Утверждено Гл. врач _______________Муртазалиев Х. Х. ______________202__г. Стандартная операционная процедура (СОП) Определение суммарных антител к вирусу гепатита «Бест анти-ВГС» Введена в действие: Должность Ф. И. О. Утвердил: Гл. врач Муртазалиев Х. Х. Разработал: Заведующий иммунодиагностической лабораторией Эльсаева М. У. Подпи сь Дата Изменение: Место хранения: Количество экземпляров: Цель внедрения Выявление антител к вирусу гепатита «Бест анти-ВГС» в сыворотке крови. Обеспечение безопасности персонала Оснащение 1. Стол. 2. Дозатор, наконечники. 3. Плазма крови. 4. Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G и М к вирусу гепатита «ВГС» 5. Стрипы в герметичной упаковке. 6. Реагент для разведения образца 7. Емкость с дезинфицирующим раствором. 8. Емкости для сбора медицинских отходов. 9. Шкафы для хранения расходных материалов. 10. Средства индивидуальной защиты. Нормативная документация 1. Федеральные и региональные нормативные документы: o o o o o o o o o Федеральный закон от 21.11.2011 №323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации»; Приказ Минздрава России от 18.05.2021 №464н «Об утверждении Правил проведения лабораторных исследований»; СП 2.1.3678-20 «Санитарно-эпидемиологические требования к эксплуатации помещений, зданий, сооружений, оборудования и транспорта, а также условиям деятельности хозяйствующих субъектов, осуществляющих продажу товаров, выполнение работ или оказание услуг»; СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарнопротивоэпидемических (профилактических) мероприятий»; Приказ Минздрава России от 07.09.2020 №947н «Об утверждении Порядка организации системы документооборота в сфере охраны здоровья в части ведения медицинской документации в форме электронных документов»; Приказ Министерства здравоохранения СССР от 04.10.1980 №1030 «Об утверждении форм первичной медицинской документации»; ГОСТ Р ИСО 15189-2015. Национальный стандарт Российской Федерации. Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности; ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования безопасности; ГОСТ Р 53079.4-2008 Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4 Правила ведения преаналитического этапа. 2. Локальные организационно-распорядительные документы. Оборудование и материалы, необходимые при работе с набором спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках стрипов при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620 - 655 нм; допускается измерение при одной длине волны 450 нм; — холодильник бытовой; —термостатируемый шейкер орбитального типа на 700—800 об/мин, поддерживающий температуру (42±1) ºС либо (37±1) ºС — автоматический промыватель для планшетов; —дозаторы полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 5 до 1000 мкл —дозаторы полуавтоматические многоканальная со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объемы жидкостей до 350 мкл; — перчатки резиновые хирургические; — бумага фильтровальная лабораторная; — цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 100 мл, 1000 мл; — колба вместимостью 1000 мл, 2000 мл; — вода дистиллированная. Название изделия медицинского назначения: 1. Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулино вкласса G и М к вирусу гепатита «ВГС» Состав и описание изделия: Назначение 1. Набор реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G и М к вирусу гепатита «ВГС» Комплект 2 набора рассчитан на проведение 96 (12Х8) определений, включая контрольные образцы. Принцип метода Метод определения основан на твердофазном иммуноферментном анализе. Во время первой инкубации при добавлении в лунки планшета исследуемого образца и биотинилированных поликлоналъных антител происходит связывание моноклональных антител, иммобилизованных на внутренней поверхности лунок, и биотинилированных поликлональных антител с ВГС в анализируемом образце. Во время второй инкубации стрептавидин, меченый пероксидазой, связывается с биотинилированными поликлональными антителами к ВГС, иммобилизованными в ходе первой инкубации. Во время третьей инкубации с раствором тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках, содержащих комплексы антиген-антитело. Степень окраски пропорциональна концентрации HBsAg в анализируемых образцах. Аналитические и диагностические характеристики 1. Чувствительность: минимальная концентрация ВГС, определяемая по стандартному образцу предприятия, содержащему ВГС (рег. № 05-2-433), аттестованному ОБТК АО «Вектор-Бест», составляет 0,01 МЕ/мл. 2. Специфичность: по результатам анализа сывороток стандартной панели предприятия, не содержащих ВГС (рег. № 05-2-104), аттестованной ОБТК АО «Вектор-Бест», составляет 100%. Меры безопасности: Не допускайте непосредственного контакта с пробами крови пациентов. Не используйте повторно одноразовые изделия. При случайном попадании реагентов на кожу обильно промойте ее водой и при необходимости обратитесь к врачу. При случайном попадании реагентов в глаза обильно промойте их водой и немедленно обратитесь к врачу. Храните и используйте реагенты в соответствии с инструкциями по эксплуатации реагентов. Не используйте просроченные реагенты. Алгоритм выполнения 1. 2. 3. 4. Обработать руки гигиеническим способом. Надеть перчатки. Подготовить рабочее место для проведения теста. Проверить срок годности набор реагентов для количественного выявления антител к вирусу. Проведения анализа 1. Подготовить необходимое количество стрипов к работе. 2. Приготовить промывочный раствор 3. Подготовить раствор коньюгата в рабочем разведении: коньюгат (концентрат),100мкл +РК 1.0мл. 4. Поместить стрип (необходимое количество) в планшет 5. Внести во все лунки стрипов по 60 мкл РС. В 2 лунки планшета внести по 40 мкл К+, в 2 лунку-40мкл К-, в остальные -по 40мкл исспытуемых сывороток. 6. Внесение образцов должно сопровождаться тщательным перемешиванием. 7. Планшет заклеить пленкой и инкубировать, используя по выбору какой-либо из следующих режимов: 8. Процедура 1- 370 С, шейкер, 500об/мин 30мин. 9. Процедура 2- 370 С, термостат, 1час. 10. По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором, промыть планшет 5 раз промывочным раствором. 11. По окончанию промывки необходимо использовать перекрестную аспирацию раствора из лунок (режим «cross aspiration»). 12. Приготовить раствор коньюгата в рабочем разведении (п.8) 13. Во все лунки внести по 100 мкл приготовленного раствора коньюгата в рабочем разведении (п.8) 14. Планшет заклеить пленкой и инкубировать, используя по выбору какой-либо из следующих режимов: 15. Процедура 1- 370 С, шейкер, 500об/мин 30мин. 16. Процедура 2- 370 С, термостат, 1час. 17. По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором, промыть планшет 5 раз промывочным раствором. 18. Внести во все лунки по 100мкл раствора ТМБ в рабочем разведении (ТМБ концентрат )50мкл+СРБ 1.0 мл. 19. Планшет поместить в защищенном от прямого солнечного света место при температуре (18-25)0 Сна 25 минут или при температуре 370 С на 20 минут. 20. Остановить реакцию добавлением во все лунки по 100мкл стоп-реагента и через 23 минуты измерить оптическую плотность (ОП). 21. Результаты исследований учитывать только при соблюдении следующих условий: - значение ОП в лунках с К- не более 0.2; - значение ОП в лунках с К+ не менее 0.8. ОПкрит=ОПсрК- +0.2, Для оценки степени позитивности положительных образцов может быть рассчитан коофициент позитивности (КП) по формуле: КП=ОПобр/ОПкрит 22. Интерпретировать результат. 23. Поместить использованную пипетку в емкость с дезинфицирующим раствором. 24. Поместить планшет в емкость с дезинфицирующим раствором. 25. Использованные перчатки поместить в емкость с дезинфицирующим раствором. 26. Обработать руки гигиеническим способом с использованием антисептика. 27. Утилизировать реагенты, отходы, пробы, расходные материалы и т. д. в соответствии со схемой обращения с медицинскими отходами. Отсутствие дефектов в процессе проведения исследования. Лист ознакомления № Ф. И. О. Должность Дата Подпись
