6. оборудование и реагенты

Инструкция
по применению Набора реагентов для количественного определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови человека
«ОБЩИЙ БИЛИРУБИН - UTS»
Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН- UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05453
Информация для заказа набора «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН- UTS»
Кат. №
Комплектация
ОБ-09-009-100
ОБ-09-009-400
Р1 80 мл + Р2 20 мл + калибратор
1 флакон (лиофилизат)
Р1 320 мл + Р2 80 мл + калибратор
2 флакона (лиофилизат)
Количество
определений
100/v
400/v
где v – объем фотометрической ячейки анализатора.
ВНИМАНИЕ! Изменено соотношение компонентов набора. Рабочий реагент готовить смешиванием Реагента 1 (Р1) и
Реагента 2 (Р2) в соотношении (4 : 1).
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН - UTS» предназначен для определения содержания общего билирубина в сыворотке или плазме крови
человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Билирубин является продуктом распада гемоглобина и присутствует в свободной и прямой (конъюгированной) формах в организме человека. При
распаде гемоглобина первоначально образуется гидрофобный (нерастворим в воде), липофильный (жирорастворимый, токсичный) свободный
билирубин, в плазме крови он присутствует в основном в комплексе «альбумин-билирубин». Далее комплекс «альбумин-билирубин» транспортируется
в печень, в клетках которой свободный билирубин ферментативно связывается с глюкуроновой кислотой. В результате этого процесса (конъюгации)
образуется конъюгированный (прямой) билирубин (водорастворимый и менее токсичный), который активно против градиента концентрации
экскретируется в желчные ходы и в составе желчи поступает в кишечник. В норме в крови человека 75% общего билирубина приходится на долю
свободного билирубина и 25% на долю прямого (связанного) билирубина.
1.3. Увеличение содержания билирубина в крови может обуславливаться многими причинами: увеличение интенсивности гемолиза эритроцитов;
поражение паренхимы печени с нарушением ее билирубинвыделительной функции; нарушение оттока желчи из желчных путей в кишечник. На этом
основано клиническое значение анализа [1].
1.4. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа,
что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска
необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с
ОСТ 91500.13.0001-2003.
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Определение общего билирубина (свободного и прямого) основано на реакции диазотирования билирубина диазосульфаниловой кислотой, в
результате чего образуется соединение азобилирубин розового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в
пробе и измеряется спектрофотометрически при 540 (520-560) нм [2,3,4]. Прямой билирубин взаимодействует с диазосульфаниловой кислотой в водной
среде, в то время как свободный билирубин необходимо перевести в водорастворимую форму с помощью диметилсульфоксида.
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 540 нм молекулами окрашенного
азобилирубина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической
плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски азобилирубина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации
общего билирубина в исследуемом образце.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН-UTS» поставляется в виде двух растворов Р1, Р2 и лиофилизированного калибратора.
Компоненты и их состав:
Наименование
Состав
Концентрация
Реагент 1
сульфаниловая кислота
29 ммоль/л
соляная кислота
0,24 ммоль/л
диметилсульфоксид (ДМСО)
3%
Реагент 2
нитрит натрия
11,6 ммоль/л
Калибратор
лиофилизат билирубина
Точная концентрация указана на
этикетке флакона
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации общего билирубина в диапазоне от 2 до 342 мкмоль/л, отклонение от
линейности не превышает 5%.
4.2. Чувствительность – не более 2,0 мкмоль/л.
4.3. Коэффициент вариации результатов определений – не более 5%.
4.4. Фактор пересчета: 1 мкмоль/л = 1мг/100мл × 17,1.
4.5. Нормальные величины концентрации общего билирубина в сыворотке или плазме взрослого человека составляют 3-21 мкмоль/л [1].
4.6. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение концентрации общего билирубина, приведены в обзоре [5].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент 1 содержит соляную кислоту, которая вызывает сильные ожоги. Реагент 2 содержит токсичный компонент нитрит натрия. Следует избегать
попадания реагентов на кожу и в глаза. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки, необходимо промыть поражённые участки большим
количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии,
противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений
системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует
рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой
возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению концентрации общего билирубина с применением набора реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН–UTS»
рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие
выполнять измерение поглощение оптической плотности при длине волны
540 (520-560) нм (режим по конечной точке).
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Свежая сыворотка или плазма крови без следов гемолиза.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее одного часа после взятия крови.
7.3. Образцы сыворотки или плазмы, для проведения анализа на содержание общего билирубина, стабильны не более 4-х суток при +(2-8) ОС и 2
месяца при –20 ОС [1]. Хранить в темноте.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Приготовление рабочего реагента: смешать 4 части Реагента 1 и 1 часть Реагента 2. Рабочий реагент стабилен в течение 8 суток при хранении в
защищенном от света месте при 2-8 0С.
Калибратор приготовить растворением содержимого флакона в 1 мл дистиллированной воды.
 Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.
8.2. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Отмерить, мкл
Бланк по реагенту –
холостая проба, мкл
Калибровоч
ная проба,
мкл
Бланк по
пробе, мкл
Проба, мкл
Вода дистиллированная
100
-
-
-
Сыворотка или плазма крови
Калибратор
Реагент 1
Рабочий реагент
1000
100
1000
100
1000
-
100
1000
8.3. Реакционную смесь перемешать и инкубировать 2 минуты при температуре 37 ОС или при 18-25 оС.
8.4. Измерить поглощение пробирки с бланком по реагенту (Ахол), затем поглощение пробирки с калибровочной пробой (Акал). После измерить бланк по пробе
(Абланк по пробе) и саму пробу (Апробы). Далее фотометр сам рассчитает содержание билирубина в пробе по формуле:
(Апробы - Абланк по пробе)/Акал * Скал
где: Скал – концентрация общего билирубина в калибраторе в мкмоль/л;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы (ед. оптич. плотн), измеренная относительно холостой пробы;
Апробы - оптическая плотность пробы (ед. оптич. плотн), измеренная относительно бланка по пробе;
Абланк по пробе - оптическая плотность пробы (ед. оптич. плотн), измеренная относительно холостой пробы;
8.5. Окраска стабильна 30 минут при комнатной температуре.
8.6. Если полученная концентрация общего билирубина в образце выше 342 мкмоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец
0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
8.10. Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:
8.10.1. Установить программу определения концентрации общего билирубина согласно таблице:
Наименование параметра
Значение
Метод измерения
Длина волны, нм
Конечная точка
Основная 540 (520-560)
дифференциальная 600
дист. вода
(18-25 ОС) или 37 ОС
мкмоль/л
2
Увеличивается
10:1
Указана на флаконе с калибратором
5
0,2
Измерение против
Температура реакции
Единица измерения
Число знаков после запятой
Изменение оптической плотности
Соотношение реагент/проба*
Концентрация калибратора, мкмоль/л
Время реакции, мин
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед.
опт. плот.
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед.
0
опт. плот.
Границы линейности, мкмоль/л
2-342
Максимум нормы, мкмоль/л
21,0
Минимум нормы, мкмоль/л
3,0
* - при проведении исследования у новорожденных допускается использование соотношения 20:1 с последующим умножением полученного
результата на два.
8.7.2. При первом использовании набора, а также при получении новой серии необходимо провести калибровку с использованием входящего в состав
набора калибратора общего билирубина.
8.7.3. Концентрация общего билирубина в образце рассчитывается в мкмоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и
сохраненной в памяти биохимического анализатора.
8.7.4. Если полученная концентрация общего билирубина в образце выше 342 мкмоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый
образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН–UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 ОС в течение
всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25 °С не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не
допускается.
9.2. Срок годности набора указан на этикетке.
9.3. Реагенты Р1 и Р2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре +2..+8 ОС в защищенном от света месте в течение всего срока
годности в плотно закрытом флаконе.
9.4. Калибратор после приготовления раствора можно хранить при температуре +2-8 ОС в защищенном от света месте темном месте в течение 3-х дней в
плотно закрытом флаконе.
9.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
1. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
2. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St. Louis. Toronto. Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
3. Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter. J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491
4. Martinek R. Improved micro-method for determination of serum bilirubin. Clin Chem 1966: Acta 13: 61-170.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится ООО «Эйлитон» по заказу ЗАО «А/О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «ОБЩИЙ БИЛИРУБИН –UTS» следует обращаться в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва,
ул. Касаткина, 3а; Тел. (495) 734-91-31, 8-800-333-91-31, Факс: (495) 564-86-41.
E-mail: office@unimedao.ru; http://www.unimedao.ru