Реагенты и стандарты: Ацетонитрил (Sigma-Aldrich) Метанол (Sigma-Aldrich) Стандартный лиофилизированный препарат витамина D (98% и более чистоты) (Sigma-Aldrich, ДИА-М) ПЭГ Приборы и компоненты: Хроматографическая колонка с размером частиц 5мкм (напр. Hector-M C18 4,6x150 mm) Хроматограф с UV-датчиком Метод: Подвижная фаза состоит из Ацетонитрила (100%). Процедура проводится в режиме изократического элюирования со скоростью 1 мл/мин. Считывание результатов проводится на длине волны 264 нм. Необходимо перед началом работы подготовить из стандартного препарата калибровочные растворы известных концентраций не менее чем в 3 точках ( 3, 40, 90 нг/мл) (чем больше точек тем лучше) Подготовка проб: 400 мкл опытной сыворотки смешиваются с 400 мкл преципитатора в эппендорфе 1500 мкл, затем в вортекс на 10 сек и следом в центрифугу на 5 минут при 10’000 RCF (RCF=11,18*r*((RPM/1000)^2)) – если объем проб слишком велик, или мал, можно изменять пропорционально. Анализ результатов: В оригинальной статье для нахождения искомой величины рассчитывали пропорцию исходя из отношений высоты пиков стандарта и искомой опытной пробы, это быстрее, но более точным будет рассчет отношений площадей пиков Важно: Результаты будут тем точнее, чем уже будут пики. При ширине пиков, превышающей их высоты результаты считать достоверными нельзя. Ссылка на оригинальную статью:
