СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ Научно-исследовательский институт антимикробной химиотерапии Смоленская государственная медицинская академия О.И.Кречикова Москва, 2 октября 2013 г. ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП Достоинства • Простота и доступность • Хорошая стандартизация • Обеспечивает достоверность и воспроизводимость результатов • При хорошо стандартизованных и контролируемых условиях тестирования связан с величиной МПК АБП в отношении тестируемого М.О. ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП Факторы, влияющие на фармакодинамические параметры антибиотиков (1) • Пригодность для роста тестируемых микроорганизмов • Сбалансированность двухвалентных катионов Ca+2, Mg+2, Zn+2 , содержания тимина и тимидина • pH среды и плотность ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП Факторы, влияющие на фармакодинамические параметры антибиотиков (2) • Соблюдение условий приготовления и хранения среды • Стандартизация содержания АБП в диске и условия их хранения • Условия инокуляции чашек и термостатирования ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП Стандартизация содержания АБП в диске определена национальными и международными техническими рекомендациями • ВОЗ - содержание АБП от 75 до 135% от заданного • FDA, США - содержание АБП от 67,5% до 150 % от заданного Несоблюдение условий хранения дисков влияет на снижение активности АБП (бета-лактамные антибиотики) ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП Содержание двухвалентных катионов Ca+2, Mg+2, Zn+2 , Cu +2, Fe +2 сложно поддаѐтся стандартизации • изменяет фармакодинамические параметры аминогликозидов при тестировании P.aeruginosa Избыток двухвалентных катионов приводит к ложной резистентности ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП Содержание тимина и тимидина влияет на определение чувствительности е сульфаниламидам и триметоприму • избыточное содержание снижает активность антифолиевых препаратов приводя к получению ложнорезистентных результатов ДИСКО-ДИФФУЗИОННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АБП Стандартизация катионного состава и тимидина • Содержание катионов Ca+2 не более 50 мг/л • Содержание катионов Mg +2 не более 25 мг/л • Содержание тимина и тимидина не менее 0, 03 мг/л Technical recommendation for in vitro susceptibility testing. 1996 Report of the Comite de I,Antibioticgramme de la Societe Fracaise de Microbiologie// Clin.Microbiol.Infect.-1996. –V.2P.S11-S25 Bushby S.R. Trimethoprim-Sulfamethoxazol: in vitro microbiological aspects // J.Infect.Dis.— 1973.-V.128. – P.S442-S462. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Оценка качества сред разных производителей Среда сравнения - Агар Мюллера-Хинтона (Becton Dickinson, США) • Среда Мюллера-Хинтона (SIFIN, Германия) • Среда Мюллера-Хинтона (Biolife, Италия) • Основа агара для определения чувствительности (Biolife, Италия) ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Методика и нормативные документы • ГОСТ ISO 11133-1 – 2011, ГОСТ ISO 11133-2 – 2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных» Руководящие указания по приготовлению питательных сред часть 1 Общие руководящие указания … часть 2 Практические руководящие указания ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Методика и нормативные документы • МУК 4.2.2316 – 08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» • CLSI 2012 M100-S22 Perfomance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing Clinical and Laboratory Standards Institute ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Среды тестировались контрольными штаммами S.aureus ATCC 25923, E.coli ATCC 25922 , P.aeruginosa ATCC 27853 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Оценивались: • • чувствительность (производительность) сред воспроизводимость ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Воспроизводимость оценивалась по результатам тестирования активности АМП • S.aureus ATCC 25923 Цефокситин, 30 мкг Гентамицин, 10 мкг Эритромицин, 15 мкг Фузидин, 10 мкг Клиндамицин, 2 мкг Рифампин, 5 мкг Ципрофлоксацин, 5 мкг Линезолид, 30 мкг Ко-тримоксазол, 1,25/23,75 ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Воспроизводимость оценивалась по результатам тестирования активности АМП • P.aeruginosa ATCC 27853 Амикацин, 30 мкг Имипенем, 10 мкг Гентамицин, 10 мкг Меропенем, 10 мкг Цефтазидим, 30 мкг Ципрофлоксацин, 5 мкг ВНУТРЕННИЙ КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Воспроизводимость оценивалась по результатам тестирования активности АМП • E.coli ATCC 25922 Ампициллин, 10 мкг Эртапенем, 10 мкг Гентамицин, 10 мкг Фосфомицин, 200 мкг Цефтазидим, 30 мкг Нитрофурантоин, 300 мкг Цефотаксим, 30 мкг Ципрофлоксацин, 5 мкг РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП (1) • Среды обеспечивали хороший рост контрольных штаммов S.aureus A TCC 25923, E.coli A TCC 25922 , P.aeruginosa A TCC 27853: - чувствительность сред (производительность ) – 65-70% • Среды имели невысокое содержание тимидина: - зоны задержки роста Enterococcus faecalis ATCC 29212 25-30 мм (d - ˃ 20 мм) ПРИНЦИП ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ВКК СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Диаметр зон в мм Единичные результаты за пределами контрольных зон Воспроизводимост ь Различие не более 3 мм Дни РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП (2) • Результаты ВК (скрининга) качества сред Мюллера-Хинтона производителей SIFIN (Германия), Biolife (Италия) показали результаты сопоставимые со средой сравнения - агаром Мюллера-Хинтона Becton Dickinson (США) РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП (2) • На среде Antibioticogramma Base Agar (Biolife, (Италия) получено несовпадение результатов со средой сравнения - агаром Мюллера-Хинтона Becton Dickinson (США) – различие в диаметрах зон подавления роста более 3 мм • 14,8% определений активности АМП имели значения за пределами допустимых значений РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СРЕД ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АМП Выводы: • Результаты скрининга показали сопоставимость качества агаров Мюллера-Хинтона разных производителей, однако требуется более широкое исследование • Требуется дополнительные исследования по оценке качества сред Antibioticog ramma Base Agar (Biolife, Италия) СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ