Министерство сельского хозяйства Российской Федерации федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» Кафедра кормления Презентация по теме: «Титр вируса. Единицы количества вирусов. Метод титрования вирусов по инфекционному действию. Метод расчета титра вирусов по Риду и Менчу» Выполнили студенты 308 группы факультет ветеринарной медицины: Cмирнова Александра и Костенко Анна Казань-2022 Что такое титр? Титр вируса — это количество вируса, содержащееся в единице объема материала. Поскольку количество вируса невозможно выразить в обычно применяемых (объем, масса и т. п.) единицах, прибегают к измерению в единицах действия или единицах активности. Вирусы обладают инфекционным и гемагглютинирующим действием. Отсюда и единицы количества вирусов инфекционные и гемагглютинирующие. Размерность этих единиц зивисит от соотношения полноценных и неполноценных вирионов в используемой суспензии, объекта, способа титрования и других факторов. В практике нашли применение три типа единиц количества вируса: Типы единиц количества вируса инфекционные инфекционные единицы 50%-ного единицы локальных действия вирусов на повреждений, гемагглютинирующие чувствительные живые вызываемых вирусами единицы объекты, и оцениваемых по оцениваемые единичному эффекту статистически Метод титрования вирусов по инфекционному действию Наиболее универсален метод определения титра вируса в единицах 50%ного инфекционного действия. По этому методу за единицу количества вируса принимается такая его доза, которая способна вызывать инфекционный эффект у 50 % зараженных тест-объектов. Она обозначается как ЭД50— эффективная 50%-ная доза. Число таких доз вируса в единице объема материала и будет выражать титр вируса в этом материале. В качестве тест-объектов в лабораториях обычно используют белых мышей, куриные эмбрионы и культуры клеток, у которых инфекционное действие вируса может проявляться гибелью, клиническими симптомами, патологоанатомическими изменениями и цитопатическим эффектом. Для каждого вируса подбирают чувствительный к нему тест-объект и форму учета его инфекционного действия, по которой оценивают эффект заражения. В зависимости от вида тест-объекта и формы проявления инфекционного действия ЭД50 принимает один из следующих видов. Тест-объекты Виды инфекционного действия вирусов Единицы количества вирусов названия единиц Лабораторные Гибель животные То же 50%-ная летальная сокращение обозначения ЛД50 доза Клинические симп- 50%-ная инфекци- томы или патоло- онная доза ИД50 гоанатомические изменения Куриные эмбри- Гибель оны 50%-ная эмбриональ- элд50 ная летальная доза То же Патологоанатоми- 50%-ная эмбриональ- ческие изменения ная инфекционная эид50 доза Культуры клеток Цитопатический 50%-ная цитопати- эффект ческая доза ЦПД50 Иначе говоря • 1 ЛД50—это доза вируса, убивающая 50 % лабораторных животных (обычно белых мышей); • 1 ИД50—доза вируса, вызывающая клинические симптомы или патологоанатомические изменения у 50 % зараженных лабораторных животных; • 1 ЭЛД — доза вируса, убивающая 50 % куриных эмбрионов; • 1 ЭИД50—доза вируса, вызывающая патологоанатомические изменения у 50 % зараженных куриных эмбрионов; • 1 ЦПД50— доза вируса, вызывающая цитопатический эффект у 50 % зараженных культур клеток (обычно пробирок с культурами клеток). Метод Рида и Менча основан на принципе кумуляции (накопления). Предполагается, что если чувствительные объекты погибают после заражения небольшими дозами вируса, они обязательно погибнут и при введении им более концентрированных и наоборот, объекты, остающиеся в живых после введения вируссодержащего материала в небольшом разведении, не погибнут, если их заразить этим же материалом в максимальном разведении. Принцип кумуляции позволяет искусственно увеличивать число исследуемых объектов и тем самым повысить точность эксперимента. Из исследуемой суспензии готовят ряд последовательных десятикратных разведений вируссодержащего материала (10-1, 10-2, 10-3, ..., 10-10). Делают это по двум причинам: а) удобство в расчетах; б) инфекционное действие вируса убывает прямо пропорционально его разведению. Вируссодержащим материалом в каждом разведении заражают группу чувствительных объектов (в каждой группе не менее 4-6) с целью удобства статистической обработки. За зараженными объектами устанавливают регулярное (не реже одного раза в сутки) наблюдение и фиксируют результат. Изменения в первые 48 ч после заражения трудно признать результатом действия вируса, особенно в высоком разведении, их считают неспецифическими и в расчет не принимают. При заражений вируссодержащим материалом в разведении 107 не наблюдалось гибели животных, следовательно, летальность здесь равна 0, и выживших мышей будет 4. Но к ним надо прибавить животных, оставшихся живыми после введения вируссодержащего материала в разведениях 10-6, 10-5 и т.д. Таким образом, кумулятивное число выживших животных при заражении вируссодержащим материалом в разведении 10-7 окажется равным 12. Активностью вируссодержащего материала в разведении 108 пренебрегаем, так как эффект в данном случае аналогичен таковому при исследовании вируссодержащего материала в разведении 10-7. Рассуждая подобным образом, находим значение кумулятивной летальности. Оно составляет при разведении вируссодержащего материала 10-2 12 животных. Показания, полученные при использовании вируссодержащего материала в разведении 10-1, по той же причине можно во внимание не принимать. Таким образом, ЛД50 при указанном способе титрования вируса на мышах равна разведению 10-4,5. Зная, что вируссодержащий материал использован в объеме 0,2 мл, можно высчитать концентрацию вируса в исходной вирусной суспензии. В 0,2 мл этой суспензии будет содержаться 104,5 ЛД50. Значит, титр вируса будет составлять: Т = 104'5 ЛД50/0,2 мл или 5 • 104'5 ЛД50/1 мл. Найдем абсолютное значение разведения, соответствующее 1 ЛЛ50. В расчет принимают цифру 4,5. Число 4 показывает, что абсолютной цифре должно быть 5 знаков (4 + 1). А антилогарифм цифры 4,50 составляет 3162. Но поскольку в ней только 4 знака значит пятый знак приписывают в виде 0 и получают 31620. Значит, для нашего примера 1 ЛД50 равна разведению вируса 1:31620.
