîïðîâîæäàåòñÿ òÿæåëûì òîêñèêîçîì, ãèïåðòåðìè÷åñêîé ðåàêöèåé, óïîðíîé ðâîòîé, ìåòåîðèçìîì, ó÷àùåííûì æèäêèì ñòóëîì, èíîãäà ñ ïðèìåñüþ ñëèçè è êðîâè, à òàêæå ñïîñîáñòâóþò âîçíèêíîâåíèþ àëëåðãè÷åñêèõ ïîðàæåíèé êîæè è îðãàíîâ äûõàíèÿ [5]. Èçâåñòíî, ÷òî äëèòåëüíûå äèñáèîòè÷åñêèå ñäâèãè êèøå÷íîãî ìèêðîáèîöåíîçà ïðèâîäÿò ê èçìåíåíèÿì èììóííîãî ñòàòóñà ïî òèïó âòîðè÷íîãî èììóíîäåôèöèòà, ñëåäñòâèåì êîòîðîãî ÿâëÿþòñÿ õðîíè÷åñêèå âîñïàëèòåëüíûå çàáîëåâàíèÿ, îáóñëîâëåííûå ïîòåíöèàëüíî ïàòîãåííûìè ìèêðîîðãàíèçìàìè, â òîì ÷èñëå Staphylococcus aureus [4, 7].  ýòîé ñâÿçè áîëüøîé èíòåðåñ âûçûâàåò âîïðîñ î ïàòîãåíåòè÷åñêîé ïðè÷àñòíîñòè ê ðàçâèòèþ ïîäîáíîé ïàòîëîãèè áèîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ è, ïðåæäå âñåãî, óñòîé÷èâîñòè äàííûõ áàêòåðèé ê ãóìîðàëüíûì ôàêòîðàì àíòèáàêòåðèàëüíîé çàùèòû ìàêðîîðãàíèçìà (â ÷àñòíîñòè, êàòèîííûì áåëêàì ëåéêîöèòîâ) [1]. Íå ìåíüøåãî âíèìàíèÿ çàñëóæèâàåò âîïðîñ, çàòðàãèâàþùèé îñîáåííîñòè âçàèìîäåéñòâèÿ çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ ñ ïðîôåññèîíàëüíûìè ôàãîöèòàìè ÷åëîâåêà (â ÷àñòíîñòè, ïîëèìîðôíîÿäåðíûìè ëåéêîöèòàìè ÏÌßË), ó÷èòûâàÿ âàæíóþ ðîëü ïîñëåäíèõ â îáåñïå÷åíèè ïðîòèâîèíôåêöèîííîé çàùèòû ìàêðîîðãàíèçìà. ВЕСТНИК ОГУ №12/ДЕКАБРЬ`2006 Öåëü íàñòîÿùåãî èññëåäîâàíèÿ àíàëèç óñòîé÷èâîñòè ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó» êîïðîèçîëÿòîâ S. aureus, âûäåëåííûõ îò ëþäåé ñî ñòàôèëîêîêê-àññîöèèðîâàííûì äèñáàêòðèîçîì êèøå÷íèêà, è õåìîòàêñè÷åñêèõ ïàðàìåòðîâ ÏÌßË ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ïàöèåíòîâ, àêòèâèðîâàííûõ àóòîøòàììàìè çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ. Ìàòåðèàëû è ìåòîäû Ïîä íàáëþäåíèåì â Êëèíèêå ÃÎÓ ÂÏÎ «×åëÃÌÀ» Ðîñçäðàâà íàõîäèëñÿ 51 ïàöèåíò ñ äèñáàêòåðèîçîì êèøå÷íèêà, ó êîòîðîãî çîëîòèñòûå ñòàôèëîêîêêè âûäåëÿëèñü èç 1 ã ôåêàëèé â òèòðàõ 104 è áîëåå. Ó âûäåëåííûõ îò ýòèõ áîëüíûõ 56 êîïðîèçîëÿòîâ S. aureus îïðåäåëÿëè óðîâåíü óñòîé÷èâîñòè ê «èíòåðöèäó» (êîíöåíòðàöèÿ 5,0 ìã áåëêà/ìë) ïî îïèñàííîìó ìåòîäó [2], ðàññ÷èòûâàÿ èíäåêñ ðåçèñòåíòíîñòè (ÈíäÐ,%) ñòàôèëîêîêêîâ ïî ôîðìóëå: ÈíäÐ = ODo/ODk*100, ãäå ODo è ODk îïòè÷åñêèå ïëîòíîñòè îïûòíîé è êîíòðîëüíîé ïðîá. Ñ ïîìîùüþ ìåòîäèêè îïðåäåëåíèÿ õåìîòàêñèñà êëåòîê ïîä àãàðîçíûì ãåëåì [8, 9] ó âñåõ ïàöèåíòîâ èçó÷åíà õåìîòàêñè÷åñêàÿ ðåàêöèÿ ÏÌßË íà ñîáñòâåííûå øòàììû ñòàôèëîêîêêîâ è «ìóçåéíûé» òåñò-øòàìì «Cowan 209». ÏÌßË âûäåëÿëè èç ãåïàðèíèçèðîâàííîé ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè (15 ÅÄ ãåïàðèíà ñóëüôàòà íà 1 ìë êðîâè) ïàöèåíòîâ ïóòåì ãðàäèåíòíîãî öåíòðèôóãèðîâàíèÿ. Äëÿ ðåãèñòðàöèè íàïðàâëåííîñòè õåìîòàêñè÷åñêîãî îòâåòà ðàññ÷èòûâàëñÿ èíäåêñ õåìîòàêñèñà îòíîøåíèå âåëè÷èíû ìèãðàöèè ÏÌßË ê õåìîàòòðàêòàí- Çóðî÷êà À.Â. è äð. Óñòîé÷èâîñòü ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ... òó ê âåëè÷èíå ìèãðàöèè îò íåãî. Ïîñëå èçó÷åíèÿ ïîäâèæíîñòè ÏÌßË îöåíèâàëàñü àêòèâíîñòü íåñïåöèôè÷åñêèõ ýñòåðàç ôàãîöèòîâ â çîíàõ ìèãðàöèè ìåòîäîì îäíîâðåìåííîãî àçîñî÷åòàíèÿ ïî Ïèðñó ñ îïðåäåëåíèåì àêòèâíîñòè ýñòåðàç (%) è ñóììàðíîãî öèòîõèìè÷åñêîãî êîýôôèöèåíòà (ÑÖÊ, óñë.åä.). Îöåíêó ðàñïðåäåëåíèÿ ÏÌßË â çîíàõ ìèãðàöèè îñóùåñòâëÿëè ïî èíäåêñàì àêòèâíîñòè ýñòåðàç è èíäåêñ ÑÖÊ, äëÿ ÷åãî âûñ÷èòûâàëè îòíîøåíèÿ âåëè÷èí àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ è ÑÖÊ â çîíàõ ìèãðàöèè ê õåìîàòòðàêòàíòó ê ñîîòâåòñòâóþùèì âåëè÷èíàì â îïïîçèòíûõ çîíàõ. Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ ïðîâåäåíà â ïðîãðàììå «Statistica 6.0» ñ ïðèìåíåíèåì êðèòåðèåâ Mann-Whitney è Wald-Wolfowitz è êîððåëÿöèîííîãî àíàëèçà [3, 6]. Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå. Èññëåäîâàíèå ïîêàçàëî, ÷òî ñðåäíèé óðîâåíü ðåçèñòåíòíîñòè ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó» ó ñòàôèëîêîêêîâ, âûäåëåííûõ îò ïàöèåíòîâ, ñîñòàâèë 36,4%±3,2% (òàáë. 1). Ïîäîáíûé óðîâåíü óñòîé÷èâîñòè êîïðîèçîëÿòîâ S. aureus ê «èíòåðöèäó», ñîïîñòàâèìûé ñ ðåçèñòåíòíîñòüþ ìóçåéíîãî òåñò-øòàììà S. aureus «Cowan 209», õàðàêòåðåí äëÿ êîàãóëàçîîòðèöàòåëüíûõ ñòàôèëîêîêêîâ è çíà÷èòåëüíî íèæå ïîêàçàòåëåé óñòîé÷èâîñòè çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ, âûäåëåííûõ èç ãíîéíî-âîñïàëèòåëüíûõ î÷àãîâ [2]. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ãðóïïà êîïðîøòàììîâ S. aureus îòëè÷àëàñü âûñîêîé ñòåïåíüþ ãåòåðîãåííîñòè ïî àíàëèçèðóåìîìó ïàðàìåòðó. Îá ýòîì, â ÷àñòíîñòè, ñâèäåòåëüñòâîâàë øèðîêèé äèàïàçîí âàðüèðîâàíèÿ ÈíäÐ (îò 10,0 äî 118,8%), à òàêæå íàëè÷èå èçîëÿòîâ çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ, ïðîÿâëÿâøèõ êàê î÷åíü íèçêóþ (<20%), òàê è î÷åíü âûñîêóþ (>100%) óñòîé÷èâîñòü ê «èíòåðöèäó» èõ äîëè ñîîòâåòñòâåííî ñîñòàâèëè 10,7±4,1 è 3,6±2,5% îò âñåõ èññëåäîâàííûõ ôåêàëüíûõ øòàììîâ S. aureus. Ïîëó÷åííûå äàííûå ïîçâîëÿþò ñäåëàòü çàêëþ÷åíèå, ÷òî ïðè ñòàôèëîêîêê-àññîöèèðîâàííîì êèøå÷íîì äèñáàêòåðèîçå â êèøå÷íèêå ìîãóò íàõîäèòüñÿ ðàçëè÷íûå ïî óðîâíþ óñòîé÷èâîñòè ê «èíòåðöèäó» S. aureus, ïðè÷åì íåêîòîðûå èç íèõ ñïîñîáíû ïðîÿâëÿòü «ñóïåð-ðåçèñòåíòíîñòü» ê äàííîìó ýôôåêòîðó èììóíèòåòà ìàêðîîðãàíèçìà. Ïîñëåäíåå îáñòîÿòåëüñòâî êîñâåííî ñâèäåòåëüñòâóåò î ðîëè êèøå÷íèêà êàê ïîòåíöèàëüíîãî èñòî÷íèêà âîçáóäèòåëåé ãíîéíî-âîñïàëèòåëüíûõ çàáîëåâàíèé ñòàôèëîêîêêîâîé ýòèîëîãèè. Îöåíêà õåìîòàêñè÷åñêîé è ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíîñòè ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ íåéòðîôèëîâ âûÿâèëà èíîé ïî âûðàæåííîñòè îòâåò ôàãîöèòîâ íà àóòîøòàììû çîëîòèñòûõ ñòàôèëîêîêêîâ ïî ñðàâíåíèþ ñ «ìóçåéíûì» òåñò-øòàììîì S. aureus «Cowan 209» (òàáë. 2). Òàáëèöà 1. Ïîêàçàòåëè ðåçèñòåíòíîñòè êîïðîøòàììîâ Staphylococcus aureus ê êàòèîííîìó áåëêó ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäó» Ïàðàìåòðû ðåçèñòåíòíîñòè áàêòåðèé ê "èíòåðöèäó Øòàììû áàêòåðèé ÈíäÐ, % (M±m) Äèàïàçîí ÈíäÐ, % (min-max) Äîëÿ øòàììîâ ñ ÈíäÐ<20% (%) Äîëÿ øòàììîâ ñ ÈíäÐ>100% (%) Êîïðîøòàììû S. aureus (n=56) 36,4±3,2 10,0-118,8 10,7±4,1 3,6±2,5 S. aureus «Cowan 209» 21,2±5,8 12,5-38,2 Ïðèìå÷àíèå: ÈíäÐ èíäåêñ ðåçèñòåíòíîñòè áàêòåðèé Òàáëèöà 2. Õåìîòàêñè÷åñêàÿ è ìåòàáîëè÷åñêàÿ àêòèâíîñòü ïîëèìîðôíîÿäåðíûõ ëåéêîöèòîâ ó ëèö ñî ñòàôèëîêîêê-àññîöèèðîâàííûì äèñáàêòåðèîçîì êèøå÷íèêà Ïîêàçàòåëè ëåéêîöèòîâ Õåìîàòòðàêòàíòû Òåñò-øòàìì S. aureus «Cowan 209» Àóòîøòàììû S. aureus Èíäåêñ õåìîòàêñèñà (n=51) 1,35±0,03 1,64±0,10* Èíäåêñ àêòèâíîñòè ýñòåðàç (n=51) 0,92±0,03 1,08±0,05* Èíäåêñ ÑÖÊ (n=51) 0,94±0,02 1,06±0,05* Ïðèìå÷àíèå: * îòëè÷èå îò ïîêàçàòåëåé â îïûòàõ ñ S. aureus «Cowan 209», p<0,05. ВЕСТНИК ОГУ №12/ДЕКАБРЬ`2006 Ìèêðîáèîëîãèÿ, èììóíîëîãèÿ, áèîòåõíîëîãèÿ  öåëîì àóòîøòàììû S. aureus îáëàäàëè áîëåå âûðàæåííûì àêòèâèðóþùèì äåéñòâèåì íà ïîëèìîðôíîÿäåðíûå ëåéêîöèòû ïàöèåíòîâ, îò êîòîðûõ áûëè âûäåëåíû, ÷åì «ìóçåéíûé» øòàìì S. aureus «Cowan 209», êîòîðûé, êàê áûëî ïîêàçàíî âûøå, îáëàäàë è áîëåå íèçêîé óñòîé÷èâîñòüþ ê «èíòåðöèäó». Äëÿ óòî÷íåíèÿ âçàèìîñâÿçè ìåæäó èçó÷åííûìè ïàðàìåòðàìè («èíòåðöèä»-ðåçèñòåíòíîñòü ñòàôèëîêîêêîâ è ïîêàçàòåëè õåìîòàêñè÷åñêîé àêòèâíîñòè ëåéêîöèòîâ) áûë ïðîâåäåí êîððåëÿöèîííûé àíàëèç, êîòîðûé âûÿâèë íàëè÷èå äîñòîâåðíîé ïîëîæèòåëüíîé êîððåëÿöèîííîé ñâÿçè ñðåäíåé ñèëû (r=0,33) ìåæäó èíäåêñîì àêòèâíîñòè ýñòåðàç ëåéêîöèòîâ è óðîâíåì óñòîé÷èâîñòè àóòîø- òàììîâ S. aureus ê «èíòåðöèäó». Ýòî ÿâëÿåòñÿ êîñâåííûì ïîäòâåðæäåíèåì òîãî, ÷òî óêàçàííàÿ êà÷åñòâåííàÿ õàðàêòåðèñòèêà ñòàôèëîêîêêîâ ñïîñîáíà îêàçûâàòü íà ñîñòîÿíèå ôàãîöèòèðóþùèõ êëåòîê ìîäèôèöèðóþùèé ýôôåêò, ïðîÿâëÿþùèéñÿ â âûðàæåííîé ñòèìóëÿöèè íàïðàâëåííîé ïîäâèæíîñòè êëåòîê è àêòèâàöèè èõ ëèçîñîìàëüíîãî àïïàðàòà. Íåëüçÿ èñêëþ÷èòü, ÷òî ïîâûøåííàÿ ðåàêöèÿ ëåéêîöèòîâ íà «èíòåðöèä»-ðåçèñòåíòíûå øòàììû ñëóæèò ýôôåêòèâíûì ìåõàíèçìîì ñäåðæèâàíèÿ ðàñïðîñòðàíåíèÿ ñòàôèëîêîêêîâ èç êèøå÷íèêà âî âíóòðåííèå îðãàíû ÷åëîâåêà, ïðåäîòâðàùàÿ òåì ñàìûì ðàçâèòèå èíôåêöèîííî-âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà â ìàêðîîðãàíèçìå. Ñïèñîê èñïîëüçîâàííîé ëèòåðàòóðû: 1. Áóõàðèí Î.Â. Ïåðñèñòåíöèÿ ïàòîãåííûõ áàêòåðèé. Ì.: Ìåäèöèíà, 1999. 2. Ãðèöåíêî Â.À., Ãðèöåíêî ß.Â. ×óâñòâèòåëüíîñòü è àäàïòàöèÿ ñòàôèëîêîêêîâ ê áàêòåðèöèäíîìó äåéñòâèþ êàòèîííîãî áåëêà ëåéêîöèòîâ «èíòåðöèäà». Âåñòíèê ÎÃÓ, 2005, 5 (Ïðèëîæåíèå): 19-22. 3. Ãóáëåð Å.Â., Ãåíêèí À.À. Ïðèìåíåíèå íåïàðàìåòðè÷åñêèõ êðèòåðèåâ ñòàòèñòèêè â ìåäèêî-áèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ. Ë. Ìåäèöèíà, 1973. 4. Äåðÿáèí Ä.Ã. Ñòàôèëîêîêêè: ýêîëîãèÿ è ïàòîãåííîñòü. Åêàòåðèíáóðã: Óðî ÐÀÍ, 2000. 5. Êðàñíîãîëîâåö Â.Í. Äèñáàêòåðèîç êèøå÷íèêà. Ì.: Ìåäèöèíà, 1989. 6. Ëàêèí Ã.Ô. Áèîìåòðèÿ, Ì.: Âûñø. øê., 1990. 7. Õàèòîâ Ð.Ì., Ïèíåãèí Á.Â. Âòîðè÷íûå èììóíîäåôèöèòû: êëèíèêà, äèàãíîñòèêà, ëå÷åíèå. Èììóíîëîãèÿ, 1999, 1: 14-17. 8. Ýáåðò Ë.ß., ×óêè÷åâ À.Â., Çóðî÷êà À.Â., Ìàðà÷åâ Ñ.È., Íîâîêðåùåíîâ Ë.Á. Ñïîñîá îïðåäåëåíèÿ âèäà áàêòåðèàëüíîé èíôåêöèè, À.Ñ. 1156644 (ÑÑÑÐ), Îôèö. áþëë. Îòêðûòèÿ è èçîáðåòåíèÿ, 1985, 19: 9. 9. Nelson R.D., Quie P.G., Simmons R.L. Chemotaxis under agarose: A new and simple method for measuring chemotaxis and spontaneous migration of human polymorphonuclear leucocytes and monocytes. J. Immunol., 1975, 115: 1050-1058. ВЕСТНИК ОГУ №12/ДЕКАБРЬ`2006