Загрузил shchdev

энзиматические исследования микроорганизмов

реклама
В дальнейшем удалось установить, что растворение бактерий вызывается пожирателем бактерий
— бактериофагом . Например, бактериофаг дизентерии вызывает полный лизис этих бактерий
через 4—6 ч после внесения его в культуру. Действие бактериофага специфично.
После проникновения в клетку фаги размножаются очень быстро. Уже через 10 мин после
инфицирования в каждой клетке культуры бакте1 й можно найти 2—3 фага, а через 20 мин — уже
100. После лизиса бактериальной клетки фаги выделяются из нее и переходят в зрелую форму.
Клеточные фаги могут находиться и в форме профагов. В этом случае они, находясь в скрытом
состоянии, не уничтожают клетку, а при помощи своей ДНК, связанной с ДНК клетки, синхронно
репродуцируются вместе с клеткой. Если клетки бактерий, содержащие профаги, попадают в
неблагоприятные условия (воздействие ультрафиолетовых лучей или ядовитых соединений),
профаги могут перейти в вегетативную форму, размножиться и лизировать клетку. Такие культуры
бактерий, содержащие профаги, называют лизогенными.
обычно применяют мягкие методы их разрушения, включающие использование детергентов и
лизоцима, хотя для разрушения некоторых микроорганизмов с прочными клеточными стенками
может понадобиться пресс, стеклянные бусы или растирание клеток с абразивами. В некоторых
случаях для ослабления клеточных стенок в растущие культуры (например, грамположительных
бактерий) добавляют глицин, лизин или треонин. Иногда для тех же целей клетки
грамположительных бактерий в растущих культурах обрабатывают антибиотиками, такими как
пенициллин С или ме-тициллин, которые подавляют биосинтез пептидогликана клеточной стенки.
Чувствительность к лизоциму микобактерий, содержащих высокий процент липидов и
полисахаридов в клеточной стенке, может быть усилена их обработкой изопропанолом. При
лизисе микроорганизмов, имеющих особенно прочные клеточные стенки, применяют
поли(этиленгликоль) с последующим удалением из лизата, так как его присутствие мешает
проведению дальнейшей очистки ДН.
Методы дезинтеграции микробов
1. Разрушение микробных клеток в механическом дезинтеграторе. В специальные нейлоновые
стаканы помещают взвесь клеток (1 млрд/мл), на каждый миллилитр которой добавляют 1 г бус
диаметром 0.15 мм, изготовленных из пирекс-стекла. Стакан вращается приводом
электродвигателя со скоростью 3000 об/мин. Разрушение клеточных стенок бактерий наступает
через 10—20 мин. Разница в экспозиции зависит от вида бактерий.
2. Разрушение клеток в прессах высокого давления. Продавливают замороженную при 30-70°С
микробную массу через узкую щель под давлением в 2000 атм. При переходе бактерий из зоны
высокого давления пресс-аппарата в зону атмосферного давления их клеточная стенка
разрушается. Процедуру повторяют 3—4 раза. Метод является более щадящим, чем встряхивание
с бусами.
3. Ультразвуковой метод дезинтеграции. Применяют генераторы, излучающие волны частотой не
более 10—20 кГц и мощностью 60—100 вт. Экспозиция озвучивания зависит от вида и формы
микробной клетки и колеблется от 10 до 60 минут.
4. Разрушить бактериальную клетку можно и детергентами (лаурилсульфат натрия, дезоксихолат
натрия). На 1 мл взвеси бактерий добавляют 1—1,5% детергента. Экспозиция зависит от вида
бактерий и подбирается опытным путем.
После дезинтеграции бактериальных клеток одним из методов из взвеси выделяют жгутики,
капсульное вещество, клеточные стенки, мембраны, цитоплазматические компоненты.
Скачать